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Resumo Enquadramento: Óleos vegetais apresentam ação antimicrobiana e promovem a proliferação celular. O óleo de girassol é usado como alternativa para o tratamento de feridas cutâneas, especialmente nos países subdesenvolvidos ou em desenvolvimento. Objetivo: Caracterizar o óleo de girassol e avaliar os efeitos in vitro na proliferação celular e na atividade antimicrobiana. Metodologia: Análises por cromatografia a gás acoplada à espectrometria de massas, testes de proliferação celular e atividade antimicrobiana. Resultados: Na análise cromatográfica do óleo de girassol identificaram-se os compostos maioritários - ácidos gordos insaturados (82,2%) tendo como principais lípidos os ácidos linoleico (47,8%), oleico (28,7%) e linolênico (3,9%), seguidos pelos ácidos saturados (12,70%), palmítico (8,8%) e esteárico (3,6%). Houve diferença (p < 0,001) entre os tratamentos com óleo de girassol (100 e 10 µg/ml) e controlos negativos na proliferação celular. Ineficácia na atividade antimicrobiana frente às bactérias Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis e Klebsiella pneumoniae. Conclusão: A composição do óleo de girassol mostrou elevada concentração de ácidos gordos essenciais, promoveu proliferação celular, mas não inibiu atividade bacteriana.

Background: Vegetable oils have antimicrobial activity and promote cell proliferation. Sunflower oil is used as an alternative for treating skin wounds, particularly in underdeveloped or developing countries. Objective: To characterize sunflower oil and evaluate the in vitro effects on cell proliferation and antimicrobial activity. Methodology: The study was carried out using gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) analysis and cell proliferation and antimicrobial activity tests. Results: The chromatographic analysis identified the main components of sunflower oil, namely: unsaturated fatty acids (82.2%) with linoleic (47.8%), oleic (28.7%), and linolenic (3.9%) acids as the main lipids, followed by saturated (12.70%), palmitic (8.8%) and stearic (3.6%) acids. A difference (p < 0.001) in cell proliferation was found between treatments with sunflower oil (100 and 10 μg/ ml) and the negative controls. It failed in antimicrobial activity against Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis, and Klebsiella pneumoniae. Conclusion: Sunflower oil contains a high concentration of essential fatty acids and promotes cell proliferation but fails to inhibit bacterial activity., Marco contextual: Los aceites vegetales tienen acción antimicrobiana y promueven la proliferación celular. El aceite de girasol se utiliza como alternativa para tratar las heridas cutáneas, especialmente en los países subdesarrollados o en vías de desarrollo. Objetivo: Caracterizar el aceite de girasol y evaluar los efectos in vitro sobre la proliferación celular y la actividad antimicrobiana. Metodología: Análisis por cromatografía de gases acoplado a espectrometría de masas, pruebas de proliferación celular y actividad antimicrobiana. Resultados: En el análisis cromatográfico del aceite de girasol, se identificaron los compuestos mayoritarios - ácidos grasos insaturados (82,2%), los principales lípidos son el ácido linoleico (47,8%), oleico (28,7%) y linolénico (3,9%), seguidos del ácido saturado (12,70%), palmítico (8,8%) y esteárico (3,6%). Hubo una diferencia (p < 0,001) entre los tratamientos con aceite de girasol (100 y 10 μg/ml) y los controles negativos en la proliferación celular. Actividad antimicrobiana ineficaz contra las bacterias Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis e Klebsiella pneumoniae. Conclusión: La composición del aceite de girasol mostró una alta concentración de ácidos grasos esenciales, promovió la proliferación celular, pero no inhibió la actividad bacteriana., Enquadramento: Óleos vegetais apresentam ação antimicrobiana e promovem a proliferação celular. O óleo de girassol é usado como alternativa para o tratamento de feridas cutâneas, especialmente nos países subdesenvolvidos ou em desenvolvimento. Objetivo: Caracterizar o óleo de girassol e avaliar os efeitos in vitro na proliferação celular e na atividade antimicrobiana. Metodologia: Análises por cromatografia a gás acoplada à espectrometria de massas, testes de proliferação celular e atividade antimicrobiana. Resultados: Na análise cromatográfica do óleo de girassol identificaram-se os compostos maioritários - ácidos gordos insaturados (82,2%) tendo como principais lípidos os ácidos linoleico (47,8%), oleico (28,7%) e linolênico (3,9%), seguidos pelos ácidos saturados (12,70%), palmítico (8,8%) e esteárico (3,6%). Houve diferença (p < 0,001) entre os tratamentos com óleo de girassol (100 e 10 μg/ml) e controlos negativos na proliferação celular. Ineficácia na atividade antimicrobiana frente às bactérias Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis e Klebsiella pneumoniae. Conclusão: A composição do óleo de girassol mostrou elevada concentração de ácidos gordos essenciais, promoveu proliferação celular, mas não inibiu atividade bacteriana.

Submitted by Nathalie Abreu (abreu.nathalie@yahoo.com.br) on 2022-07-29T17:27:44Z No. of bitstreams: 2 Termo de Depósito BDTD.pdf: 204564 bytes, checksum: e033ca68c8b8b4d9110281e4a860d81e (MD5) DS - Nathalie Murielly Rolim de Abreu.pdf: 1533190 bytes, checksum: 3f13f33cb0dc6d069372f6054204cad7 (MD5) Rejected by Rosalvo Andrade (rosalvo_andrade@servidor.uepb.edu.br), reason: on 2022-07-29T21:57:48Z (GMT) Submitted by Nathalie Abreu (abreu.nathalie@yahoo.com.br) on 2022-07-29T23:43:28Z No. of bitstreams: 2 Termo de Depósito BDTD.pdf: 204564 bytes, checksum: e033ca68c8b8b4d9110281e4a860d81e (MD5) DS - Nathalie Murielly Rolim de Abreu.pdf: 1540982 bytes, checksum: 59d6185499d20d039a3c3f8e55e02cfb (MD5) Approved for entry into archive by Rosalvo Andrade (rosalvo_andrade@servidor.uepb.edu.br) on 2022-07-30T00:03:48Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Termo de Depósito BDTD.pdf: 204564 bytes, checksum: e033ca68c8b8b4d9110281e4a860d81e (MD5) DS - Nathalie Murielly Rolim de Abreu.pdf: 1540982 bytes, checksum: 59d6185499d20d039a3c3f8e55e02cfb (MD5) Made available in DSpace on 2022-08-01T13:01:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Termo de Depósito BDTD.pdf: 204564 bytes, checksum: e033ca68c8b8b4d9110281e4a860d81e (MD5) DS - Nathalie Murielly Rolim de Abreu.pdf: 1540982 bytes, checksum: 59d6185499d20d039a3c3f8e55e02cfb (MD5) Previous issue date: 2022-07-27 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Objective: To analyze the biomechanical performance of four direct resin solutions in non-carious cervical lesions (NCCL), when submitted or not to the biocorrosive process. Method: Two in vitro studies were carried out, based on 4 resinous groups: Tetric N-Ceram® - RN Group; Tetric N-Ceram® Bulk Fill-RB; Tetric N-Flow® + Tetric N-Ceram®-RFN; and Tetric N-Ceram® Bulk Fill + Tetric N-Ceram®-RBN, and a non-ST-restorative treatment group was added for the 2nd study. Eighty circular specimens were made for the test of roughness (ER) and weight (EP), and forty rectangular specimens for the test of flexural strength (RF), divided into 4 resinous groups. In the 2nd study, NCCLs were made in 80 bovine teeth distributed in the 4 restorative groups, and the ST. All were subdivided, and half of them submerged in a biocorrosive challenge (c). ER and EP analyzes were performed for the circular specimens and RF for the rectangular specimens. All bovine specimens were subjected to mechanical (300,000 cycles, 50 N, 2 Hz) and thermal (5ºC, 37ºC and 55ºC, 4,000 cycles) simulated aging and a constant compressive load applied to the palatal surface at 1mm/min until failure. /break (RFR). The results of the RE, EP and RF were submitted to statistical analysis by one-way ANOVA and Tukey post hoc, to analyze the group effect and the paired t test to analyze the initial and final means (ER and EP). The RFR (material and medium effect) was evaluated by the two-way ANOVA test, with Tukey's post hoc, and the failure mode by the Fisher's exact test. All at a 5% statistical significance level. Result: There was an increase in roughness in the RB group when in acidified medium (p=0.008). There were no differences in weight change between the studied groups. The RFN group in the salivary medium showed the highest flexural strength (p=0.037), however it showed a significant reduction when submitted to the acid challenge. The RBN group presented the best fracture resistance regardless of the medium, while the ST group had the worst. Conclusion: Low pH beverage negatively affects biomechanical properties of restorative materials in non-carious cervical lesions. Objetivo: Analisar o desempenho biomecânico de quatro soluções resinosas diretas em lesões cervicais não cariosas (LCNC), quando submetidos ou não ao processo biocorrosivo. Método: Foram realizados dois estudos in vitro, baseado em 4 grupos resinosos: Tetric N-Ceram® - Grupo RN; Tetric N-Ceram® Bulk Fill- RB; Tetric N-Flow® + Tetric N-Ceram®- RFN; e Tetric N-Ceram® Bulk Fill + Tetric N-Ceram®- RBN, e um grupo sem tratamento restaurador-ST, foi adicionado para o 2º estudo. Foram confeccionados oitenta corpos de prova circulares para o ensaio de rugosidade (ER) e peso (EP), e quarenta retangulares para o ensaio de resistência flexural (RF), divididos nos 4 grupos resinosos. No 2º estudo foram confeccionadas LCNC em 80 dentes bovinos distribuídos nos 4 grupos restauradores, e o ST. Todos foram subdivididos, e metade deles submersos em um desafio biocorrosivo (c). Foram realizadas análises ER, EP para os corpos de prova circulares e da RF para os retangulares. Todos os espécimes bovinos foram submetidos ao envelhecimento simulado mecânico (300.000 ciclos, 50 N, 2 Hz) e térmico (5ºC, 37ºC e 55ºC, 4.000 ciclos), e a uma carga compressiva constante aplicada na superfície palatina a 1mm/min até a falha/ruptura (RFR). Os resultados dos ER, EP e RF foram submetidos a análise estatística por anova oneway e post hoc Tukey, para análise do efeito do grupo e o teste t pareado para análise das médias iniciais e finais (ER e EP). A RFR (efeito do material e do meio) foi avaliada pelo teste anova two way, com post hoc de Tukey, e o modo de falha pelo teste exato de Fisher. Todos a um nível de significância estatística de 5%. Resultado: Houve um aumento da rugosidade no grupo RB quando em meio acidificado (p=0,008). Não houve diferenças na alteração de peso entre os grupos estudados. O grupo RFN no meio salivar apresentou a maior resistência flexural (p=0,037), contudo apresentou significativa redução quando submetido ao desafio ácido. O grupo RBN apresentou a melhor resistência a fratura independente do meio, enquanto que o ST a pior. Conclusão: Bebida de baixo pH afeta negativamente propriedades biomecânicas de materiais restauradores em lesões cervicais não cariosas.

Isolated substances and those organically synthesized have stood out over the years for their therapeutic properties, including their antibacterial activity. In this context, the aim of this research was to investigate the pharmacological properties of 2-(2 hydroxyethylamine)-3-(3-methyl-2-butenyl)-1,4-dihydro-1,4-naphthalenedione, 2-(2- hydroxy-ethylamine)-3-(2-methyl-propenyl)-[1,4] naphthoquinone and 2-(3-hydroxypropylamine)-3-(3-methyl-2-butenyl)-[1,4]naphthoquinone using computational prediction models, to evaluating the in vitro antibacterial and modulatory activity of these compounds against bacterial ATCC strains and clinical isolates, in addition to analyzing the inhibitory effect on the efflux pump functioning of these substances in strains of multiresistant Staphylococcus aureus. The substances were synthesized from 2-hydroxyquinones, lapachol and nor-lapachol obtaining the corresponding 2-methoxylated derivatives via dimethyl sulfate alkylation in a basic medium, these then reacted chemoselectively with 2-ethanolamine and 3-propanolamine to form the corresponding amino alcohols. The antibacterial activity and modulatory activity of the substances were assayed by broth microdilution method to determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). To verify the effect of reducing the MIC of the ethidium bromide and the antibiotic, inoculums obtained from plates incubated in a bacteriological oven for 24 hours at 37ºC with the stock peaking were used. After this period inoculums were used in saline solution according to Mcfarland 0.5 corresponding to 105UFC. The results of the tests were done in triplicates and as geometric mean. In the statistical analysis, oneway ANOVA was used, followed by the Tukey hoc post test using GraphPad Prism 5.0.The molecular structures were analyzed using the ChEMBL database to predict possible pharmacological targets and soon after underwent a virtual structure-based analysis (docking)., which pointed to the molecule 2- (2-hydroxy-ethylamine)-3-(2-methyl-propenyl)-[1,4]naphthoquinone as a probable antibacterial agent for the proteins Replicative DNA helicase and RecA. The MICs of the substances were not clinically significant, however, the association with gentamicin and amikacin reduced the MICs of these antibiotics with significance of p < 0.0001. against Staphylococcus aureus strains carrying the NorA efflux pump mechanism, a significant reduction (p < 0,0001) of their MICs was observed when the substances were associated with norfloxacin and ethidium bromide, with this effect being attributed to efflux pump inhibition. Following a virtual analysis based on its structure (docking), information regarding the affinity of new ligands for the ABC efflux pump. The tested substances also demonstrated effectiveness at decreasing the MIC of erythromycin, tetracycline and mainly of ethidium bromide with MIC reduction up to 16x. In conclusion, the combination of these substances with antibiotics may be a therapeutic alternative to bacterial resistance and the reduction of side effects. Substâncias isoladas e sintetizadas organicamente têm se destacado ao longo dos anos por suas propriedades terapêuticas, incluindo sua atividade antibacteriana. Neste contexto, o objetivo desta pesquisa foi investigar as propriedades farmacológicas de 2-(2-hidroxietilamina)-3-(3-metil-2-butenil)-1,4-di-hidro-1,4-naftalenodiona, 2-(2-hidroxietilamina)-3-(2-metil-propenil)-[1,4]naftoquinona e 2-(3-hidroxi-propilamina)-3-(3- metil-2-butenil)-[1,4]naftoquinona por meio de modelos computacionais de predição, avaliar a atividade antibacteriana e moduladora in vitro dessas compostos contra cepas bacterianas ATCC e isolados clínicos, além de análisar o efeito inibidor sobre o funcionamento de bomba de efluxo dessas substâncias em cepas de Staphylococcus aureus multirresistentes. As substâncias foram sintetizadas a partir de 2-hidroxiquinonas, lapachol e nor-lapacol obtendo os correspondentes derivados 2-metoxilados via alquilação de sulfato de dimetila em meio básico, estes então reagiram quimiosseletivamente com 2-etanolamina e 3-propanolamina para formar os correspondentes aminoálcoois . A atividade antibacteriana e a atividade moduladora das substâncias foram avaliadas pelo método de microdiluição em caldo para determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM). Para verificar o efeito de redução do CIM do brometo de etídeo e do antibiótico, foi utilizado inóculos obtidos de placas incubadas em estufa bacteriológica por 24h a 37ºC com o repique do estoque. Após esse período foi utilizado inóculos em solução salina de acordo com Mcfarland 0,5 que corresponde a 105UFC. Os resultados dos testes foram feitos em triplicatas e como média geométrica. Na análise estatística foi utilizada ANOVA de uma via, seguida do pos teste hoc Tukey usando GraphPad Prism 5.0. As estruturas moleculares foram analisadas usando o banco de dados ChEMBL para prever possíveis alvos e logo após passaram por uma análise virtual de estrutura (docking), que apontaram para a molécula 2-(2-hidroxi-etilamina)-3- (2-metil-propenil)-[1,4]naftoquinona como um provável agente antibacteriano para as proteínas Replicative DNA helicase e RecA. As CIMs das substâncias não foram clinicamente significativas, porém, a associação com gentamicina e amicacina reduziu as CIMs desses antibióticos com significância de p < 0,0001. Frente a cepas de Staphylococcus aureus que carregam o mecanismo de bomba de efluxo NorA, foi observada redução significativa (p < 0,0001) de suas CIMs quando as substâncias foram associadas à norfloxacina e ao brometo de etídio, sendo esse efeito atribuído à inibição da bomba de efluxo. Após uma análise virtual baseada em sua estrutura (docking), foram observadas informações sobre a afinidade de novos ligantes para a bomba de efluxo ABC. As substâncias testadas também demonstraram eficácia em diminuir a CIM de eritromicina, tetraciclina e principalmente do brometo de etídio com redução da CIM em até 16x. Em conclusão, a combinação dessas substâncias com antibióticos pode ser uma alternativa terapêutica para a resistência bacteriana e a redução dos efeitos colaterais.

Submitted by Viviana Loureiro Rocha (viviana.l.rocha@unesp.br) on 2022-06-14T23:19:09Z No. of bitstreams: 1 20220526 - MS Viviana Dissertação.pdf: 1897902 bytes, checksum: 95263f6525579fbc7ecf4f064f2203d0 (MD5) Approved for entry into archive by Elida Daniele de Antonio null (elida_daniele@btu.unesp.br) on 2022-06-15T13:21:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rocha_vl_me_bot.pdf: 1897902 bytes, checksum: 95263f6525579fbc7ecf4f064f2203d0 (MD5) Made available in DSpace on 2022-06-15T13:21:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rocha_vl_me_bot.pdf: 1897902 bytes, checksum: 95263f6525579fbc7ecf4f064f2203d0 (MD5) Previous issue date: 2022-05-06 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) A infecção pelo vírus de Epstein-Barr (EBV) está associada a alguns tipos de cânceres, como o linfoma de Burkitt (BL) e o carcinoma de nasofaringe (NPC). O EBV é ubíquo e infecta, de forma latente, a maioria da população adulta. A latência biológica do EBV é caracterizada por elevada restrição na expressão de produtos virais, sendo limitada a poucas proteínas e RNAs não codificantes, como os miR-BARTs. A superexpressão de miR-BART 7 no NPC regula a expressão do produto do gene supressor tumoral PTEN. O miR-BART 9, por sua vez, regula a expressão da oncoproteína viral LMP1 e de caderina E celular. A regulação da expressão destas proteínas sugere papel dos miR-BARTs 7 e 9 no fenômeno de transição epitelial-mesenquimal (EMT), importante para progressão de cânceres de origem epitelial. Dessa forma, este estudo tem como objetivo a criação de um modelo experimental para verificar o papel exercido por miR-BART 7 e miR-BART 9 na aquisição de características favoráveis a carcinogênese. O modelo estabelecido baseia-se em células de epitélio de nasofaringe infectadas com partículas virais selvagens ou mutadas para estes miRNAs. A construção deste modelo emprega a tecnologia CRISPR/Cas9 para edição do genoma do EBV em células Akata-EBV+. As células Akata-EBV+ com genoma selvagem ou mutado foram quimicamente tratadas para ativação de ciclo lítico, e produção de partículas virais. A validação foi realizada a partir da expressão de marcadores de ciclo lítico, BZLF1 e gp350, enquanto a quantificação das partículas produzidas foi realizada a partir de curva-padrão com o genoma B95-8. A infecção de células epiteliais de nasofaringe foi avaliada a partir da estimativa do número de cópias do genoma viral. As células Akata-EBV+ contendo os genomas com comprometimento da expressão dos miR-BARTs 7 ou 9 apresentaram deficiência na produção de partículas virais quando comparadas as células contendo o genoma selvagem, enquanto na infecção de células epiteliais de nasofaringe, o comprometimento da expressão dos miR-BARTs 7 ou 9 influenciou positivamente, aumentando o número de cópias virais nas células infectadas com as versões editadas. Os dados apresentados demonstram estabelecimento de modelo experimental de estudo dos miR-BARTs do EBV, e indicam uma possível relação com eventos relacionados ao ciclo lítico do vírus. Epstein-Barr virus infection is associated with some types of cancers, such as Burkitt lymphoma (BL), and nasopharyngeal carcinoma (NPC). EBV is a ubiquitous virus, and infects, latently, the majority of adult population. The EBV latency is characterized by limited viral expression, expressing a few proteins and non-coding RNAs, such as miR-BARTs. The overexpression of EBV miR-BART 7 in NPC was associated with regulation of protein levels of PTEN suppressor gene. EBV miR-BART 9, on the other hand, regulates the expression of the LMP1 viral oncoprotein and the cellular E-cadherin. The regulation of these proteins suggests a role of miR-BARTs 7 and 9 in epithelial-mesenchymal transition (EMT), which is important for progression of epithelial cancers. This study aims to create an experimental model to verify the role played by miR-BART7 and miR-BART9 in acquisition of features favorable to carcinogenesis. The model established is based on immortalized nasopharynx epithelial cells infected with wild type or edited viral particles for these miRNAs. The construction of this model employs the CRISPR/Cas9 technology for the EBV genome editing in Akata-EBV+ cells. The EBV+ Akata cells with wild type or mutated genome were chemically treated to activate lytic cycle and viral particles production. The validation was performed evaluating the expression of lytic cycle markers, BZLF1 and gp350, while the quantification of the produced particles was performed using a B95-8 genome standard curve. The nasopharynx epithelial cells infection was evaluated from the estimate of the viral genome copy number. The Akata-EBV+ cells containing genomes with impaired expression of miR-BARTs 7 or 9 showed deficiency in the production of viral particles when compared to cells containing the wild type genome, while in nasopharynx epithelial cells infection, the impairment of expression of miR-BARTs 7 or 9 positively influenced, increasing the viral copy number in cells infected with the edited versions. The data presented demonstrate the establishment of an experimental model for the study of EBV miR-BARTs, and indicate a possible relationship with events related to the lytic cycle of the virus. CAPES: 88887.466765/2019-00 FAPESP: 17/23393-9

A detecção de lesões de cárie na superfície proximal é um desafio para o profissional. Diante disso, métodos baseados em indução de fluorescência têm sido desenvolvidos para auxiliar nesse processo. No entanto, ainda existe uma lacuna no que se refere ao desempenho desses métodos em lesões de cárie incipientes tratadas com infiltrante resinoso e adesivo dentinário. O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro a influência dos materiais resinosos nos valores de fluorescência do aparelho DIAGNOdent pen (DDpen) no tratamento micro invasivo de lesões de cárie proximais em molares decíduos. Foram selecionados 72 molares decíduos recém-extraídos e congelados a -20°C, com pelo menos uma superfície proximal com lesão de cárie incipiente ativa ICDAS 2 (International Caries Detection & Assessment System) e radiograficamente com translucidez na metade interna do esmalte (E2) ou no terço externo da dentina (D1). Os dentes decíduos foram aleatoriamente divididos em dois grupos: (Grupo I) Scotchbond® - adesivo dentinário (n=36; superfícies proximais) e (Grupo II) Icon® - infiltrante resinoso (n=36; superfícies proximais). Dois examinadores treinados avaliaram independentemente os dentes com o dispositivo DDpen duas vezes, com intervalo de uma semana entre eles, antes do tratamento (baseline) e após o tratamento. Em seguida, os dentes foram preparados para avaliação histológica em microscópio de luz polarizada, e a profundidade do corpo da lesão e sua área foram determinadas por meio do software Image J. 7 Os dados foram submetidos à análise estatística inferencial, com nível de significância de 5%. O Coeficiente de Correlação Intraclasse (CCI) apresentou concordância satisfatória a excelente para reprodutibilidade intra- e inter examinador para o DDpen antes e após o tratamento das lesões de cárie com sistema adesivo e infiltrante resinoso. Verificou-se uma redução significativa dos valores de fluorescência do DDpen após o tratamento com sistema adesivo e infiltrante resinoso em superfícies proximais de molares decíduos (p0,05). Não houve correlação significativa comparando área histológica da lesão de cárie proximal e os valores de fluorescência a laser (antes, após e diferença) pelo DDpen para ambos os grupos (p>0,05). Conclui que os valores de fluorescência obtidos pelo DDpen apresentaram diminuição significativa após tratamentos micro-invasivos de lesões de cárie proximais não-cavitadas em molares decíduos, tanto com sistema adesivo como com infiltrante resinoso. The detection of approximal caries lesions is a challenge for the dental professional. Therefore, fluorescence-based methods have been developed to assist in this process. However, there is still a gap regarding the performance of these methods for incipient caries lesions treated with resin infiltrant and adhesive system. The aim of this study was to evaluate in vitro the influence of resin-based materials on the fluorescence values of the DIAGNOdent pen (LFpen) device in the micro-invasive treatment of approximal caries lesions in primary molars. Seventy-two newly extracted and frozen at -20 °C primary molars were selected, with at least one approximal surface with an active incipient caries lesion ICDAS 2 (International Caries Detection & Assessment System) and radiographically with translucency in the inner half of enamel (E2) or in the inner third of dentin (D1). The primary teeth were randomly divided into two groups: (Group I) Scotchbond® - adhesive system (n=36; approximal surfaces) and (Group II) Icon® - resin infiltrant (n=36; approximal surfaces). Two trained examiners performed independently assessed the teeth with LFpen twice, with a one-week interval between them, before treatment (baseline) and after treatment. Then, the teeth were prepared for histological evaluation under a polarized light microscope, and the depth of the lesion body and its area were determined using Image J software. Data were analysed by inferential statistics, with a significance 9 level of 5%. The Intraclass Correlation Coefficient (ICC) showed satisfactory to excellent agreement for intra- and inter-examiner reproducibility for LFpen before and after treatment of caries lesions with adhesive system and resin infiltrant. There was a significant reduction in the fluorescence values of LFpen after treatment with an adhesive system and resin infiltrant on approximal surfaces of primary molars (p0.05). There was no significant correlation comparing the histological area of the approximal caries lesion and the laser fluorescence values (before, after and difference) by LFpen for both groups (p>0.05). It can be concluded that the fluorescence values obtained by LFpen showed a significant decrease after micro-invasive treatments of non-cavitated approximal caries lesions in primary molars, both with adhesive system and resin infiltrant.

Submitted by Fabiano Malheiro (fabianomalheiro22@hotmail.com) on 2021-09-25T19:57:33Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tese Isabela Furlaneto.pdf: 506551 bytes, checksum: 22f701f8a4e3e41609054b9c0101e549 (MD5) Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2021-09-27T12:36:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 tese Isabela Furlaneto.pdf: 506551 bytes, checksum: 22f701f8a4e3e41609054b9c0101e549 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Made available in DSpace on 2021-09-27T12:36:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 tese Isabela Furlaneto.pdf: 506551 bytes, checksum: 22f701f8a4e3e41609054b9c0101e549 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2020-12-21 Sem bolsa Os estudos in vitro são provavelmente os de desenvolvimento mais frequente na Odontologia, pois a maioria dos materiais precisam ser testados in vitro antes do uso em humanos. Embora os estudos in vitro não sejam realizados em humanos ou animais, eles tentam simular condições biológicas para testar novos materiais e métodos preventivos ou terapêuticos, ou comparar materiais disponíveis frente às suas características, seja quando há questões éticas envolvidas, seja quando uma comparação clínica seria impossível por exemplo, quando se necessita avaliar um material e suas características por longos períodos de tempo e condições extremas (de temperatura, fadiga, etc). Como em outros estudos, os estudos in vitro representam uma etapa preliminar importante para o desenvolvimento de pesquisas clínicas futuras. Os resultados dos estudos in vitro são, desta forma, traduzidos para a prática clínica muitas vezes por meio de revisões sistemáticas. Um dos pontos principais quando se realiza uma revisão sistemática é a análise do risco de viés, justamente porque o viés pode super ou subestimar o real efeito de um tratamento ou comparação. Sem esta análise, as conclusões podem estar equivocadas e muitas vezes completamente devido ao viés. Desta forma, avaliar o risco de viés com uma ferramenta adequada é fundamental. Se uma revisão sistemática não apresenta uma análise de risco de viés dos estudos incluídos, pode transformar um achado importante em informação inútil. Assim, este protocolo teve como objetivo realizar um estudo para avaliar revisões sistemáticas de estudos in vitro considerando desfecho odontológicos e avaliar, dentro destas revisões, como foi realizada a análise de risco de viés a fim de criar uma ferramenta de análise de risco de viés para estudos in vitro em Odontologia. Foram avaliadas a quantidade e qualidade das revisões sistemáticas, a proporção daquelas que utilizaram uma ferramenta para análise de risco de viés, e a pertinência da ferramenta e seu impacto nos resultados e conclusões. Ainda, pretende-se desenvolver uma ferramenta a ser utilizada em revisões sistemáticas de estudos in vitro, considerando-se os parâmetros mais comumente utilizados nestes estudos e que possam ser fontes de viés. In vitro studies are probably the most used in Dentistry, as most materials need to betested in vitro before use in humans. Although in vitro studies are not carried out on humans or animals, they try to simulate biological conditions to test new materials and preventive or therapeutic methods, or to compare available materials according to their characteristics, either when there are ethical issues involved or when a clinical comparison would be impossible, for example, when it is necessary to evaluate a material and its characteristics for long periods of time and extreme conditions (temperature, fatigue, etc.). As in other studies, in vitro studies represent an important preliminary step for the development of future clinical research. The results of in vitro studies are thus translated into clinical practice, often through systematic reviews. One of the main points when carrying out a systematic review is the analysis of the risk of bias, precisely because the bias can over or underestimate the real effect of a treatment or comparison. Without this analysis, the conclusions can be wrong and often completely due to the bias. Thus, assessing the risk of bias with an appropriate tool is essential. If a systematic review does not present a risk analysis of bias in the included studies, it can turn an important finding into useless information. Thus, this protocol aims to (ii) carry out a systematic review to evaluate systematic reviews of in vitro studies considering various outcomes and how the risk of bias analysis was carried out and (ii) create a risk analysis tool for studies in vitro in Dentistry. The quantity and quality of systematic reviews, the proportion of those who used a tool for risk of bias analysis, and the relevance of the tool and its impact on results and conclusions will be evaluated. Still, it is intended to develop a tool to be used in systematic reviews of in vitro studies, considering the parameters most commonly used in these studies and that may be sources of bias.

Dissertação (Mestrado) - Pontifícia Universidade Católica de Minas Gerais, Programa de Pós-Graduação em Odontologia. Bibliografia: f. 53 Tendo em vista as dificuldades em condicionar quimicamente as cerâmicas cristalinas, este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da aplicação de diferentes condicionamentos de superfície na resistência de união de bráquetes ortodônticos metálicos (Morelli, Sorocaba, SP, Brasil) aderidos à cerâmica IPS e.max CAD (Ivoclar Vivadent, Schaan, Lienchtesnstein), composta majoritariamente por dissilicato de lítio. Foram aplicados 7 diferentes tipos de condicionamentos, cada um representado por um grupo (n=20), sendo eles: Grupo T (grupo controle 1): Transbond XT (3M Unitek, Monrovia, CA, Estados Unidos); Grupo FS (grupo controle 2): Condac Porcelana- Ácido fluorídrico a 10% (FGM, Joinville, SC, Brasil) + RelyX Ceramic Primer- Silano (3M ESPE, Mineápolis MN, Estados Unidos) + Transbond XT; Grupo SB (grupo controle 3): Condac Porcelana- ácido fluorídrico a 10% + Relyx Ceramic Primer- Silano + Adesivo Adper Scotch Bond (3M ESPE, Mineápolis, MN, Estados Unidos) + Transbond XT; Grupo S: Singlebond Universal (3M ESPE, Mineápolis, MN, Estados Unidos) + Transbond XT; Grupo P: Palfique Bond (Tokuyama Dental, Tóquio, Japão) + Transbond XT; Grupo PB: Prime&Bond Universal (Dentsply Sirona, York, Pensilvânia, Estados Unidos) + Transbond XT; Grupo ST: Adesivo Adper Scotch Bond + Transbond XT. Logo após a colagem, os grupos foram imersos em um recipiente contendo água destilada e armazenados a 37°C por 7 dias. Após término deste tempo, foram retirados do recipiente e submetidos à ensaio de cisalhamento (0,5mm/minuto). A tensão necessária para descolamento dos bráquetes foi medida em Newtons e, medindo-se a área de sua base, convertida para Mpa. As médias entre os grupos foram submetidas à análise de variância de um fator, post hoc de Bonferroni considerando p

Dissertação (Mestrado) - Pontifícia Universidade Católica de Minas Gerais, Programa de Pós-Graduação em Odontologia. Bibliografia: f. 55-56 O objetivo dessa pesquisa foi avaliar radiografias e tomografias para detecção de anquilose dentária in vitro em caninos e pré-molares inferiores, a partir de dois sistemas de radiografias periapicais digitais: Sistema de Armazenamento de Fósforo Ativado (PSP) e Dispositivo de Carga Acoplada (CMOS), e de três tomógrafos computadorizados de feixes cônicos diferentes: Orthophos SL® (Sirona Dental Systems, Bensheim, Alemanha), CS 8100® (Carestream Health, Inc., Atlanta, GA, EUA) e i-CAT® (Imaging Science International LLC, Hatfield, PA, USA). Foram selecionadas dez mandíbulas que apresentavam pelo menos um canino ou um pré-molar, totalizando 39 dentes. Todos os dentes foram submetidos a realização de radiografias digitais e tomografias computadorizadas de feixe cônico utilizando três voxels distintos (Grupo Controle). Posteriormente, simulações de anquilose dentária foram feitas utilizando osso particulado e cola branca (Grupo Anquilose). Três examinadores analisaram as imagens para determinar sinais de anquilose. Foram avaliados a concordância inter e intraexaminador, a acurácia, sensibilidade, especificidade, a construção da curva ROC além de determinar quais sistemas de imagem e protocolos proporcionam diagnóstico semelhante ao real. O nível de significância foi fixado em 5%. As imagens de TCFC com os menores voxels dos tomógrafos CS 8100® e Orthophos SL® apresentam valores estatisticamente maiores em relação aos padrões de acurácia, sensibilidade e especificidade, quando comparadas aos demais voxels e sensores radiográficos, proporcionando imagens cujo diagnóstico não apresentaram diferença significativa com o diagnóstico real. Já as radiografias periapicais e imagens de TCFC, nos voxels intermediário e maior, não apresentaram diferenças de resultados entre si na acurácia, sensibilidade e especificidade, além de apresentarem menor desempenho com o diagnóstico real. Assim, a precisão do diagnóstico de anquilose é possível quando o exame de TCFC é realizado nos voxels menores (75 µm e 79 µm). A acurácia dos sensores radiográficos é semelhante às TCFC nos voxels intermediário e maior. Palavras-chave: Anquilose dental. Diagnóstico. Tomografia computadorizada de feixe cônico. The present study sought to evaluate radiographs and computed tomography (CT) to detect dental ankylosis in vitro, using two digital periapical radiography systems (CMOS) and three CT scans with different cone beams (Orthophos SL®, CS 8100® and i-CAT®). Material and methods: Thirty-nine teeth were selected and submitted to digital radiography and cone-beam computed tomography (CBCT), using three distinct voxels (Control Group). Subsequently, dental ankylosis simulations were performed by adhering the particulate bone and composing the Ankylosis Group. Three evaluators analyzed the images to determine possible signs of ankylosis. Inter- and intra-examiner agreement, accuracy, sensitivity and specificity, and construction of the ROC curve were evaluated, in addition to determining which imaging systems and protocols provide a diagnosis similar to the real one. The level of significance was set at 5%. Results: The CBCT images that have voxels smaller than 80µm present statistically higher values in relation to the standards of accuracy, sensitivity, and specificity, when compared to the other voxels and radiographic systems. In addition, these smaller voxels provided images whose diagnosis did not differ significantly from the real diagnosis. The periapical radiographs and CBCT exams in the intermediate and higher voxels, however, showed no differences in results in terms of accuracy, sensitivity, and specificity, and presented less performance with the real diagnosis. Conclusions: An assertive diagnosis of ankylosis is possible when the CBCT exam is performed on smaller voxels (75µm and 79µm). Radiographic sensors and CBCT scans on the intermediate and larger voxels present similar diagnoses. Keywords: Dental ankylosis. Diagnosis. Cone-beam computed tomography.

FACEPE Após um período de ênfase nas ações governamentais para a modernização da agricultura na região nordeste do Brasil, o Vale de São Francisco tornou-se um local fértil e propício ao cultivo, principalmente de frutas, onde é possível encontrar grandes empresas e pequenos agricultores. Assim, o agrotóxico dimetoato (organofosforado) amplamente utilizado nesta região foi selecionado como objeto desde estudo. O estudo de caso in vivo foi realizado com três trabalhadores através de duas abordagens: 1) uma secção de algodão, imitando uma peça de roupa, fixada nas roupas do trabalhador, em diferentes regiões com área exposta específica para investigar a exposição dérmica do dimetoato; 2) a quantificação do estrato córneo foi realizada pela técnica de tape-striping para avaliar a absorção dérmica do dimetoato. Uma abordagem in vitro usando células Franz foi realizada aplicando-se dimetoato (0,4 e 1,8 μg) diretamente na pele de porco ou em uma seção de algodão antes de entrar em contato com a pele de porco. Dois estudos ex vivo foram ainda realizados em, um com córneas bovinas excisadas frescas e refrigerada e o outro com olhos bovinos inteiros frescos, refrigerados e danificados. Em ambos os experimentos foram aplicados 50 μL (5 mg/mL) de uma formulação de pesticida emulsificável (Dimetoato 500 EC®). Os resultados in vivo demonstraram os altos níveis de agrotóxicos aos quais os agricultores estão expostos, com a exposição dérmica potencial total entre 0,87-2,85 mg/pessoa/h e o fator estimado de penetração de EC(PF) entre 0-54,0 e 0- 28,9% para a nuca e os braços, respectivamente. Para o estudo in vitro, a quantidade de pesticida retido no EC foi de 52,63 ± 10,73 e 135,15 ± 31,8 ng/cm² após a aplicação diretamente no EC e demonstrando uma boa concordância com a abordagem in vivo. No estudo de absorção ocular ex vivo, os perfis de dimetoato, os fluxos e os coeficientes de permeação não apresentaram diferenças estatísticas (p

Orientador: Prof. Dr. Arnaldo Rodrigues dos Santos Junior Coorientador: Prof. Dr. Leonardo Ribeiro Rodrigues Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, Santo André, 2020.

Submitted by admin tede (tede@pucgoias.edu.br) on 2019-12-05T18:56:52Z No. of bitstreams: 1 Fabio Augusto Cypreste Oliveira.pdf: 26362413 bytes, checksum: 8dae21d721133eee8c2175ccd466a5ce (MD5) Made available in DSpace on 2019-12-05T18:56:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fabio Augusto Cypreste Oliveira.pdf: 26362413 bytes, checksum: 8dae21d721133eee8c2175ccd466a5ce (MD5) Previous issue date: 2019-10-02 Peripheral vascular disease, an important component of cardiovascular diseases, represents a considerable cause of death and hospitalization due to chronic disease in Brazil and in the world, causing an overload on health systems and great financial impact. In the last decades, there has been a change in the surgical treatment of peripheral circulatory diseases, with a significant increase in minimally invasive endovascular procedures and in the use of peripheral stents. New intraluminal devices have been developed with structural improvements in order to increase their effectiveness and durability, with the laboratory tests of fatigue resistance being fundamental in this process. The objective of this study was to perform the structural analysis of fatigue resistance of a new model of covered peripheral vascular stent. The evaluation of the prototype was performed by using two methods: in vitro accelerated fatigue test (AFT) and computational analysis using the finite element method (FEM). A total of 6 prototypes analyzed macroscopically and microscopically before and after AFT, as well as computational analysis of the model using Solidworks® and Abaqus® software in its simulation. The prototypes submitted to the accelerated fatigue test were successful in fatigue resistance after a total of 400 million cycles of accelerated fatigue and the computational analysis of the proposed model, after validation, was able to confirm safety and identify the points of greatest stress / strain under simulated conditions of pulsatile arterial flow in stenosed peripheral artery. Based on this work, it is concluded that the studied model of covered peripheral vascular stent presents adequate structural resistance to the analyses performed, in accordance with international standards A doença vascular periférica, importante componente das doenças cardiovasculares, representa uma considerável causa de óbito e internação por doença crônica no Brasil e no mundo, promovendo uma sobrecarga aos sistemas de saúde e grande impacto financeiro. Nas últimas décadas, houve uma mudança no perfil de tratamento cirúrgico das doenças circulatórias periféricas, com aumento significativo dos procedimentos terapêuticos endovasculares minimamente invasivos e uso dos stents periféricos. Novos dispositivos intraluminais vem sendo desenvolvidos com melhorias estruturais de modo a aumentar sua eficácia e durabilidade, sendo os testes laboratoriais de resistência à fadiga de importância fundamental nesta avaliação. O objetivo deste estudo foi realizar a análise estrutural de resistência a fadiga de um novo modelo de stent vascular periférico recoberto. A avaliação do protótipo foi realizada por meio de dois métodos: teste in vitro de fadiga acelerada (TFA) e análise computacional pelo método de elementos finitos (MEF). Foram analisados macroscopicamente e microscopicamente um total de 6 protótipos antes e após o TFA, além de análise computacional do modelo utilizando os softwares Solidworks® e Abaqus® em sua simulação. Os protótipos submetidos ao teste de fadiga acelerada obtiveram sucesso no quesito resistência à fadiga após um total de 400 milhões de ciclos de fadiga acelerada e a análise computacional do modelo proposto, após sua validação, ratificou sua segurança e identificou os pontos de maior tensão/deformação sob condições simuladas de fluxo arterial pulsátil em artéria periférica estenosada. Com base nesse trabalho, conclui-se que o modelo estudado de stent vascular periférico recoberto apresenta resistência estrutural adequada às análises realizadas, conforme as normas internacionais

The chronic injury is a disabling disease closely related to aging and to chronic diseases, such as diabetes, arterial hypertension and obesity. They are also associated to the biofilms, responsible to antimicrobial resistance, persistence and progression of the clinical picture, specially of Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa. Thus, it is important, in order to better comprehend the etiopathogeneses involved on this relation, to develop a more reliable to the in vivo conditions model. Therefore, the aim of this study was to establish an ex vivo model of chronic injuries on porcine skin to the study of S. aureus and P. aeruginosa biofilms and compare them to the in vitro model. To do so, three strains of each species were evaluated, which one of these strains was the control case (S. aureus ATCC 29213 and P. aeruginosa ATCC 27853) and the other two were clinical strains. To the ex vivo model, fragments of skin measuring 1,5 cm x 1,5 cm were disinfected with 70% alcohol and 12% NaOH. An orifice measuring 0,8 cm of diameter was made to the removal of epidermis, where the bacterial inoculum of 1,5-1,8 x 109 CFU/mL (25 µL) was placed. The in vitro biofilms were formed on polystyrene plaques, using BHI broth supplemented with 1% of the glucoses (175 µL) and bacterial inoculum of 1,5-1,8 x 109 CFU/mL (25 µL). The in vitro and ex vivo biofilms were incubated at 37 ºC each for 48, 72, 96 and 120 hours. In each period of evaluation, the CFU counting and the quantification of the matrix proteins and the counting of proteases and siderophore production were made. The ex vivo biofilms were evaluated via optical microscopy and confocal microscopy. It was observed that the CFU counting and the quantification of the matrix of S. aureus and P. aeruginosa ex vivo biofilms were significantly (P < 0,05) greater than those of in vitro biofilms, especially the ones of 48-96 hours of growing. The confocal microscopy of ex vivo biofilms have shown one significant (P < 0,05) reduction of the biomass and the thickness, for 96 hours, and a greater (P < 0,05) robustness at 72 hours of growing, to both the species. In matters of the production of virulence factors, S. aureusex vivo biofilms produced fewer siderophore and proteases than in vitro biofilms, while P. aeruginosaex vivo biofilms produced more siderophore and fewer proteases than those which have grown in vitro. The results have shown that ex vivo biofilms presented more cells and matrix and greater biomass and robustness than those which have grown in vitro, emphasizing the importance of working with ex vivo models, once it mimics better the host environment and it creates more reliable conditions to the study of chronic injuries. A ferida crônica é uma doença incapacitante, intimamente relacionada ao envelhecimento e às doenças crônicas como diabetes, hipertensão arterial e obesidade.Estão associadas também aos biofilmes, responsáveis pela resistência aos antimicrobianos, persistência e progressão do quadro clínico, principalmente de Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa. Assim, desenvolver um modelo mais fidedigno com as condições in vivo é importante para a compreensão daetiopatogênese envolvida nesta interação. Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivo estabelecer um modelo ex vivo de feridas crônicas para o estudo de biofilmes de S. aureuse deP. aeruginosa em pele suína e compará-lo com o modelo in vitro. Para tanto, três cepas de cada espécie foram avaliadas, sendo uma cepa controle (S. aureusATCC 29213 e P. aeruginosaATCC 27853) e duas cepas clínicas. Para o modelo ex vivo, fragmentos de pele de 1,5 x 1,5 cmforam desinfetados com álcool 70% e NaOH 12% e um orifício de 0,8 cm de diâmetro foi feito removendo a epiderme, onde o inóculo bacteriano de 1,5-1,8 x 109 UFC/mL (25 µL) foi depositado. Os biofilmes in vitroforam formados em placas de poliestireno, utilizando caldo BHI-glicose 1% (175 µL) e inóculo bacteriano de 1,5-1,8 x 109 UFC/mL (25 µL). Ambos foram incubados a 37 oC, por 48, 72, 96 e 120 h. Em cada período de avaliação, foi realizada contagem de UFC, quantificação das proteínas de matriz e produção de proteases e sideróforos. Os biofilmes ex vivo foram avaliados por microscopia óptica e microscopia confocal. Observou-se que as contagens de UFC e a quantificação de matriz de biofilmes de S. aureuse P. aeruginosaex vivo foram significativamente (P

FACEPE Os corticosteróides tópicos (CT) são as drogas mais utilizadas na prática dermatológica no tratamento de inflamações. O Valerato de Betametasona (VBM) é um corticosteróide potente, disponível comercialmente nas formas de creme, pomada e loção na concentração de 0,1%. A eficácia clínica in vivo de CT depende da biodisponibilidade (BD) no local da ação, que pode ser avaliada devido à sua característica de branquearem a pele, pelo seu efeito vasoconstritor. Uma possibilidade de redução de efeitos adversos dos CT, seria uma formulação que aumentasse a retenção do fármaco nas camadas da pele sem aumentar a quantidade absorvida. As microemulsões (MEs) são uma alternativa para a administração tópica de VBM, pois podem modificar a BD, por atuarem como sistemas de liberação controlada. MEs são sistemas que apresentam gotículas na escala nanométrica e são compostas por tensoativos, água e óleo. O óleo de licuri (Syagrus coronata) é extraído de uma palmeira brasileira, possui excelente espalhabilidade e penetração. A avaliação do potencial irritante de produtos é tradicionalmente realizada a partir do uso de animais de laboratório, porém métodos alternativos foram desenvolvidos a fim de substituir os testes in vivo na avaliação de segurança. Dito isto, este projeto visa desenvolver MEs contendo óleo de licuri, relizar avaliação biofarmacoténica e farmacodinâmica e determinar o potencial irritante, das formulações desenvolvidas e formulação comercial, contendo VBM. Para tanto, diagramas de fase pseudoternários foram construídos para desenvolver as MEs. As MEs obtidas foram caracterizadas quanto a centrifugação, pH, solubilidade em corante, potencial zeta, tamanho de gotícula e microscopia de luz polarizada (MLP). Foi avaliada também a estabilidade acelerada das formulações, além do estudo de liberação in vitro, permeação e retenção cutânea em pele de porco. O teste de branqueamento foi utilizado para avaliação farmacodinâmica das formulações. O potencial de irritação foi avaliado utilizando dois métodos alternativos (HET-CAM e CAM-TBS). Foram desenvolvidas e caracterizadas quatro microemulsões do tipo O/A, que foram veiculadas em gel de Carbopol® para incremento de viscosidade. Todas as formulações apresentaram pH na faixa de tolerância da pele; tamanho de gotícula de 14,67±0,2 a 37,56±0,8; potencial zeta negativo, entre -3,596 e -1,407 mV e mostraram-se isotrópicas através da MLP. Em geral, todas as formulações apresentaram maior retenção do fármaco do que a formulação comercial. A Formulação F3 exibiu maior retenção de VBM, quando comparada as outras formulações, sem aumento na quantidade permeada. Por esta razão, a F3 foi selecionada para o ensaio de branqueamento, e como resposta não houve diferença entre as concentrações testadas e entre o Betnovate® na avaliação farmacodinâmica. Todas as formulações foram classificadas como não irritantes ou irritantes leves nos ensaios realizados. Os resultados indicam que as formulações desenvolvidas contendo óleo de licuri são alternativas promissoras, seguras e estáveis para a administração tópica de VBM, com destaque a F3, onde foi possível aumentar a retenção nas camadas da pele sem aumento da absorção cutânea, podendo ser uma alternativa viável na melhora da biodisponibilidade local, sem observação de efeitos sistêmicos. Topical corticosteroids (TC) are commonly used in dermatological practice in the treatment of inflammation. Betamethasone Valerate (BMV) is a potent corticosteroid, commercially available in cream, ointment and lotion forms at a concentration of 0.1%. In vivo TC efficacy depends on their bioavailability (BA) at the site of the action, and can be evaluated by a simple technique, since this pharmacological class has a characteristic of bleaching the skin, by their vasoconstricting effect. Even though efficacy has been demonstrated, TCs adverse effects may limit its use, one possibility to reduce such effects are the development of a formulation that could increase drug retention in the skin without increasing the absorbed amount. Microemulsions (MEs) are an alternative for BMV topical administration, they can modify a BA because they act as controlled release systems. MEs are nanometric systems composed of surfactants, water and oil. The licuri oil (Syagrus coronata) is extracted from a Brazilian palm tree fruit, it has an excellent spreadability and penetration. Since the 1940s, the assessment of the potential irritant of products has been made using laboratory animals, but alternative methods were developed to replace the questioned in vivo tests in the safety assessment. So, this project aimed to develop microemulsions with licuri oil for the topical delivery of betamethasone, followed biopharmaceutical and pharmacodynamic assesment and to determine the irritant potential, by alternative methods, of developed formulations and the commercial product. For that, pseudoternals phase diagrams were constructed for MEs development. Developed MEs were characterized under centrifugation, pH, dye solubility, zeta potential, droplet size and polarized light microscopy. It was also performed the accelerated stability of the formulations, besides the study of release, permeation and cutaneous retention. The bleaching test was used to evaluate the formulations pharmacodynamics. The irritation potential assessment was made using two alternative methods, the chorioallantoic membrane assays (HET-CAM and CAM-TBS). Four O/A microemulsions were developed and characterized. After MEs characterization, they were based on Carbopol® gel for viscosity increase. All formulations had pH values in the skin tolerance range; droplet size of 14.67 ± 0.2 to 37.56 ± 0.8; negative zeta potential, between -3.596 and -1.407 mV and was shown to be isotropic by polarized light microscopy. In general, all formulations showed bigger drug retention compared to commercial product. Formulation F3 presented higher BMV retention when compared with other formulations, without increase in the drug permeated amount. For this reason, F3 was selected for the bleaching assay, and as a response was not difference between the tested formulations and between Betnovate® on the pharmacodynamic evaluation. All formulations were classified as non-irritant or mild irritants in HET-CAM and CAM-TBS assay. The results indicate that developed formulations containing licuri oil are promising, safe and stable alternatives for the BMV topical administration, especially F3, where it was possible to increase the retention in the layers of the skin without increasing the skin absorption, being an alternative improvement in local bioavailability, without observing systemic effects.

CAPES A dor é um fenômeno que afeta a maioria da população, atingindo principalmente indivíduos pós-cirurgiados e por isso, no alívio da dor pós-operatória, a analgesia deve ser usada adequadamente. Neste contexto, a Bupivacaína é uma droga amplamente utilizada, promovendo efeitos duradouros. No entanto, a cardiotoxicidade e a neurotoxicidade são desvantagens relacionadas ao seu uso repetido e por isso, foi desenvolvida a Novabupi®, uma mistura contendo excesso enantiomérico da porção levógira que apresenta efeitos de toxicidade reduzidos. Buscando racionalizar o seu uso mediante prolongamento da duração de efeito, e diminuição de aplicações, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e avaliar lipossomas contendo o Cloridrato de Levobupivacaína em excesso enântiomético de 50%, seguido da incorporação em termogeis desenvolvidos anteriormente no nosso grupo de pesquisa. Os lipossomas foram preparados usando o método de hidratação lipídica fina e seca seguido de sonicação. Inicialmente, diferentes lotes de lipossomas carregados com LBPV, com diferentes concentrações lipídicas (de 42 a 240 mM) e variando a concentração de fármaco (2 a 5 mg / mL), para obter uma formulação estável contendo a maior quantidade de fármaco. As formulações desenvolvidas foram caracterizadas em termos de tamanho de partícula, índice de polidispersividade (PDI), potencial zeta. A eficiência de encapsulação do fármaco em lipossomas foi determinada por ultracentrifugação/ultrafiltração. Todas as formulações permaneceram estáveis por 30 dias, exceto lipossomas preparados a 42 mM. O tamanho de partícula variou de 334,8 ± 4,17 a 414,33 ± 5,9nm e o índice de polidispersão foi menor que 0,5, sugerindo que este sistema é homogêneo. Apresentaram carga de superfície neutra e a taxa de eficiência do fármaco próxima a 80%. O Lipossoma foi selecionado e incorporado no termogel, onde foram analisados outros parâmetros de formulação entre eles pH, temperatura de transição de fase, teor, biocompatibilidade, potencial irritante e perfil de permeação. Termogel contendo lipossomas carregados com LBPV foram desenvolvidos com sucesso, sendo uma formulação promissora para futuros testes de efetividade in vivo. Pain is a phenomenon that affects most people, mainly affecting the people who are operated on. For the relief of postoperative pain, an analgesia is used ready. Bupivacaine is a widely used locally drug that receives enduring warranties. However, cardiotoxicity and neurotoxicity are disadvantages of its repetitive use, because of this, studies were made and confirmed with a racemic mixture molecule justified under the effect of toxicity, then a Novabupi® was developed, which contains the enantiomeric excess. Therefore, the purpose of this work was to develop liposomes with Levobupivacaine hydrochloride in 50% enantiomeric excess, for subsequent incorporation into thermogel already developed. Liposomes were prepared using the fine and dry lipid hydration method followed by sonography. Initially, batches of liposomes were loaded with LBPV, with different lipid levels (from 42 to 240 mM) and varying the drug concentration (2 to 5 mg / mL), which are associated with greater amount of drug. The formulations in were characterized in terms of particle size, polydispersity index (PDI), zeta potential. The encapsulation efficiency of LBPV in liposomes was determined by ultracentrifugation / ultrafiltration. All standing formulations were stable for 30 days except liposomes prepared at 42 mM. The particle size varied from 334.8 ± 4.17 to 414.33 ± 5.9nm and the polydispersity index was less than 0.5, suggesting that this system is homogeneous, induced neutral workload and efficiency rate of after the development of the liposome that was most adequate to the parameters, it was at the same time that thermogel, other parameters such as pH, phase transition temperature, content, biocompatibility, irritant potential were reached and permeation profile. We developed liposomes loaded with LBPV with subsequent incorporation in thermogel. The system proved to be promising in accordance with the results of the characterizations.

Orientador: Gislaine Ricci Leonardi Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O padrão ouro no tratamento do fotoenvelhecimento se dá através da administração tópica de ácido retinoico. Este, por sua vez, quando veiculado em formulações alternativas às convencionais, como, por exemplo, encapsulado em ?-carragena, pode apresentar redução das reações adversas características. Desta maneira, é de interesse geral na área da dermatologia que formulações modernas contendo ácido retinoico sejam desenvolvidas. Novos produtos dermatológicos obrigatoriamente são submetidos a avaliações de eficácia e segurança. Com a crescente preocupação ética no que concerne ao uso de animais em pesquisas, a busca por métodos alternativos tem sido crucial. Objetivos: avaliar através de ensaios in vitro a citotoxicidade e a irritação ocular de uma nova formulação contendo ácido retinoico veiculado em microcápsulas de ?-carragena. Métodos: dois artigos foram desenvolvidos, sendo o primeiro uma revisão bibliográfica referente aos ensaios in vitro já validados no setor dermatológico e cosmético. Para o segundo artigo, a formulação desenvolvida foi avaliada em cultura de queratinócitos do tipo HaCaT pelas técnicas de MTT e Sulforrodamina B, a fim de se determinar a influências microcápsulas de k-carragena na citotoxicidade pela viabilidade celular. Além disso, as mirocápsulas foram avaliadas quanto ao potencial de irritação ocular através do ensaio de HET-CAM. Resultados: foi demonstrado que a veiculação do ácido retinoico em uma formulação foi indiferente na redução da progressão da citotoxicidade do fármaco. Concentrações de até 10 ?g/mL de ácido retinoico microencapsulado foram consideradas seguras quanto à viabilidade celular, sendo que concentrações de até 5 mg/mL do fármaco puro também não apresentaram potencial citotóxico. As formulações desenvolvidas não demonstraram potencial de irritação ocular, bem como o ácido retinoico livre. Conclusão: os ensaios realizados mostram que a formulação desenvolvida está apta a ser utilizada na terapia do fotoenvelhecimento. Além disso, as avaliações in vitro de toxicidade e irritação podem contribuir para a redução do uso de animais em pesquisa, como forma de triagem para posteriores ensaios in vivo Abstract: The gold standard in the treatment of photoaging is through the topical administration of retinoic acid. This, in turn, when vehicle in formulations alternative to the conventional ones, such as encapsulated in ?-carrageenan, may present a reduction of characteristic adverse reactions. Thus, it is of general interest in the field of dermatology that modern formulations containing retinoic acid are developed. New dermatological products are obligatorily submitted to efficacy and safety evaluations. With the increasing ethical concern regarding the use of animals in research, the search for alternative methods has become crucial. Objectives: To evaluate, through in vitro assays, the cytotoxicity and ocular irritation of a new retinoic acid-containing formulation conveyed in ?-carrageenan microcapsules. Methods: two papers were developed, the first one being a bibliographical review regarding the in vitro tests already validated in the cosmetic. The second paper evaluated the dermatologic preparations using ketatinocytes culture (HaCaT) through MTT and sulforhodamine B techniques, in order to determine the influence of the retinoic acid vehicle in k-carrageenan microcapsules. Besides that, the microcapsules were evaluated for their ocular irritaton profile by HET-CAM assay. Results: it has been shown that the vehiculation of retinoic acid in a formulation was inconclusive in derucing the progression of cytotoxicity of the drug. Concentrations up until 10 ?g/mL for microcapsuled retinoic acid were safe for cell viability, and even 5 mg/mL for the solution of the active ingredient did not shown cytotoxic profile. The develped formulas algo did not shown ocular irritation profile, as the free active ingredient as well. Conclusion: the tests carried out show that the formulation developed is suitable for use in photoaging therapy. In addition, in vitro toxicity and irritation assessments may contribute to the reduction of animal research use as a screening method for further in vivo testing Mestrado Clínica Médica Mestra em Ciências

Introdução: A atrite reumatoide (AR) é uma doença crônica autoimune que afeta principalmente as articulações. Os fibroblastos sinoviais (FLS) são as principais células estromais da sinóvia articular, e apresentam estão envolvidos na degradação da cartilagem e na erosão óssea. Não há cura médica ou cirúrgica conhecida para a AR e as opções terapêuticas atuais não são efetivas na manutenção e indução da remissão da doença. Por essa razão, moléculas com ação anti-inflamatória e imunomoduladora estão sendo estudadas a partir de extratos de helmintos. A Fasciola hepatica (F. hepatica) é um helminto que libera produtos excretores-secretores através de seu tegumento que contêm componentes imunomoduladores capazes de suprimir a resposta imune Th1 e a produção de citocinas inflamatórias. Objetivo: Avaliar in vitro o potencial terapêutico do extrato de F. hepatica em FLS de pacientes com AR. Materiais e métodos: Primeiramente, os FLS foram isolados do líquido sinovial de pacientes com AR, cultivados, e caracterizados para os marcadores fenotípicos CD55, CD90 e CD68. Após, os FLS foram expostos a diferentes concentrações do extrato de F. hepatica (60 μg/ml, 80 μg/ml e 100 μg/ml) e analisados após 24 h, 48 h e 72 h pelo ensaio de proliferação celular (MTT). O efeito do extrato também foi avaliado através do índice de morfometria nuclear (NMI), ensaio de apoptose, aderência celular, invasão e migração e produção de TNF-α. As análises estatísticas foram realizadas por ANOVA ou teste T e p < 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. Resultados: O extrato de F. hepatica reduziu a proliferação celular dos FLS na concentração de 100 μg/ml após 48 h (83,8 % ± 5,0 extrato vs 100,0 % ± 00 controle; p < 0,05), e nas concentrações de 80 μg/mL (88,4 % ± 3,0 extrato vs 100,0 % ± 0,0 controle; p < 0,05) e 100 μg/ml (89,8 % ± 3,8 extrato vs 100,0 % ± 0,0 controle; p < 0,05) após 72 h, quando comparado ao grupo controle sem tratamento. Baseado nesses resultados, a dose de 100 μg/ml no tempo de 48 h foi escolhida para os testes seguintes. O tratamento com o extrato de F. hepatica não afetou parâmetros de NMI nem induziu apoptose ou morte celular nos FLS. Por outro lado, o extrato demonstrou redução da capacidade de aderência dos FLS (92,0 células ± 5,8 extrato vs 116,3 células ± 7,9 controle; p < 0,05), do potencial migratório (69,5 % ± 17,6 extrato vs 100,0 % controle; p < 0,05) e da invasão celular (80,3 % ± 3,9 extrato vs 100,0 % controle; p < 0,05). Além disso, houve uma tendência na redução dos níveis de TNF-α após o tratamento com o extrato. Conclusão: Em conjunto, nossos resultados apontam o extrato de F. hepatica como uma potencial estratégia terapêutica para AR, devido à sua capacidade de reduzir o perfil agressivo e invasivo dos FLS, sem induzir apoptose ou morte celular. Análises adicionais in vitro e estudos in vivo em modelos experimentais de artrite são necessárias para uma melhor compreensão dos mecanismos do efeito do extrato da F. hepatica e de seus diferentes componentes nos FLS. Introduction: Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic autoimmune disease that mainly affects the joints. Fibroblast-like synoviocytes (FLS) are the main stromal cells of the joint synovium, and are involved in cartilage degradation and bone erosion. There is no known medical or surgical cure for RA and current therapeutic options are not effective in maintenance and induction of disease remission. For this reason, molecules with anti-inflammatory and immunomodulatory action are being studied from helminth extracts. Fasciola hepatica (F. hepatica) is a helminth that releases excretory-secretory products through its tegument which contains immunomodulatory components capable of suppressing the Th1 immune response and the production of inflammatory cytokines. Objective: To evaluate the therapeutic potential of F. hepatica extract in FLS from patients with RA. Materials and methods: First, the FLS were isolated from synovial fluid of RA patients, cultured and characterized for the phenotypic markers CD55, CD90 and CD68. After, the FLS were exposed to different concentrations of F. hepatica extract (60 μg/ml, 80 μg/ml and 100 μg/ml) and analyzed after 24 h, 48 h and 72 h by the cell viability assay (MTT). The effect of the extract was also evaluated by nuclear morphometry index (NMI), apoptosis assay, cell adherence, invasion and migration tests, and TNF-α production. Statistical analyzes were performed by ANOVA or T test and p < 0.05 was considered statistically significant. Results: F. hepatica extract decreased the cell viability of FLS at concentration of 100 μg/ml after 48 h (83.8 % ± 5.0 extract vs 100.0 % ± 0.0 control; p < 0.05), and at concentrations of 80 μg/ml (88.4 % ± 3.0 extract vs 100.0 % ± 0.0 control; p < 0.05) and 100 μg/ml (89.8 % extract ± 3.8 extract vs 100.0% ± 0.0 control; p < 0.05) after 72 h, when compared with control group without treatment. Based on these results, the dose of 100 μg/ml after 48 h was chosen for the following tests. The treatment with F. hepatica extract does not affect NMI parameters or induce apoptosis or cell death on FLS. On the other hand, the extract showed a decreased of FLS adherence (92.0 cells ± 5.8 extract vs 116.3 cells ± 7.9 control; p < 0.05), migratory potential (69.5 % ± 17.6 extract vs 100.0 % control; p < 0.05) and cell invasion (80.3 % ± 3.9 extract vs 100.0 % control; p < 0.05). Moreover, there was a trend of decreased TNF levels after extract treatment. Conclusions: Taken together, our results point out F. hepatica extract as a potential strategy for AR due to their ability to reduce the aggressive and invasive profile of FLS without inducing apoptosis and cell death. However, further analyses in vitro and in vivo are needed for a better understanding the mechanisms of the effect of F. hepatica extract on FLS and its different components on FLS.

A experimentação animal tem sido um grande aliado do homem no progresso da Ciência. Contudo, muito tem se discutido sobre a capacidade preditiva desses modelos in vivo em identificar substâncias químicas tóxicas para o ser humano. O avanço do conhecimento científico do Século XXI tem incentivado a busca de modelos preditivos que considerem a fisiologia do organismo humano, bem como a fisiopatologia das reações adversas física e quimicamente induzidas. Nesse contexto, o foco do presente estudo foi a avaliação de toxicidade dérmica de ingredientes de tinturas de cabelo e agrotóxicos e seus produtos acabados, denominados aqui de misturas da “vidareal” (a real condição que o consumidor está exposto). Uma estratégia integrada de testes in vitro foi desenvolvida para avaliar o potencial desses materiais em induzir reações alérgicas quando em contato com a pele humana. Essa estratégia envolveu diferentes técnicas inovadoras de relevância humana baseadas em eventos-chave da via do efeito adverso da sensibilização dérmica (reatividade com proteínas, ativação de queratinócitos e/ou células dendríticas). O primeiro método implementado “in house” foi o teste denominado direct peptide reactivity assay (DPRA, OECD 442C/2015). No processo de implementação, um refinamento voltado na redução do volume final de reação do ensaio foi realizado e, desta forma, o custo e o uso de solventes orgânicos foram reduzidos consideravelmente. Essas modificações permitiram a “miniaturização da técnica”, denominada micro-DPRA (mDPRA), a qual apresentou desempenho similar ao DPRA convencional na identificação de substâncias alergênicas e produtos acabados como formulações de agrotóxicos contendo glifosato e surfactantes. Além disso, foi estabelecido um segundo refinamento que originou o desenvolvimento de outra técnica, o photo-mDPRA, capaz de identificar fotoalérgenos de contato, o que não era possível pela técnica disponível de fototoxicidade já validada (3T3 neutral red uptake phototoxicity test – OECD 432/2004). Da mesma forma que o mDPRA, o photo-mDPRA também apresentou aplicabilidade para substâncias puras e misturas baseadas em glifosato e surfactantes. Outro ponto desse trabalho foi o estabelecimento de uma plataforma multiparamétrica in vitro para avaliação da sensibilização dérmica de materiais cosméticos: ingredientes cosméticos e produtos naturais de tintura capilar contendo henna [Lawsonia inermis (Lythraceae)]. Além do mDPRA e photo-mDPRA, foram implementados outros sete diferentes ensaios inovadores. Entre eles, quatro apresentaram superioridade frente aos tradicionais modelos em roedores na identificação de ingredientes cosméticos com potencial alergênico: mDPRA, quantificação de interleucina (IL)-18 em queratinócitos humanos HaCaT, U937 cell line activation test (U-SENSTM, OECD 442E/2018) e genomic allergen rapid detection (GARDTM skin). O GARDTM skin obteve a melhor capacidade preditiva em relação aos dados humanos (concordância = 100%), enquanto que mDPRA (concordância = 91,7%), quantificação de IL-18 em queratinócitos HaCaT e U-SENSTM (ambos com concordância = 92.3%) apresentaram predições similares. Expandindo a aplicabilidade dessa estratégia, ela foi utilizada para avaliar dez produtos naturais de tintura capilar contendo henna, vendidos em estabelecimentos comerciais localizados em Goiânia, GO, Brasil. Como primeiro passo, foram realizadas a análise de rótulo e a caracterização dessas misturas da “vida real” por cromatografia líquida de alta eficiência. Para isso, foram avaliadas quanto à presença do potente alérgeno de contato p-fenilenodiamina (p-phenylenediamine, PPD) e do biomarcador da henna, o lawsone. Contrastando com o que foi declarado nos rótulos pelos fabricantes, as análises cromatográficas evidenciaram que todos os produtos continham PPD e um deles não apresentou teores detectáveis de lawsone. Portanto, deparou-se com duas problemáticas: adulteração e falsificação de produtos henna. Além disso, a avaliação toxicológica utilizando a abordagem integrada de testes in vitro estabelecida nesse trabalho mostrou que, de forma geral, as hennas desencadearam alta reatividade peptídica, aumento dos níveis de IL-18 em queratinócitos HaCaT e de expressão de CD86 em células U937 no ensaio U-SENSTM, e induziram alterações nos 200 genes que compõem a assinatura preditiva do GARDTM skin. Desse modo, outra problemática foi encontrada nesses produtos testados: todas as hennas apresentaram potencial em promover dermatite de contato alérgica em humanos. Em paralelo, também foi verificado que os ingredientes de tintura capilar, incluindo o PPD, promoveram modulação de genes relacionados à resposta ao estresse oxidativo em queratinócitos humanos HaCaT, entre eles: nuclear factor erythroid 2- related factor 2 (NRF2), heme oxygenase 1 (HO1), e Fos proto-oncogene (FOS). Assim, ressaltam-se as conseqüências toxicológicas do uso não declarado de PPD em produtos naturais à base de henna, bem como os riscos associados, que podem envolver a sensibilização de consumidores suscetíveis e casos de dermatite de contato alérgica em indivíduos previamente sensibilizados. Ademais, esse trabalho vem contribuir na promoção da inovação e autonomia tecnológica do Brasil dentro da área da Toxicologia do Séc. XXI através do estabelecimento e desenvolvimento de abordagens in vitro de relevância humana para avaliação da sensibilização dérmica. Animal experimentation has been a great ally of man in the progress of Sciences. However, the predictive capacity of in vivo models to identify toxic chemicals to humans has been widely debated. The advance of the 21st Century scientific knowledge has promoted the search for predictive models that consider the human physiology as well as the pathophysiology of the physically and chemically induced-adverse reactions. In this context, the present study focused on the evaluation of dermal toxicity of ingredients of hair dyes and agrochemicals and their finished products, referred to herein as "real-life" mixtures (the real condition of which the consumer is exposed to). An integrated strategy of in vitro tests was developed to evaluate the potential of these materials to induce allergic reactions when in contact with human skin. This strategy involved different human-relevant innovative techniques based on key-events of the adverse outcome pathway of skin sensitization (protein reactivity, activation of keratinocytes and/or dendritic cells). The first method implemented in house was the direct peptide reactivity assay (DPRA, OECD 442C/2015). The refinement process conducted was able to reduce the final reaction volume of the test, yielding in considerable reduction of cost and use of organic solvents. These modifications allowed the "minituarization of the technique", called micro-DPRA (mDPRA), which showed a similar performance to conventional DPRA in the identification of allergenic substances and finished products as surfactants and glyphosate-containing formulations. A second refinement led to the development of the photo-mDPRA, a technique capable of identifying contact photoallergens, which was not possible by the already validated phototoxicity technique (3T3 neutral red uptake phototoxicity test - OECD 432/2004). Similar to mDPRA, photo-mDPRA showed applicability to pure substances and mixtures based on glyphosate and surfactants. This work also established an in vitro multiparametric platform to evaluate the skin sensitization of cosmetic materials: cosmetic ingredients and hair dye products containing henna [Lawsonia inermis (Lythraceae)]. In addition to mDPRA and photo-mDPRA, seven different innovative methods were implemented. Four of them showed superior capacity to identify cosmetic ingredients with allergenic potential as compared to the traditional rodent models, which are: mDPRA, measurement of interleukin (IL)-18 in human HaCaT keratinocytes, U937 cell line activation test (U-SENSTM, OECD 442E/2018) and genomic allergen rapid detection (GARDTM skin). GARDTM skin had the highest predictive capacity in relation to human data (concordance = 100%), while mDPRA (concordance = 91.7%), measurement of IL-18 in HaCaT keratinocytes and U-SENSTM (both with concordance = 92.3%) showed similar predictions. Expanding the applicability of this strategy, it was used to evaluate ten natural henna-containing hair dye products sold in commercial establishments located in Goiânia, GO, Brazil. The first step was the label analysis followed by characterization and quantification of the potent contact allergen pphenylenediamine (PPD) and the henna biomarker lawsone using high performance liquid chromatography. In contrast to what was stated in the labels by the manufacturers, the chromatographic analyses showed that all products contained PPD, and one of them did not present detectable contents of lawsone. Therefore, revealing the adulteration and falsification of henna products. Furthermore, toxicological evaluation using the integrated in vitro testing approach established in this study showed that hennas generally triggered high peptide reactivity, increased IL-18 levels in HaCaT keratinocytes and CD86 expression in U937 cells in U-SENSTM assay, and induced changes in the 200 genes from the GARDTM skin predictive signature. Additionally, all hennas had the potential to trigger allergic contact dermatitis in humans. In parallel, hair dye ingredients, including PPD, promoted modulation of genes related to the oxidative stress response in human HaCaT keratinocytes, including nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (NRF2), heme oxygenase 1 (HO1), and Fos proto-oncogene (FOS). Therefore, the toxicological consequences and the associated risks of undeclared use of PPD in natural henna products are highlighted, which include sensitization of susceptible consumers and cases of allergic contact dermatitis in previously sensitized individuals. In addition, this study contributes to promotion of innovation and technological autonomy of Brazil within the area of Toxicology for the 21st Century through the establishment and development of an in vitro human-relevant approaches for skin sensitization assessment. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Submitted by PATRICIA MILAGROS MAQUERA HUACHO (pattymi_6@hotmail.com) on 2018-05-14T19:28:46Z No. of bitstreams: 1 TESE DOUTORADO_PMMH_FINAL biblio.pdf: 43774787 bytes, checksum: 94cfdfa4589eb471115979249a46580c (MD5) Rejected by Ana Cristina Jorge null (anacris@fclar.unesp.br), reason: Solicitamos que realize correções na submissão seguindo orientações abaixo: -As palavras chave e keywords (abaixo do seu Resumo e Abstract) estão diferentes das indicadas na ficha catalográfica; -Procurar sua biblioteca local e solicitar orientação quanto a grafia de seu título. O título e o subtítulo devem ser separados por dois pontos e essa correção deve ser feita na ficha catalográfica também; - Retirar o título "Dedicatória" da sua folha de dedicatória. Att. on 2018-05-15T12:40:17Z (GMT) Submitted by PATRICIA MILAGROS MAQUERA HUACHO (pattymi_6@hotmail.com) on 2018-05-15T20:26:30Z No. of bitstreams: 1 TESE DOUTORADO_PMMH_FINAL biblio.pdf: 43774690 bytes, checksum: 7f671483105127307128e41238a993a1 (MD5) Approved for entry into archive by Ana Cristina Jorge null (anacris@fclar.unesp.br) on 2018-05-16T13:29:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 maquera Huacho_pm_dr_arafo_par..pdf: 2471384 bytes, checksum: 444faa7ea3c3060acc7e471ecc226e92 (MD5) Made available in DSpace on 2018-05-16T13:29:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 maquera Huacho_pm_dr_arafo_par..pdf: 2471384 bytes, checksum: 444faa7ea3c3060acc7e471ecc226e92 (MD5) Previous issue date: 2018-04-04 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) A doença peri-implantar é um processo inflamatório de etiologia bacteriana. Diferentes tratamentos antimicrobianos disponíveis buscam reduzir a carga microbiana e eliminar a inflamação. Terapias alternativas com extratos naturais abrem novas perspectivas para controlar e reduzir a carga microbiana. Terpinen-4-ol e Carvacrol, principais constituintes naturais de óleos essenciais vêm se destacando por sua propriedade antimicrobiana. O objetivo deste estudo foi avaliar: I) as modificações físico-químicas em superfícies de titânio, adesão e proliferação de fibroblastos e osteoblastos; II) as propriedades antimicrobianas sobre biofilme de P. gingivalis e F. nucleatum; e citotóxicas em fibroblastos. III) efeito inibitório de biofilmes simples e multi-espécies de S. sanguinis, S. gordonii, S. mitis, S. oralis , S. salivarius, S. mutans, S. sobrinus, A. viscosus, A. naeslundii, P. intermedia, P. gingivalis, F. nucleatum, A. actinomycetemcomitans e V. parvula a partir de concentrações não tóxicas em queratinócitos. Para isto: I)Discos de titânio foram descontaminados com T4ol e Carvacrol e a influência na modificação do ângulo de contato, energia livre de superfície, estrutura química por MEV-EDS, viabilidade e adesão celular de fibroblastos e osteoblastos pelo ensaio Alamar Blue foram avaliados. II) Concentração inibitória mínima (CIM), concentração bactericida mínima (CBM), concentração mínima de inibição do biofilme (CMIB) por ensaio XTT, e biofilme em superfícies de titânio foi quantificada em UFC e por Microscopia de laser de varredura confocal (CLSM) e a citotoxicidade em fibroblastos foi avaliada pelo ensaio MTT. III) A citoxicidade foi testada em queratinócitos orais por ensaio XTT, a inibição e erradicação do biofilmes simples foi analisada por cristal violeta e o efeito sobre biofilmes multi-espécie foi avaliado por qPCR. Resultados de MEV-EDS demonstraram presença de Na, O e Cl após o tratamento com T4ol e Carvacrol. Todas as superfícies apresentaram características hidrófilas e valores de Energia Livre de Superfície (ELS) entre 5,5 mN/m e 3,4 mN/m. Teste de viabilidade e microscopia de fluorescência não apresentaram diminuição da viabilidade celular e adesão. Os valores de CIM foram Carvacrol 0,007% e 0,002% respectivamente para P. gingivalis e F. nucleatum e T4ol 0,06% para ambos os microrganismos. Os valores de CBM foram semelhantes aos CIM. Os valores de CMIB foram Carvacrol 0,03%, 0,06% e T4ol 0,06%, 0,24%, respectivamente, para P. gingivalis e F. nucleatum. Observou-se por contagem de UFC e CLSM atividade antibiofilme usando Carvacrol (0,26%, 0,06%) e T4ol (0,95%, 0,24%) com atividade citotóxica semelhante à Clorexidina. T4ol 0.19% e Carvacrol 0.06% não afetaram a viabilidade das células epiteliais. Foi observada a inibição e erradicação de biofilmes simples e multi-espécie, especialmente em patógenos periodontais. Portanto, podemos concluir que T4ol e Carvacrol não alteram as propriedades da superfície do titânio e permitem interação adequada com células envolvidas no processo de re-osseointegração. Além disso, concentrações específicas destes compostos sem toxicidade sobre células humanas, reduziram o número de patógenos periodontais em biofilmes simples e multi-espécie. Peri-implant disease is an inflammatory process of bacterial etiology. Different antimicrobial treatments available seek to reduce microbial load and eliminate inflammation. Alternative therapies with natural extracts open new perspectives to control and reduce microbial burden. Terpinen-4-ol and Carvacrol, the main natural constituents of essential oils; has been notable for its antimicrobial property. The objective of this study was to evaluate: I) physico-chemical modifications on titanium surfaces, adhesion and proliferation of fibroblasts and osteoblasts; II) the antimicrobial properties of P. gingivalis and F. nucleatum biofilm; and cytotoxic effects on fibroblasts. III) Inhibitory effect of single and multi-species biofilms of S. sanguinis, S. gordonii, S. mitis, S. oralis, S. salivarius, S. mutans, S. sobrinus, A. viscosus, A. naeslundii, P. intermedia, P. gingivalis, F. nucleatum, A. actinomycetemcomitans and V. parvula from non-toxic concentrations in keratinocytes. For this: I) Titanium discs were decontaminated with T4ol and Carvacrol and the influence on the modification of contact angle, surface free energy, chemical structure by MEV-EDS, viability and cellular adhesion of fibroblasts and osteoblasts by the Alamar Blue assay were evaluated. II) Minimum inhibitory concentration (MIC), minimum bactericidal concentration (MBC), minimum concentration of biofilm inhibition (MBIC) by XTT assay, and biofilm on titanium surfaces was quantified in CFU and by Confocal Scanning Laser Microscopy (CLSM), and fibroblast cytotoxicity was evaluated by the MTT assay. III) Cytotoxicity was tested in oral keratinocytes by XTT assay, inhibition and eradication of single biofilms was analyzed by crystal violet and the effect on multi-species biofilms was evaluated by qPCR. SEM results showed the presence of Na, O and Cl after treatment with T4ol and Carvacrol. All surfaces showed hydrophilic characteristics and surface free energy (SFE) values between 5.5 mN/m and 3.4 mN/m. Viability test and fluorescence microscopy showed no decrease in cell viability and adhesion. MIC values were Carvacrol 0.007% and 0.002% respectively for P. gingivalis and F. nucleatum and T4ol 0.06% for both microorganisms. MBC values were similar to MICs. The MBIC values were Carvacrol 0.03%, 0.06% and T4ol 0.06%, 0.24%, respectively, for P. gingivalis and F. nucleatum. Anti-biofilm activity using Carvacrol (0.26%, 0.06%) and T4ol (0.95%, 0.24%) was observed through CFU and CLSM and showed cytotoxic activity like Chlorhexidine. T4ol 0.19% and Carvacrol 0.06% did not affect the viability of epithelial cells. Inhibition and eradication of simple and multispecies biofilms were observed, especially in periodontal pathogens. Therefore, we can conclude that T4ol and Carvacrol do not alter the surface properties of Ti surfaces and allow an adequate interaction with cells involved in the reosseointegration process; and specific concentrations of these compounds without toxicity to human cells, reduced the number of periodontal pathogens in single and multi-species biofilms. FAPESP: 2015/08742-1

FACEPE A esquistossomose é uma doença endêmica parasitário presente nos continentes da América do Sul, da África e Ásia atingindo mais de 250 milhões de pessoas, sendo considerada como a segunda doença negligenciada de importância em saúde pública. O único fármaco disponível para o tratamento é o praziquantel (PZQ) o qual se mostra seguro e eficaz contra as todas as espécies de Schistosoma spp. Entretanto, não impede a reinfecção e não é eficaz contra as fases jovens do verme. Este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade esquistossomicida, in vitro, da β- lapachona isolada e no complexo de inclusão β-ciclodextrina (βCD-β-lapachona) e o efeito esquistossomicida da associação com praziquantel (PZQ) sobre as diferentes fases evolutivas de Schistosoma mansoni (Cepa BH). Caramujos Biomphalaria glabrata foram infectados com miracídios de S. mansoni (cepa BH) e após 30 dias foram expostos a luminosidade artificial para obtenção das cercárias, as quais foram utilizadas para obtenção mecânica dos esquistossômulos com 3 horas. Camundongos fêmeas Swiss webster, previamente anestesiados, foram infectados por via per cutânea com uma suspensão média de 120 cercárias. Após 21 e 50 dias de infecção, os camundongos foram eutanasiados e os vermes jovens e adultos foram obtidos através da perfusão hepática. A partir da susceptibilidade in vitro frente a β-lapachona, β-CD-β-lapachona e praziquantel (PZQ) no intervalo de 24 horas a CL₅₀ foi determinada, respectivamente, em 0,23μM, 0,15μM e 164,9μM para esquistossômulos com 3 horas; 15,6μM, 17,2μM, 78,9μM, para vermes jovens com 21 dias; 69μM, 60μM e 1,8μM para verme adulto macho e 6,6μM, 6,2μM e 36,4μM para verme adulto fêmea. A associação da β-lapachona/PZQ apresentou efeito sinérgico na concentração associada da CL₅₀ e subinibitórias frente a vermes jovens e adultos macho e fêmea. Já a associação da βCD-βlapachona/PZQ foi sinérgica frente aos vermes jovens e adultos machos, também expostos às concentrações da CL₅₀ e subinibitórias. Schistosomiasis is an endemic parasitic disease present in the continents of South America, Africa and Asia, with more than 250 million infected people, being considered as the second neglected disease of importance in public health. The only drug available for treatment is praziquantel (PZQ) which is safe and effective against all species of Schistosoma spp. However, it does not prevent reinfection and is not effective against immatures worms. The aim of this study was to evaluate the in vitro schistosomicidal activity of β-lapachone alone and in the β-cyclodextrin inclusion complex (βCD-β-lapachona) and the schistosomicidal effect of the association with praziquantel (PZQ) on different stages of Schistosoma mansoni (BH strain). Biomphalaria glabrata snails were infected with S. mansoni miracidia (BH strain) and after 30 days the artificial light was obtained to obtain the cercariae, which were used to obtain the schistosomula with 3 hours. Previously anesthetized female Swiss mice were infected by percutaneously route with 120 cercariae. After 21 and 50 days of infection, the mice were euthanized and the immature and adult worms were obtained through hepatic perfusion. From the in vitro susceptibility to β-lapachone, β- CD-β-lapachone and praziquantel (PZQ) within 24 hours the LC₅₀ was determined, respectively, at 0.23μM, 0.15μM and 164.9μM for schistosomula with 3 hours; 15.6μM, 17.2μM, 78.9μM, for immature worms with 21 days; 69μM, 60μM and 1.8μM for adult male worm and 6.6μM, 6.2μM and 36.4μM for adult female worm. The association of β-lapachone/PZQ showed a synergistic effect on the associated concentration of LC₅₀ and subinhibitory against immature and adult male and female worms. The association of βCD-β-lapachone/PZQ was synergistic with immature and adult male worms, also exposed to LC₅₀ and subinhibitory concentrations.

Introduction: The detection of pyrogens is essential for the quality control of injectable products. The Rabbit Pyrogen Test remains widely used, despite the existence of alternative methods such as the Monocyte Activation Test (MAT). Objective: To review the use of alternative methods for pyrogen testing, pointing out advances and perspectives from the recognition of MAT by the European pharmacopoeia and its acceptance for regulatory purposes in Brazil. Method: A search was performed on the PubMed and BVS databases, with further classification, categorization by topic and critical analysis of the results. Results: Twenty-four papers were identified, addressing topics such as applications of MAT, its validation and comparisons with in vivo tests. MAT presented better results when compared to other tests, both in the evaluation of biological products and in the detection of non-endotoxin pyrogens. Limitations to diffusion include difficulties in obtaining whole human blood as a source of monocytes, for which several alternatives have been proposed. Conclusions: MAT is a promising method, with application in safety evaluation of new technologies. Its application in Brazil depends on a national implementation policy, which might include greater integration between BraCVAM, Concea and RENAMA in search for its recognition for regulatory purposes. Introdução: A detecção de pirogênios é imprescindível no controle da qualidade de produtos injetáveis. O Teste de Pirogênio em coelhos ainda tem larga aplicação, apesar da existência de métodos alternativos como o Teste de Ativação de Monócitos (MAT). Objetivo: Revisar o uso dos métodos alternativos no teste de pirogênio, apontando avanços e perspectivas a partir do reconhecimento do MAT pela Farmacopeia Europeia e sua aceitação para fins regulatórios no Brasil. Método: Uma busca foi realizada nas bases PubMed e BVS, com posterior classificação, categorização por assuntos e análise crítica dos resultados. Resultados: Foram identificados 24 trabalhos, abordando temas como as aplicações do MAT, sua validação e comparação com testes in vivo. O MAT apresentou melhores resultados quando comparado a outros testes, tanto na avaliação de produtos biológicos como na detecção de pirogênios não-endotoxinas. Limitações para sua difusão incluem a dificuldade de obtenção de sangue total humano como fonte de monócitos, para o qual diversas alternativas têm sido propostas. Conclusões: O MAT se mostra um método promissor, com aplicação na avaliação da segurança de novas tecnologias. Sua aplicação no Brasil depende de uma política nacional de implantação, que inclua maior Integração entre BraCVAM, Concea e RENAMA na busca por seu reconhecimento para fins regulatórios.

CAPES A experimentação com animais nas pesquisas é umas das formas de avaliar a eficácia e segurança de produtos farmacêuticos, surgindo a necessidade do desenvolvimento, implementação e divulgação de métodos alternativos que substituíssem total ou parcialmente o uso de animais. O teste in vitro mais utilizado para avaliar a absorção sistêmica de produtos aplicados topicamente é absorção cutânea in vitro e o modelo de pele para tal finalidade mais usado é a pele de porco. Outros testes consistem na identificação do potencial irritante de produtos, como os testes de opacidade e permeabilidade em córnea bovina (BCOP) e o da membrana cório-alantóide do ovo embrionado de galinha (HET-CAM). Diante disto, neste estudo, formulações tópicas contendo metronidazol 0,75% e lapachol 0,5% foram avaliadas sob a ótica dos métodos alternativos. Para tanto, foi realizada a caracterização fisico-química (pH, viscosidade, espalhabilidade e teor) e estudo de liberação in vitro das formulações. O estudo de absorção cutânea foi realizado com células de Franz baseado no guia 428 da OECD, com inclusão da avaliação da dermatofarmacocinética (DPK) in vitro, utilizando as diferentes partes de pele do porco (dorso, ventre, barriga) como biomembrana, com prévia análise microscópica das peles e in vivo com 14 participantes. O BCOP foi conduzido baseado no guia OECD 437 utilizando córneas bovinas e o HET-CAM com ovo embrionado de galinha segundo o ICCVAM. Os dados das avaliações das formulações de metronidazol e lapachol demonstraram comportamento pseudoplástico e modelo cinético de Higuchi. As análises de absorção cutânea para o metronidazol mostraram perfil de distribuição semelhante do fármaco, com maior concentração obtida no estrato córneo, concentração média na epiderme e derme e nenhuma quantificação no líquido receptor. Mediante avaliação estatística da correlação dermatofarmacocinética in vitro/in vivo não foi observada diferença na utilização da pele da região dorsal ou ventral do porco. Para o lapachol foi encontrado concentrações significativas no líquido receptor e estrato córneo, com maior quantificação do fármaco na epiderme e derme. Foi observado para o lapachol o mesmo perfil de distribuição em todas as regiões de pele de porco investigadas. A falta de variabilidade significativa das regiões de peles investigadas, a partir das características de cada fármaco, foi evidenciada considerando que o mesmo perfil de distribuição foi mantido independente da região da pele utilizada, o que demonstra que as diversas partes da pele de porco estão aptas para uso nos estudos de absorção cutânea (in vitro). Uma padronização da região de pele com validação dos protocolos antes de iniciar os experimentos é recomendada para obter dados confiáveis e reprodutíveis. Para a formulação do metronidazol não foi evidenciado potencial irritante através dos métodos de BCOP e HET-CAM, mas para o lapachol foi exibido resultado de irritante moderado pelo HET-CAM e não determinado pelo BCOP. Todos os métodos alternativos demonstraram reprodutibilidade e eficiência na avaliação da segurança destas formulações convencionais. The animals use in research is one of the possibilities to evaluate the efficacy and safety of pharmaceuticals products and there is the necessity of development, implementation and dissemination of alternative methods that totally or partially replaced the use of animals. The most widely used in vitro test to evaluate the systemic absorption of topically applied products is in vitro dermal absorption and the most commonly skin model for this assay is the pig skin. Other test is the irritant potential of products that can be evaluated through the assays such as bovine corneal opacity and permeability (BCOP) and chicken embryo chorioallantoic membrane (HET-CAM). In this study, topical formulations containing metronidazole 0,75% and lapachol 0,5% were evaluated under alternative methods. Physical-chemical characterization (pH, viscosity, spreadability and content) and in vitro release study were performed. Dermal absorption study was performed with Franz cells based on the OCDE 428 guide and the in vitro dermatopharmacokinetics (DPK) evaluation was performed with different parts of the porcine skin (back, ventral, ear) as biomembrane with prior microscopic analysis and the in vivo procedure was executed with 14 participants. BCOP was based on OECD 437 guideline with bovine corneas and the HET-CAM according to ICCVAM guidelines. Data from the metronidazole and lapacho formulations showed pseudoplastic behavior and Higuchi kinetic model. The dermal absorption and DPK analysis for metronidazole demonstrated high drug concentration in stratum corneum, epidermis and dermis, and no quantification in the receiving liquid. Metronidazole dermatopharmacokinetics in vitro/in vivo statistical evaluation no difference was observed in the use of back and ventral pig skin. Lapachol had significant concentration in the recipient liquid and the highest quantification was in epidermis and dermis, the drug had the same distribution profile in all skins regions investigated. The skin types invariability, based on the drugs characteristics, was evidenced considering the same distribution profile independent of the skin region. The results demonstrated that different parts of the pig skin are suitable for use and standardization of the skin region with validation of the protocols before starting the experiments is recommended in order to obtain reliable and reproducible data. For the metronidazole formulation no irritant potential was evidenced by BCOP and HET-CAM methods but for the lapacho formulations a slight irritant result was shown by HET-CAM and non-irritants by BCOP. All the alternative methods demonstrated reproducibility and efficiency in the safety assessment of conventional formulations.

FACEPE No Brasil, o estudo comparativo exigido para registro das formulações tópicas genéricas é o estudo de equivalência farmacêutica (EF). Este estudo avalia apenas os parâmetros físico-químicos e microbiológicos dos medicamentos, o que, aparentemente, não garante aos medicamentos genéricos o mesmo grau de eficácia e segurança que o medicamento referência. Assim, para garantir a equivalência farmacêutica e terapêutica de fórmulas genéricas tópicas em relação ao medicamento de referência um dos caminhos seria a busca da similaridade qualitativa (Q1) e quantitativa (Q2) dos excipientes, bem como a similaridade da microestrutura da formulação (Q3). O presente estudo avaliou três pomadas (genéricos A e B e similar) presentes no mercado brasileiro, contendo mupirocina a 2%, em relação ao seu medicamento de referência Bactroban®, através de ensaios físico-químicos, de estudos de liberação in vitro (IVRT) e estudos de dermatofarmacocinética (DPK) in vitro e in vivo. Frente aos ensaios de EF e IVRT, as formulações, mostram-se ser Q1, Q2 e Q3 semelhantes, sendo classificadas como classe 1 conforme o Sistema de Classificação de Produtos Tópicos e consideradas bioequivalentes ao medicamento de referência Bactroban®, com exceção do medicamento similar. Os resultados de DPK in vitro e in vivo demonstram que os genéricos A e B são estatisticamente semelhantes ao Bactroban®, corroborando com o resultado da EF e IVRT. Diante destes resultados, a escolha do método apropriado para avaliação da bioequivalência (BE) de produtos tópicos dermatológicos (PTD) deve ser baseada numa abordagem multifacetada, adaptada ao ativo e ao local alvo da doença a que se destina. Os resultados evidenciam a grande importância de uma rediscussão da legislação nacional e a inclusão de um maior número de testes para determinação da BE entre PTD bem como o estabelecimento de diretrizes detalhadas para cada método e a harmonização destes por órgãos reguladores internacionais. In Brazil, the comparative study required for the registration of topical generic formulations is the pharmaceutical equivalence study (PE). This study evaluates only physico-chemical and microbiological parameters of drugs, which apparently doesn’t ensure for generic drugs the same degree of efficacy and safety that reference drug. So, to ensure the pharmaceutical and therapeutic equivalence of topical generic formulation in relation to the reference medicine, one of the ways would be the search for the qualitative (Q1) and quantitative (Q2) similarity of excipients, as well as the similarity of the microstructure of the formulation (Q3). The present study evaluated three ointments (generic A and B and similar) present in the Brazilian market, containing mupirocin 2%, in relation to reference medicine Bactroban®, through physical-chemical tests, in vitro release test (IVRT) and dermatopharmacokinetics (DPK) in vitro and in vivo. In relation to the PE and IVRT, all formulations shown to be Q1, Q2 and Q3, being classified as class 1 according to the Topical Drug Classification System and considered as bioequivalent to the reference drug Bactroban®, with the exception of the similar drug. DPK results in vitro and in vivo demonstrated that generics A and B are statistically similar a Bactroban®, corroborating with the result of PE and IVRT. So, in view of these results, a choice of the appropriate method for evaluating of bioequivalence (BE) of dermatological topical products (DTP) should be based on a multifaceted approach, adapted to the active and the target local of the disease for which it is intended. The results evidence the importance of a re-discussion of national legislation and the inclusion of a larger number of tests for the determination of BE among DTP as well as the establishment of detailed guidelines for each method and a harmonization for international regulatory agencies.

A Entamoeba histolytica produz a amebíase, doença infecciosa que atinge o intestino humano, constituindo a 2ª maior causa de morte entre as doenças parasitárias. Considerada comensal, alguns autores têm reproduzido experimentalmente a colite e o abscesso hepático amebiano (AHA) utilizando Entamoeba dispar isolada de hospedeiros assintomáticos e sintomáticos. Das cepas de E. dispar disponíveis em nosso acervo, apenas a MCR foi estudada com maiores detalhes, tendo sido analisada a cinética das lesões hepáticas entre 12 horas e 8 dias após a infecção (DAI) e, mensurada as lesões. Ainda não foi avaliada a virulência das cepas de E. dispar de nosso acervo, através do ensaio de eritrofagocitose, muitas cepas ainda não foram testadas quanto à sua patogenicidade e é desconhecida a evolução do AHA após 12 DAI. Diante disso, foi objetivo deste estudo avaliar a virulência e a patogenicidade das cepas MCR, ACFN, ICS, ADO E VEJ de E. dispar após 3, 8, 12 e 16 dias de infecção. No ensaio in vitro, os trofozoítos interagiram com eritrócitos humanos, sendo então contadas as hemácias fagocitadas e os trofozoítos que fagocitaram. Quinze hamsters foram inoculados com 1x105 trofozoítos de cada cepa e, como controle, 1 hamster foi inoculado em cada grupo com a microbiota indígena. Cinco hamsters de cada grupo foram eutanasiados aos 3, 8, 12 e 16 DAI para necropsia, coleta do fígado e processamento para histopatologia e morfometria digital. Todas as cepas de E. dispar foram capazes de fagocitar eritrócitos, sem diferenças significativas entre elas, porém em quantidades inferiores em relação à E. histolytica. A cepa ACFN demonstrou ser patogênica no hamster, sendo capaz de produzir o AHA e, 100% de mortalidade em períodos superiores a 8 DAI. Já a MCR produziu 29% de mortalidade do 8º ao 16º DAI, enquanto as cepas ICS, VEJ e ADO não causaram mortalidade. O AHA foi observado em todos os grupos de hamsters, sendo mais frequente nos inoculados com as cepas ACFN e MCR. A ACFN produziu área de necrose significativamente superior à ADO no 8º DAI, enquanto a necrose foi gerada somente pela MCR no 12º DAI. A extensão da necrose estava associada ao intenso parasitismo (predominante no 8º DAI) e geralmente ao infiltrado inflamatório granulocitário, histiocitário ou misto, focal e/ou difuso (predominante geralmente no 12º DAI). No 12º DAI foram observados os últimos abscessos em atividade e os primeiros em reparo. A inflamação crônica granulomatosa foi mais frequente no 8º e 12º DAI, variando entre os grupos. A trombose e a hemorragia foram mais frequentes nos hamsters inoculados com a ACFN, enquanto os fenômenos degenerativos, com a MCR. A maioria dos hamsters no 16º DAI apresentou preservação da maior parte do parênquima hepático. A regeneração é o mecanismo de cura predominante na amebíase experimental produzida pela E. dispar. A cicatrização ocorre em pequenas áreas, a despeito das grandes extensões de tecido de granulação. Assim, com exceção da ACFN, todas as outras cepas foram capazes de produzir danos hepáticos autolimitantes. Entamoeba histolytica produces amebiasis, an infectious disease that affects the human intestine, making it the second largest cause of death among parasitic diseases. Considered commensal, some authors have experimentally reproduced colitis and amebic liver abscess (AHA) using Entamoeba dispar isolated from asymptomatic and symptomatic hosts. Of the strains of E. dispar available in our collection, only MCR was studied in greater detail, analyzing the kinetics of hepatic lesions between 12 hours and 8 days after infection (DAI) and, measuring the lesions. Virulence of the strains of E. dispar from our collection has not yet been evaluated through the erythrophagocitose assay. Many strains have not yet been tested for their pathogenicity and the evolution of AHA after 12 DAI is unknown. The objective of this study was to evaluate the virulence and pathogenicity of E. dispar strains MCR, ACFN, ICS, ADO and VEJ after 3, 8, 12 and 16 days of infection. In the in vitro assay, the trophozoites interacted with human erythrocytes, and the phagocytosed erythrocytes and trophozoites that phagocytosed were counted. Fifteen hamsters were inoculated with 1x105 trophozoites from each strain and, as a control, 1 hamster was inoculated in each group with the native microbiota. Five hamsters from each group were euthanized at 3, 8, 12 and 16 DAI for necropsy, liver collection and processing for histopathology and digital morphometry. All strains of E. dispar were able to phagocyte erythrocytes, with no significant differences between them, but in lesser amounts in relation to E. histolytica. The ACFN strain proved to be pathogenic in the hamster, being able to produce AHA and 100% mortality in periods superior to 8 DAI. On the other hand, MCR produced 29% mortality from the 8th to the 16th DAI, whereas the ICS, VEJ and ADO strains did not cause mortality. AHA was observed in all groups of hamsters, being more frequent in the inoculated with the strains ACFN and MCR. The ACFN produced a necrosis area significantly higher than ADO in the 8th DAI, while necrosis was generated only by the MCR in the 12th DAI. The extent of necrosis was associated with intense parasitism (predominant in the 8th ICD) and usually to the granulocytic, histiocytic or mixed, focal and / or diffuse inflammatory infiltrate (predominantly in the 12th). At the 12th DAI, the last active abscesses were observed and the first ones under repair. Chronic granulomatous inflammation was more frequent in the 8th and 12th DAI, varying between groups. Thrombosis and hemorrhage were more frequent in hamsters inoculated with ACFN, while degenerative phenomena, with the MCR. Most hamsters in the 16th DAI presented preservation of most of the liver parenchyma. Regeneration is the predominant healing mechanism in the experimental amoebiasis produced by E. dispar. Healing occurs in small areas, despite large extensions of granulation tissue. Thus, with the exception of ACFN, all other strains were able to produce self-limiting liver damage.

A esporotricose é uma micose subcutânea zoonótica de distribuição mundial, causada por espécies fúngicas do complexo Sporothrix schenckii. Os protozoários do gênero Acanthamoeba constituem um grupo amplamente distribuído no ambiente (solo, água e ar) e algumas espécies podem ser patogênicas e/ou oportunistas. Estes organismos coexistem no mesmo ambiente, podendo resultar em algumas alterações interespecíficas. O objetivo do estudo foi verificar o perfil da interação entre S. schenckii sensu stricto e S. brasiliensis e A. castellanii, através de um modelo in vitro de cocultivo como fator modulador de características intrínsecas de ambos microrganismos. Para isso, foram avaliados o índice de fagocitose de S. schenckii sensu stricto e S. brasiliensis por A. castellanii; a viabilidade de S. schenckii sensu stricto e S. brasiliensis após contato com A. castellanii; a viabilidade das amebas após contato com os fungos; e a influência de S. schenckii sensu stricto e S. brasiliensis no processo de encistamento de A. castellanii. As análises indicaram que S. schenckii e S. brasiliensis sofreram eventos fagocíticos por A. castellanii. Os resultados não demonstraram aumento significativo da replicação fúngica na presença da ameba e nem diminuição da viabilidade amebiana em cocultura com os fungos. Porém, os resultados foram obtidos através de testes in vitro, sendo necessários estudos com a coinfecção in vivo para confirmação desta hipótese. Sporotrichosis is a worldwide zoonotic subcutaneous mycoses, caused by species of the fungal Sporothrix schenckii complex. The protozoa from genus Acanthamoeba are widely distributed in the environment (soil, water and air), and some species may be pathogenic and/or opportunistic. These organisms coexist in the same environment, which may result in some interspecific changes. The aim of our study was to verify the profile of interaction between S. schenckii sensu stricto and S. brasiliensis and A. castellanii, by an in vitro model of co-culture as a modulator factor of both microorganisms intrinsic characteristics. In order to do so, we evaluated the phagocytosis index of S. schenckii sensu stricto and S. brasiliensis by A. castellanii; S. schenckii sensu stricto and S. brasiliensis viability after contact with A. castellanii; amoeba viability after contact with the fungus; and the influence of S. schenckii sensu stricto and S. brasiliensis in encystment process of A. castellanii. Our analyses indicated that S. schenkki and S. brasiliensis have suffered phagocytic events by A. castellanii. Results also showed that there was no significant increase in fungal replication in the presence of amoebae and there was no change in the viability of amoebas in co-culture with fungi. Our results were obtained through in vitro assays, which make possible the absence of these results in vivo, so there is a need for studies with co-infection in vivo in order to have a thorough understanding of this relationship. Our results were obtained through in vitro assays, which make possible the absence of these results in vivo, so there is a need for studies with co-infection in vivo in order to have a thorough understanding of this relationship.

Orientador: José Angelo Camilli Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Desordens musculoesqueléticas estão entre os acometimentos mais comuns a saúde humana com as fraturas ósseas se destacando como uma das mais debilitantes. Fraturas comprometem a qualidade de vida das pessoas e impõem significativa sobrecarga econômica a sociedade. O câncer ósseo, por sua vez, ocorre mais frequentemente em crianças e adultos jovens entre 5 e 20 anos de idade. Por ano cerca de 1000 novos casos de osteosarcoma (câncer ósseo) são diagnosticados só nos Estados Unidos. Por ano cerca de 1000 novos casos de osteosarcoma (câncer ósseo) são diagnosticados só nos Estados Unidos. Objetivando melhorar a qualidade do tratamento para essas condições nós alteramos a composição do vidro bioativo Bioglass®45S5 adicionando Dióxido de Nióbio (Nb2O5) ou Gálio (Ga). Nós buscamos dois diferentes objetivos principais: (1) aumentar a bioatividade do Bioglass®45S5 por meio da adição do Nb2O5 o que alteraria a estrutura interna do vidro, aumentando sua taxa de dissolução e consequentemente a formação da camada de hidroxiapatita sobre sua superfície a fim de ser usado para a regeneração de grandes fraturas; (2) produzir vidros bioativos capazes de liberar Gálio localmente, de uma forma controlada, para que este atue na regeneração de defeitos ósseos pós- osteotomia enquanto mata células cancerígenas remanescentes no local da lesão. Para alcançar esses objetivos nós conduzimos duas séries diferentes de estudos que estão apresentados nessa tese em duas partes. A parte um descreve três investigações que mostram que a adição do Nb2O5 a rede do Bioglass®45S5 produziu um vidros biocompatíveis, não genotóxicos e com bioatividade aumentada estimulando maior formação de osso subperiostal e a diferenciação de Células Tronco Embrionárias humanas (CTEs) e Células Mesenquimais derivadas da medula óssea. Além disso, esses vidros sofram capaz de proporcionar a regeneração de um defeito ósseo de 5 mm de diâmetro na calvária de ratos em 8 semanas. A segunda parte dessa tese mostra um estudo no qual nós investigamos o potencial da incorporação de Gálio em vidros bioativos biodegradáveis projetados especificamente para aplicações em câncer ósseo. Nós observamos que adição de 3% de Gálio promoveu a morte de mais de 50% das células de osteosarcoma (SAOS2 cells) sem afetar os osteoblastos saudáveis. Os vidros bioativos contendo gálio fornecem uma entrega controlada e local de íons gálio no sítio da fratura e tem potencial considerável em aplicações clínicas para o tratamento de câncer ósseo. Nós acreditamos que através do desenvolvimento de novos biomateriais para substituição óssea nosso estudo irá contribuir para a redução da morbidade e melhorar o prognóstico de milhões de vítimas de fraturas. Além disso, o conhecimento gerado pelo presente trabalho vem a aumentar a compreensão acerca da interação entre substitutos ósseos sintéticos e o tecido ósseo lesado, esclarecendo as respostas do corpo a presença de vidros bioativos contendo Nióbio ou Gálio. Assim, o presente estudo fomenta a literatura com informação relevante para prática clínica e futuras investigações Abstract: Musculoskeletal disorders are the most widespread human health issue with bone fractures standing among the most debilitating ones. Bone fractures compromises the quality of life of people and cause significant economic burden to society. On the other hand, bone cancer occurs most frequently in children and young adults between the age of 5 and 20 years, but may also grow in the elderly. Each year, about 1,000 new cases of osteosarcoma are diagnosed in the United States alone.Aiming to improve the quality of the treatment for these conditions we altered the composition of the Bioglass®45S5 adding Niobium Dioxide (Nb2O5) or Gallium (Ga). We targeted two different main goals: (1) increase the bioactivity of the Bioglass®45S5 by means of doping it with Nb2O5 which would alter the glass¿ internal structure, enhancing its dissolution rate and consequently the formation of a hydroxyapatite-like layer on its surface in order to use it for the regeneration of large fractures; (2) to produce a Ga-doped bioactive glass that can locally release gallium in a controlled manner to regenerate post-osteotomy defects whilst killing any remainder cancer cell. To meet these goals we conducted two different series of studies that are displayed in this thesis in two parts. Part one describes three investigations that show that the addition of Nb2O5 into Bioglass®45S5 produced biocompatible, non-genotoxic glasses which stimulated greater subperiosteal bone formation and the differentiation of Embryonic Stem Cells (ESCs) and bone marrow- derived Mesenchymal Stem Cells (BM-MSCs). Furthermore one composition of Nb-doped glass was able to regenerate a 5-mm size calvarial defect in rats after 8 weeks. The second part of this thesis shows a study in which we investigated the potential of incorporating gallium into bio-degradable bioactive glasses specifically targeted towards bone cancer applications. We observed that adding 3% of gallium killed more than 50% of the osteosarcoma cells (SAOS2) whilst it did not affect healthy human osteoblasts. The gallium doped bioactive glasses provide a localised controlled delivery of gallium ions at the surgical site of interest and has considerable potential clinical applications for bone cancer treatment. We believe that developing novel biomaterials for bone replacement our study will reduce the morbidity and to improve the prognostic of millions of victims of fractures. Nonetheless, the knowledge generated by the present work comes to improve the comprehension about the interaction between the synthetic bone substitutes and the injured bone tissue, clarifying the responses of the body in the presence of the Nb or Ga- doped bioactive glasses. Thus, the present study foments the literature with relevant information for clinic practise and further investigations Doutorado Anatomia Doutor em Biologia Celular e Estrutural CNPQ 141210/2017-6

Entre os fatores que levam à perda de implantes dentários estão aqueles relacionados ao trauma cirúrgico. Durante a perfuração do osso e instalação do implante dental, pode ocorrer elevação da temperatura do tecido ósseo peri-implantar. A necrose tecidual induzida pelo calor compromete a capacidade óssea de cicatrização e osseointegração. O objetivo deste trabalho foi avaliar a variação da temperatura durante a perfuração de osso sintético, a partir do uso de fresas coletoras retas para implante com desenho modificado. Sete novas fresas teste (T) de diâmetros variados foram comparadas com fresas controle (C) já existentes no mercado, a partir da mensuração da temperatura por termopar. Foi utilizado um corpo de prova de poliuretano em bloco, simulador de osso tipo I. As perfurações foram realizadas a 780 rpm e torque de 55 N.cm, sem irrigação e velocidade de carga constante de 2 kg, até a profundidade de 13 mm, com equipamento cirúrgico acoplado em dispositivo desenvolvido unido a máquina de ensaio universal. O termopar foi instalado no bloco de osso sintético a 2,0 mm da extremidade externa do raio de cada fresa. Foram coletadas as temperaturas ao final da perfuração (Tp) e no momento da remoção da fresa (Tr). As partículas obtidas de cada perfuração foram aferidas em balança de precisão (M, massa, em gramas). Os dados coletados referente a Variação de Temperatura de Perfuração (Tp, °C), Variação de Temperatura de Remoção (Tr, °C) e Massa (g) foram registrados em uma planilha no Microsoft Word Excel® para tabulação, submetidos ao teste de Shapiro-Wilk, seguido do teste de Kruskal-Wallis ou Tukey, com p

Estudos demonstram que a administração transdérmica de princípios ativos terapêuticos oferecem muitas vantagens, pois utilizam a pele como via de entrada para substâncias que proporcionem benefícios em função de seus compostos. Sendo assim, justifica-se o interesse e o crescimento de pesquisas que visam a descobrir formas de quantificar e potencializar a permeação de substâncias na pele. O microagulhamento é uma dessas técnicas utilizadas recentemente, pois tem como objetivo a criação de microrupturas na pele, penetrando suas barreiras. O ácido ascórbico é um ativo farmacológico que, quando associado à técnica de microagulhamento, possui ação antioxidante, formadora de colágeno e inibidora da melanogênese. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi verificar e analisar a retenção e permeação do Ácido Ascórbico 5%, associado ao microagulhamento em sistema de disfunção vertical. Os resultados mostraram que as micropunturas são efetivas no que diz respeito a ampliar a retenção do ativo em todas as camadas da pele no tempo de 30 minutos, entretanto, a permeação foi maior no grupo tratado em relação ou controle no tempo de 15 minutos. Studies demonstrate that the transdermal administration of therapeutic active ingredients offer many advantages once the skin is used as a gateway for substances that provide benefits depending on their compounds. This may justify the interest and the growth of researches that seek to discover ways to quantify and potentiate the permeation of substances in the skin. Microneedling is one of the techniques recently used since it aims to create microruptures in the skin, penetrating its barriers. Ascorbic acid is a pharmacological active that associated with the microneedle technique, has antioxidant, collagen-forming and melanogenesis inhibiting action. The objective of this study was, therefore, to verify and analyze the retention and permeation of 5% Ascorbic Acid associated to microneedling in a vertical dysfunction system. The results showed that micropunctures are effective in increasing the retention of the active in all the layers of the skin in the time of 30 minutes, however, the permeation was greater in the treated group in relation or control in the time of 15 minutes.

The maxillofacial region may be affected by a variety of benign lesions (odontogenic and non-odontogenic), but locally invasive. The use of a conservative treatment can generate high rates of recurrence, whereas a radical approach can lead to aesthetic-functional disorders. The use of Carnoy's solution, as a complementary therapy to surgical treatment, has been described in the literature with the purpose of reducing the recurrence rates of these lesions, in addition to minimizing damages resulting from an aggressive surgical treatment. Thus, the present dissertation is constituted by two chapters that aim, respectively: 1) to characterize the physico-chemical and pharmacological properties of Carnoy's solution with and without chloroform; 2) to evaluate in vitro the effect of different formulations of Carnoy's solution on calcified human substrates. As methodological approaches, laboratory studies were performed. In Chapter 1, the physico-chemical / pharmacological properties and behavior of different formulations of the Carnoy solution used in oral and maxillofacial surgery were evaluated through Raman microspectroscopy, UV / Visible spectrophotometry, among others. The results of this study showed that the Carnoy solution presents acidic pH and, when chloroform is present, it becomes slightly more acidic, as well as giving the solution a higher viscosity. When the solutions were not filtered after preparation, precipitation of iron salts occurred after the seventh day when the chloroform was used in its composition. A study was carried out with 36 lower third molars and 18 mandibular bone fragments, both donated and collected from humans, which were divided into three groups: two groups (Group I = Carnoy solution with chloroform, Group II = Carnoy solution without chloroform) and a control group (saline solution). The samples were evaluated through Raman microspectroscopy, Knoop microhardness test and scanning electron microscopy (SEM) with X-ray dispersive energy spectrum (EDX). There was demineralization / degradation of dental structures in both the mineral matrix / organic matrix and carbonate / phosphate (GI and GII, p

The microorganisms when presented in biofilm express properties different from when they are in the planktonic form. One of these properties is a higher resistance to antimicrobial agents. The aim of this study was to evaluate the formation of dermatophytes’ biofilms in in vitro and ex vivo assay performed in polystyrene coverslip and nail fragments, respectively, and their susceptibility to three antifungal agents (itraconazole, voriconazole and griseofulvin) in planktonics and biofilm forms. To this end, at first, they were used 26 strains isolated from clinical specimens of human and animal: Trichophyton rubrum (4) Trichophyton tonsurans (6), Trichophyton mentagrophytes (3), Microsporum gypseum (3) e Microsporum canis (10). The biofilms were initially formed in microdilution plates, and the strains were classified by the amount of biomass as non producers (2/26), weak (7/26), moderate (1/26) and strong biofilm producers (16/26). Then, strains, strong producers of biofilms, were chosen, one of each species, to biofilm formation in coverslip Thermanox® and nail fragments for later analysis by optical, confocal and scanning electron microscopy. The analyzes demonstrated that all species formed biofilms in vitro and ex vivo, with different density and architecture. M. gypseum and M. canis produced biofilms with higher and lower amounts of biomass, respectively. At a second step, according to the recommendations of the CLSI M38-A2 protocol, the minimum inhibitory concentration (MIC) values for the three antifungal agents against these 26 strains were determined, in the planktonic form. MICs values ranged from 0.00195-0.25 μg/ml for itraconazol, 0.00195-0.125 for voriconazole and

FACEPE A anfotericina B (AnB) é um antibiótico macrolídeo derivado de uma cepa de Streptomyces nodosus, de reconhecida atividade antifúngica e leishmanicida. No entanto, tem seu uso limitado em razão da elevada toxicidade. Para tentar reduzir essa toxicidade na forma convencional tem se estimulado o desenvolvimento de novos sistemas de liberação. A via tópica oferece algumas vantagens, todavia a eficácia tópica só é obtida quando o fármaco apresenta adequado grau de penetração na pele. As microemulsões (MEs) são uma proposta interessante para a veiculação por via tópica da AnB, pois atuam como promotores de permeação, devido ao reduzido tamanho das gotículas formadas, assim como pelo seu alto conteúdo de tensoativos, que desorganiza os lipídeos da pele. Além disso, as MEs podem proporcionar uma modificação na biodisponibilidade e na diminuição da toxicidade dos fármacos, visto que esses sistemas apresentam-se como reservatórios capazes de liberar e direcionar os fármacos para tecidos e células específicas do organismo. Portanto, o objetivo deste estudo foi desenvolver e comparar as características biofarmacêuticas e potencial irritante de MEs e sistemas convencionais (SCs) contendo óleo de Syagrus cearensis para administração tópica de AnB. Diagramas de fase pseudo-ternários foram construídos utilizando o método de titulação de água para desenvolver as MEs e os SCs foram preparados de acordo com a técnica clássica de inversão de fase. No estudo de permeação e retenção cutânea, pele de porco dermatomizada sem estrato córneo foi utilizada como um modelo de biomembrana lesionado. O potencial de irritação foi avaliado utilizando três métodos alternativos, os ensaios da membrana corioalantóide (HET-CAM e CAM-TBS) e o teste de opacidade e permeabilidade em córnea bovina (BCOP). A formulação otimizada (ME02) consistiu em Anfotericina B a 0,1% (p/p), óleo catolé 9,1% (p/p), Smix (1:1, Tween 20 e Kolliphor EL) 81%, tamanho de gotícula de 31,02 ± 0,9 nm, potencial zeta de -23,4 mV e viscosidade 0,63 ± 0,1 Pa.s. A ME02 exibiu maior retenção de AnB nas camadas de pele (84,79 ± 2,08 μg.cm-2) do que todas as outras formulações. Em geral, as MEs apresentaram maior liberação e retenção do fármaco do que os SCs e todas as formulações mostraram maior retentividade que permeabilidade. Apenas as MEs desenvolvidas usando Labrasol/Plurol (L/PO) como par de tensoativos exibiram um potencial de irritação moderado, todas as outras formulações foram classificadas como não-irritantes ou levemente irritantes. Os resultados indicam que as formulações contendo óleo de S. cearensis são alternativas promissoras para a administração tópica da AnB visando o tratamento da leishmaniose cutânea. Amphotericin B is a macrolide antibiotic derived from a strain of Streptomyces nodosus, known for its antifungal and antileishmanial activity. However, it has limited use due to the high toxicity. In order to reduce the toxicity in the conventional way, the development of new delivery systems has been stimulated. Topical administration of active drugs is a route that offers certain advantages, however, topical efficacy is only obtained from drugs with a suitable degree of penetration into the skin. Microemulsions are an interesting proposal for topical administration of Amphotericin B, because they act as permeation enhancers, due to the small size of the droplets formed, as well as to its high content of surfactants, which disrupts the skin lipids. Moreover, the MEs can also provide a change in bioavailability and by decreasing the toxicity of drugs, since such systems are presented as reservoirs capable of releasing drugs and targeting tissues and specific cells of the organism. Therefore, the aim of this study was to compare the biopharmaceutical characteristics and irritation potentials of microemulsions (MEs) and conventional systems (CSs) containing oil from Syagrus cearensis for intradermal delivery of Amphotericin B (AmB). Pseudo-ternary phase diagrams were constructed using a water titration method to develop the MEs, and the CSs were prepared according to the classical technique of phase inversion. In the skin permeation and retention study, dermatomed pig skin without stratum corneum was used as an alternative disturbed skin model. The irritation potential was evaluated using three different methods, chorioallantoic membrane assays (HET-CAM and CAM-TBS), and bovine corneal opacity and permeability test (BCOP). The optimized formulation (ME02) consisting of 0.1% (w/w) Amphotericin B, 9.1% (w/w) catolé oil, 81% (w/w) Smix (1:1, Tween 20 and Kolliphor EL) possessed droplet size of 31.02 ± 0.9 nm, zeta potential of -23.4 mV and viscosity 0.63 ± 0.1 Pa.s. ME02 exhibited greater retention of AmB in to skin layers (84.79 ± 2.08 μg.cm-2) than all the others formulations. In general, MEs showed higher drug release and retention than CSs and all of the formulations showed greater retentivity than permeability. Only MEs developed using Labrasol/Plurol Oleique (L/PO) as the surfactant and co-surfactant exhibited a moderate irritation potential, all other MEs and CSs were classified as non-irritants or slight irritants. The results indicate that formulations containing oil from S. cearensis are promising alternatives for the delivery of AmB targeting the treatment of cutaneous leishmaniasis.

Sporotrichosis is a cosmopolitan subcutaneous mycosis, found mainly in tropical and subtropical areas of Latin America, caused by species of Sporothrix schenckii complex. The aim of this study was to demonstrate the capacity of Sporothrix schenckii complex to produce in vitro biofilms and to determine the profile of these biofilms against to classical antifungal drugs. Four species from Sporothrix schenckii complex were used: S. brasiliensis (n=10), S. schenckii sensu stricto (n=2), S. globosa (n=2) and S. mexicana (n=4). The formation of biofilms was performed by transferring inoculum of 2 x 105 conidia/mL for microdilution plates, which were incubated at 25 °C for 5 days. After each day of incubation, XTT and Crystal Violet assays were made to determine the metabolic activity and biomass of biofilm, respectively. For susceptibility tests, three different concentrations (planktonic MIC, 10 x MIC and 50 x MIC) of antifungals amphotericin B (AMB), caspofungin (CAS), ketoconazole (KTC), voriconazole (VRC) and fluconazole (FLC) were transferred to biofilm wells, which were incubated for 72 hours at 25 °C. The biofilms profile then antifungal drugs presence was determined by the XTT and crystal violet assays. Biofilms were produced in Thermanox™ coverslips for viewing by optical microscopy with congo-red staining, scanning electron microscopy and confocal microscopy. It was found that all species from S. schenckii complex are strong biofilm-forming, with no difference formation between them. Absorbance of biofilm after drug exposure showed that biomass and metabolic activity was significantly reduced (p

Submitted by LEONARDO DE FREITAS SILVA null (leonardofreitas86@gmail.com) on 2016-10-20T13:26:49Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado- reapresentação 1.pdf: 1472109 bytes, checksum: e157f95a9ba34bce0469c51f091af276 (MD5) Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-10-26T17:52:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silva_lf_me_arafo.pdf: 1472109 bytes, checksum: e157f95a9ba34bce0469c51f091af276 (MD5) Made available in DSpace on 2016-10-26T17:52:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silva_lf_me_arafo.pdf: 1472109 bytes, checksum: e157f95a9ba34bce0469c51f091af276 (MD5) Previous issue date: 2016-10-17 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A estabilidade primária de implantes dentários corresponde a um fenômeno mecânico relativo à qualidade ou quantidade óssea, ao tipo de implante e a técnica de instalação. O objetivo deste trabalho foi avaliar o tempo de fresagem, aquecimento dos sítios fresados e a estabilidade dos implantes instalados em cavidades realizadas com ultrassom cirúrgico e instrumentos rotatórios. Foram realizadas 64 cavidades em 04 blocos de poliuretano simulando as densidades de ossos tipo I, II, III e IV. A temperatura da superfície do bloco nos leitos foi medida durante a fresagem. A estabilidade dos implantes foi mensurada por meio do torque de inserção, de remoção e frequência de ressonância. O implante cilíndrico TitaOss 3,75 x 11 mm foi instalado em todas as cavidades. Os resultados mostraram maior tempo e temperatura para o grupo em que foi usado o ultrassom. Quanto à estabilidade primária não houve diferença significante entre os grupos estudados. Pôde-se concluir que a estabilidade primária dos implantes não foi influenciada pelos métodos de fresagem utilizados e que o ultrassom cirúrgico necessitou de mais tempo e gerou mais calor do que o instrumento rotatório para o preparo das cavidades. The primary stability of dental implants corresponds to a mechanical phenomenon related to bone quality or quantity, type of implant and installation technique. The objective of this study was to evaluate the time of drilling, heating drilled sites and stability of implants placed in cavities made with piezosurgery and rotary instruments. Polyurethane blocks were used simulating the densities of bone type I, II, III and IV. The surface temperature of the block was measured in the cavity during drilling, and recorded the highest temperature variation. The stability of the implants was measured with a torque insertion, torque of removal and resonance frequency. The cylindrical implant TitaOss 3.75 x 11 mm was used in all cavities. The results showed greater time and temperature for the group that was used piezosurgery. The primary stability was no significant difference between groups. It could be concluded that implant primary stability was not influenced by the used methods and piezosurgery took more time and generated more heat than the conventional rotatory instruments to prepare the cavities.

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-07T15:14:00Z No. of bitstreams: 1 Paula Azevedo dos Santos Tese completa.pdf: 2247901 bytes, checksum: de2f4110fb7968af2bf65df8905ed4b1 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-07T15:14:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paula Azevedo dos Santos Tese completa.pdf: 2247901 bytes, checksum: de2f4110fb7968af2bf65df8905ed4b1 (MD5) Previous issue date: 2016-09-25 Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Aeromonas is an important pathogen for humans and animals and is responsible for the etiology of intestinal and extraintestinal diseases. The presence of Aeromonas spp. in food and water demonstrates that it s an important vehicle of infection in humans. The pathology caused by these bacteria involves several virulence factors, such as the ability to adhere, invade and produce toxins. The properties conferred by these factors have been extensively studied in experiments of interaction between bacterial strains and cell culture. However, there is no animal model established to study Aeromonas spp. pathogenesis. The present study assessed the interaction of eight Aeromonas spp. strains, previously isolated from human faeces, food and water with HEp-2, Caco-2 and T-84 cell lines as to the cytotoxic effects, the pattern of adhesion, invasive capacity and intracellular survival. We also evaluated the interaction of five A. caviae strains isolated from human diarrheic faeces with rabbit ileal and colonic mucosa ex vivo, using in vitro organ culture model (IVOC). The results showed that Aeromonas strains were adherent to three cells lines in 6 h of incubation, displaying the aggregative adherence pattern. Among eight strains studied, 50 % produced cytotoxic effects on HEp-2 cells, while none of the strains produced cytotoxic effects on Caco-2 and T-84 cells at 48 h. This study demonstrated that strains of Aeromonas isolated from different sources were able to invade intestinal (T-84, Caco-2) and epithelial (HEp-2) cell lines cultivated in vitro surviving within intracellular environments up to 72 h. All strains adhered to rabbit ileal and colonic mucosa, with higher degree of adherence on the colonic mucosa. The typical aggregative adherence pattern was observed among all strainsstudied. Through electron microscopy and light microscopy we observed extensive colonization of ileal and colonic mucosa, large mucus production, biofilm formation and morphological alterations such as intense vacuolization, structural disorganization, cell extrusion and destruction of the villi. Our study demonstrated that the in vitro organ culture (IVOC) of rabbit intestinal mucosa may be used to investigate the mechanisms of pathogenesis of Aeromonas spp. Our results also contributed to reinforce the pathogenic potential of Aeromonas strains, confirming its importance inpublic health. Aeromonas é um importante patógeno para o homem e animais, sendo responsável pela etiologia de doenças intestinais e extra-intestinais. A presença de Aeromonas spp. nos alimentos e na água faz com que estes sejam importantes veículos de infecções para os seres humanos. A patologia causada por esta bactéria envolve inúmeros fatores de virulência, dentre eles a capacidade de aderir, invadir e produzir toxinas. As propriedades atribuídas a esses fatores têm sido extensivamente estudadas em experimentos de interação entre cepas bacterianas e cultura de células. No entanto, não há um modelo animal bem estabelecido no estudo da patogênese de Aeromonas spp. O presente estudo avaliou a interação de oito cepas de Aeromonas spp. previamente isoladas, a partir de fezes humanas, alimentos e água com linhagens celulares HEp-2, T-84 e Caco-2 quanto a ação das toxinas citotóxicas, o padrão de aderência celular, a capacidade de invasão e a sobrevivência intracelular. A interação de cinco cepas de A. caviae originárias de fezes diarreicas humanas com mucosa ileal e colônica de coelho ex vivo, utilizando cultivo de órgão in vitro (IVOC) também foi avaliada. Observamos que todas as cepas de Aeromonas foram aderentes às três linhagens celulares em 6 horas de incubação, exibindo o padrão agregativo. Entre as oito cepas estudadas, 50% produziram efeitos citotóxicos em células HEp-2, enquanto que nenhuma cepa foi citotóxica em células Caco-2 e T-84 após 48 horas de incubação. Este estudo demonstrou que as cepas de Aeromonas isoladas de diferentes fontes foram capazes de invadir linhagens intestinais (T-84, Caco-2) e linhagem epitelial (HEp-2) cultivadas in vitro e que sobreviveram no ambiente intracelular por até 72 h. Todas as cepas aderiram a mucosa ileal e colônica de coelho ex vivo, com maior grau de aderência na mucosa colônica. O típico padrão agregativo de aderência foi observado entre as cepas estudadas. Através de microscopia eletrônica e microscopia de luz foi possível observar extensiva colonização da mucosa do íleo e do cólon, grande produção de muco, formação de biofilme e alterações morfológicas tais como, intensa vacuolização, desorganização estrutural, extrusão celular e destruição das vilosidades. Nosso estudo demonstrou que a cultura de órgão in vitro (IVOC) da mucosa intestinal de coelho pode ser utilizada para investigar os mecanismos de patogênese de Aeromonas spp. Nossos resultados também contribuíram para corroborar o potencial patogênico de cepas de Aeromonas, ratificando sua importância na área de saúde pública.

Submitted by ALINE SILVA ANDRADE null (alynesandrade@hotmail.com) on 2016-05-25T18:52:56Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO FINAL 25_05_2016 PARA REPOSITORIO UNESP.pdf: 1640140 bytes, checksum: 1d8244378caa2e1a54d7c3ab788fdacf (MD5) Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-05-31T14:06:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 andrade_as_me_arafo_par.pdf: 644728 bytes, checksum: 71ea41c3a10ae63a6f903e598e5303a0 (MD5) Made available in DSpace on 2016-05-31T14:06:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 andrade_as_me_arafo_par.pdf: 644728 bytes, checksum: 71ea41c3a10ae63a6f903e598e5303a0 (MD5) Previous issue date: 2016-03-31 Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Cimentos à base de silicato tricálcico são desenvolvidos como alternativa ao Mineral Trióxido Agregado (MTA). O objetivo do estudo foi avaliar a biocompatibilidade e bioatividade do cimento experimental silicato tricálcico com 20% de óxido de zircônio (ZrO2) (STC) e MTA Plus (MTAP). Capítulo1- Células humanas de osteoblastos (Saos-2) foram utilizadas para análise da viabilidade celular por meio dos ensaios de MTT e Vermelho Neutro (NR), da bioatividade pela atividade da enzima fosfatase alcalina (ALP) e da presença de área mineralizada pela coloração de Vermelho de Alizarina (ARS). Os dados obtidos para MTT, NR e ALP foram analisados por ANOVA e Bonferroni, e ARS, por ANOVA e Tukey (p ≤ 0,05). Nos ensaios de viabilidade celular, os materiais não foram citotóxicos. Maior atividade de ALP ocorreu aos 7 dias para todos materiais avaliados. Área mineralizada foi observada em todos os grupos, sendo menor para o grupo STC. Concluiu-se que o cimento experimental silicato tricálcico com 20% de óxido de zircônio e MTA Plus apresentam citocompatibilidade e potencial bioativo. Capítulo 2- A reação inflamatória induzida pelo STC e MTAP foi investigada em subcutâneo de ratos. Tubos de polietileno foram preenchidos com STC (n= 20) e MTAP (n= 20) e implantados no subcutâneo dorsal de quarenta ratos. No grupo controle (GC; n= 20), tubos vazios foram implantados. Após 7, 15, 30 e 60 dias, os tubos de polietileno com o tecido conjuntivo circundante foram fixados e embebidos em parafina. O número de células inflamatórias foi avaliado nos cortes corados em HE; e a densidade numérica de células para interleucina-6 (IL-6) após imunomarcação. Os dados obtidos foram analisados pelos Testes ANOVA e Tukey (p ≤ 0,05). Elevado número de células inflamatórias e imunomarcadas para IL-6 foram observadas aos 7 dias, em todos os grupos; no entanto, o número de células inflamatórias foi significativamente maior para os grupos STC e MTAP. Diferenças significantes não foram detectadas em relação ao número de células imunomarcadas para IL-6 nas cápsulas entre os grupos GSTC, GMTAP e GC, em cada período. Uma redução gradativa e significante da reação inflamatória e imunomarcação para IL-6 foi observada, em todos os grupos. Aos 60 dias, as cápsulas de tecido conjuntivo denso exibiram diversos fibroblastos e feixes organizados de fibras colágenas. Concluiu-se que o cimento experimental silicato tricálcico com 20% de óxido de zircônio e MTA Plus são materiais biocompatíveis. Tricalcium silicate- based cements have been developed as an alternative to Mineral Trióxido Agregado (MTA). The aim of the study was to evaluate biocompatibility and bioactivity of the tricalcium silicate cement replaced with 20% zirconium oxide (STC) e MTA Plus (MTAP). Chaper 1- Human osteoblastic cells (Saos-2) were exposed to test materials and assessed for viability, MTT and Neutral Red (NR) assay, and bioactivity for ALP activity assay and alizarin red staining (ARS). Unexposed cells acted as the control group. Statistical analysis was performed using ANOVA and the Bonferroni post- test (P < 0.05) to MTT, NR and ALP, and ANOVA and Tukey post- test (P ≤ 0.05) to ARS. MTT and NR results, all tested cements were non-cytotoxic. The highest ALP activity occurred at the 7th days. Mineralized area was observed in all materials, STC group showed lower mineralized area. Experimental tricalcium silicate with 20% zirconium oxide and MTA Plus have present biocompatibility and bioactive potential. Chapter 2- The inflammatory reaction induced by tricalcium silicate cement replaced with 20% zirconium oxide (STC) e MTA Plus (MTAP) was evaluated in rat subcutaneous tissues. A polyethylene tube filled with STC (n= 20) and MTAP (n= 20) was placed into the dorsal subcutaneous of forty rats; in the control group (GC; n= 20), empty tubes were implanted. After 7, 15, 30 and 60 days, the polyethylene tubes surrounded by connective tissue were embedded in paraffin. The number of inflammatory cells was estimated in HE-stained sections; numerical density of interleukin-6 (IL-6)- immunolabelled cells was also performed. The differences amongst the groups were analysed statistically by Tukey’s test (P ≤ 0.05). A high number of inflammatory cells and IL-6-positive cells were observed at 7 days, in all groups; however, the number of inflammatory was significantly higher (P ≤ 0.05) to STC and MTAP groups. The number of IL-6- positive cells in the capsules was not significantly different amongst GSTC, GMTAP and GC groups in each period. In the capsules of animals from all groups, a gradual and significant reduction (P ≤ 0.05) of these parameters was seen over time. At 60 days, the connective tissue capsules exhibited numerous fibroblasts and bundles of collagen fibres. Experimental tricalcium silicate with 20% zirconium oxide and MTA Plus are biocompatible. FAPESP: 2014/13353-1

The Chagas disease is a major public health problem, affecting about 6 million people worldwide and causes high morbidity and mortality in affected populations. The benznidazole (BZ), the drug used in the treatment has limited effectiveness and cause serious adverse effects. The drug transport by nanoparticles has demonstrated efficacy as the controlled and targeted release of pharmacological molecules, in addition to its desirable properties such as good biocompatibility and biodegradability. The objective of this study was to evaluate the cytotoxicity of benznidazole nanoparticles of calcium carbonate (CaCO3 @ BZ) on host cells LLC-MK2; determining the trypanocidal effect on epimastigotes, trypomastigote and amastigotes of T. cruzi Y strain and comparing the effect of BZ as well as to characterize the mechanism of death. The cytotoxicity tests using the MTT method conducted with LLC-MK2 cells grown in DMEM with 10% FBS showed IC50 of 55 ug / ml for BZ @ CaCO3 and 160 g / mL for BZ. epimastigotes were cultured in LIT 10% FBS at 28 ° C in the presence of CaCO3 @ BZ for 24, 48 and 72 hours. BZ @ CaCO3 showed trypanocidal activity against epimastigotes the three treatment times (24h IC50 = 8.72 mg / ml, 48 h IC50 = 8 ug / ml, 72 h IC50 = 4.8 ug / ml) this being more significant effect the BZ (IC50 = 24h 56.7 g / ml IC50 = 48h 15.9 g / ml, 72 h IC50 = 4.3 ug / ml). trypomastigotes were obtained from LLC-MK2 cells infected supernatants, resuspended in DMEM with 2% FCS and treated for 24 h. The trypomastigotes were more likely BZ @ CaCO3 (IC50 = 1.8 ug / ml) than the BZ (IC50 = 67 ug / ml). These assays were also performed with calcium carbonate nanoparticles free drug (@ CaCO3) used as negative control. In the tests with the amastigote forms obtained by infecting LLC-MK2 cells BZ @ CaCO3 was able to reduce the% of infected cells, the number of amastigotes per infected cells and the survival rate at 24 hours of incubation. Flow cytometric assays using fluorescence markers 7-amino actinomycin D, annexin V-PE and rhodamine 123 demonstrated that the trypanocidal effect of both BZ @ CaCO3 as BZ associated death by necrosis with altered mitochondrial potential. Thus, it is concluded that the CaCO3 has BZ @ trypanocidal effect in vitro on the three forms of Trypanosoma cruzi, this being potentially greater effect than that observed for BZ. A doença de chagas é um grande problema de saúde pública, afeta cerca de 6 milhões de pessoas em todo o mundo e causa altos índices de morbidade e mortalidade nas populações afetadas. O benzonidazol (BZ), fármaco utilizado no tratamento apresenta eficácia limitada e provoca sérios efeitos adversos. O transporte de fármacos por meio de nanopartículas tem demonstrado eficiência quanto à liberação controlada e direcionada de moléculas farmacológicas, além de apresentar propriedades desejáveis, como boa biocompatibilidade e biodegradabilidade. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a citoxicidade de nanopartículas de benzonidazol em carbonato de cálcio (BZ@CaCO3) sobre células de hospedeiras LLC-MK2; determinar o efeito tripanocida sobre as formas epimastigotas, tripomastigotas e amastigotas da cepa Y de T. cruzi e comparar ao efeito do BZ, bem como, caracterizar o mecanismo de morte. Os testes de citotoxicidade utilizando o método do MTT realizados com células LLC-MK2 cultivadas com meio DMEM a 10% de SBF demonstraram IC50 de 55 µg/mL para BZ@CaCO3 e 160 µg/mL para BZ. Formas epimastigotas foram cultivadas em meio LIT a 10% de SBF a 28ºC na presença de BZ@CaCO3 por 24, 48 e 72 horas. BZ@CaCO3 mostrou atividade tripanocida sobre formas epimastigotas nos três tempos de tratamento (CI50 24h = 8,72 µg/mL; CI50 48h = 8 µg/mL; CI50 72 h = 4,8 µg/ml) sendo esse efeito mais significativo que o do BZ (CI50 24h = 56,7 µg/mL CI50 48h = 15,9 µg/mL; CI50 72h = 4,3 µg/ml). Formas tripomastigotas foram obtidas a partir dos sobrenadantes de células LLC-MK2 infectadas, ressuspensas em meio DMEM com 2% de SBF e tratadas durante 24 h. As formas tripomastigotas foram mais susceptíveis a BZ@CaCO3 (IC50 = 1,8 µg/mL) do que ao BZ (CI50= 67 µg/mL). Esses ensaios também foram realizados com nanopartículas de carbonato de cálcio livres de fármacos (@CaCO3) utilizadas como controle negativo. Nos ensaios com as formas amastigotas obtidas por infecção de células LLC-MK2 BZ@CaCO3 foi capaz de reduzir o % de células infectadas, o número de amastigotas por células infectadas e o índice de sobrevivência em 24h de incubação. Ensaios de citometria de fluxo utilizando os marcadores de fluorescência 7- amino actinomicina D, anexina V- PE e rodamina 123 mostraram que o efeito tripanocida tanto da BZ@CaCO3 quanto do BZ está relacionado a morte por necrose com alteração do potencial mitocondrial. Assim, conclui-se que a BZ@CaCO3 apresenta efeito tripanocida in vitro sobre as três formas de Trypanossoma cruzi, sendo esse efeito potencialmente maior do que o observado para BZ.

A técnica walking bleach amplamente utilizada para clareamento endógeno em dentes despolpados e escurecidos, é considerada simples, conservadora e de resultados previsíveis na busca de um perfil estético, capaz de alterar significantemente a autoestima dos pacientes. Com o objetivo de analisar novos produtos para este fim, o presente estudo visa avaliar in vitro o potencial clareador e possível difusão do percarbonato de sódio, comparado ao peróxido de carbamida a 37% em dentes bovinos manchados. Foram utilizados nesta pesquisa 40 incisivos centrais divididos em quatro grupos conforme os agentes clareadores recebidos e controle: G1- peróxido de carbamida a 37%; G2- percarbonato de sódio; G3 – (controle positivo) percarbonato de sódio sem barreira; G4 (controle negativo) –bolinha de algodão estéril. Os espécimes foram individualizados em recipientes de vidro preenchidos totalmente com água destilada até a altura do cíngulo. As leituras de cor foram realizadas nos dias: tempo zero (antes do manchamento), 1° (inicial), 7º, 14°, 21° e 28° (final) utilizando um colorimetro Shade Eye através do sistema CIEL*a*b*.Para a análise de possível difusão, as amostras de água obtidas foram analisadas por um peagâmetro digital portátil Kasvi nos dias 0,1,7,14 e 21.Para a análise inferencial dos componentes da cor e difusão das amostras nos diferentes tempos foi utilizada a análise de variância de duas vias (Two-way ANOVA), complementada por teste de Tukey quando detectadas diferenças estatisticamente semelhantes para um nível de significância α=0,05. Os resultados obtidos demostraram que o percarbonato de sódio é tão eficaz e seguro quanto o peróxido de carbamida quando utilizado como agente clareador interno para dentes bovinos. ABSTRACT - The walking bleach tequinic widely used for bleaching in endogenous pulped and discolored teeth, is considered simple, conservative and predictable results in the search for an aesthetic profile, able to significantly change the self-esteem of patients. In order to analyze new products for this purpose, this study aims to evaluate the in vitro whitening potential and possible diffusion of sodium percarbonate, compared to carbamide peroxide 37% in stained bovine teeth. They were used in this research 40 central incisors divided into four groups according to the received control and bleaching agents: G1 carbamide peroxide at 37%; G2 sodium percarbonate; G3 - (positive control) sodium percarbonate with no buffer; G4 (negative control) –without whitening solution or staining. The specimens were kept individually in glass containers completely filled with distilled water up to the height of the girdle. The color readings were taken on days: zero time (prior to staining), 1st (starting), 7th, 14 °, 21 ° and 28 ° (final) using a colorimeter Shade eye through the CIEL * a * b * system. For the analysis of possible diffusion, the obtained water samples were analyzed by a portable digital pHmeter Kasvi on days 0,1,7,14 and 21. For the inferential analysis of color components and distribution of samples at different times was used to analyze two-way variance (two-way ANOVA), complemented by Tukey test when detected statistically similar differences for a significance level α = 0.05. The results showed that the sodium percarbonate is as effective and safe as the carbamide peroxide when used as internal bleaching agent for bovine teeth.

OBJETIVO: Avaliar a influência de Lactobacillus rhamnosusna expressão dos fatores de virulência de Candida albicans in vitro.MÉTODOS: Uma suspensão de L. rhamnosusfoi inicialmente cultivada em ágar MRS. No dia seguinte, foi adicionado ágar Sabouraud dextrose sobre o crescimento dos lactobacilos e C. albicansfoi cultivada, por 24, 48 e 72 horas. As cepas de Candidaforam então isoladas para investigação da capacidade de formação de biofilme, por meio do cultivo em placas de 96 poços e leitufra das densidades ópticas e contagem de unidades formadoras de colônia por mL (UFC/mL). Também se investigou a capacidade de formação de tubo germinativo, após incubação em soro de cavalo e contagem em 200 células. Os resultados foram comparados aos observados nas cepas de Candidacultivadas na ausência de L. rhamnosus, utilizando o teste tde Student para análise estatística.RESULTADOS: Observou-se uma redução significativa no crescimento de C. albicans na presença de lactobacilos após 24, 48 ou 72 horas. Também foi observada redução significativa na formação de tubo germinativo após a interação por 48 ou 72 horas. Quanto à formação de biofilme, não foi observada diferença significante entre as cepas de Candidacultivadas na presença ou na ausência de lactobacilos.CONCLUSÃO: Os resultados sugerem que L. rhamnosusé capaz de influenciar significativamente o crescimento e a expressão de fatores de virulência de C. albicans in vitro, podendo interferir na patogenicidade desses micro-organismos. PURPOSE: To investigate the influence of Lactobacillus rhamnosus in the expression of virulence factors of Candida albicans in vitro.METHODS: A suspension of L. rhamnosus was initially grown in MRS agar. The other day, Sabouraud dextrose agar was added on the growth of lactobacilli and C. albicans was seeded for 24, 48 and 72 hours. Candida strains were then isolated for investigation of the ability of biofilm formation, by means of cultivation into 96 wells plaque, and reading the optical densities and counting colony forming units per mL. Also the ability of germ tube formation was investigated, after incubation in horse serum and counting of 200 cells. The results were compared to Candida strains grown in the absence of L. rhamnosus, using Student's t test for statistical analysis.RESULTS: there was a significant reduction in the growth of C. albicans in the presence of lactobacilli after 24, 48 or 72 hours. Significant reduction was also observed in germ tube formation after interaction for 48 or 72 hours. For biofilm formation, no statistically significant difference was observed between the Candida strains grown in the presence or absence of lactobacilli.CONCLUSION: The results suggest that L. rhamnosus is able to influence significantly the growth and expression of virulence factors of C. albicans in vitro, and may interfere with pathogenicity of these micro-organisms.

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-07T15:16:35Z No. of bitstreams: 1 Adriane de Lacerda Nery Dissertacao completa.pdf: 1136047 bytes, checksum: 8b47244acd965d6576f2af2254091f0b (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-07T15:16:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Adriane de Lacerda Nery Dissertacao completa.pdf: 1136047 bytes, checksum: 8b47244acd965d6576f2af2254091f0b (MD5) Previous issue date: 2015-07-15 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Leishmaniasis are a group of diseases caused by protozoan of genus Leishmania spp affecting of 98 countries. In Brazil, in the year 2013 were 3.253 reported cases of visceral leishmaniasis and 18.226 cases of cutaneous leishmaniasis. The first choice of treatment is still performed with pentavalent antimonials and in cases of failures drugs of second line of treatment are pentamidine and anfotericin B. These drugs cause many adverse effects and has lately emerged resistant strains. In endemic areas it has been increasingly common the appearance of co-infection Leishmania and Mycobacterium tuberculosis. The treatment of tuberculosis with pyrazinamid and isoniazid control the leishmaniasis.The aim of this study was evaluate the anti-leishmania activity in vitro of INZ and PZA and yours derivatives compounds (serie G and serie R,respectively) on the Leishmania (Viannia) braziliensis. The molecules were tested on infected monolayers of peritoneal murine macrophages for 48h. All the molecules te inhibited the infection index in a dose-dependent manner in relation to controls. The molecules of the R series were more active than PZA, but the result was only significant for R02 (p < 0,005). Only R05 (CC50 = 76,64µM) was relatively toxic to macrophages. The most active compounds were R02, G01 and G02 whose select index were 14,31, 19 and 30, respectively. Nitrite assay was performed in supernatants of infected monolayers of peritonial macrophages treated with the substancies at 10 and 100µM. G01 and G02 stimulated NO2 prodution, however, the result was only statistically significant for G02 at 100µM (p < 0,001). All the compounds of R serie stimulated NO2 production however the results were statistically significant for the R03 and R05 at 100µM (p < 0,001). Additionally, a in silico preditive pharmacokinetic analysis was performed to active molecules using the admetSAR software the data showed that G01, G02 and R02 were similar to their original molecules as to high capacity to be absorbed by the gastrointestinal tract, low hepatotoxic and carcinogenic potencial. Together, these data demonstrate that these molecules are selectively toxic to the parasite with the potencial to be tested orally on studies in experimental infection. As leishmanioses são um grupo de doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania spp que afetam 98 países. No Brasil, no ano de 2013, foram relatados 3.253 casos de leishmaniose visceral e 18.226 casos de Leishmaniose Tegumentar Americana. O tratamento de primeira escolha continua sendo realizado com antimoniais pentavalentes, e em casos de insucessos os fármacos de segunda escolha são a pentamidina e a anfotericina B. Tais medicamentos causam intensos efeitos adversos e ultimamente têm surgido cepas resistentes aos mesmos. Em áreas endêmicas têm sido cada vez mais comum o surgimento da co-infecção Leishmania com Mycobacterium tuberculosis. O tratamento para a tuberculose com pirazinamida (PZA) e isoniazida (INZ), controla a leishmaniose. Esses dados sugerem atividade anti-leishmania da PZA e da INZ. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade in vitro da INZ e da PZA e seus compostos derivados (série G e série R, respectivamente) sobre Leishmania (Viannia) braziliensis. As moléculas foram testadas em monocamadas de macrófagos peritoneais de camunongos infectados com L. (V) braziliensis durante 48h. Todas as moléculas testadas inibiram o índice de infecção de forma dose dependente em comparação aos controles. As moléculas da série R foram mais ativas do que a PZA, porém o resultado foi significativo somente para a R02 (p < 0,005). Apenas a molécula R05 (76,64µM) foi relativamente tóxica para macrófagos. Os compostos mais ativos foram R02, G01 e G02, cujos índices de seletividade foram 14,31, 19 e 30, respectivamente. A dosagem de nitrito foi feita em sobrenadantes de monocamadas de macrófagos peritoniais infectados e tratados com as substâncias nas concentrações 10 e 100µM. A G01 e a G02 estimularam a produção de NO2 nas duas concentrações, entretanto o resultado foi estatisticamente significativo para a G02 em 100µM (p < 0,0001), a G05 só estimulou óxido nítrico na maior concentração. Todos os compostos da série R estimularam NO2, contudo, o resultado foi estatisticamente significativo para a R03 e R05 a 100µM (p < 0,001). Adicionalmente, foi realizado uma análise preditiva in sílico de parâmetros farmacocinéticos das moléculas mais ativas in vitro, utilizando o software admetSAR. Os dados obtidos mostraram que de forma semelhante às suas moléculas originais a G01, G02 e R02 apresentaram alta capacidade de serem absorvidas pelo trato gastrointestinal, baixo potencial hepatotoxico e carcinogênico. Juntos, esses dados demonstram que essas moléculas são seletivamente tóxicas para o parasito com potencial para serem testadas pela via oral em estudos em modelo experimental de infecção.

Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Diversos estudos epidemiologicos sugerem relacao inversa entre o consumo regular de cafe e a ocorrencia de algumas desordens neurodegenerativas como a doenca de Parkinson e a doenca de Alzheimer. Dados experimentais da literatura principalmente relacionados as acoes farmacologicas da cafeina corroboram esta hipotese. Assim, foram avaliados extratos de cafe com diferentes conteudos de cafeina em testes in vitro e in vivo. A diferenca encontrada nas concentracoes de cafeina nao interferiu na capacidade antioxidante dos extratos avaliada pelo teste de sequestro de radicais DPPH e pelo teste de inibicao da lipoperoxidacao. Na avaliacao da inibicao da enzima anticolinesterase, no entanto, os cafes cafeinados inibiram a enzima em concentracoes muito menores quando comparados ao cafe descafeinado. Da mesma forma, foi observada atividade pro-dopaminergica para os cafes cafeinados mas nao para o descafeinado no teste da catatonia induzida por haloperidol apos com tratamento agudo com cafe (50, 150 e 500 mg/kg, v.o.) e cafeina (98,6 mg/kg, v.o.). A cafeina e as doses de 150 e 500 mg/kg dos cafes forte e extra-forte foram capazes de bloquear significativamente o estado catatonico induzido pelo haloperidol. Apos tratamento continuado por 45 dias com as doses acima descritas, foi observada reducao no numero de rotacoes de animais com lesao unilateral do feixe prosencefalico medial por 6-OHDA tratados com a dose de 500 mg/kg de cafe forte apenas, apos a administracao de metanfetamina. Esse resultado e correlacionavel com um efeito neuroprotetor no modelo utilizado. O conjunto destes resultados sugere que o cafe pode agir como neuroprotetor contra a doenca de Parkinson, com importante contribuicao da cafeina BV UNIFESP: Teses e dissertações

Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Vice Direção de Ensino, Informação e Comunicação. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. A tuberculose (TB) continua sendo uma das principais doenças associadas à morbidade e mortalidade no mundo, correspondendo a 1,7 milhões de mortes somente em 2009. Cerca de um terço da população mundial está infectada com seu agente etiológico, o Mycobacterium tuberculosis. Doenças infecciosas como a TB levam a modulações na expressão gênica do hospedeiro, que podem ser detectadas globalmente por ensaios de microarranjos de DNA. Estudos recentes in silico das respostas imunológicas moduladas em estudos de expressão gênica globais foram capazes de observar a diferença de expressão gênica de biomarcadores com potencial de diagnóstico e ferramentas de prognóstico na evolução da fase latente da tuberculose para a forma ativa da doença. Entretanto, até o momento nenhuma integração de diferentes estudos foi realizada. Os dados de microarranjos de DNA precisam ser submetidos a bancos de dados públicos, como o Gene Expression Omnibus (GEO), antes da publicação em artigos científicos, tornando-os disponíveis para uso por outros pesquisadores. A reanálise desses dados pode levar a novas descobertas, permitindo ainda a integração entre dados de diferentes experimentos ou até gerados em diferentes plataformas, como Affymetrix e Agilent. Nesta dissertação, onze conjuntos de dados referentes à infecção por M. tuberculosis, in vivo e in vitro, em hospedeiros humanos e murinos foram selecionados no GEO. Esses conjuntos de dados foram reanalisados e integrados para determinar quais os principais processos biológicos e vias de regulação gênica que estavam sofrendo alterações durante o processo infeccioso. Foram constatados que os processos biológicos relacionados com a resposta imune do hospedeiro, além de vias metabólicas relacionadas aos lisossomos, ao processo de apoptose, a receptores para ligação de citocinas, a receptores tipo NOD e a receptores tipo toll apresentavam alteração significativa nos conjuntos de dados reanalisados. Esses resultados apontam para utilização desses genes como biomarcadores de infecção e progressão a doença. Esses biomarcadores podem ser úteis no desenvolvimento de testes visando o diagnóstico e o prognóstico de tuberculose, bem como podem servir como alvos para futuras pesquisas no desenvolvimento de vacinas. Tuberculosis (TB) remains a major disease associated with morbidity and mortality worldwide, accounting for 1.7 million deaths only in 2009. About a third of the world population is infected with its causative agent, Mycobacterium tuberculosis. Infectious diseases such as TB lead to modulation of host gene expression, which can generally be detected by DNA microarray assays. Recent studies of immune responses in silico modulated in global gene expression studies were able to observe the difference in gene expression of biomarkers with potential as diagnostic and prognostic tools in the evolution of the latent stage of tuberculosis to active disease. However, until now no integration of different studies has been performed. The DNA microarray data must be submitted to public databases, such as Gene Expression Omnibus (GEO), before the publication of scientific articles, making them available for use by other researchers. A reanalysis of these data can lead to new discoveries, while allowing the integration of data from different experiments or even generated in different platforms such as Affymetrix and Agilent. In this thesis, eleven data sets describing in vivo and in vitro infection with M. tuberculosis in human or murine hosts were selected in GEO. These data sets were reviewed and integrated to determine which biological processes and pathways were undergoing changes during the infectious process. It has been found that biological processes related to the host immune response, and metabolic pathways related to lysosomes, the process of apoptosis, cytokines-cytokines binding receptors, NOD like receptors and toll like receptors had a significant change in reanalyzed data sets. These results points to the use of these genes as biomarkers of infection and progression to disease while may serve as diagnostic and prognostic tests as well as targets for future research concerning the development of vaccines.