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Relatório de Estágio para a obtenção do grau de Mestre em Ensino da Música Submitted by Paulo Moreira (paulomoreira@esmae.ipp.pt) on 2016-10-07T17:05:51Z No. of bitstreams: 1 DM_AlexandreQuintas_2016.pdf: 718911 bytes, checksum: 6109dc7f44c1f46514f30f2e3442b105 (MD5) Made available in DSpace on 2016-10-07T17:05:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DM_AlexandreQuintas_2016.pdf: 718911 bytes, checksum: 6109dc7f44c1f46514f30f2e3442b105 (MD5) Previous issue date: 2016-07-15 Restored into DSpace on 2021-10-06T13:17:52Z (GMT).

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Universitário Egas Moniz Este estudo estabelece, através da espetroscopia de Raman, uma metodologia de identificação e quantificação, quer de substâncias ou misturas precursoras de explosivos, quer de explosivos improvisados, em cenário policial de fiscalização ou de combate ao terrorismo. Nestes ambientes, as substâncias apresentam-se desconhecidas, sendo necessário a sua identificação e, em certos cenários, a quantificação, para que todo o trabalho policial seja realizado com sucesso. Foram identificados dez explosivos improvisados, fabricados com substâncias sujeitas a restrições, e determinadas quais as substâncias ou misturas de substâncias a analisar. Foram realizadas análises em triplicado a dez explosivos improvisados, a vinte e cinco substâncias no maior grau de pureza conseguido, a sessenta substâncias preparadas em diferentes percentagens de concentração e a dois sais usados para realizar algumas preparações sólidas, perfazendo no total duzentos e noventa e uma análises realizadas. A análise química foi efetuada com recurso à técnica de espetroscopia de Raman, por se caraterizar como uma técnica robusta, portátil e, acima de tudo, uma técnica que não exige nenhuma, ou muito pouca, preparação da amostra, possibilitando uma análise in loco de forma rápida e segura, podendo a leitura ser realizada de forma direta ou através do recipiente onde esta se encontra. O desenvolvimento do presente trabalho permitiu a criação de uma biblioteca com sessenta e nove entradas iniciais de substâncias precursores de explosivos, no seu maior grau de pureza conseguido e em diversas concentrações. Conseguiram-se obter resultados positivos na identificação de substâncias precursores de explosivos, per si e inseridas em misturas de substâncias – explosivos improvisados. Embora mostre várias vantagens, a técnica e instrumentação empregada apresenta algumas limitações, i.e., não permitiu a identificação de algumas substâncias ou de alguns explosivos improvisados e o detetor saturava facilmente em alguns casos. No entanto, estas limitações poderão ser suplantadas ao se empregar passos adicionais de otimização. This study establishes, through Raman spectroscopy, a methodology for the identification and quantification, either of substances or mixtures precursors of explosives, or of improvised explosives, in a police surveillance or combat against terrorism scenario. In these environments, substances are unknown, requiring identification and, in certain scenarios, quantification, so that all police work is carried out successfully. Ten improvised explosives, manufactured with substances subject to restrictions, were identified and the substances or mixtures of substances to be analyzed were determined. Analyzes were carried out in triplicate to ten improvised explosives, to twenty-five substances in the highest degree of purity achieved, to sixty substances prepared in different concentration percentages and to two salts used to perform some solid preparations, making a total of two hundred and nighty one analyzes performed. The chemical analysis was performed using the Raman spectroscopy technique, as it is characterized as a robust, portable technique and, above all, a technique that does not require any, or very little, sample preparation, enabling an in loco analysis quickly and safely, and the reading can be performed directly or through the container where it is located. The development of the present work allowed the creation of a library with 69 initial entries of explosive precursor substances, in their highest degree of purity achieved and in different concentrations. Positive results were obtained in the identification of explosive precursor substances, per se and inserted in mixtures of substances - improvised explosives. Although it shows several advantages, the technique and instrumentation employed have some limitations. I.e., did not allow the identification of some substances or some improvised explosives and the detector saturated easily in some cases. However, these limitations can be overcome by employing additional optimization steps.

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Universitário Egas Moniz O trabalho que se segue consiste na discriminação de diferentes tipos de pólvora, com base em análises cromatográficas e espectroscópicas, e com o propósito de possibilitar a identificação de amostras de pólvora desconhecida, em contextos policiais e forenses. Estas análises foram efetuadas em 29 tipos de pólvora diferentes, provenientes das três marcas de fabricantes de pólvoras e munições mais comercializadas em Portugal, a Maxam (através da sua sucursal portuguesa, a Cacicambra), a Nobel Sports e a Baschieri & Pellagri. Para ambos os métodos foram utilizados três replicados de cada tipo de pólvora, perfazendo um total de 87 amostras. Esta investigação foi realizada em cooperação com o Centro Nacional de Peritagens, sediado no Departamento de Armas e Explosivos da Polícia de Segurança Pública de Lisboa. A análise química foi efetuada através de GC/MS, o solvente utilizado foi o diclorometano (DCM) e elaborou-se um perfil químico das pólvoras através dos seus cromatogramas, visualizando os diferentes picos cromatográficos e respetivas áreas, correspondentes às substâncias presentes em cada pólvora. A análise espectroscópica foi realizada através de NIRS. Foram efetuadas leituras diretamente nos grãos de pólvora e também na pólvora dissolvida em metil-etil-cetona (MEK). Os espectros foram obtidos através do Vision Spectral Analysis Software. Relativamente aos resultados, através da análise de GC/MS verificou-se a discriminação de 15 das 29 pólvoras, sendo que as restantes 14 apresentaram perfis químicos demasiado semelhantes para poderem ser diferenciados através desta técnica. A análise de NIRS na pólvora dissolvida em MEK revelou-se inconclusiva uma vez que o aparelho apenas conseguiu detetar a presença do solvente utilizado. Já a análise de NIRS dos grãos de pólvora permitiu construir, através dos dados dos espectros, um modelo estatístico capaz de discriminar corretamente todas as 29 pólvoras em estudo, sendo, por isso, a técnica mais robusta apresentada neste estudo.

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Universitário Egas Moniz Nos últimos anos, a prevalência do uso de canabinóides tem aumentado rapidamente, inclusive em mulheres grávidas. Fitocanabinóides, substâncias extraídas da Cannabis sativa, atuam principalmente pela ligação aos recetores canabinóides 1 e 2 (CB1R e CB2R), exercendo efeitos psicoativos e não psicoativos. Os canabinóides sintéticos são uma classe de Novas Substâncias Psicoativas, e apresentam altas afinidades de ligação aos CB1/2R. Visto que o sistema endocanabinóide é altamente relevante para o desenvolvimento embrionário, temos como hipótese que o consumo de canabinóides durante a gravidez pode causar defeitos no neurodesenvolvimento. Assim, foi utilizado um modelo tridimensional que recapitula os passos iniciais do neurodesenvolvimento. Organoides corticais com 46 dias foram gerados e expostos aos fitocanabinóides Δ9-tetrahidrocanabinol (Δ9-THC) e canabidiol (CBD), e aos canabinóides sintéticos THJ-018 e EG-018 por 9 dias, mimetizando a exposição pré-natal aos mesmos. Estes foram também administrados na presença de um antagonista dos CB1R, para determinar se os seus efeitos são mediados por estes recetores. Análises de imunofluorescência, RNA e Western Blot foram realizadas para avaliar alterações em marcadores de diferenciação neuronal, e na expressão dos recetores canabinóides. Foi efetuado single-cell calcium imaging para avaliar a funcionalidade celular. Embora preliminares, estes resultados sugerem que o Δ9-THC pode retardar a diferenciação neuronal e afetar a funcionalidade celular por mecanismos mediados pelos CB1R. O CBD induziu mínimas alterações nestes parâmetros, mas evidenciou a interação complexa entre CB1R e CB2R. Os canabinóides sintéticos THJ-018 e EG-018 apresentaram um impacto mais negativo comparativamente aos fitocanabinóides. Estes induziram uma redução de progenitores neurais e neurónios maduros, e um aumento da apoptose, sugerindo efeitos neurotóxicos. Algumas destas alterações não foram revertidas pelo antagonista dos CB1R, indicando a interação com outros recetores. No entanto, os nossos resultados não obtiveram significância estatística, evidenciando a necessidade de validação adicional. Contudo, este projeto demonstra o potencial dos canabinóides para impactar o neurodesenvolvimento embrionário, evidenciando a importância da investigação científica sobre exposição pré-natal a canabinóides. In the last years, the use prevalence of cannabinoids has been rapidly rising, including among pregnant women. Phytocannabinoids, substances extracted from Cannabis sativa, act mainly by binding to cannabinoid receptors 1 and 2 (CB1R and CB2R), exerting a range of psychoactive and nonpsychoactive effects. Synthetic cannabinoids are a class of New Psychoactive Substances, and also present high affinities to CB1/2R. Since the endocannabinoid system is highly relevant for embryonic development, we hypothesise that cannabinoids consumption during pregnancy can lead to neurodevelopmental defects. For this purpose, a three dimensional model, recapitulating the first steps of neurodevelopment, was used. 46 days-old dorsal forebrain organoids were generated and exposed to phytocannabinoids Δ9-tetrahydrocannabinol (Δ9-THC) and cannabidiol (CBD), and to synthetic cannabinoids THJ-018 and EG-018 for 9 days, to mimic prenatal exposure to these compounds. They were also administrated in the presence of a CB1R antagonist, to determine if the effects are CB1R-mediated. Immunofluorescence, RNA analysis and Western Blot were performed to evaluate alterations in neuronal differentiation markers, and in CB1/2R expression levels. Single-cell calcium imaging was performed to evaluate cell functionality. Although preliminary, the results suggest that Δ9-THC might delay neuronal differentiation and affect neuronal functionality by mechanisms mediated by CB1R. CBD induced minimal effects on these parameters, but highlighted the complex interaction between CB1R and CB2R. Synthetic cannabinoids THJ-018 and EG-018 had a more negative impact compared to phytocannabinoids. Their administration led to a reduction of neural progenitors and mature neurons, and increased apoptosis, suggesting neurotoxic effects. Some of these alterations were not reverted by the CB1R antagonist, indicating interation with other receptors. However, our results lack statistical significance, highlighting the need for further confirmation. Nonetheless, this project demonstrates the potential of cannabinoids to impact embryonic neurodevelopment, highlighting the importance of research on prenatal exposure to cannabinoids.

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Universitário Egas Moniz A canábis é a substância de abuso prevalente nos padrões de consumo atuais. Adicionalmente, verifica-se um desconhecimento da composição destes produtos pelo consumidor e uma tendência crescente nos teores de tetrahidrocanabinol (THC). Esta problemática conduz a uma série de consequências, nomeadamente a generalização do consumo recreativo, a automedicação desregulada e o desencadeamento de psicoses. Neste sentido, é fundamental desenvolver metodologias analíticas que permitam caracterizar estes produtos. No presente trabalho, pretende-se desenvolver e validar uma metodologia analítica para determinação de Δ9-THC, CBD, CBN, THCA e CBDA em amostras de canábis herbáceo. Para tal, recorreu-se à extração sólido-líquido (SLE) assistida por ultrasonicação e combinou-se o teste colorimétrico Fast Blue BB à cromatografia gasosa acoplada à espetrometria de massa (GC-MS). A utilização do teste colorimétrico permitiu definir com antecipação a massa de amostra necessária à análise cromatográfica. Esta etapa previne a saturação da instrumentação, o que se traduz num maior intervalo de tempo decorrente entre manutenções e na extensão da sua utilização. Adicionalmente, evita a reinjeção da amostra, possibilitando a realização de mais análises no mesmo intervalo de tempo. A metodologia desenvolvida é seletiva, apresenta linearidade, precisão e veracidade satisfatórias e limiares analíticos adequados ao objetivo do trabalho. Neste parâmetro, destaca-se o limite de quantificação (LOQ) do Δ9-THCTMS de 0,2% (m/m), sendo este correspondente ao teor de máximo de THC aceitável em plantas para fins industriais. Os teores de Δ9-THC e THCA determinados em amostras provenientes de apreensões policiais encontram-se entre 2,72% e 18,47% (m/m) e 10,95% e 25,06% (m/m), respetivamente. Estes valores estão em concordância com os valores reportados pelo Observatório Europeu da Droga e da Toxicodependência (EMCDDA) e pela literatura. Relativamente às amostras provenientes de lojas, os níveis de CBD e CBDA determinados encontram-se entre 2,50% e 6,60% (m/m) e 5,84% e 24,10% (m/m), respetivamente, e os teores de Δ9-THC abaixo do LOQ. A metodologia apresentada permite cumprir o objetivo proposto no presente trabalho. Deste modo, a metodologia desenvolvida poderá contribuir para a compreensão do panorama atual associado ao consumo de canábis e observar tendências face à composição dos produtos consumidos. Cannabis is the substance of abuse prevalent in current consumption patterns. In addition, there is a misknowledge of the composition of these products by the consumer and a growing trend in the levels of tetrahydrocannabinol (THC). This problem leads to several consequences, including the generalization of recreational consumption, deregulated self-medication and the triggering of psychoses. In this sense, it is essential to develop analytical methodologies that allow to characterise these products. In the present work, it is intended to develop and validate an analytical methodology for the determination of Δ9-THC, CBD, CBN, THCA and CBDA in herbaceous cannabis samples. For this, the solid-liquid extraction (SLE) assisted by ultrasonication was used and the colorimetric test Fast Blue BB was combined with gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). The use of the colorimetric test allowed to define with anticipation the sample mass necessary for chromatographic analysis. This step prevents the saturation of instrumentation, which results in a longer interval of time between maintenance and the extent of its use. Additionally, it avoids the reinjection of the sample, allowing more analysis in the same time interval. The methodology developed is selective, presents satisfactory linearity, precision and trueness and analytical limits appropriate to the objective of the work. In this parameter, the quantification limit (LOQ) of Δ9-THC-TMS of 0.2% (m/m) stands out, corresponding to the maximum acceptable THC content in plants for industrial purposes. The levels of Δ9-THC and THCA determined in samples from police seizures are between 2.72% and 18.47% (m/m) and 10.95% and 25.06% (m/m), respectively. These values are in agreement with the data reported by the European Monitoring Centre for Drugs and Drug Addiction (EMCDDA) and the literature. For store samples, the levels of CBD and CBDA determined are between 2.50% and 6.60% (m/m) and 5.84% and 24.10% (m/m), respectively, and Δ9- THC contents below LOQ. The methodology presented allows to achieve the objective proposed in the present study. Thus, the methodology developed can contribute to the understanding of the current panorama associated with cannabis consumption and observe trends in the composition of the products consumed.

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Universitário Egas Moniz A importância da análise das plantas de canábis tem vindo crescer, nomeadamente para controlo de qualidade dentro dos produtos para uso recreacional, indústria medicinal, ou ainda para discriminação forense entre a tipologia de substância de abuso ou cânhamo. No presente estudo foi desenvolvido um método com recurso a cromatografia líquida de alta eficiência com deteção por fotodíodos (HPLC-DAD), destinado à análise quantitativa dos canabinoides principais da planta de canábis: Δ9 -tetrahidrocanabinol (Δ9 -THC) e canabidiol (CBD), respetivas formas ácidas, canabinol (CBN) e o Δ8 - tetrahidrocanabinol Δ8 -THC, em material vegetal da canábis. A etapa de extração foi otimizada com recurso a desenhos experimentais, permitindo uma recuperação ~100% dos canabinoides. As amostras herbáceas foram extraídas com etanol:acetonitrilo (50:50), com recurso a ultrassons, e posterior deteção e quantificação dos canabinoides em HPLC-DAD, sendo apenas necessário utilizar 50 mg de amostra. Para os óleos da planta foi aplicada uma simples diluição em etanol. A separação cromatográfica foi conseguida numa coluna de fase reversa, utilizando como eluente uma mistura de acetonitrilo/água contendo 0,1% ácido fórmico. Os compostos foram quantificados a 230 nm, em 30 minutos de corrida. Os ensaios de validação do método mostraram que esta era linear (R2>0,997), sendo seletivo e sensível, com a precisão e veracidade adequados, bem como excelente estabilidade e repetibilidade entre análise de amostra real. Os principais canabinoides identificados (% p/p) em amostras reais foram o Δ9-THCA, CBD, CBDA, e o Δ9-THC. A presente metodologia foi aplicada com sucesso a várias amostras reais ricas em THC ou CBD, demonstrando a sua eficácia em análises de rotina para permitir dar resposta à atual procura de serviços de análise desta planta e seus derivados. The importance of the analysis of cannabis plants has been developing globally, namely for quality control within products for recreational use, medicinal industry, or even for forensic discrimination between the typology of substance of abuse or hemp, for industrial purposes. In the present study, a HPLC-DAD method was developed for the quantitative analysis for the main cannabinoids: Δ9-THC and CBD, their acid forms, CBN and Δ8 -THC, in cannabis plant material. Extraction was optimized using experimental design (DoE), granting ~100% recovery of the cannabinoids. Herbal samples were extracted with ethanol:acetonitrile (50:50) by ultrasonication, and subsequent detection and quantification of cannabinoids in HPLC-DAD, only requiring 50 mg of sample. For the plant oils a simple dilution in ethanol was necessary. Chromatographic separation was achieved on a reverse-phase C18 column, using an acetonitrile/water mixture containing 0.1% formic acid as eluent. The compounds were quantified at 230 nm in 30 minutes of run time. Method validation proved its linearity (R2>0.997), being selective and sensitive, with excellent results for precision and trueness, as well as excellent stability and repeatability. The main cannabinoids identified (% w/w) in actual samples were Δ9-THCA, CBD, CBDA, and Δ9-THC. The presented method was successfully applied to real samples, demonstrating its suitability in routine analyses to assist current demand for analysis services of this plant and its derivatives.

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Universitário Egas Moniz Enquadramento: A alteração legislativa no Código Penal foi o grande suporte e alavanca na defensa dos direitos dos animais de companhia. Objetivo: Desenvolver, otimizar e validar um método para a identificação de fármacos e pesticidas organofosforados em amostras biológicas (sangue) de cães e gatos por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa para dar resposta a situações de envenenamento de animais de companhia com validade em tribunal. Materiais e métodos: A metodologia utilizada é constituída por dois métodos. O método de extração em fase sólida (SPE) e o método confirmatório de cromatografia acoplada à espetrometria de massa (GC/MS). Resultados: De modo a validar o método pela guideline Standard Practides for Method Validation in Forensic Toxicology foi possível identificar um limite de deteção (LOD) a 50 ng/mL para 8 compostos. Conclusão: A análise toxicológica em animais de companhia torna- Background: The legislative change in the Penal Code was the great support and leverage in the defense of the rights of companion animals. Objective: To develop, optimize, and validate a method for the identification of drugs and organophosphate pesticides in biological (blood) of dogs and cats by gas chromatography coupled with mass spectrometry to respond to situations of poisoning of pets with court validity. Materials and methods: The methodology used is obtained by two methods. The solid phase extraction method (SPE) and the confirmation method of chromatography coupled with mass spectrometry (GC/MS). Results: In order to validate the method by the guideline, standard practices for method validation in forensic toxicology it was possible to identify a limit of detection (LOD) of 50 ng/mL for 8 compounds. Conclusion: A toxicological analysis in companion animals becomes a challenging and important process in the diagnosis in cases of poisoning.

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Universitário Egas Moniz O mercado de novas substâncias psicoativas tem vindo a crescer continuadamente de forma a contornar as leis que regulam a venda e o consumo de substâncias de abuso ilícitas. Os consumidores destas substâncias entendem-nas como legais e menos tóxicas em comparação com as substâncias ilegais que mimetizam. Os canabinóides sintéticos são atualmente a classe de novas substâncias mais vendidas. O presente projeto de investigação foi desenvolvido com o propósito de auxiliar na investigação destas substâncias, passando pela utilização de um modelo celular eucariota, a Saccharomyces cerevisiae, para análise da citotoxicidade de três canabinóides sintéticos, um de segunda geração (THJ-018) e dois de terceira geração (EG-018 e SGT-151), como adquiridos na internet. Tendo a sua toxicidade foi verificada através de ensaios de citotoxicidade, nomeadamente ensaios ATP, MTT e GSH. Os resultados sugerem que os canabinóides ativam a via glicolítica, diminuindo a fosforilação oxidativa para concentrações mais elevadas da substância, com um efeito no crescimento celular. The market for new psychoactive substances has been growing continuously in order to circumvent the laws that regulate the sale and consumption of drugs. Consumers of these substances understand them as legal and less toxic compared to the illegal substances they mimic. Synthetic cannabinoids are currently the major-selling class of new psychoactive substances. The present research project was developed with the purpose of supporting the investigation of these substances, through the utilization of a eukaryotic cell model with Saccharomyces cerevisiae and the analysis of the cytotoxicity of three synthetic cannabinoids, one of the second generation (THJ-018) and two of third generation (EG-018 and SGT-151), as purchased on the internet. Its toxicity was verified through cytotoxicity tests, namely ATP, MTT and GSH tests. The results suggest that cannabinoids activate the glycolytic pathway, decreasing oxidative phosphorylation to higher concentrations of the substance, with an effect on cell growth.

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz O comportamento agressivo tem geralmente origem em transtornos psiquiátricos e doenças neurológicas. A farmacogenética permite conhecer as principais alterações genéticas, ao nível de cada polimorfismo envolvido, que desencadeiam estes comportamentos anormais permitindo pesquisar e desenvolver fármacos que os possam contrariar/inibir. Por outro lado, também podem surgir comportamentos agressivos induzidos pela utilização de determinados fármacos, verificando-se, nesses casos, a necessidade de se suspender essa terapêutica, realizando-se a substituição da mesma por outra que não apresente estes efeitos secundários. Os genes humanos mais importantes associados a comportamentos agressivos anormais são os que se relacionam com as hormonas sexuais, as vias dopaminérgicas e as serotoninérgicas. Consequentemente, a farmacogenética permite estudar e conhecer os mecanismos que influenciam o comportamento agressivo e, deste modo, detetar quais os fármacos que podem provocar respostas agressivas, salientando-se os antiepilépticos e as benzodiazepinas como os mais críticos. Contudo, também existem fármacos que se aconselham para o tratamento agressivo e diminuição de tentativas de suicídio, destacando-se o lítio, antidepressivos, anticonvulsionantes, antipsicóticos, betabloqueadores e buspirona. Para a realização desta monografia foi necessário efetuar uma revisão da literatura existente sobre o tema proposto tendo em conta o comportamento agressivo, os genes associados, as possíveis correlações entre os fármacos prescritos e o comportamento agressivo e, por último, a sua terapêutica.

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz Na Medicina Dentária Forense a identificação humana tem sido a vertente mais explorada, onde a perícia Médico Dentária, baseada em conhecimentos específicos e experiência do perito, é decisiva, nomeadamente quando a identificação não é possível por outros meios. São exemplos a desfiguração, a decomposição da matéria orgânica a carbonização ou nas grandes catástrofes que envolve um elevado número de vítimas a identificar. A natureza única da anatomia dentária e dos tratamentos dentários protéticos bem como das restaurações, garante grande precisão na identificação. Pode-se afirmar que as estruturas dentárias têm grande importância na identificação visto manterem a sua estabilidade mesmo sob condições adversas, ao contrário de outras estruturas do organismo, permitindo a sua preservação e a sua comparação com os registos ante mortem. A Medicina Dentária Forense assume importância capital no seio das Ciências Forenses, na medida em que permite a identificação in extremis desde que os Médicos Dentistas registem e preservem a informação clínica dos seus pacientes, onde se deverão encontrar os elementos fundamentais de identificação através da comparação, permitindo assim confrontar os registos ante mortem com os vestígios post mortem. Importa assim consciencializar, quer na área da Medicina Dentária quer na área do Direito, sobre as possibilidades e limitações que esta área do conhecimento.

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz Objetivo - Estudar o efeito do Δ9-tetra-hidrocanabinol (THC) na quantidade de fluxo salivar estimulado e não estimulado, e também na flora bacteriana (nomeadamente no número de unidades formadoras de colónias (ufc) de Streptococcus e Staphylococcus), de indivíduos fumadores de tabaco e canábis em comparação com fumadores só de tabaco e com indivíduos não fumadores. Materiais e métodos - Neste estudo utilizou-se uma amostra de 45 indivíduos (n=45), divididos por 3 grupos de igual número de sujeitos (15), de acordo, com os seus hábitos de consumo de tabaco e canabinóides. O primeiro grupo corresponde a sujeitos não fumadores (i), o segundo grupo sujeitos fumadores só de tabaco (ii), e o terceiro grupo fumadores de tabaco e canabinóides (iii). Todos os sujeitos foram submetidos a dois questionários, o primeiro destinado a traçar o perfil de hábitos de consumo, o segundo mais específico, destinado ao diagnóstico de Xerostomia. Foi recolhida saliva não estimulada e estimulada (min/ml),sendo determinado o valor de pH de cada amostra. Foi igualmente determinado, em cada amostra recolhida o número de ufc de Streptococcus orais e de Staphylococcus sp. Os dados obtidos foram analisados, recorrendo a metodologias de análise estatística. Resultados - O consumo de canábis teve um impacto estatisticamente significativo na “sensação de boca seca”, os indivíduos consumidores tiveram o maior score de resposta ao questionário de diagnóstico de xerostomia mas o seu consumo não teve impacto estatisticamente significativo na quantidade de saliva produzida (ml/min) em comparação com os outros grupos. Esta investigação revelou diferença estatisticamente significativa no crescimento bacteriano total, sendo os indivíduos fumadores apresentar maior número de unidades formadoras de colónias (UFC) comparativamente ao grupo de controlo. Conclusão - O consumo de canábis tem elevada influência na “sensação de boca seca” (xerostomia), apesar de não ter tido resultados com diferenças estatisticamente significativas na quantidade de saliva produzida, na comparação com os restantes grupos. Fumar cria um ambiente propício para o crescimento bacteriano anaeróbio facultativo.

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz A doença do Alzheimer (DA) é uma das doenças mais complexas entre as patologias do foro neurodegenerativo. Esta é caracterizada como uma doença lenta, progressiva e irreversível que se manifesta através da perda de cognição e memória. A DA é responsável por cerca de 50% a 70% dos casos de demência. A incidência e a prevalência da doença aumentam exponencialmente com a idade, principalmente em idades acima dos 65 anos. Para esta doença são conhecidas duas formas, o Alzheimer de início tardio e o Alzheimer de início precoce. Estudos recentes sugerem que alterações de natureza epigenética estão associadas à DA. Esta nova área de estudo associa a influência do ambiente sobre a expressão génica, ou seja a capacidade de fatores ambientais induzirem alterações no fenótipo sem afectarem a sequência de ADN. As principais alterações epigenéticas que afetam o fenótipo são a nível da metilação do ADN, modificação de histonas, modificação da cromatina e regulação do RNA não codificante. A terapia na DA tem como objetivos a terapêutica específica, a terapêutica profilática e o tratamento sintomático. Os fármacos disponíveis para o tratamento são a tacrina, o donepezilo, a galantamina, a rivastigmina e a memantina. Para a DA o único objetivo da utilização destes fármacos é retardar a sua progressão. Tem também vindo a ser estudada a hipótese da utilização de terapia epigenética para o seu tratamento. As classes mais desenvolvidas neste âmbito são as dos inibidores das DNMT e inibidores das HDACs. Estas classes são usadas com o objetivo de reverter as alterações epigenéticas. O tema abordado neste trabalho é relativamente recente, sendo uma área em desenvolvimento. Com isto, é essencial que a investigação desta doença continue no âmbito de se encontrar uma cura e diminuir assim a taxa de mortalidade.

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz As doenças neurodegenerativas são doenças crónicas de caráter degenerativo que se caracterizam pela disfunção e perda progressiva de neurónios no sistema nervoso central (SNC). Estas patologias afetam cerca de 37 milhões de pessoas em todo o mundo e a tendência é crescente. Estima-se que o número de indivíduos com algum tipo de neurodegenerescência duplique a cada 20 anos, o que faz com que as doenças neurodegenerativas sejam consideradas uma das maiores preocupações da comunidade científica e da sociedade em geral. A doença de Alzheimer, a doença de Parkinson e a esclerose múltipla são alguns exemplos das inúmeras doenças existentes que apresentam um foro neurodegenerativo. Apesar de toda a investigação e pesquisa de que têm sido alvo, a etiologia e os mecanismos neuropatológicos subjacentes a estas doenças continuam por compreender. Recentemente, através de várias evidências epidemiológicas, experimentais e estudos emergentes surge mais uma hipótese que tenta explicar a etiologia destas patologias que aponta para um possível envolvimento de agentes infeciosos na patogénese e/ou progressão dos processos neurodegenerativos. É proposto que determinados agentes infeciosos detêm a capacidade de entrar no SNC e de estabelecer uma infeção crónica que conduz à danificação progressiva da viabilidade neuronal. Os agentes infeciosos, quando presentes no SNC, são responsáveis por desencadear uma série de eventos neurotóxicos que parecem ser cumulativos ao longo do tempo e com o avanço da idade. Concomitantemente os fatores genéticos e/ou ambientais concorrem para gerar, amplificar e/ou acelerar o processo neurodegenerativo. São cada vez mais as evidências que suportam esta hipótese. Na verdade, estudos recentes sugerem que os agentes infeciosos são capazes de produzir marcas moleculares patogénicas típicas da neurodegenerescência, nomeadamente a formação e a deposição de proteínas misfolded, disfunção mitocondrial e sináptica, stress oxidativo, processos autofágicos deficientes e neuroinflamação. Contudo, esta associação ainda é controversa e a grande parte das correlações entre os agentes infeciosos e as doenças neurodegenerativas não estão comprovadas.

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz A Cannabis sativa caracteriza-se pela presença de canabinóides naturais como produtos do seu metabolismo secundário, os quais têm um elevado potencial psicoativo. Devido a esta característica é a planta mais consumida para fins recreativos apesar de a sua plantação ser ilegal na maior parte dos países. A sua ilegalização originou diferentes epifenómenos entre os quais a sua substituição por canabinóides sintéticos com efeitos psicoativos mais pronunciados e na sua maioria legais. Os canabinóides podem ser classificados como endocanabinóides, canabinóides sintéticos ou fitocanabinóides, podendo levar a efeitos positivos ou negativos no organismo humano. Os canabinóides sintéticos existem desde o ano 2004, no entanto, o seu consumo só ganhou relevância a partir de 2008. Estes surgiram como miméticos sintéticos do Δ9-Tetrahidrocanabinol (Δ9-THC), conhecido como princípio ativo da Cannabis, podendo levar a efeitos adversos mais graves que esta. No entanto, têm sido utilizados devido ao seu potencial farmacológico. Os canabinóides possuem propriedades terapêuticas importantes que podem contribuir para o tratamento de sintomas associados a doenças prolongadas, incuráveis e progressivas, isto porque têm demonstrado atuar segundo vários mecanismos, exercendo ações neuroprotectoras, antioxidantes e anti-inflamatórias. Estas características suscitaram interesse no uso destes compostos como potencias agentes terapêuticos nas Doenças Neurodegenerativas. Após inúmeros ensaios clínicos, foi possível verificar que vários canabinóides sintéticos têm a capacidade de providenciar neuroprotecção nestas doenças, nomeadamente na doença de Alzheimer, doença de Parkinson, Esclerose Múltipla e doença de Huntington. Contudo, visto que, a grande maioria dos estudos efetuados, foram realizados em animais, nomeadamente em ratinhos, são ainda, necessários mais estudos, principalmente em humanos, que confirmem que estes compostos são seguros, eficazes e bem tolerados pelo Homem.

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz Os primeiros registos da comercialização de misturas herbais contendo canabinóides sintéticos para fins recreativos datam do início da década passada. Desde então tem-se verificado um aumento quer no consumo destas substâncias quer na emergência de novas substâncias. De facto, o número de casos de hospitalização pelo consumo de canabinóides reportados indica um problema sério de saúde pública, agravado pela ausência de conhecimento sobre os efeitos tóxicos destas substâncias assim como dos seus efeitos farmacológicos. Com o objetivo de contribuir para o conhecimento do impacto toxicológico das misturas herbais e considerando que o consumo é feito pela inalação do fumo referidas misturas, foi utilizado um sistema de fumo para a obtenção dos produtos de pirólise dos canabinóides sintéticos. A identificação dos produtos de pirólise foi realizada por GC-MS, e a respetiva quantificação por HPLC-UV. Após a pirólise de 160 mg de “Spice”, contendo 24 mg de JWH-018, no sistema de queima recuperou-se 3,8mg deste composto e quantidades minoritárias de produtos de pirólise, não identificados pela base de dados de Massas. O impacto celular do JWH-018 e dos produtos de pirólise hidrófilos e hidrófobos da “Spice” foi avaliado na linha celular SH-SY5Y, recorrendo ao teste do MTT. O ensaio com MTT na presença das substâncias referidas na concentração de 0.0026 a 20μg/mL, não aponta uma correlação entre a concentração do pirolisado e a morte celular. No entanto, a repetição deste estudo para outras gamas de concentração de pirolisados é necessária para que se possa compreender o impacto dos produtos de pirólise e dos canabinóides sintéticos na viabilidade celular. O presente estudo é um contributo para o desenvolvimento de uma metodologia que permita medir o impacto de Novas Substâncias Psicoactivas na saúde.

Tese de mestrado, Bioquímica (Bioquímica Médica), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2010 Submitted by Teresa Boa (tdboa@fc.ul.pt) on 2011-07-13T11:51:50Z No. of bitstreams: 1 ulfc055907_tm_Maria_Helena_Franco.pdf: 2607762 bytes, checksum: 774a6d7091a3114609ae62a3ba2c571f (MD5) Made available in DSpace on 2011-07-13T11:52:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ulfc055907_tm_Maria_Helena_Franco.pdf: 2607762 bytes, checksum: 774a6d7091a3114609ae62a3ba2c571f (MD5) Previous issue date: 2010