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The immune system has different cells producing different substances whose objective is to defend the organism against foreign bodies. The human immune system is divided into a central system (bone marrow and thymus) and a peripheral system (spleen, lymph nodes, and mucous membrane associated lymphoid tissue – MALT). This system allows all cells to work together and synchronically. Infection, trauma, malignances, and inflammatory diseases activate the immune system production of pro-inflammatory substances. These substances are produced by different cells, mainly the gutassociated lymphoid tissue (GALT), perhaps the most important component of MALT, which has a central role in this process. The related nutrition abnormalities suppress the immune system, becoming the most commonly acquired immune deficiency in human beings. Many studies have been published showing the potential benefits of nutrients (arginine, glutamine, nucleotides, carnitine, fibers, and fish oil) in modulating the immune response. Moreover, recent studies have shown the beneficial effects of diets including probiotic flora in enteral formulas to enhance the gut mucosal barrier. This is called ecoimmunonutrition. The use of immune-enhancing formulas and modern recommendations concerning this sort of approach are discussed in the present article., O sistema imune humano possui diferentes células que produzem substâncias destinadas a defender o organismo humano contra agentes infecciosos ou suas toxinas. Este sistema imune é dividido em um sistema central (medula óssea e timo) e periférico (baço, linfonodos, tonsilas amigdalianas e tecidos linfóides associados às membranas mucosas), e permite a ação conjunta e sincronizada de diferentes células. Morbidades como infecção, trauma, câncer e doenças inflamatórias ativam este sistema, possibilitando a produção de substâncias pró-inflamatórias, produzidas por diferentes elementos deste sistema, principalmente o tecido linfóide associado à mucosa intestinal, que tem papel central neste processo. Alterações da nutrição suprimem o sistema imune, caracterizando-se como a forma mais comum de imunodeficiência adquirida em seres humanos. Muitos estudos têm sido publicados em diferentes e importantes jornais médicos, mostrando o possível benefício de nutrientes imunoestimulantes (arginina, glutamina, nucleotídeos, carnitina, fibras e lipídios w-3) na melhor modulação da atividade imunológica. Além disso, recentes estudos mostraram os efeitos benéficos de dietas incluindo flora pró-biótica em fórmulas enterais com o objetivo de realçar a barreira intestinal (ecoimunonutrição). O uso de fórmulas imunoestimulantes e recomendações atuais pertinentes a esta abordagem são discutidas neste artigo.

The expression head and neck cancer (HNC) refers to a group of neoplasms that may be present in the oral cavity, pharynx, larynx, nasal cavity, paranasal sinuses, thyroid and salivary glands that include a variety of histopathological tumors. Among the treatment options, there are surgery, radiation and / or chemotherapy, with surgery being the main one. However, depending on the tumor site and the disease stage, surgical resection can compromise important functions; thus, radiotherapy and chemotherapy appear as alternatives in the treatment. Malnourished patients have a worse prognosis and impaired immune function. Regarding the immune function, it has gained a significant role in cancer and this importance has given rise to a research field, which included the study of specific nutrients, capable of modulating the actions of the immune system and of influencing clinical outcome, known as immunonutrition. The triad glutamine, arginine and omega 3 has received a great focus in surgical patients, being related to a lower number of postoperative complications, increased survival, and body weight recovery. However, studies during chemoradiotherapy are still limited in this population. In order to contribute to the problem discussion, this dissertation is divided into two topics: The first one is a literature review, adressing the main points related to the HNC, the role of the immune system in cancer and aspects related to immunonutrition, focusing on the immunonutrients arginine, glutamine and omega 3. The second topic refers to a systematic review with meta-analysis that assessed the effects of glutamine, arginine and omega 3 supplementation on treatment tolerance, nutritional status and immune function in HNC during chemoradiotherapy. It was shown that glutamine can act on the severity of mucositis during chemoradiotherapy and that omega 3 can be promising in recovering nutritional status. However, results for immune function were limited. These results must be interpreted with care, given the differences between the supplementation regimen and the lack of methodological rigor in an important portion of the studies. Investigations focused on elucidating the contribution of each immunonutrient during chemoradiotherapy deserve further investigation. FAPEAL - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Alagoas O termo câncer de cabeça e pescoço (CCP) refere-se a um conjunto de neoplasias que podem se apresentar na cavidade oral, faringe, laringe, cavidade nasal, seios paranasais, tireoide e glândulas salivares que incluem uma variedade de tumores histopatológicos. Entres a opções de tratamento existem a cirurgia, radiação e/ou quimioterapia, sendo a cirurgia a principal opção de tratamento. Porém, dependendo da localização e estadiamento da doença, a ressecção cirúrgica pode comprometer funções importantes, assim radioterapia e quimioterapia surgem como alternativas. Contudo, assim como na cirurgia, estes tratamentos também estão associados a efeitos adversos importantes, que favorecem o surgimento da desnutrição. Pacientes desnutridos apresentam pior prognóstico e deficiência na função imune. Por sua vez, a função imune vem ganhado um papel significativo no câncer, dando origem a um campo de pesquisas, que inclui o estudo de nutrientes específicos, capazes de modular a ações do sistema imunológico e influenciar resultado clínico, conhecido como imunonutrição. Imunonutrientes como glutamina, arginina e ômega 3 tem recebido grande enfoque em pacientes cirúrgicos estando relacionados a um menor número de complicações pós-operatórias, aumento de sobrevida e recuperação do peso. Entretanto, estudos durante a quimiorradioterapia ainda são limitados nessa população. Visando contribuir com a discussão do problema, esta dissertação está dividida em dois tópicos: uma revisão da literatura, tratando dos principais pontos relacionados ao CCP, ao papel do sistema imune no câncer e aspectos relacionados a imunonutrição, com enfoque nos imunonutrientes arginina, glutamina e ômega 3. O segundo tópico refere-se a uma metanálise que avaliou os efeitos da suplementação de glutamina, arginina e ômega 3 na tolerância ao tratamento, estado nutricional e função imune no CCP durante a quimiorradioterapia. Foi evidenciado que a glutamina pode atuar na gravidade da mucosite durante a quimiorradioterapia e que o ômega 3 pode ser promissor na melhora do estado nutricional. No entanto, os resultados para função imune foram limitados. Esses resultados devem ser interpretados com cuidado dadas as diferenças entre os tipos de suplementação ofertada e a falta de rigor metodológico em parcela importante dos estudos. Investigações focadas em elucidar a contribuição de cada imunonutriente durante a quimiorradioterapia merecem ser aprofundadas.

Períodos de inatividade ou desuso da musculatura esquelética, em decorrência de situações, incluindo, imobilização de membros, têm sido associados a redução da tensão sobre os músculos, menor resistência à fadiga, redução no conteúdo proteico, diâmetro da fibra e da produção de força muscular. Adicionalmente, indivíduos submetidos a períodos de desuso da musculatura esquelética, podem ser acometidos por uma série de fisiopatologias secundárias, dentre elas, uma maior incidência de infecções, fato que, além de retardar a sua recuperação, contribui para a elevação da morbidade e, até mesmo, para um maior grau de mortalidade, entre esta população. Perfazendo cerca de 20% do pool total de aminoácidos livres no plasma e entre 50% a 60% no músculo esquelético, a glutamina é o aminoácido livre mais abundante no organismo, sendo a musculatura esquelética, o seu principal sítio de síntese, estoque e liberação endógena. Entretanto, sob condições de estresse fisiológico, incluindo câncer, sepse e exercícios físicos intensos, prolongados ou exaustivos, entre outras, ocorre considerável redução na disponibilidade de glutamina corporal, fato que decorre de um desequilíbrio entre a síntese e o consumo deste aminoácido, pelo organismo. Tal fato tem se correlacionado, de forma direta, ao desencadeamento de ações desagregadoras a homeostasia celular, incluindo a ativação de vias de sinalização celular com potencial proteolítico e pró-apoptótico, como as do fator nuclear Kappa B (NF-kB), da proteína quinase ativada por mitógenos (MAPK), subunidade p38 (p38 MAPK) e do fator transcricional Forkhead box O, subunidade 3a (FOXO3a) em decorrência de um desequilíbrio no estado redox celular, advindo da elevada síntese de espécies reativas de oxigênio (ERO), em relação a sua neutralização pelo sistema antioxidante celular, situação conhecida como estresse oxidativo. Por estas razões, a suplementação com L-glutamina, tanto na forma livre, conjugada com L-alanina (solução GLN+ALA), bem como na forma de dipeptídeos contendo este aminoácido, como o L-alanil L-glutamina (DIP) tem sido investigada, por representar uma maneira eficiente de fornecimento de glutamina, por via oral, ao organismo. Logo, no presente estudo, ratos Wistar machos adultos, foram submetidos a um período de 14 dias de imobilização bilateral dos membros posteriores, por meio de um novo modelo experimental de imobilização de membros e suplementados, concomitantemente, de maneira oral, com DIP (1,49 g/Kg-1/d, grupo DIP-IMOB) e com a solução contendo os aminoácidos L-glutamina (1 g/Kg-1/d) e Lalanina (0,61 g/Kg-1/d) na forma livre (grupo GLN+ALA-IMOB) ou água (grupo IMOB). Parâmetros basais foram obtidos de animais não imobilizados e suplementados com DIP (grupo DIP), GLN+ALA (grupo GLN+ALA) e água (grupo CONTR), na mesma posologia dos grupos submetidos a imobilização. Os animais foram sacrificados 10 horas após a última sessão de gavagem, onde o plasma e os músculos sóleo e gastrocnêmio foram coletados para análise. No plasma, foram mensuradas as concentrações de glutamina, glutamato, amônia, fator de necrose tumoral-α (TNF-α), cortisol, substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e a concentração de glutationa (GSH) e dissulfeto de GSH (GSSG), nos eritrócitos. Nos músculos sóleo e gastrocnêmio foram analisadas as concentrações de glutamina, glutamato, GSH, GSSG, razão GSSG/GSH, TBARS, proteínas carbonilas, TNF-α, caspase 3 e o imunoconteúdo de NF-kB, heterodimero p65, IKKα/β, p38 MAPK e FOXO3a, nas suas isoformas total e fosforilada, bem como o imunoconteúdo total, de HSP70. Ainda nos músculos sóleo e gastrocnêmio, foram analisados o conteúdo proteico e área de secção transversa miofibrilar, bem como parâmetros morfológicos, incluindo: peso corporal total, % de ganho de peso durante o período experimental, peso muscular total, relação peso muscular/peso corporal total e o grau de atrofia e/ou % de alteração do peso muscular, de ambos os membros submetidos a imobilização. Quartoze dias de imobilização de membros promoveram significativa redução da concentração de glutamina no plasma e nos músculos sóleo e gastrocnêmio de animais IMOB, quando comparados aos grupos basais do estudo. Tal situação foi atenuada e reestabelecida nos grupos DIP-IMOB e GLN+ALA-IMOB (p

Background : : : : There is little scientific data about the effects of continuous supplementation with nutraceuticals over horse’s health and performance. Horse owners and veterinarians are still using supplements for horses without any kind of evaluations. At the Brazilian market is possible to buy hundreds of different products, but there is not private or state regulation over production and quality of these products. The absence of information about quality and efficacy of these products may contribute to mistakes in horse’s nutrition program. The objective of this research was to determine the effect of supplementation with a combination of nutraceuticals over some blood parameters (red cell count, total plasma proteins, free plasma glutamine and glutamate) and components of body composition in working horses. Materials, Methods & Results : There were 19 gelding horses, divided in two groups: nutraceutical (NUTR; n=10) and placebo (PLAC; n=9). Both groups received equivalent feeding regimens in regard to concentrate and grass, and did similar exercise program. NUTR group received their pellets with nutraceuticals, and PLAC group received a placebo during the morning meal. There is no visual difference between nutraceutical and placebo pellets. Body composition determination and blood collection were taken in three periods: pre-test, after 4 and 12 weeks of supplementation. Body composition was determined after evaluation of horse’s body mass by electronic scale associated with measurement of rump fat by ultrasound. Results showed that there were no significant changes in body composition during 12 weeks of supplementation in both groups, which had percentage of body fat around 13%. However, supplementation with nutraceutical produced significant changes (P Discussion : Supplementation with nutraceutical or placebo did not produce illness or other nutritional problem in the experimental horses during 12 weeks. Also, because the nutraceutical and placebo pellets were visually similar to horse’s grain, the experimental animals did not have problems to eat all feed during 12 weeks. During this period it was observed that NUTR group had some improvement of the blood parameters when compared with PLAC group (P 16%), total plasma protein (>7%) and free plasma glutamine (>20%) observed in NUTR group will contribute to horse’s performance since it is positive action on red blood indexes and plasma amino acid concentration, contributing to the well-being of this horse group. Increase in blood glutamine concentration observed in NUTR group without improvement of body composition was not expected because this amino acid is produced mainly by skeletal muscle. Increase in fat-free mass frequently is associated with improvement of blood glutamine concentration. Finally, initial elevation in few parameters in PLAC group at 4 weeks of supplementation probably was associated with improvement of general management practices. In conclusion, Supplementation with a nutraceutical combination, for 12 weeks, produces changes in the concentration of some blood parameters, but it didn’t modify the corporal composition. The elevation of those components can favor the transport of oxygen and nutrients in tissues leading to improvement in the horse performance.

O método de escolha para o tratamento do megaesôfago avançado é a realização de esofagectomia, que resulta em resposta inflamatória aguda mediada por citocinas pró-inflamatórias. A implementação de terapia nutricional com imunonutrientes pode modular a resposta imune e consequentemente a resposta de fase aguda. O presente estudo comparou as variáveis de composição corporal, os dados hematológicos e a concentração sérica de albumina e citocinas no pré e pós-operatório de pacientes portadores de megaesôfago avançado submetidos à esofagectomia após terapia nutricional enteral suplementada de glutamina e ácido graxo ômega-3. Foi desenvolvido um estudo prospectivo, que avaliou 20 pacientes, em cinco momentos, denominados M1, M2, M3, M4 e M5. O M1 foi caracterizado pela avaliação inicial, o M2 um dia antes da cirurgia e, o M3, M4 e M5, no quinto, sétimo e nono dia de pós-operatório, respectivamente. A avaliação nutricional foi realizada no M1, M2 e M4, e a coleta de amostras de sangue no M1, M2, M3 e M5. Peso e índice de massa corporal não apresentaram alterações significativas em nenhum momento. Massa livre de gordura, massa muscular esquelética, água intra e extracelular, água corporal total e a relação da água extracelular pela água corporal total aumentaram significativamente no M4, enquanto que a relação da água e a massa de gordura reduziram de maneira significativa no M2. A massa de gordura também reduziu no M4, assim como o ângulo de fase. Houve aumento significativo dos leucócitos no M5, diminuição dos linfócitos no M3 e aumento dos neutrófilos no mesmo período. A albumina reduziu significativamente no M2, M3 e M5. IL-1β, IL-8, IL-10 e TNF-α apresentaram valores abaixo do limite de detecção do ELISA. Para IL-6 não foi observada diferença significativa entre os momentos. A retenção hídrica característica da resposta de fase aguda interferiu na análise das variáveis de composição corporal e da concentração sérica da albumina. O ELISA, método utilizado para avaliação da concentração sérica de citocinas pode não ter sido o melhor para quantificação das mesmas no soro, já que apenas a IL-6 apresentou valores acima do limite de detecção. Portanto, nas condições empregadas neste estudo, a terapia nutricional suplementada de glutamina e ácido graxo ômega-3 parece não contribuir para melhorar os dados analisados. The method of choice for the treatment of advanced megaesophagus is esophagectomy, which results in acute inflammatory response mediated by pro-inflammatory cytokines. The implementation of nutritional therapy with immunonutrients can modulate the immune response and consequently the acute phase response. The present study compared The present study compared the variables of body composition, hematological data and serum concentration of albumin and cytokines in the preoperative and postoperative periods of patients with advanced megaesophagus submitted to esophagectomy after supplemented enteral nutritional therapy of glutamine and omega-3 fatty acid. A prospective study was conducted, which evaluated 20 patients in five moments, called M1, M2, M3, M4 and M5. M1 was characterized by the initial evaluation, M2 one day before surgery and M3, M4 and M5, on the fifth, seventh and ninth postoperative day, respectively. The nutritional evaluation was performed in M1, M2 and M4, and the collection of blood samples in M1, M2, M3 and M5. Weight and body mass index did not show significant changes at any time. Fat-free mass, skeletal muscle mass, intracellular and extracellular water, total body water and the extracellular water ratio by total body water increased significantly in M4, while the water ratio and fat mass reduced significantly in M2. The fat mass also reduced in the M4, as well as the phase angle. There was a significant increase in leukocytes in M5, decrease in lymphocytes in M3 and increase in neutrophils in the same period. Albumin reduced significantly in M2, M3 and M5. IL-1β, IL-8, IL-10 and TNF-α showed values below the detection limit of the ELISA. For IL-6, no significant difference was observed between the moments. The water retention characteristic of the acute phase response interfered in the analysis of the variables of body composition and serum albumin concentration. ELISA, a method used to evaluate the serum concentration of cytokines may not have been the best for quantification of serum levels, since only IL-6 presented values above the limit of detection. Therefore, under the conditions employed in this study, the supplemental nutritional therapy of glutamine and omega-3 fatty acid does not seem to contribute to improve the data analyzed.

Introdução: A Insuficiência hepática aguda grave (IHAG), frequentemente chamada de hepatite fulminante, é uma síndrome clínica dependente de múltiplas etiologias, que ocorre em pacientes sem doença prévia, não habitual, grave e rápida, frequentemente fatal. A perda de hepatócitos, característica da IHAG, leva a uma síndrome de resposta inflamatória sistêmica com falência multiorgânica. A resposta inflamatória está envolvida no estresse oxidativo e nitrosativo, que potencialmente reforça os efeitos citotóxicos podendo levar a uma perturbação no sistema de proteínas de choque térmico e desenvolvimento do estresse de reticulo endoplasmático que contribuem para o processo de morte celular. A glutamina atua como substrato energético para a maioria das células e também é um importante precursor para nucleotídeos, glutamato e, em particular, para a síntese de glutationa. Ela é capaz de diminuir o estresse oxidativo e reduzir a liberação de citocinas inflamatórias. Objetivo: Avaliar os marcadores de estresse oxidativo e de retículo, proteínas de choque térmico, processo inflamatório e morte celular no fígado de ratos Wistar com IHAG, induzida por tioacetamida, na tentativa de elucidar a ação da glutamina nesse modelo experimental. Métodos: Foram utilizados 28 ratos machos Wistar (peso médio de 300 g), distribuídos em quatro grupos: controle (CO), controle mais glutamina (CO+G), tioacetamida (TAA) e tioacetamida mais glutamina (TAA+G). A IHAG foi induzida através de administração intraperitoneal de duas doses de tioacetamida (400 mg/Kg) em solução salina (0,9% NaCl), com intervalo de 8 horas. Os grupos tratados receberam glutamina 30 minutos após a última dose de TAA e 24 e 36 horas após o início do experimento na dose de 25 mg/kg em 1 mL de NaCl a 0,9% por via intraperitoneal. Após 48 horas, os animais foram anestesiados e o sangue foi então coletado do plexo retro-orbital para análises de aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT) e fosfatase alcalina (FA). Os animais foram eutanasiados por overdose anestésica e o fígado foi removido e dividido em seções para armazenamento e posteriores avaliações. Foi realizada análise histológica através de coloração de Hematoxilina e Eosina. O homogeneizado do tecido foi utilizado para análise de lipoperoxidação (TBARS), atividade enzimática (CAT, GPx e GST), níveis de GSH, avaliação dos metabólitos do óxido nítrico (nitritos/nitratos), quantificação de proteína total, níveis de proteínas carboniladas, avaliação de citocinas inflamatórias por análise multiplex (TNFα, IL-1β, 10 IL6 e IL10) e análises moleculares por Western Blot das proteínas Nrf2, Keap1, NQO1, SOD, TLR4, NF-B, COX, iNOS, HSF1, HSP27, HSP70, HSP90, ATF6, GRP78, CHOP, PI3K, Akt, FOXO3a, Bcl-2, Bax, Caspase 3, mTOR, Beclin1 e LC3α/β. Resultados: A glutamina diminuiu as enzimas de integridade hepática, aumentou os níveis de proteína total, diminuiu a concentração de proteínas carboniladas, diminuiu a lipoperoxidação e os níveis de óxido nítrico. Foi eficaz na preservação do parênquima hepático reduzindo o infiltrado inflamatório, a balonização e a necrose. Observou-se que a glutamina ativou a via do Nrf2, modulou as enzimas antioxidantes e diminuiu a enzima detoxificadora GST. Além disso atenuou o processo inflamatório evidenciado pela diminuição dos níveis das citocinas e expressão dos demais mediadores inflamatórios. Foi evidenciado ainda, que a glutamina reduziu o dano celular por modular as proteínas de choque térmico, inibiu o estresse de retículo endoplasmático e promoveu sobrevivência celular evidenciado na redução dos parâmetros de morte celular. Conclusão: Sugere-se que a glutamina desempenhou um papel restaurador no fígado de animais submetidos ao modelo de IHAG induzida por tioacetamida, possivelmente pelo sua ação antioxidante e anti-inflamatória, demonstrado pelas avaliações realizadas neste estudo. Introduction: Severe acute hepatic insufficiency (IHF), often called fulminant hepatitis, is a clinical syndrome that is independent of multiple etiologies, presenting with no disease, severe and rapid, often fatal, therapy. The loss of hepatocytes, characteristic of IHAG, leads to a systemic inflammatory response syndrome with multiorgan failure. The inflammatory response is involved in oxidative and nitrosative stress, which potentially enhances the cytotoxic effects, leading to a disturbance in the thermal shock protein system and the development of endoplasmic reticulum stress that contribute to the process of cell death. The glutamine acts as an energy substrate for most cells and is also an important precursor for nucleotides, glutamate and in particular for a synthesis of glutathione. It is able to decrease oxidative wear and reduce the release of inflammatory cytokines. Objective: To evaluate the markers of oxidative and reticulum stress, heat shock proteins, inflammatory process and cell death in the liver of Wistar rats with IHAG, induced by thioacetamide, in an attempt to elucidate the action of glutamine in this experimental model. Methods: Twenty-eight male Wistar rats (average weight of 300 g) were divided into four groups: control (CO), control plus glutamine (CO+G), thioacetamide (TAA) and thioacetamide plus glutamine (TAA+G). The IHAG was induced by intraperitoneal solution of two doses of thioacetamide (400 mg/kg) in saline solution (0.9% NaCl), with an interval of 8 hours. The treated groups received glutamine 30 minutes after the last dose of TAA and 24 and 36 hours after the start of the experiment at a dose of 25 mg/kg in 1 mL of 0.9% NaCl intraperitoneally. After 48 hours, the animals were anesthetized and blood was then collected from the retro-orbital plexus for analysis of aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT) and alkaline phosphatase (FA). The animals were euthanized by anesthetic overdose and the liver was removed and divided into sections for storage and subsequent evaluations. A histological analysis was performed through the staining of Hematoxylin and Eosin. The tissue homogenate was used for the analysis of lipoperoxidation (TBARS), enzymatic activity (CAT, GPx and GST), GSH levels, evaluation of nitric oxide (nitrite/nitrate) metabolites, quantification of total protein, levels of carbonylated proteins, evaluation of inflammatory cytokines by multiplex analysis (TNFα, IL1β, IL6 and IL10) and molecular analyzes by Western Blot of proteins Nrf2, Keap1, NQO1, 12 SOD, TLR4, NF-B, COX, iNOS, HSF1, HSP27, HSP70, HSP90, ATF6, GRP78, CHOP, PI3K, Akt, FOXO3a, Bcl-2, Bax, Caspase 3, mTOR, Beclin1 e LC3α/β. Results: Glutamine decreased liver integrity enzymes, increased total protein levels, decreased carbonylated protein concentration, decreased lipoperoxidation and nitric oxide levels. It was effective in preserving the liver parenchyma by reducing inflammatory infiltrate, ballooning and necrosis. It was observed that glutamine activated the Nrf2 pathway, modulated the antioxidant enzymes and decreased the detoxification enzyme GST. It also attenuated the inflammatory process evidenced by the decrease in cytokine levels and the expression of other inflammatory mediators. It was further evidenced that glutamine reduced cell damage by modulating heat shock proteins, inhibited endoplasmic reticulum stress and promoted cell survival evidenced in the reduction of cell death parameters. Conclusion: It is suggested that glutamine played a protective role in the liver of animals submitted to the thioacetamide-induced IHAG model, possibly due to its antioxidant and anti-inflammatory action, as demonstrated by the evaluations carried out in this study.

INTRODUÇÃO: O estudo das células L vem sendo muito valorizado pelo potencial de produção de incretinas e peptídeos intestinais. O GLP-1 é a principal incretina produzida. OBJETIVO: avaliar a secreção de GLP-1 em células intestinais da linhagem HCT-8, quando são expostas às condições de alteração do pH, suplementação de glutamina e palmitato de sódio. METODOLOGIA: As células foram expostas às condições de pH 7,2 e estimuladas com glutamina, palmitato de sódio e submetidas a alteração do pH para 4,8, tendo os meios de cultura coletados em 15 (T0), 30 (T2) e 60 (T3) minutos para dosagem de GLP-1 e DHL. RESULTADOS: Quando comparados os tempos nas condições de pH observou-se uma concentração maior do hormônio em T2 comparado com o basal (p=0,02), podendo ser observado o mesmo comportamento com o estímulo de palmitato de sódio (p=0,04). Com o estímulo de glutamina não foram observadas diferenças significativas. CONCLUSÃO: Com base nos resultados, pode se sugerir que a alteração do pH assim como o estímulo com palmitato influencia na secreção de GLP-1, nas células HCT-8, observando-se uma concentração maior quando é comparado com o basal. O estímulo da glutamina, na concentração utilizada no trabalho, não se mostrou um potencializador da secreção do hormônio. Mais estudos devem ser realizados para que sejam comprovadas as teorias. INTRODUCTION: The study of L cells has been highly valued for their potential of production of intestinal incretins and peptides. GLP-1 is the main incretin produced. OBJECTIVE: To evaluate GLP-1 secretion in intestinal cells of the HCT-8 strain when exposed to pH alteration conditions, glutamine supplementation and sodium palmitate. METHODOLOGY: Cells were exposed to pH 7.2 and stimulated with glutamine, sodium palmitate and pH change for 4,8 and, the culture médium was collected at 15 (T0), 30 (T1) and 60 (T2) minutes for GLP-1 and DHL dosage. RESULTS: A higher concentration of the hormone was observed in T2 compared to baseline (p = 0,02) when compared to the pH conditions, the same behavior could be observed with the sodium palmitate stimulus (p = 0,04). With the glutamine stimulus, no significant differences were observed. CONCLUSION: Based on the results, it can be suggested that pH change as well as stimulation with palmitate influences the secretion of GLP-1 in HCT-8 cells, observing a higher concentration when compared to baseline. Glutamine stimulation, at the concentration used in the study, did not prove to be a potentiator of hormone secretion. Further studies must be carried out to prove the theories.

RESUMO Objetivo: analisar a influência da glutamina nas alterações morfo-histológicas observadas em íleo, pulmão, rim e fígado de ratos Wistar submetidos à sepse. Métodos: a sepse foi induzida por meio de ligadura e punção do ceco. Os animais foram divididos em dois grupos: grupo A, controle, com cinco animais, e grupo B, experimento, com dez animais que utilizaram previamente glutamina por dois dias por via enteral. Na análise histológica, classificou-se as lesões de acordo com um escore cujo valor atribuído dependia da gravidade da lesão e do órgão acometido. A somatória dos valores atribuídos a cada animal resultou em sua nota final. No íleo, avaliaram-se as vilosidades; no fígado, esteatose microgoticular; no pulmão, pneumonite intersticial; e no rim, vacuolização dos túbulos contorcidos proximais. Resultados: a lise celular e a destruição das vilosidades no íleo do grupo controle foram mais intensas em relação aos animais que receberam glutamina. No rim, verificou-se vacuolização mais acentuada dos túbulos contorcidos proximais no grupo controle em relação aos animais que receberam glutamina. Tanto a esteatose microgoticular como a pneumonite intersticial mostraram-se semelhantes em ambos os grupos. Conclusão: o uso de glutamina via enteral previamente à sepse na dose de 0,5 g/kg/dia preservou de maneira significativa a estrutura histológica do intestino delgado e os rins em ratos. ABSTRACT Objective: to analyze the influence of glutamine on morphological and histological changes observed in the ileum, lung, kidney and liver of Wistar rats subjected to sepsis. Methods: we induced sepsis by cecal ligature and puncture. We divided the animals in two groups: group A, control, with five animals, and group B, experience, with ten animals that received enteral glutamine two days before sepsis induction. We used histological analysis to rank the injury according to a score dependent on the injury severity and the affected organ. The sum of values assigned to each animal resulted in a final grade. We assessed the villi in the ileum, microgoticular steatosis in the liver, interstitial pneumonitis in the lungs, and vacuolation of the proximal convoluted tubules in the kidneys. Results: cell lysis and destruction of the villi of the ileum were more intense in the control group when compared with animals receiving glutamine. In the kidney, we found more pronounced vacuolization in the proximal convoluted tubules in the control group compared with animals receiving glutamine. Both microgoticular steatosis and interstitial pneumonitis were similar between groups. Conclusion: administration of enteral glutamine prior to sepsis preserved the histological structure.

Orientador: Sandra Martha Gomes Dias Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O câncer de mama triplo-negativo (TN) corresponde a cerca de 15% dos casos diagnosticados da doença e é caracterizado pela ausência dos receptores de hormônios progesterona e estrógeno e do receptor de membrana HER2 e, por isso, não responde aos tratamentos convencionais para o câncer de mama. Estudos recentes têm mostrado uma relação entre o câncer de mama TN e o metabolismo alterado, sugerindo que a reprogramação metabólica (com dependência do aminoácido glutamina) pode ser chave na progressão da doença e importante no desenvolvimento de novas terapias. Dado que a inibição da enzima glutaminase (GLS), primeira na via de metabolismo de glutamina, já está sendo avaliada na terapêutica de tumores de mama triplo-negativo com o composto CB-839 (Fase Clinica II), nós avaliamos quais mecanismos metabólicos alternativos poderiam ser acionados com o tratamento, causando a resistência deste subtipo tumoral ao composto. Inicialmente, confirmamos dados da literatura que mostram uma dependência variada à glutamina e sensibilidade ao composto CB-839 em linhagens celulares TN e, dessa maneira, identificamos células resistentes (inibição de proliferação menor que 50% em relação ao veículo) e sensíveis ao tratamento (morte ou inibição de proliferação maior que 50%). Em seguida, a partir da análise de dados de transcriptômica de linhagens e tecidos tumorais, observamos que genes relacionados ao metabolismo de lipídios são diferencialmente expressos entre células resistentes e sensíveis ou entre tumores com baixo e alto nível de expressão de GLS. Especificamente, diversos genes relacionados ao processo de beta-oxidação estão com expressão aumentada em tecidos tumorais com baixa expressão de GLS. Além disso, pacientes com tumores com baixa expressão de GLS e maior expressão de Carnitina Palmitoiltranferase (CPT1) apresentaram pior prognóstico. Para validar se beta-oxidação é uma via metabólica importante em linhagens resistentes ao CB-839, verificamos o nível proteico de CPT1 e CPT2, atividade de CPT1 e sensibilidade ao etomoxir (inibidor da beta-oxidação) dessas linhagens. Como resultado, verificamos que células resistentes ao CB-839 têm maior nível proteico de CPT2, maior atividade de CPT1 e apresentam maior sensibilidade ao etomoxir (em relação à proliferação) do que células sensíveis. Observamos também que CB-839 impacta menos na morfologia mitocondrial e nível de ATP em linhagens resistentes em relação às células sensíveis. Além disso, o tratamento conjunto de CB-839 com etomoxir nas células resistentes tem maior impacto na respiração celular de ácidos graxos, nível de ATP intracelular e nos fenótipos de crescimento, invasão e migração celular. Por fim, observamos que os níveis de fosforilação de Tyr172 em Proteína cinase ativada por AMP (AMPK) e Ser72 em Acetil-CoA Carboxilase (ACC) são maiores em tumores com menor expressão de GLS, provendo as bases moleculares para a ativação da beta-oxidação em células resistentes ao CB-839. Em sumário, concluímos que o metabolismo de glutamina e de ácidos graxos dão plasticidade metabólica para os tumores de mama triplo-negativo e que os níveis proteicos de CPT1 e CPT2 devem ser usados como marcadores de resposta ao tratamento com CB-839 Abstract: Triple-negative breast cancer accounts for about 15% of all breast cancer, characterized by a lack of estrogen and progesterone receptor expression (ESR and PGR, respectively) and the absence of human epithelial growth factor receptor (ERBB2) amplification. Therefore, this subtype does not respond to conventional treatments for breast cancer. Recent studies have shown a relationship between triple-negative breast cancer and altered metabolism, suggesting that metabolic reprogramming (with dependence on the amino acid glutamine) may be key to disease progression and promising in the development of new therapies. Inhibition of Glutaminase enzyme (GLS), first in the glutamine metabolism pathway, has been evaluated in the treatment of triple-negative breast tumors with compound CB-839 (Clinical Phase II) and, therefore, we evaluated which alternative metabolic mechanisms could be triggered with the treatment, causing tumor resistance to the compound. Initially, we confirmed literature data showing a varyable dependence on glutamine and sensitivity to CB-839 in TN cell lines and, thus, identified resistant (proliferation inhibition less than 50% compared to vehicle tretatment) and sensitive (death or proliferation inhibition more than 50% of that of the vehicle-treated cells) cells lines. Then, from the analysis of transcriptomic data from cells lines and tumor tissues, we observed that the genes related to lipid metabolism are differentially expressed between resistant and sensitive cells and between tumors with low or high GLS expression. Specifically, several genes related to the beta-oxidation process have increased expression in tumor tissues with low GLS expression. In addition, patients with tumors with lower GLS associated to higher CPT1 expression show worse prognosis. In order to validate whether beta-oxidation is an important metabolic pathway in resistant cells lines, we evaluated CPT1 and CPT2 protein expression, CPT1 activity, and etomoxir sensibility (beta-oxidation inhibitor) levels on those cells. Cells resistant to CB-839 have higher CPT2 protein level, higher CPT1 activity and are more sensitive to etomoxir (in relation to proliferation) than sensitive cells. We also observed that CB-839 treatment impacted less the mitochondrial morphology and ATP levels of resistant compared to sensitive cells. Combined treatment of CB-839 with etomoxir in resistant cells promoted a greater impact on cellular respiration of fatty acids, intracellular ATP level, cell proliferation, invasion and migration phenotypes. The levels of Tyr172 phosphorylation in AMPK and Ser72 in ACC are higher in tumors with lower GLS expression, providing the molecular bases for the activation of beta-oxidation in CB-839-resistant cells. In summary, we conclude that glutamine and fatty acid metabolism provide metabolic plasticity for triple-negative breast tumors and that the protein levels of CPT1 and CPT2 should be used as markers of response to CB-839 treatmen Doutorado Genética Animal e Evolução Doutora em Genética e Biologia Molecular FAPESP 2014/18061-9

Introdução: A lesão de isquemia e reperfusão (I/R) intestinal pode causar danos celular e tecidual local e em órgãos a distância. Alguns fatores podem estar envolvidos nesses processos, tais como: a geração de espécies reativas de oxigênio, mediadores inflamatórios, óxido nítrico (NO) e estresse do retículo endoplasmático (RE). Devido ao envolvimento do estresse oxidativo nas lesões de I/R intestinal, algumas opções terapêuticas com antioxidantes estão sendo estudadas e testadas nas lesões de I/R intestinal. Objetivo: Avaliar o efeito local e sistêmico da glutamina no intestino e fígado de animais submetidos à I/R intestinal. Métodos: Foram utilizados 20 ratos wistar machos divididos em quatro grupos: Sham operated (SO), Glutamina+Sham operated (G+SO), Isquemia e reperfusão intestinal (I/R); Glutamina+Isquemia e reperfusão intestinal (G+I/R). Os animais foram anestesiados e, após, realizada a laparotomia mediana e identificação da artéria mesentérica superior. A artéria foi clampeada por 30 e após esse tempo, os animais foram mantidos por mais 15 minutos em reperfusão intestinal. A glutamina foi administrada por via intraperitoneal, na dose de 25 mg/Kg diluída em 1 mL de solução fisiológica. O tratamento foi realizado uma vez ao dia, durante 48 horas antes da indução da isquemia. Foram realizadas análises séricas para a função de integridade hepática através das enzimas aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT) e fosfatase alcalina (FA) e danos ao DNA pelo ensaio cometa. Realizamos a análise histológica dos tecidos através da coloração de Hematoxilina-Eosina e imunohistoquímica para avaliar a quantidade de células marcadas com os anticorpos monoclonais IL-1β, IL-6, TNF-α e NF-κB no intestino e fígado. O homogeneizado do intestino e fígado foram utilizados para a avaliação dos níveis de lipoperoxidação (LPO) através das substâncias que reagem ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), avaliação da atividade das enzimas antioxidantes catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx), determinação dos níveis de glutationa (GSH), avaliação dos metabólitos do óxido nítrico (nitritos/nitratos) e para as análises moleculares das proteínas iNOS, NF-B, Nrf2, Keap1, SOD, NQO1, HSP70, GRP78 e ATF-6 por Western Blot. Resultados: O pré-tratamento com glutamina reduziu os níveis de LPO, óxido nítrico, danos ao DNA, bem como as enzimas de integridade hepática. Observamos que a glutamina foi eficaz na preservação da arquitetura tecidual do intestino e fígado dos animais submetidos a I/R intestinal, reduzindo parâmetros como infiltrado inflamatório, perda das vilosidades intestinais e necrose. Constatou-se que a glutamina ativou a via do Nrf2 e as enzimas antioxidantes, reduziu o dano celular, e inibiu o estresse do RE, além de reduzir os mediadores do processo inflamatório. Conclusão: Neste estudo, sugerimos que o pré-tratamento com a glutamina desempenhou um papel protetor tanto no intestino como no fígado dos animais submetidos a I/R intestinal, demonstrado pelas análises estudadas, possivelmente pela sua ação antioxidante e anti-inflamatória. Background: Injury by intestinal ischemia and reperfusion (I/R) can cause local and cellular damage to tissues and organs at distance. Some factors may be involved in those processes, such as the generation of reactive oxygen species, inflammatory mediators, nitric oxide (NO) and endoplasmic reticulum stress. Due to the involvement of oxidative stress in intestinal I/R lesions, some therapeutic options with antioxidants are being studied and tested in order to reduce these damages. Objective: To evaluate the local and systemic effect of glutamine in the intestine and liver of animals submitted to intestinal I/R. Methods: Twenty male Wistar rats were divided into four groups: Sham operated (SO), Glutamine+Sham operated (G+SO), Intestinal Ischemia and reperfusion (I/R); Glutamine+intestinal ischemia and reperfusion (G+I/R). The animals were anesthetized and after we performed the median laparotomy and identification of the superior mesenteric artery. The artery was clamped for 30 minutes and after that the animals were maintained for another 15 minutes in intestinal reperfusion. Glutamine was administered intraperitoneally at a dose of 25 mg/kg diluted in 1 ml of saline solution. Treatment was performed once daily for 48 hours prior to induction of ischemia. Serum samples for hepatic integrity were collected, and the enzymes aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT) and alkaline phosphatase (FA) were accessed. DNA damage was evaluated by the comet assay. We performed the histological analysis of the tissues through the staining of Hematoxylin-Eosin and immunohistochemistry, in order to evaluate the amount of cells labeled with the monoclonal antibodies IL-1β, IL-6, TNF-α and NF-κB in the intestine and liver. The intestinal and liver homogenates were used to evaluate the levels of lipoperoxidation (LPO) through thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), evaluation of the activity of antioxidant enzymes catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx), determination of glutathione levels (GSH) and nitric oxide (nitrites/nitrates), and for the molecular analyzes of the iNOS, NF-B, Nrf2, Keap1, SOD, NQO1, HSP70, GRP78 and ATF-6 proteins we performed Western blot analysis. Results: Pretreatment with glutamine reduced levels of LPO, nitric oxide, DNA damage, as well as liver integrity enzymes. We observed that glutamine was effective in preserving the intestinal and liver tissue architecture of animals submitted to intestinal I/R, reducing parameters such as inflammatory infiltrate, loss of intestinal villi and necrosis. It was found that glutamine activated the Nrf2 pathway and antioxidant enzymes, reduced cell damage, and inhibited endoplasmic reticulum stress in addition to reducing mediators of the inflammatory process. Conclusion: In this study, we suggest that pretreatment with glutamine played a protective role in both intestine and liver of animals submitted to intestinal I/R, demonstrated by the present analyzes, possibly for its antioxidant and anti-inflammatory action.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Contaminação bacteriana que normalmente infecta o endométrio bovino no pós-parto prejudica a defesa imunológica quando há estresse metabólico, levando a endometrite e infertilidade. A resposta do endométrio contra bactérias depende da imunidade inata, com o reconhecimento de padrões moleculares associados a patógenos, estimulando a inflamação, caracterizadas por secreção de interleucinas (IL)-1p, IL-6 e IL-8. Entretanto, animais frequentemente falham em eliminar a infecção microbiana quando apresentam reduzidas concentrações de glicose e glutamina, que são fontes de energia para o endométrio no conhecido balanço energético negativo. A contínua inflamação e resposta imune inata contra infecção bacteriana no útero após o parto compromete o bem-estar animal. Neste estudo testou-se a hipótese de que as vias homeostáticas conferidas pela glicose, glutamina e biotina integram o metabolismo energético e a imunidade inata no tecido endometrial bovino. A ausência de glicose reduziu a secreção de IL-1P, IL-6 e IL-8 em culturas de órgãos endometriais desafiadas com a endotoxina lipopolissacarídeo (LPS). Depleção de glutamina também reduziu a atividade inflamatória do endométrio contra LPS. Entretanto, as atividades de glicose e glutamina dependem da presença de glicólise. A vitamina biotina demonstrou ter caráter anti- inflamatório, reduzindo a produção de citocinas pró-inflamatórias no endométrio. Em conclusão, o estresse energético metabólico afetou as respostas inflamatórias à infecções bacterianas no endométrio. Providenciamos dados que demonstram como o balanço energético negativo pode estar ligado a doença uterina no pós-parto. Bacteria that usually infect the bovine endometrium at postpartum impairs immune defense when exist metabolic stress, leading to endometritis and infertility. The response of the endometrium to bacteria depends on innate immunity, with the recognition of pathogen-associated molecular patterns by stimulating inflammation, characterized by secretion of interleukins (IL) -1p, IL-6 and IL-8. However, animals often fail to eliminate the microbial infection when they have reduced levels of glucose and glutamine, which are sources of energy to the endometrium in the negative energy balance. Continuous inflammation and innate immune response to bacterial infection in the uterus after calving compromise animal welfare. In this study we tested the hypothesis that homeostatic pathways conferred by glucose , glutamine and biotin, link the energy metabolism and innate immunity in the bovine endometrial tissue. The deprivation of glucose reduced the secretion of IL-1P, IL-6 and IL-8 in cultures of endometrial organs challenged with the endotoxin lipopolysaccharide (LPS). Glutamine depletion also reduces the inflammatory activity of the endometrium to LPS. However, glucose and glutamine activities depend on the presence of glycolysis. The vitamin biotin demonstrates anti-inflammatory nature, reducing the production of proinflammatory cytokines in the endometrium. In conclusion, the energy metabolic stress disrupts inflammatory responses to bacterial infections in the endometrium. We provide data on how negative energy balance may be linked to postpartum uterine disease. Tese (Doutorado)

O aminoácido glutamina (Gln) é precursor dos neurotransmissores cerebrais glutamato e GABA. O aumento de sua disponibilidade pode modular a excitabilidade cerebral. O objetivo deste trabalho foi descrever os efeitos do tratamento com diferentes doses de Gln, durante o desenvolvimento cerebral, sobre o comportamento de ansiedade, a depressão alastrante cortical (DAC) e a ativação da microglia no córtex de ratos recém-desmamados (D) e adultos (A). Os animais foram amamentados em ninhadas com 9 (L9; lactação normal) e com 15 filhotes (L15; lactação desfavorável). Do 7º ao 27º dia de vida pós-natal (P7-P27), os filhotes machos receberam por gavagem 250, 500 ou 750 mg/kg/dia de Gln (grupos Gln250, Gln500 e Gln750, respectivamente). Os grupos controles foram formados por animais que receberam o veículo (água destilada) no qual a Gln foi dissolvida por gavagem e por animais que não receberam gavagem (grupo ingênuo). Aos P28-P30 (D) e P88-P90 (A), os animais foram submetidos aos testes para comportamentos sugestivos de ansiedade no labirinto em cruz elevado (LCE) e no campo aberto. Dos P30-35 (D) ou P90-120 (A), registrou-se a DAC, obtendo-se dados de sua velocidade de propagação, duração e amplitude. Em seguida, os cérebros de alguns animais foram processados para imunomarcação com anticorpos anti-Iba1, específicos para microglia. No grupo D, os ratos tratados com Gln apresentaram um comportamento menos ansioso, tanto no LCE quanto no campo aberto. Este efeito ansiolítico da Gln foi mais evidente nos animais da condição L15. Na idade adulta (A), os grupos Gln500 e Gln750 da condição L15 percorreram uma maior distância e apresentaram menor tempo de imobilidade no LCE. Em relação à DAC, os animais da condição L15 apresentaram maior velocidade de propagação do que os correspondentes L9. Com exceção do grupo Gln250 da condição L15 na idade adulta, todos os grupos tratados com Gln apresentaram maior velocidade de propagação quando comparados aos respectivos controles. Além disso, esse efeito acelerador foi dependente da dose, uma vez que os grupos Gln500 e Gln750 apresentaram maiores velocidades de propagação do que os correspondentes Gln250. Quanto à reação da microglia, os animais tratados com Gln apresentaram maior imunorreatividade, tanto no córtex parietal quanto no hipocampo dos grupos D e A. Nos animais A da condição L9, a imunorreatividade da microglia e o percentual de área marcada foram maiores no grupo Gln500 do que no grupo Gln250. A partir desses resultados, sugere-se que o tratamento com Gln durante o período neonatal module a excitabilidade cerebral, resultando nas alterações eletrofisiológicas, comportamentais e imunohistoquímicas descritas neste estudo. Essas alterações persistem até a idade adulta e são dependentes da dose e da condição nutricional do animal. The amino acid glutamine (Gln) is precursor of the brain neurotransmitters glutamate and GABA. Therefore, the increase of its availability can modulate brain excitability. The aim of this study was to describe the effects of treatment with different doses of Gln during brain development on anxiety-like behavior, cortical spreading depression (CSD) and microglial reaction in the cortex of developing (D) and adults (A) rats. Wistar rats were suckled in litters with 9 (L9; normal condition) or 15 (L15; unfavorable condition) pups. From 7th to 27th postnatal day (P7-P27), male rats received Gln by gavage at the doses of 250 mg/kg/day or 500 mg/kg/day or 750 mg/kg/day (respectively Gln250, Gln500 and Gln750 groups). The control groups were formed by animals that received vehicle which Gln was dissolved (distilled water) and animals that were not submitted to the gavage procedure (naive group). At P28-P30 (D) and P88-P90 (A), animals were tested in elevated plus maze (EPM) and open field. At P30-35 (D) and P90-120 (A), we recorded the CSD, obtaining data from its velocity of propagation, duration and amplitude. The brains of some animals were processed for microglial immunolabeling with anti-Iba-1 antibodies to analyze cortical microglia. In the D group, Gln treated rats showed less anxious behavior, both in EPM and open field. This anxiolytic effect of Gln was more evident in L15 condition. In adult rats (A), Gln500 and Gln750 groups of L15 condition traveled a greater distance and displayed shorter immobility time in the LCE when compared to controls. Regarding CSD, L15 animals presented with higher propagation velocity than the corresponding L9. Except for the Gln250 group of L15 condition in adulthood, all groups treated with Gln showed higher CSD velocity when compared to their respective controls. Moreover, the accelerating effect was dose dependent, since Gln500 and Gln750 groups displayed higher CSD velocity than the corresponding Gln250. Gln treated groups had greater immunoreactivity in both the parietal cortex and hippocampus. In adult rats of L9 condition, Gln500 group had greater immunoreactivity and higher percentage of labeled area when compared Gln250 group. Our findings suggest that neonatal treatment with Gln modulates brain excitability, resulting in the electrophysiological, behavioral and microglial alterations here described. These alterations persist into adulthood and are modulated by dose and lactation conditions.

Este estudo analisou o efeito da suplementação com creatina ou glutamina sobre variáveis bioquímicas em policiais de militares. Neste propósito, desenvolveu-se um estudo experimental, duplo cego, com amostra de 32 homens distribuídos aleatoriamente, em três grupos: suplementados em creatina (n=10), glutamina (n=10) e grupo placebo (n=12) e avaliados em três momentos distintos, num intervalo de três meses (T1, T2 e T3) durante o período do treinamento físico militar, com frequência de cinco sessões de 90 minutos, por semana. Por meio da análise sanguínea mensuraram-se: os níveis de creatinina, triglicerídeos, colesterol total, HDL, VLDL, LDL. Deste modo, foi observado que a suplementação não foi a principal responsável pelas modificações observadas nas medidas ao longo do estudo, já que apenas o efeito do tempo foi significativo em três medidas: CREA (p= 0.001, ηp2= 0.50), HDL (p= 0.001, ηp2= 0.30), LDL (p= 0.009, ηp2= 0.20). Ou seja, a suplementação com creatina ou glutamina em policiais militares submetidos ao treinamento físico militar não causou efeito sobre as medidas bioquímicas., Motricidade, Vol 12 No 1 (2016)