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Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária, área de Clínica Doenças inflamatórias encefálicas do cão : comparação entre a imagem de ressonância magnética e a análise do líquido cefalorraquidiano - As doenças inflamatórias do sistema nervoso central (SNC) podem ter uma etiologia infeciosa ou não infeciosa, sendo estas últimas mais frequentes na espécie canina. Este grupo de doenças inflamatórias não-infeciosas do SNC reúne diversas entidades clínicas, cujo diagnóstico definitivo requer a confirmação histopatológica, sem a qual passam a designar-se meningoencefalites de origem desconhecida. Os dois principais exames complementares utilizados no diagnóstico destas doenças, na prática clínica, são a análise do líquido cefalorraquidiano (LCR) e a ressonância magnética (RM). O objetivo do presente estudo foi o de avaliar imagens de RM emparelhadas com a análise de LCR de cães com o diagnóstico provável de doença inflamatória encefálica, por forma a averiguar a ocorrência de associações entre os resultados obtidos nos dois métodos. Assim, analisaram-se retrospetivamente 75 casos, cada um correspondendo a uma imagem de RM e uma análise de LCR pertencentes ao mesmo animal. Recolheu-se informação relativa à localização das lesões e características da imagem, bem como informação relativa à análise do LCR. Observou-se que a pleocitose monocítica está associada a uma probabilidade 18 vezes superior de surgir emparelhada com uma imagem de RM alterada, quando foi comparada com a pleocitose neutrofílica. As lesões no tronco cerebral surgiram associadas a pleocitoses monocíticas e a aumentos de proteína total (PT) no LCR mais graves (p0,01, respetivamente). As lesões multifocais e difusas revelaram uma probabilidade 5 vezes superior do que as focais de resultar num LCR com alterações patológicas. Não se observou associação entre as características da imagem e a análise do LCR, levando à conclusão de que a RM não deverá ser utilizada para prever as alterações do LCR. Conclui-se que os dois métodos complementares de diagnóstico deverão continuar a ser utilizados em conjunto, uma vez que a sua sensibilidade está longe da desejável, no que toca ao diagnóstico das doenças inflamatórias do SNC ABSTRACT - Inflammatory diseases of the brain in dogs: comparison between magnetic resonance imaging (MRI) and cerebralspinal fluid (CSF) analysis - Inflammatory diseases of the central nervous system (CNS) may have an infectious or non-infectious etiology, the latter being more frequent in the canine species. This group of non-infectious inflammatory diseases of the CNS includes several clinical entities whose definitive diagnosis requires histopathological confirmation, without which the preferred term is meningoencephalitis of unknown origin (MUO). The two main complementary tests used in the diagnosis of these diseases in clinical practice are cerebrospinal fluid (CSF) analysis and magnetic resonance imaging (MRI). The objective of the present study was to evaluate MRI images paired with CSF analysis of dogs with a probable diagnosis of inflammatory brain disease, in order to investigate the occurrence of associations between the results obtained in both diagnostic methods. To this end, concurrent MRI and CSF analysis of 75 dogs presented to the Montenegro Imaging Center were examined retrospectively. Information was collected regarding the location of lesions and image characteristics, as well as information regarding the CSF analysis. It was observed that monocytoid pleocytosis is associated with an 18-fold higher probability of being paired with an altered MR image, when it was compared to neutrophilic pleocytosis. Brainstem lesions appeared associated with monocytoid pleocytosis and more marked CSF total protein increases (p0.01, respectively). Multifocal and diffuse lesions were 5 times more likely than focal lesions to result in CSF with pathological changes. No association was observed between imaging features and CSF analysis, leading to the conclusion that MRI should not be used to predict the changes to be found in the CSF analysis. We conclude that the two complementary diagnostic methods should continue to be used together, as their sensitivity is far from desirable for the diagnosis of inflammatory CNS diseases N/A

Relatório de Estágio do Mestrado Integrado em Ciências Farmacêuticas apresentado à Faculdade de Farmácia No âmbito da unidade curricular "Estágio curricular", do plano de estudos do Mestrado Integrdo em Ciências Farmacêuticas, foi desenvolvido o seguinte documento, que engloba os Relatórios de estágio relativos à prática em Distribuição por grosso de medicamentos e em Farmácia comunitária, bem como a monografia intitulada "BIOMARCADORES DO FLUÍDO CÉREBROESPINAL NO DIAGNÓSTICO DA DOENÇA DE ALZHEIMER”. Ambos os relatórios, referentes ao estágio realizado na Plural - Cooperativa Farmacêutica, CRL. e na Farmácia de Celas, foram redigidos sob a forma de uma análise SWOT, salientando os pontos fortes (S), os pontos fracos (W), as oportunidades (O) e as ameaças (T) de cada estágio.A doença de Alzheimer é uma doença neurodegenerativa irreversível bastante complexa onde, mesmo nos dias de hoje, a sua etiologia ainda não está bem definida. Com o aumento da esperança média de vida e com a inexistência de uma cura ou um tratamento que retarde a sua progressão, prevê-se que esta doença se torne cada vez mais prevalente. Tendo em conta as características da doença, que influenciam fortemente a qualidade de vida dos doentes, e o seu impacto socioeconómico, diversos estudos e esforços têm sido desenvolvidos de modo a obter diagnósticos capazes de reconhecer a doença ainda no seu estado precoce.O líquido cefalorraquidiano tem um papel importante na doença de Alzheimer, uma vez que apresenta uma interação direta com o fluído intersticial e, ao recolher produtos do metabolismo cerebral, auxilia no diagnóstico e no decorrer da sua evolução.Nesta monografia são analisados vários mecanismos da doença de Alzheimer, biomarcadores e métodos imagiológicos que permitem auxiliar o diagnóstico e acompanhar a progressão da mesma. Within the scope of the curricular unit "Curricular internship", of the study plan of the Integrated Master in Pharmaceutical Sciences, the following document was developed, which includes the internship reports related to the practice in Wholesale Distribution of medicines and in Community Pharmacy, as well as the monograph entitled "BIOMARKERS OF CEREBROSPINAL FLUID IN DIAGNOSIS OF ALZHEIMER'S DISEASE." Both reports, referring to the internship at Plural - Cooperativa Farmacêutica, CRL. and at Farmácia de Celas, were written in the form of a SWOT analysis, highlighting the points strengths (S), weaknesses (W), opportunities (O) and threats (T) for each stage.Alzheimer’s disease is a very complex irreversible neurodegenerative disease where, even today, its etiology is still not well-defined. With the increase in average life expectancy and the lack of a cure or treatment that slows down its progression, this disease is expected to become increasingly prevalent.Bearing in mind the characteristics of the disease that strongly influence the quality of life of patients and its socioeconomic impact, several studies and efforts have been carried out in order to develop diagnoses capable of recognizing the disease at an early stage.The cerebrospinal fluid carries out a significant role in this diagnosis since it has a direct interaction with the interstitial fluid, collecting products of the brain metabolism, therefore helping the diagnosis and the evolution of Alzheimer's disease.In this monograph, various mechanisms of Alzheimer's disease, biomarkers, and imaging methods are analysed which help to diagnose and watch its progression.

Multiple sclerosis (MS) is a type of neurological disease commonly diagnosed in young adult patients, with often unknown causes that can impact the quality of life of the affected person. The objective of this study is to present the peculiarities and applications of imaging diagnostic tests, more specifically magnetic resonance imaging in the diagnosis of multiple sclerosis through a literature review. The present work is a research proposal outlined and based on literature review studies for an integrative review. The result has been that magnetic resonance imaging, due to its high resolution images, has played an increasingly unique role in the diagnosis and treatment of multiple sclerosis patients, enabling the detection of small lesions. It is concluded that MRI can be considered an important resource to assist in the diagnosis of multiple sclerosis due to its relationships between the combinations of different types of pulse sequences and protocols, which make it possible to visualize the lesions, confirm the picture of MS and exclude the supposed alternative diagnoses that are similar. La esclerosis múltiple (EM) es un tipo de enfermedad neurológica que se diagnostica comúnmente en pacientes adultos jóvenes, con causas a menudo desconocidas que pueden afectar la calidad de vida de la persona afectada. El objetivo de este estudio es presentar las peculiaridades y aplicaciones de las pruebas de diagnóstico por imágenes, más específicamente la resonancia magnética en el diagnóstico de la esclerosis múltiple a través de una revisión de la literatura. El presente trabajo es una propuesta de investigación esbozada y basada en estudios de revisión de la literatura para una revisión integral. El resultado ha sido que la resonancia magnética, debido a sus imágenes de alta resolución, ha desempeñado un papel cada vez más singular en el diagnóstico y el tratamiento de los pacientes con esclerosis múltiple, permitiendo la detección de pequeñas lesiones. Se llega a la conclusión de que la resonancia magnética puede considerarse un recurso importante para ayudar en el diagnóstico de la esclerosis múltiple debido a sus relaciones entre las combinaciones de diferentes tipos de secuencias y protocolos de pulso, que permiten visualizar las lesiones, confirmar el cuadro de la esclerosis múltiple y excluir los supuestos diagnósticos alternativos que son similares. A esclerose múltipla (EM) é um tipo de doença neurológica comumente diagnosticada em pacientes jovens adultos, com causas muitas vezes desconhecidas e que podem implicar na qualidade de vida da pessoa acometida. O objetivo desse estudo é apresentar as peculiaridades e aplicações dos exames de diagnóstico por imagem, mais especificadamente a ressonância magnética no diagnóstico da esclerose múltipla através de uma revisão de literatura. O presente trabalho trata-se de uma proposta de pesquisa delineada e embasada em estudos de revisão de literatura, para realização de uma revisão integrativa. Onde resultou que o exame de ressonância magnética por apresentar imagens com alta resolução tem vindo a desencadear um papel cada vez maior e único no diagnóstico e tratamento de doentes com esclerose múltipla, possibilitando a detecção de lesões com pequenas dimensões. Conclui-se que a RM pode ser considerada como um recurso importante para auxílio ao diagnóstico da esclerose múltipla, devido suas relações entre as combinações de diferentes tipos de sequências de pulsos e protocolos, que possibilitam visualizar as lesões, confirmar o quadro de EM e excluir os supostos diagnósticos alternativos que se assemelham.

Resumo Introdução A hidrocefalia é uma complicação frequente entre os pacientes neurológicos e seu tratamento em casos agudos é por meio de um cateter de derivação ventricular externa que possibilita a monitorização e o controle da hipertensão intracraniana. O objetivo desse estudo foi descrever a retenção do conhecimento dos enfermeiros após intervenção educativa sobre cuidados com derivação ventricular externa. Materiais e Métodos Estudo quase experimental com enfermeiros de uma unidade de terapia intensiva adulto, em que foi avaliado a retenção de conhecimento sobre o tema em três momentos: antes, uma semana e três meses após o treinamento. Resultados Houve retenção significativa após uma semana, mas não aos três meses, sendo que aos três meses o índice de acertos nas questões foi expressivamente baixo em relação às fases anteriores. O desempenho dos participantes foi melhor nas questões relacionadas ao manuseio do sistema. Discussão O tempo é um fator que interfere no aprendizado e os estudos mostram que o conhecimento aos 3 meses diminui significativamente, sendo que aos 6 meses e um ano quase que completamente. Condutas práticas baseadas em diretrizes de assistência tem melhor retenção entre os profissionais, ressaltando que há mais facilidade no aprendizado de habilidades técnicas que estão associadas a vivência profissional. Conclusões Houve retenção de conhecimento significativa entre os profissionais na primeira semana após o treinamento, mas não aos três meses após o treinamento. Resumen Introducción La hidrocefalia es una complicación frecuente entre los pacientes neurológicos y su tratamiento en casos agudos se hace a través de un catéter de derivación ventricular externa que permite monitorear y controlar la hipertensión intracraneal. El objetivo de este estudio fue describir la retención del conocimiento de los enfermeros después de la intervención educativa sobre cuidados relativos a la derivación ventricular externa. Materiales y Métodos Estudio cuasi experimental con enfermeros de una unidad de terapia intensiva de adultos, en el que se evaluó la retención del conocimiento sobre el tema en tres momentos: antes, una semana y tres meses después del entrenamiento. Resultados Después de una semana se observó una retención significativa, sin embargo no a los tres meses, dado que después de tres meses el índice de aciertos en las preguntas fue significativamente bajo con respecto a las fases anteriores. El desempeño de los participantes fue mejor en las preguntas relacionadas con el manejo del sistema. Discusión El tiempo es un factor que interfiere en el aprendizaje y los estudios muestran que el conocimiento a los tres meses disminuye significativamente, y después de seis meses y un año casi por completo. Las conductas prácticas basadas en directrices de asistencia tienen mejor retención entre los profesionales, resaltando que resulta más fácil aprender habilidades técnicas que están asociadas con la vivencia profesional. Conclusiones Se observó una retención de conocimiento significativa entre los profesionales en la primera semana posterior al entrenamiento, pero no a los tres meses después del entrenamiento. Abstract Introduction Hydrocephalus is a common complication among neurological patients and its treatment in acute cases is done through an external ventricular drain catheter that allows monitoring and controlling intracranial hypertension. This study aimed to describe nurses' knowledge retention after an educational intervention on external ventricular drain care. Materials and methods A quasi - experimental study with nurses at an adult intensive care unit was conducted in which knowledge retention on the topic was evaluated at three different stages: before training, one week after training, and three months after training. Results Significant retention was observed after one week but not after three months, given the fact that after this time, the score of correct answers versus the number of questions was significantly lower than in the previous phases. Participants showed better performance at device handling issues. Discussion Time is a factor that interferes with learning as studies show that knowledge at three months significantly decreases and after six months and one year almost completely decreases. Practical behaviors based on assistance guidelines have better retention among professionals, emphasizing that it is easier to learn technical skills associated with professional experience. Conclusions Significant knowledge retention was observed among professionals in the first week after training but not after three months.

A esclerose múltipla (EM) é uma doença neurológica inflamatória crônica autoimune do sistema nervoso central (SNC) que agride a bainha de mielina causando sua destruição em graus variados. A causa da EM é desconhecida e a teoria mais aceita envolve a combinação da suscetibilidade genética com um gatilho não genético associado a um sistema imune propício e fatores contribuintes no SNC. Ainda não existe marcador biológico capaz de detectar a EM ou prever o prognóstico da doença nem sua evolução clínica. Existem vários possíveis biomarcadores, mas ainda permanecem sem relevância clínica e nenhum possui sensibilidade e confiabilidade para diagnosticar EM e monitorar o curso da doença. O objetivo da pesquisa clínica na área de doenças desmielinizantes e principalmente EM é encontrar biomarcadores que possibilitem evidenciar doença subclínica, a atividade da doença ou permitam avaliação do tratamento. Este estudo analisou por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (LC-MS) aspectos metabolômicos de líquido cefalorraquidiano (Líquor - LCR) em pacientes com suspeita e diagnóstico confirmado de EM com o objetivo de descobrir um biomarcador capaz de diferenciar pessoas não doentes de pessoas com o diagnóstico de esclerose múltipla e caracterizar as diferentes classificações de EM. Neste trabalho, a análise LC-MS com abordagem untarget demonstrou que existem meios viáveis de diferenciar pacientes com EM de indivíduos normais e diferenciar pacientes de diferentes tipos de EM. Através de análises estatísticas como PCA, PLS-DA, da VIP e do Heat map consegui-se evidenciar um possível candidato a biomarcador, a fosfatidilcolina. Entretanto, ainda há poucos estudos que mostram o mecanismo e a relação da diminuição dos níveis de fosfatidilcolina em amostras de líquor. Acredita-se que os níveis deste potencial biomarcador está diretamente relacionado com o aumento da idade de pacientes afetados. Multiple sclerosis (MS) is a chronic autoimmune chronic inflammatory neurological disease of the central nervous system (CNS) that attacks the myelin sheath causing its destruction to varying degrees. The cause of MS is unknown and the most accepted theory involves combining genetic susceptibility with a non-genetic trigger in addition to a conducive immune system and contributing factors in the CNS. There is still no biological marker capable of detecting MS or predicting the prognosis of the disease or its clinical evolution. There are several possible biomarkers, but they still remain clinically relevant and none have the sensitivity and reliability to diagnose MS and monitor the course of the disease. The objective of clinical research in the area of demyelinating diseases and mainly MS is to find biomarkers that make it possible to evidence subclinical disease, disease activity or allow evaluation of treatment. This study analyzed by mass spectrometry cerebrospinal fluid (CSF) metabolic aspects in patients with suspected and confirmed diagnosis of Multiple Sclerosis with the objective and to discover a biomarker able to differentiate non-diseased persons from people diagnosed with multiple sclerosis in addition to being able to differentiate different classifications of multiple sclerosis. The untarget analysis performed demonstrated that there are viable means of differentiating patients with multiple sclerosis from normal individuals in addition to differentiating patients from different MS types. Through the analysis by PCA, PLS-DA, VIP and Heat map, it was possible to evidence a possible candidate for biomarker. This biomarker candidate is already cited in the literature. However, there are still few studies that show the mechanism and the relationship of decreased phosphatidylcholine levels in CSF samples. It is believed that the levels of this potential biomarker is directly related to the increased age of affected patients. Dados abertos - Sucupira - Teses e dissertações (2019)

Submitted by Denis Jeronimo Svicero (de_svicero@hotmail.com) on 2019-03-06T18:59:45Z No. of bitstreams: 1 Tese - Denis Jeronimo Svicero.pdf: 2573362 bytes, checksum: 414763d8cb5633806467b6343b29e239 (MD5) Rejected by Ana Lucia de Grava Kempinas (algkempinas@fca.unesp.br), reason: Dedicatória é o texto escrito no qual alguém, especificamente, dedica alguma coisa à outra pessoa. No seu caso a frase colocada na Dedicatória é o epígrafe (citação ou pensamento que, de alguma forma, influenciou em seu trabalho acadêmico). Faltou mencionar a CAPES nos AGRADECIMENTOS. Colocar dessa forma: O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001. on 2019-03-06T20:23:59Z (GMT) Submitted by Denis Jeronimo Svicero (de_svicero@hotmail.com) on 2019-03-07T00:38:51Z No. of bitstreams: 1 Tese - Denis Jeronimo Svicero.pdf: 2609804 bytes, checksum: 2f7b7b6758de4ec8cf66ea049de30004 (MD5) Approved for entry into archive by Ana Lucia de Grava Kempinas (algkempinas@fca.unesp.br) on 2019-03-07T13:18:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 svicero_dj_dr_botfmvz_par.pdf: 366246 bytes, checksum: cc489c6cfa72bf2c265d604410607c9d (MD5) Made available in DSpace on 2019-03-07T13:18:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 svicero_dj_dr_botfmvz_par.pdf: 366246 bytes, checksum: cc489c6cfa72bf2c265d604410607c9d (MD5) Previous issue date: 2019-02-20 Pró-Reitoria de Pós-Graduação (PROPG UNESP) Estudos com células estromais mesenquimais multipotentes (MSCs) estão em crescente progresso devido às suas propriedades imunomoduladoras, antiinflamatórias, antiapoptóticas e de regeneração tecidual, tornando essa modalidade de terapia celular promissora no tratamento de diversas doenças. Devido à limitada capacidade regenerativa do sistema nervoso central (CNS), causando sequelas funcionais, as MSCs estão sendo investigadas como uma alternativa terapêutica para condições neurológicas inflamatórias, vasculares, traumáticas e degenerativas em diversas espécies animais. A Mieloencefalite protozoária equina (EPM) causada por ambos os protozoários do filo Apicomplexa, Sarcocystis neurona e Neospora hughesi, permanece como uma importante doença neurológica dos equinos nas Américas, embora a maioria dos casos seja devida à infecção por S. neurona. A aplicação da proteômica com sua gama de ferramentas na clínica de equinos pode contribuir significativamente para o entendimento de processos patológicos e facilitar a descoberta de novos alvos terapêuticos ou marcadores diagnósticos. Neste contexto, os objetivos deste estudo foram avaliar o perfil proteômico do líquido cefalorraquidiano (CSF) antes e após múltiplos transplantes intratecal de MSCs em equinos hígidos e o perfil proteômico do CSF de equinos cronicamente afetados pela EPM. Doze cavalos adultos clinicamente saudáveis foram divididos aleatoriamente em três grupos experimentais: grupo DPBS (DPBS ou control; n = 4) onde a solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco's (DPBS) foi administrada pela via intratecal; grupo AD-G (AD-G; n = 4), no qual foram realizados transplantes intratecal com MSCs alogênicas de tecido adiposo; e grupo BM-G (BM-G; n = 4), no qual foram realizados transplantes intratecal com MSCs alogênicas de medula óssea. Todos os grupos experimentais receberam três tratamentos seriados (DPBS ou MSCs) com intervalo de 30 dias entre eles. As amostras de CSF foram coletadas dos grupos experimentais imediatamente antes do primeiro tratamento (denominado momento M0 ou Before) e 30 dias após o terceiro tratamento (denominado momento M90 ou After). Ao mesmo tempo, os CSF de 16 equinos clinicamente saudáveis e de 9 equinos cronicamente afetados por EPM foram coletados da subaracnóide, denominados grupo Control (Control; n = 16) e grupo EPM (EPM; n = 9) respectivamente. Cada uma das amostras de CSF do grupo Control e do grupo EPM foram individualmente ressuspendidas e agrupadas em pool, totalizando dois pool representativos de cada um dos grupos experimentais e denominados igualmente (Control e EPM) para avaliar o perfil proteômico dos mesmos. De modo similar, os três grupos que receberam transplantes e coletas de CSF nos dois distintos momentos, foram agrupados em seis pool representativos para cada grupo e momento. Considerando a plataforma proteômica utilizada, os três grupos foram pareadamente comparados: DPBS After vs. Before, AD-G After vs. Before e BM-G After vs. Before, sendo encontradas 208, 211 e 131 proteínas em cada comparação, respectivamente. Do mesmo modo, na comparação pareada do CSF dos grupos EPM e Control, EPM vs. Control, 201 proteínas foram identificadas e 33 proteínas observadas exclusivamente no CSF do grupo EPM. Ademais, também foi observada na comparação pareada dos grupos DPBS, BM-G e EPM, a presença dos três tipos de enolases interagindo entre si (ENO 1, ENO 2 e ENO 3), sendo em DPBS e BM-G como exclusivas do momento After e no grupo EPM como exclusivas dele. Neste contexto, este estudo ao avaliar os perfis proteômico do CSF antes e após múltiplos transplantes intratecal de MSCs em equinos hígidos e do CSF de equinos cronicamente afetados pela EPM permitiu identificar as enolases como potenciais marcadores de lesão neural e/ou de EPM. Novos estudos devem ser realizados para confirmar estes achados e avançar no conhecimento dos efeitos da terapia celular com MSCs pela via intratecal, para o tratamento de lesões neurológicas em equinos. Multipotent mesenchymal stromal cell (MSCs) studies are under increasing progress because of their immunomodulatory, anti-inflammatory, antiapoptotic and tissue regeneration properties, making this modality of cell therapy promising in the treatment of various diseases. Due to the limited regenerative capacity of the central nervous system (CNS), causing functional sequelae, MSCs are being investigated as a therapeutic alternative for inflammatory, vascular, traumatic and degenerative neurological conditions in various animal species. Equine protozoal myeloencephalitis (EPM) caused by both protozoa of the Apicomplexa phylum, Sarcocystis neurona and Neospora hughesi, remains an important neurological disease in horses in the Americas, although most cases are due to S. neurona infection. The application of proteomics with its range of tools in the equine clinic can contribute significantly to the understanding of pathological processes and facilitate the discovery of new therapeutic targets or diagnostic markers. In this context, the objectives of this study were to evaluate the proteomic profiling of cerebrospinal fluid (CSF) before and after multiple intrathecal transplantations of MSCs in healthy horses and the CSF proteomic profiling of horses chronically affected by EPM. Twelve clinically healthy adult horses were randomly divided into three experimental groups: DPBS (DPBS or control; n = 4), in which intrathecal "transplants" with Dulbecco's phosphate buffered saline (DPBS) were performed; group AD-G (AD-Gs; n = 4), in which intrathecal transplants were performed with allogeneic adipose tissue MSCs; and BM-G group (BM-G; n = 4), in which intrathecal transplants were performed with allogeneic bone marrow MSCs. All experimental groups received three serial treatments (DPBS or MSCs) with a 30-day interval between them. CSF samples were collected from the experimental groups immediately before the first treatment (called the M0 or Before) and 30 days after the third treatment (called the M90 or After). At the same time, CSF of 16 healthy horses and 9 horses chronically affected by EPM were collected from the subarachnoid, Control group (Control; n = 16) and EPM group (EPM; n = 9) respectively. Each of the CSF samples from the Control group and from the EPM group were individually resuspended and pooled, totalizing two representative pools of each one the experimental groups and also named (Control and EPM) to evaluate their proteomic profilings. Similarly, the three groups that received transplants and CSF collections at two different times were grouped into six representative pools for each group and time. Considering the proteomic platform used, the three groups were similarly compared: DPBS After vs. Before, AD-G After vs. Before and BM-G After vs. Before, being found 208, 211 and 131 proteins in each comparison, respectively. Likewise, in the paired comparison of the CSF of the EPM and Control groups, EPM vs. Control, 201 proteins were identified, and 33 proteins were observed exclusively in the CSF of the EPM group. In addition, the presence of the three types of enolases interacting with each other (ENO 1, ENO 2 and ENO 3) was also observed in the comparison of the DPBS, BM-G and EPM groups, being exclusives in DPBS and BM-G at time After and in the EPM group as its exclusively. In this context, this study, when evaluating the proteomic profilings of CSF before and after multiple intrathecal transplantations of MSCs in healthy horses and CSF of horses chronically affected by EPM, allowed the identification of enolases as potential markers of neural and / or EPM injury. Further studies should be performed to confirm these findings and to advance the knowledge of the effects of intrathecal cell therapy with MSCs for the treatment of neurological lesions in horses.

RESUMO O objetivo deste trabalho foi relatar um caso raro de hidrocefalia em um felino doméstico, da raça Persa, de 30 dias de idade. O animal foi atendido com histórico de impossibilidade de manter-se em estação, incoordenação motora, inabilidade para se alimentar sozinho e sustentar o peso da cabeça. No exame clínico, foi observada presença de fontanela aberta, aumento de calota craniana, ataxia, estrabismo unilateral e secreção ocular. A realização de ultrassonografia do crânio levou à confirmação do diagnóstico de hidrocefalia. O paciente permaneceu internado, sendo o protocolo de tratamento empregado constituído de corticosteroide, diurético e protetor gástrico em alta dose, além de alimentação por via oral e fluidoterapia. O animal veio a óbito após 24 horas, sendo encaminhado para realização de necropsia. ABSTRACT The objective of this work was to report a rare case of hydrocephalus in a domestic Persian feline, 30 days old. The animal was attended with a history of inability to keep in season, incoordination of the motor, inability to feed itself and support the weight of the head. In the clinical examination, the presence of an open fontanelle, an increase in the skull cap, ataxia, unilateral strabismus and ocular secretion were observed. The ultrasound examination of the skull led to confirmation of the diagnosis of hydrocephalus. The patient remained hospitalized, and the treatment protocol consisted of a corticosteroid, diuretic and gastric protector in high dose, besides oral feeding and fluid therapy. The animal died after 24 hours, being referred for necropsy.

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária A análise de Líquido Cefalorraquidiano (LCR) é um exame complementar de diagnóstico extremamente útil, pois permite o acesso a informações relativas à saúde neurológica dos pacientes. Esta é frequentemente realizada com o propósito de auxiliar no processo diagnóstico ou para o controlo da evolução clínica dos doentes. Com o presente estudo procurou-se conhecer a realidade clínica associada a este exame, desde os sinais clínicos dos cães a que é colhido LCR, passando pelos resultados desta análise, até ao desfecho clínico dos episódios em estudo. No presente estudo foram incluídos 130 cães, os seus LCR foram analisados, comparando-se os resultados obtidos nos exames citológicos e nos PCR realizados com o descrito na bibliografia. Foram ainda comparados os desfechos clínicos de 54 cães com diferentes resultados na avaliação citológica, procurando-se perceber se as conclusões extraídas da análise de LCR possuem valor como ferramenta de prognóstico. A contagem de células nucleadas totais apresentou-se aumentada em 62 (47,7%) amostras, 55 (42,3%) com pleocitoses de células mistas e 7 (5,38%) neutrofílicas, tendo sido identificada a presença de bactérias numa amostra deste último grupo. Não foram identificadas pleocitoses mononucleares. Em 32 amostras foram realizadas técnica de PCR para deteção de agentes infeciosos, tendo sido, em 4 delas identificados os seguintes agentes: uma com Toxoplasma gondii, uma com Neospora caninum e duas com o vírus da esgana canina. A amostra com Neospora caninum não evidenciou qualquer alteração à citologia, enquanto que as restantes 3 amostras apresentaram pleocitoses moderadas de células mistas. Os cães de raça Beagle demonstraram uma associação com as pleocitoses neutrofílicas. A análise citológica e PCR de LCR demonstrou não possuir valor prognóstico. Os dados obtidos reforçam a importância da análise do LCR em cães com doença neurológica, dada a frequência de pleocitoses e de agentes infeciosos no LCR neste estudo ter sido superior à descrita na bibliografia. Concluiu-se também que o recurso a técnicas moleculares é essencial, mesmo quando o LCR não apresenta as alterações analíticas esperadas, devendo os clínicos recorrer a estas técnicas sempre que suspeitem de qualquer agente infecioso como causa de meningite, não necessitando de o justificar na presença de uma pleocitose, mas sim nos sinais clínicos e diagnósticos diferenciais para cada caso. ABSTRACT - CEREBROSPINAL FLUID ANALYSIS AND INTERPRETATION IN DOGS IN CLINICAL PRACTICE - RETROSPECTIVE STUDY OF 130 CASES - The analysis of cerebrospinal fluid (CSF) is an extremely useful complementary diagnostic exam, as it allows access to information regarding the patient’s neurological health. This test is often performed for the purpose of assisting the diagnosis process or for controlling the clinical evolution of patients. The present study aimed to understand the clinical reality of this exam, including the clinical signs of the dogs from which the CSF was collected, the results of this analysis and the clinical outcome of the episodes under study For this study, 130 dogs were included on which the CSF was analyzed, comparing the results obtained in the cytological tests and in the PCR with those described in the bibliography. The clinical outcomes of 54 dogs with different results in the cytological evaluation were also compared, in an attempt to understand whether the conclusions drawn from the CSF analysis were valuable as a prognostic tool. The total nucleated cell count was increased in 62 (47.7%) samples, 55 (42.3%) with mixed cell pleocytosis and 7 (5.38%) neutrophilic, with bacteria identified in a sample from last group. No mononuclear pleocytosis were identified. Infectious agents were identified in 4 of the 32 samples where the PCR technique was performed: one tested positive for Toxoplasma gondii, one for Neospora caninum and two for canine distemper virus. The sample with Neospora caninum showed no change in cytology, whilst the other 3 samples had moderate mixed cell pleocytosis. Beagle dogs showed an association with neutrophilic pleocytosis. CSF cytological and PCR analysis showed no prognostic value. The data obtained reinforced the importance of testing the CSF of dogs with neurological disease, given that the frequency of pleocytosis and infectious agents present in the CSF in this study was superior to that described in the literature. It can also be concluded that the use of molecular techniques is essential, even when the CSF does not present the expected analytical changes. The clinicians should resort to these techniques whenever they suspect an infectious agent as the cause of meningitis, without the need to justify it in the presence of pleocytosis, but in the clinical signs and the differencial diagnosis of each case. info:eu-repo/semantics/publishedVersion

Resumo Objetivo: descrever um protocolo simplificado para abordagem de casos suspeitos de meningite. Métodos: relato de experiência na abordagem diagnóstica das meningites no serviço de referência em doenças tropicais do estado do Piauí, Brasil, no período de 2007-2016; extraíram-se informações do Sistema de Informação de Agravos de Notificação (Sinan) e do livro de registro do laboratório; utilizou-se o teste do qui-quadrado para comparar os indicadores da vigilância epidemiológica baseados na classificação final dos casos de meningite; utilizou-se o teste de concordância Phi para verificar a correlação entre os diagnósticos etiológicos presumidos pelo protocolo e aqueles confirmados laboratorialmente. Resultados: considerando-se 4.096 casos de meningite estudados, houve redução na classificação genérica desses casos, de 72 para 47% (p

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária A análise do líquido cefalorraquidiano (LCR) é um meio complementar de diagnóstico importante na abordagem a doenças que afetem o sistema nervoso central (SNC). As alterações encontradas no LCR, muitas vezes, auxiliam na exclusão de diagnósticos diferenciais, embora raramente sejam indicativas de um diagnóstico definitivo. A citometria de fluxo (CF) é um método analítico que permite a avaliação qualitativa e quantitativa de múltiplos parâmetros celulares, sendo cada vez mais utilizada em medicina veterinária, especialmente nos campos da imunologia e hematologia. Esta dissertação teve como objetivo estudar a distribuição das populações de leucócitos através da análise de amostras de LCR, e de sangue periférico, por CF, no sentido de avaliar alterações no LCR no decorrer de doenças do SNC. Serão apresentados três casos clínicos, nos quais foram obtidas as percentagens das principais populações de leucócitos (neutrófilos, monócitos/macrófagos e linfócitos) e das subpopulações de linfócitos, nomeadamente, linfócitos B, T auxiliares e T citotóxicos. Em cada caso, ocorreu uma inversão da subpopulação de linfócitos T predominante, entre o sangue periférico e o LCR, que poderá estar associada a doença. Nas amostras de sangue periférico, a percentagem de linfócitos T CD4+ excedeu a de linfócitos T CD8+, sendo esta, por sua vez, a predominante no LCR. Os resultados sugerem que a análise de LCR por CF pode fornecer informação complementar relevante ao diagnóstico de doenças do SNC, dando espaço a novas aplicações para a CF em medicina veterinária. ABSTRACT - CLINICAL IMPORTANCE OF CEREBROSPINAL FLUID ANALYSIS IN DOGS – SEVERAL ANALYTICAL METHODS IN VETERINARY MEDICINE - Cerebrospinal fluid (CSF) analysis is an important complementary diagnostic procedure available for the diagnosis of central nervous system (CNS) diseases. Despite of rarely providing a definitive diagnosis, CSF changes can often help to narrow down the list of differential diagnoses. Flow cytometry is an analytical method that allows qualitative and quantitative assessment of multiple parameters of individual cells. This technology has become routinely used in veterinary medicine, particularly in immunology and hematology. This dissertation aimed to study the distribution of leukocytes through the analysis of CSF and peripheral blood samples by flow cytometry assessing its importance in the diagnosis of CNS diseases. Three clinical cases will be presented, in which the percentage of the main populations of leukocytes (neutrophils, monocytes/macrophages and lymphocytes) and lymphocytes subtypes, namely B, T helper and T cytotoxic lymphocytes were obtained. In each case, there was an inversion of the predominant T lymphocyte subtype between peripheral blood and CSF, which may be associated with disease. In the peripheral blood samples, the percentage of CD4+ T lymphocytes exceeded the CD8+ T lymphocytes, which was the predominant subtype in CSF. The results suggest that the CSF analysis by flow cytometry can provide additional relevant information to the diagnosis of CNS diseases, giving space for new applications for flow cytometry in veterinary medicine. N/A

Submitted by DANIELLE JAQUETA BARBERINI null (daniellebarberini@yahoo.com.br) on 2017-07-31T19:56:18Z No. of bitstreams: 1 Tese doutorado barberini dj.pdf: 3357947 bytes, checksum: 0c68557b936e62daac02074889c29f94 (MD5) Rejected by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão com o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-08-01T13:34:07Z (GMT) Submitted by DANIELLE JAQUETA BARBERINI null (daniellebarberini@yahoo.com.br) on 2017-08-01T13:49:07Z No. of bitstreams: 1 Danielle Jaqueta Barberini - Doutorado.pdf: 3565921 bytes, checksum: b779c3d1931ae6bcab5c211a7b3a0f89 (MD5) Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-08-01T15:14:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 barberini_dj_dr_bot_parc.pdf: 226378 bytes, checksum: 35e2c0a83ad34244bc647e3d675a15bd (MD5) Made available in DSpace on 2017-08-01T15:14:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 barberini_dj_dr_bot_parc.pdf: 226378 bytes, checksum: 35e2c0a83ad34244bc647e3d675a15bd (MD5) Previous issue date: 2017-07-24 Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) As células-tronco mesenquimais (CTM) apresentam propriedades antiinflamatórias, imunomoduladoras, neuroprotetoras e neurorregenerativas. Pela capacidade regenerativa limitada do tecido neural, o potencial terapêutico das células-tronco tem sido estudado em várias enfermidades do sistema nervoso central (SNC). Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a viabilidade, segurança e a resposta a transplantes intratecais sucessivos, de CTM provenientes de diversas fontes em equinos. Para isso, foram avaliados o potencial de transdiferenciação, terapêutico e o co-cultivo com líquido cefalorraquidiano (LCR) de CTM provenientes da medula óssea, tecido adiposo e cordão umbilical. Posteriormente, as CTM foram utilizadas para o transplante por via intratecal (IT) pela cisterna lombo-sacra (LS), atlanto-occipital (AO) e entre as vértebras C1-C2 em animais sadios (GS), totalizando 3 aplicações com intervalo de 30 dias. Adicionalmente as CTM foram rastreadas por cintigrafia após os transplantes pelas via AO e LS. Finalmente, as CTM foram utilizadas para o transplante IT entre as vértebras C1-C2 em animais com incoordenação motora decorrente de Mieloencefalite Equina por Protozoário (MEP) – grupo doente (GD), sob o mesmo protocolo. Todos os animais (GS e GD) foram avaliados por exame clínico e neurológico, análise hematológica e do LCR antes e após os transplantes. Os resultados demonstraram que as CTM provenientes de diversas fontes apresentaram efeitos positivos na presença de LCR, é uma terapia segura e viável utilizando diferentes vias intratecais, com altas doses e sucessivos transplantes. Adicionalmente, o transplante IT através do espaço entre C1-C2 demonstrou ser mais viável para ser realizado a campo e em animais que apresentam sinais neurológicos. Finalmente, a terapia com CTM demonstrou efeitos benéficos para sequelas crônicas em medula espinhal decorrentes da MEP. Mesenchymal stem cells (MSC) have anti-inflammatory, immunomodulatory, neuroprotective and neuro-regenerative properties. Due to the limited regenerative capacity of neural tissue, the therapeutic potential of stem cells has been studied in several pathological conditions of the central nervous system (CNS). Therefore, the objective of this study was to evaluate the viability, safety and the response to successive intrathecal injections of MSC from different sources in horses. For that, the transdifferentiation, therapeutic potential and co-culture of MSC with cerebrospinal fluid (CSF) from bone marrow, adipose tissue and umbilical cord were evaluated. Later, MSC were used for intrathecal (IT) transplantation through the lumbosacral cistern (LS), atlanto-occipital (AO) and between the C1-C2 vertebrae into healthy horses (HG), totalizing 3 injections between 30 days apart. Additionally, MSC tracking were performed after AO and LS transplantation. After this step, MSC were used for IT transplantation through the space between the C1-C2 vertebrae in horses with Equine Protozoal Myeloencephalitis (EPM) sequelae - sick group (SG) under the same protocol. All animals (HG and SH) were evaluated by serial clinical and neurological exams, hematological and CSF analysis before and after transplantation. The results demonstrated that MSC from several sources is a possibility of therapy for the CNS diseases, because their behavior in the presence of CSF have shown positive effects, it is a safe and viable therapy using different intrathecal routes, and safe even with high doses and successive transplants of MSC. In addition, IT transplantation between C1-C2 has been shown to be more feasible to be performed in the field and in animals with neurological signs. Finally, MSC therapy demonstrated beneficial effects for chronic sequelae in the spinal cord from EPM. FAPESP: 2013/26931-0 FAPESP: 2014/20550-8

Introdução: As mucopolissacaridoses (MPS) constituem um grupo de doenças lisossômicas caracterizadas pela deficiência de uma das enzimas responsáveis pela degradação dos glicosaminoglicanos (GAGs). É difícil determinar a incidência precisa de hidrocefalia em pacientes com MPS, pois não possui uma definição formal por consenso. Além disso, é difícil distinguir a hidrocefalia comunicante da dilatação ventricular secundária à atrofia cerebral, porque ambas apresentam características clínicas e neuroradiológicas comuns. Embora várias técnicas sejam usadas para identificar pacientes com MPS com maior probabilidade de ter hidrocefalia e responder ao tratamento cirúrgico, não existe um método definitivo para provar o diagnóstico. Objetivos: Avaliar a relação entre ventriculomegalia, volume cerebral e liquórico, fluxo de líquor aquedutal e cervical e pressão de abertura liquórica em pacientes com MPS, e detectar potenciais biomarcadores para as alterações da circulação liquórica. Métodos: Quarenta e três pacientes com MPS (12 MPS I, 15 MPS II, 5 MPS III, 9 MPS IV A e 2 MPS VI) realizaram testes clínicos e de desenvolvimento neurológico, ressonância magnética (RM) nas sequências T1, T2, FLAIR e por contraste de fase, seguidas por punção lombar para avaliação da pressão de abertura liquórica. Para a análise das variáveis da RM, foram medidos: volume cerebral e liquórico, carga de lesões na substância branca (LSB), índice de Evans, largura do terceiro ventrículo, ângulo do corpo caloso, espaços perivasculares dilatados (EPVD), estenose da junção craniocervical, volume de stroke aquedutal e cervical, e concentração de GAGs no líquor. Resultados: As formas graves e a macrocefalia estiveram significativamente associadas com a ventriculomegalia, principalmente com o índice de Evans (p = 0.004 e p = 0.008, respectivamente). A carga de LSB apresentou uma forte correlação com as medidas ventriculares e o volume liquórico ventricular (rs = 0.51, p = 0.001). A dilatação ventricular supratentorial e o volume de líquor ventricular apresentaram uma correlação moderada com o volume de stroke aquedutal (VSA) (rs = 0.46, p = 0.002). A pressão de abertura liquórica não se correlacionou nem com as três medidas da ventriculomegalia, nem com a volumetria liquórica, nem com o VSA. O prejuízo cognitivo e os EPVD mostraram uma associação significativa com a ventriculomegalia, especialmente com a largura do terceiro ventrículo (p = 0.019 e p = 0.001, respectivamente). Os EPVD em quantidade aumentada também apresentaram uma significativa associação com o VSA elevado (p = 0.007). Conclusões: Nos pacientes com MPS, a ventriculomegalia está associada a um fenótipo grave da doença, maior declínio cognitivo e maior extensão das LSB e EPVD. Existem associações entre as medidas de fluxo liquórico e as medidas relacionadas à volumetria liquórica. Além disso, as medidas volumétricas estão associadas a quantidade de EPVD. Background: The mucopolysaccharidoses (MPS) are a group of lysosomal diseases characterized by a deficiency in one of the lysosomal enzymes responsible to degrade glycosaminoglycans (GAGs). The precise incidence of hydrocephalus in patients with MPS is hard to determine, because it lacks a formal, consensus-based definition. In addition, it is difficult to distinguish communicating hydrocephalus from ventricular dilatation secondary to brain atrophy, because both share common clinical and neuroradiological features. Although various techniques are used to identify MPS patients who are most likely to have hydrocephalus and respond to surgical treatment, no definitive method exists to prove diagnosis. Objectives: To assess the relationship between ventriculomegaly, brain and cerebrospinal fluid (CSF) volumes, aqueductal and cervical CSF flows, and CSF opening pressure in MPS patients, and to provide potential biomarkers for abnormal CSF circulation. Methods: Forty-three MPS patients (12 MPS I, 15 MPS II, 5 MPS III, 9 MPS IV A and 2 MPS VI) performed clinical and neurodevelopmental tests, and T1, T2, FLAIR and phase-contrast magnetic resonance imaging (MRI) followed by a lumbar puncture with the CSF opening pressure assessment. For the analysis of MRI variables, the following measures were performed: brain and CSF volumes, white matter (WM) lesion load, Evans’ index, third ventricle width, callosal angle, dilated perivascular spaces (PVS), craniocervical junction stenosis, aqueductal and cervical CSF stroke volumes, and CSF GAGs concentration Results: The severe forms and the macrocephaly were significantly associated with the ventriculomegaly, mainly with the Evans’ index (p = 0.004 and p = 0.008, respectively). The WM lesion load presented a high correlation with the ventricular measurements and the ventricular CSF volume (rs = 0.51, p = 0.001). The supratentorial ventricular dilation and the ventricular CSF volume presented a moderate correlation with the aqueductal CSF stroke volume (ACSV) (rs = 0.46, p = 0.002). The CSF opening pressure did not correlate with either the three measures of ventriculomegaly, either with the CSF volumetry or with the ACSV. The cognitive impairment and the dilated PVS showed a significant association with the ventriculomegaly, especially with the width of the third ventricle (p = 0.019 and p = 0.001, respectively). Increased amount of dilated PVS also had a significant association with the elevated ACSV (p = 0.007). Conclusions: In MPS patients ventriculomegaly is associated with a severe phenotype, increased cognitive decline, WM lesion severity and enlarged PVS. There are associations between CSF flow measurements and measurements related to CSF volumetrics. Also, the volumetric measurements are associated with the degree of dilated PVS.

O envelhecimento é um processo complexo caracterizado pelo declínio progressivo de diferentes tecidos e sistemas, acarretando susceptibilidades ao desenvolvimento de doenças neurodegenerativas que estão diretamente associadas ao avanço da idade. O objetivo desse estudo foi investigar o perfil exossomal e a carga inflamatória de vesículas extracelulares em plasma e líquido cefalorraquidiano (LCR) no processo de envelhecimento. Para tanto foram usados ratos machos Wistar de 3 e 21 meses de idade (n = 12). O LCR e o plasma desses animais foram coletados e o isolamento de vesículas extracelulares foi realizado usando um kit comercial e a concentração de proteína total, a atividade de acetilcolinesterase (AChE), os níveis de CD63 e interleucina-1 beta (IL-1β) foram avaliados. Os resultados obtidos mostraram que os níveis circulantes de IL-1β foram significativamente menores nas vesículas extracelulares em comparação com jovens adultos, enquanto que, o envelhecimento não alterou os níveis de IL-1β no LCR; houve uma redução dos níveis de CD63, um marcador exossomal, em plasma de ratos envelhecidos, enquanto que um aumento relacionado à idade nos níveis de CD63 no LCR foi observado; e houve um aumento da atividade de AChE em plasma e LCR do grupo envelhecido. Nossos dados sugerem que o aumento dos níveis de IL-1β nas vesículas extracelulares circulantes pode ser associado, pelo menos em parte, a condições inflamatórias relacionadas ao envelhecimento e a alteração nas vesículas extracelulares do LCR, analisada pelos níveis de CD63, em ratos envelhecidos podem estar envolvidos na susceptibilidade a distúrbios neurodegenerativos. Aging is a complex process characterized by the progressive decline of different tissues and systems, increasing the susceptibility to neurodegenerative diseases. The aim of this study was to investigate exosomal markers and inflammatory cargo of extracellular vesicles obtained from cerebrospinal fluid and plasma in aging process. Male Wistar rats of 3-month-old and 21-month-old were used (n= 12). The cerebrospinal fluid and plasma of animals were collected and isolation of extracellular vesicles was performed using a commercial kit. Total protein concentration, acetylcholinesterase (AChE) activity, CD63, an exosomal marker, and interleukin-1β (IL-1β) levels were evaluated. The results obtained showed a decrease in circulating IL-1β levels in extracellular vesicles in aged rats, whereas, aging did not alter exosomal IL-1β levels in cerebrospinal fluid; an age-related increase was observed in CD63 levels in extracellular vesicles from cerebrospinal fluid, while its content was decreased in plasma extracellular vesicles of aged group; and there was an increase in AChE activity in plasma and cerebrospinal fluid of the aged group. Our data suggest that IL-1β levels in circulating extracellular vesicles can be linked at least in part to aging-related inflammatory conditions and a disruption on cerebrospinal fluid, evaluated by CD63 levels, in aged rats can be involved to susceptibility to neurodegenerative disorders.

Introdução A preocupação crescente com as possíveis consequências da replicação viral no sistema nervoso central mostra a necessidade da detecção do HIV no compartimento cerebral. O teste de PCR em tempo real desenvolvido pela Abbott, o Abbott m2000 RealTime HIV-1 (m2000rt), quantifica a carga viral do HIV em amostras de sangue com um procedimento efetivo e de baixo custo no nosso país, por isso é adotado como método padrão pelo Ministério da Saúde, mas não é utilizado em amostras de líquor. O ensaio produzido pela Roche, o COBAS TaqMan HIV-1, version 2 (COBAS v2.0), é o método de PCR em tempo real que tem sido amplamente utilizado para detectar a carga viral do HIV no compartimento cerebral. No entanto, esse método ainda não foi validado para esse propósito e seu custo pode ser uma limitação em diversas regiões com baixos recursos. Objetivos Considerando que não há uma metodologia padronizada para essa situação específica (detecção do HIV no líquor), nós conduzimos esse estudo a fim comparar os desempenhos dos testes m2000rt e COBAS v2.0, na tentativa de propôr um método alternativo e com baixos custos ao mais utilizado nesse contexto (COBAS v2.0). Métodos O estudo foi realizado no período de maio de 2015 a julho de 2016. O cálculo do tamanho da amostra foi baseado em dados de um estudo piloto que revelaram ser necessário um número mínimo de 37 amostras, para detectar uma diferença de 0,20 log10 na carga viral, com um coeficiente de correlação de 0,979 e um poder de 90%. Essa equação permitiria uma perda de 10%. As amostras de líquor foram coletadas consecutivamente a partir de 37 pacientes HIV positivos atendidos no Hospital de Clínicas de Porto Alegre/RS. Os métodos foram processados de acordo com o proposto pelo fabricante para utilização com amostras de plasma. Pequenas modificações foram necessárias no teste em estudo (m2000rt) para neutralizar qualquer diferença metodológica e evitar vieses de mensuração: o congelamento das amostras foi realizado a -20ºC até o momento da análise. O ensaio COBAS v2.0 foi utilizado como referência, uma vez que é o método mais utilizado. Foram realizadas análises quantitativas com resultados que estavam dentro da faixa linear em ambos os métodos (n = 18). Para tornar os métodos comparáveis, adotou-se o limite de detecção do ensaio m2000rt para ambos (40 cp/mL ou 1,60 log10 cp/mL). Os resultados abaixo do limite de detecção foram apresentados como uma variável categórica, uma vez que não são quantificáveis. O coeficiente de correlação de Pearson foi utilizado para comparar os métodos. A normalidade das variáveis foi então resumida calculando o viés estimado pela diferença média "đ " e o desvio padrão das diferenças realizadas pelo teste t para amostras pareadas. Com base na falta de normalidade dos métodos, o grau de concordância dos resultados das cargas virais de HIV foi analisado pelo índice Kappa. Esse estudo foi aprovado pelo comitê de ética do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (RS)/ Brasil, registrado na Plataforma Brasil como sendo CAAE: 35072214.7.0000.532. Conclusão Em conclusão, o teste m2000rt que foi modificado para este ensaio mostrou boa concordância e correlação com o teste mais utilizado nesse contexto e pode ser considerado um método alternativo com resultados semelhantes ao COBAS v2.0 e baixos custos na quantificação da carga viral do HIV no líquor. Sugerimos, principalmente em locais onde este método está prontamente disponível com uma relação custo-benefício aceitável, que o exame m2000rt deva ser realizado. Introduction Growing concern about possible consequences of viral replication in the central nervous system shows the need for HIV detection in the cerebral compartment. The real time PCR test developed by Abbott, Abbott RealTime m2000 HIV-1 (m2000rt) quantifies HIV viral load in blood samples effectively and with low costs Brazil. It is the standard method by the Brazilian Ministry of Health, but it has never been utilized to measure HIV in cerebrospinal fluid samples. The assay produced by Roche, COBAS TaqMan HIV-1, version 2 (COBAS v2.0) is the real-time PCR method that has been widely used to detect HIV viral load in cerebral compartment. However, this method has not yet been validated for this purpose and its cost may be a limitation in several regions in the world with low resources. Objective Taking under consideration that there was no standard methodology for this specific situation (detecting HIV in cerebrospinal fluid), we conducted this study to compare the performances of the m2000rt and COBAS v2.0 assays, to propose an alternative and low-cost method to more used in this context (COBAS v2.0). Methods The study was conducted from May 2015 to July 2016. The sample size calculation was based on data from a pilot trial that revealed that a minimum of 37 samples would be needed to detect a difference of 0.20 log10 in viral load, with a correlation coefficient of 0.979 and a 90% power. This equation would allow a 10% lost. CSF samples were collected consecutively from 37 HIV-positive patients seen at Hospital de Clínicas, Porto Alegre, RS. Methods were processed according to proposed by the manufacturer for utilization with plasma samples. Small modifications were necessary in the study test (m2000rt) to neutralize any methodological differences, thus avoiding measurement bias: the freezing of samples was carried out at -20ºC until the moment of the analysis. The COBAS v2.0 test was used as a reference since it is the most commonly used method. Quantitative analyzes were performed with results that were within the linear range in both methods (n=18). To make the methods comparable, the detection limit of the m2000rt assay for both (40 cp/mL or 1.60 log10 cp/mL) was adopted. The results below the limit of detection were presented as a categorical variable, since they are not quantifiable. The Pearson correlation coefficient was used to compare methods. The normality of the variables was then summarized calculating the estimated bias by the mean difference "đ" and standard deviation of the differences performed by t test for paired samples. Based on the lack of normality of the methods, the degree of agreement of the HIV viral load results was analyzed by the Kappa index. This study was approved by the Hospital de Clínicas of Porto Alegre (southern Brazil) Ethics Review Board, registered in the Brazil Platform as CAAE: 35072214.7.0000.532. Conclusion In conclusion, the m2000rt test that was modified for this trial showed good agreement and correlation with the most used test in this context and can be considered an alternative method with similar results to COBAS v2.0 and low costs in the HIV viral load quantification in cerebrospinal fluid. We suggest, especially in places where this method is readily available with an acceptable cost-benefit ratio, that the m2000rt exam should be performed.