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Nos últimos anos, tem se verificado um grande aumento na procura de novos equipamentos eletrónicos, devido ao seu constante desenvolvimento. Como tal, tem-se vindo a intensificar um problema já existente, que é o descarte de equipamentos elétricos eletrónicos (EEE), pois este tem de ser feito de forma consciente e sustentável. Só desta forma é que estamos a ajudar o meio ambiente e a aproveitar componentes, que possam ser reutilizados ou reciclados. O grande objetivo do projeto que alimentou esta tese de mestrado, é desenvolver um processo composto por várias etapas para recuperação e purificação de metais preciosos oriundos de resíduos de EEE (REEE, em particular telemóveis), incluindo lixiviação dos metais e adsorção dos mesmos a um adsorvente (pode incluir mais que 1 etapa) e finalmente redução dos metais purificados. As recuperações de metais preciosos, nos telemóveis, têm valor comercial e podem ter novas funções. O presente trabalho focou-se sobretudo na etapa da adsorção dos metais (no estado solúvel iónico) em solução e desenvolvimento de meios adsorventes eficientes, bem como formas de quantificar o que é adsorvido. Para a extração dos metais, foi necessário preparar biocarvões com duas origens diferentes: recurso à microalga Chlorella vulgaris (C.vulgaris), na forma liofilizada, cedida pela A4f e recuso à bactéria Bacillus cereus (B.cereus), após crescimento celular e secagem. Foi necessário fazer a caracterização dos biocarvões e para isso recorreu-se ao traçado de curvas de rutura para a prata e isotérmicas de adsorção de prata. Analisou-se a estrutura e superfície dos biocarvões, antes de serem usadas e após adsorção e dessorção, com recurso à técnica de microscopia dos eletrões secundários, SEM. Os ensaios laboratoriais de caracterização dos biocarvões, foram realizados com nitrato de prata e para a dessorção, recorreu-se a uma solução de tiossulfato de sódio e como alternativa, a uma solução aquosa de tiureia. Com base nos resultados preliminares obtidos, é possível ter uma base para delinear as etapas do trabalho futuro, nomeadamente repetir ensaios. In recent years, there has been a large increase in the demand for new electronic equipment, due to its constant development. Consequently, it has been intensifying an already existing problem, which is the disposal of electronic electrical equipment (EEE), because this has to be done in a conscious and sustainable way. Only in this way are we helping the environment and taking advantage of components, which can be reused or recycled. The main goal of the project that fed this master thesis, is to develop a process composed of several steps for recovery and purification of precious metals from waste EEE (WEEE, in particular mobile phones), including leaching of metals and adsorption of them to an adsorbent (can include more than 1 step) and finally reduction of the purified metals. Recoveries of precious metals, in mobile phones, have commercial value and can have new functions. The present work focused mainly on the step of adsorbing metals (in the ionic soluble state) in solution and developing efficient adsorbent media as well as ways of quantifying what is adsorbed. For the extraction of metals, it was necessary to prepare biocarbons from two different sources: the microalgae Chlorella vulgaris, freeze-dried, provided by A4f and the bacteria Bacillus cereus, after cell growth and drying. It was necessary to characterise the biocarbons and, for that, it was used the plotting of breaking curves for silver and isotherms of silver adsorption. The structure and surface of the biocharvons, before and after adsorption and desorption, were analysed using the SEM technique. The laboratory tests for characterization of the biocharbons, were performed with silver nitrate and for desorption, a sodium thiosulfate solution was used and as an alternative, an aqueous solution of thiourea. Based on the preliminary results obtained, it is possible to have a basis for outlining the steps of future work, namely repeat assays.

Dissertação de Mestrado em Segurança Alimentar O recurso aos serviços delivery e take-away tem tido um crescimento exponencial ao longo dos últimos anos, evidenciando-se ainda mais com a pandemia devido ao Sars-Cov-2. O presente trabalho pretende perceber de que forma varia a temperatura de refeições com proteína de diversa natureza ao longo do serviço de delivery e take-away, bem como caracterizar os microrganismos produtores de esporos mais preocupantes na restauração e de que forma a sua cinética microbiana poderá ter impacto na saúde do consumidor. A recolha de temperaturas desde a confeção das refeições até à chegada ao consumidor foi efetuada com recurso a loggers de sonda inseridos no próprio alimento. Foram utilizados 2 métodos de espera e acondicionamento das refeições, de forma a entender que influência teriam nas temperaturas apresentadas pelas refeições até ao consumidor. Os dados recolhidos foram tratados e aplicados a modelos de multiplicação populacional microbiana para Clostridium botulinum, Clostridium perfringens e Bacillus cereus, através dos quais se procedeu ao cálculo da duração de fase de latência com as constantes definidas nos modelos, e à visualização de taxas de crescimento populacional resultantes dos mesmos modelos. Refeições com base líquida apresentaram melhor desempenho na manutenção da temperatura ao longo do tempo, e refeições com matérias-primas desfiadas ou picadas demonstraram responder melhor ao método de espera em estufa aliado ao acondicionamento em caixa térmica com placa térmica (previamente aquecida em banho-maria). A duração de fase de latência (lag) de Clostridium perfringens foi de 2,08 horas para carne de aves, 1,24 horas para carne de bovino e 1,48 horas para carne de suíno. Para Clostridium botulinum o resultado da implementação do modelo matemático não se considerou válido e para Bacillus cereus considerou-se o valor da mediana que foi 1,42 horas. Como os resultados da fase lag se encontraram dentro do conjunto de valores de tempo total do serviço, não se considerou um potencial crescimento da população microbiana. O perigo associado a refeições vendidas através destes regimes recai nas possíveis atitudes de risco do consumidor. ABSTRACT - Approach of the meal’s models of food delivery and take-away in the light of food safety - The use of delivery and take-away services has grown exponentially over the past few years, becoming even more evident with the Sars-Cov-2 pandemic. This study aims to understand how the temperature of meals with different type of protein varies throughout the delivery and take-away services, as well as to characterize the spore-producing microorganisms of most concern in the restaurant industry and how the microbial kinetics may affect the consumer. The collection of temperatures from meal preparation to arrival at the consumer was performed using loggers inserted into the food itself through a probe. Two methods of waiting and packaging of the meals were used in order to understand what influence they would have on the temperatures presented by the meals until the consumer. The data treatment and usage were performed with the use of microbial population multiplication models for Clostridium botulinum, Clostridium perfringens and Bacillus cereus, through which the adaptation period were calculated with the constants defined in the models and the growth rates resulting from the models were visualized. Liquid based meals showed better performance in maintaining temperature over time and meals with shredded or chopped food products showed better response to the method of waiting in the heated banquet cabinet combined with packaging inside a thermal box with thermal plate (previously heated in a water bath). The adaptation period (lag) for Clostridium perfringens was 2,08 hours for poultry, 1,24 hours for beef, and 1,48 hours for pork. For Clostridium botulinum the result of the mathematical model implementation was not considered valid and for Bacillus cereus the median value was considered to be 1,42 hours. As the results of the lag phase value were within the value range of the total service time, potential microbial growth was not considered. The danger associated with meals sold through these services lies in the possible risky attitudes of the consumer. N/A

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária RESUMO - Assiste-se na atualidade a uma necessidade crescente de desenvolver novos métodos de descontaminação, uma vez que os métodos convencionais são insuficientes para eliminar agentes patogénicos resistentes. O projeto “Descontaminação por Aerossol Gasoso de Partículas Oxidantes” (DRACO), desenvolvido pela Unidade Militar Laboratorial de Defesa Biológica e Química, em parceria com o Centro de Investigação da Academia Militar, tem por objetivos testar e desenvolver abordagens inovadoras para a descontaminação operacional. Neste âmbito pretende testar a eficácia de um novo descontaminante, baseado em nano partículas oxidantes. A tecnologia em teste, designada por dryVHP (formulação sólida de peróxido de hidrogénio vaporizado) foi desenvolvida pela Delox, uma startup inovadora da Faculdade de Ciências da Universidade de Lisboa. Esta tecnologia tem como objetivo permitir a criação de uma nova geração de sistemas de descontaminação com maior compatibilidade para materiais e eletrónica, permitindo também a redução do impacto ambiental e redução dos recursos humanos em cenários de contaminação biológica. Pretende-se que esta tecnologia seja empregue em áreas civis na descontaminação de infraestruturas, mas também na descontaminação de interiores, edifícios e viaturas militares. Deste modo, propomo-nos neste trabalho testar a eficácia deste novo descontaminante, comparando o seu potencial esporicida ao de outros descontaminantes líquidos (peróxido de hidrogénio líquido a 10% e ácido peracético a 0.1%), recorrendo ao uso de esporos de Bacillus cereus, como substituto de Bacillus anthracis. A estirpe de B. cereus NCTC 11143 estudada neste trabalho produz duas frações de esporos, do topo e do fundo, que se diferenciam entre si essencialmente pelas suas propriedades físico-químicas, nomeadamente a nível da hidrofobicidade. As experiências de descontaminação foram efetuadas com estas subpopulações de esporos de B. cereus em separado e testaram-se duas superfícies de plástico diferentes, uma limpa e outra suja com óleo alimentar. O peróxido de hidrogénio líquido a 10% e o ácido peracético a 0.1% demonstraram ação esporicida para as duas frações de esporos de B. cereus tanto quando aplicado em superfícies limpas, como em superfícies sujas. Por outro lado, dryVHP, disperso por vaporização pela Delox demonstrou-se apenas eficaz na descontaminação dos esporos do fundo (hidrofílicos), não exercendo ação esporicida nos esporos do topo (hidrofóbicos). Pensa-se que a diferente hidrofobicidade das duas frações de esporos esteja relacionada com as suas resistências diferenciais aos descontaminantes testados. O presente estudo permitiu destacar que o modo de aplicação do descontaminante é um fator condicionante do mecanismo de ação das substâncias ativas oxidantes, e contribuiu para aumentar o conhecimento no âmbito da descontaminação de esporos de B. cereus. ABSTRACT - Nowadays, there is a growing need to develop new decontamination methods since conventional ones are insufficient to eliminate resistant pathogens. The "Decontamination by Aerosol Gas Decontamination of Oxidizing Particles" (DRACO) project, developed by the Biological Defense and Chemical Laboratory Unit in partnership with the Military Academy Research Center, aims to test and develop innovative approaches for operational decontamination. In this context, the main goal is to test the effectiveness of a new decontaminant, based on oxidizing nanoparticles. The decontaminant technology under test is called dryVHP (a solid formulation of vaporized hydrogen peroxide) and was developed by Delox, an innovative start-up from the Faculty of Science of the University of Lisbon. This technology aims to provide the creation of a new generation of decontamination systems with greater compatibility for materials and electronics, also allowing the reduction of environmental impact and reduction of human resources in biological contamination scenarios. This technology is intended to be used in civilian areas in the decontamination of infrastructures, but also in the decontamination of interiors, buildings, and military vehicles. Thus, the purpose of this work is to test the effectiveness of this new decontaminant, comparing its sporicidal potential to other liquid decontaminants (liquid hydrogen peroxide at 10% and peracetic acid at 0.1%), using Bacillus cereus spores as a substitute for Bacillus anthracis. The strain of B. cereus NCTC 11143 studied in this work produces two fractions of endospores, the top and bottom fraction, which differ essentially by their physicochemical properties, namely hydrophobicity. The decontamination experiments were carried out with these separate B. cereus spore subpopulations and two different plastic surfaces were tested, a clean one and a soiled one with cooking oil. Liquid hydrogen peroxide at 10% and peracetic acid at 0.1% were shown to possess sporicidal action for both subpopulations of B. cereus spores when applied to clean and dirty surfaces. On the other hand, gaseous hydrogen peroxide (dryVHP) dispersed by vaporization by Delox was shown to be effective only in decontaminating bottom (hydrophilic) spores and did not exert sporicidal action on the spores of the top (hydrophobic). The different surface hydrophobicity these two spore fractions carry is thought to be responsible for their differential resistances with the decontaminants tested. The present study highlighted that the application method of the decontaminant is a conditioning factor on the mechanism of action of the oxidizing active substances and contributed to increase knowledge in the field of decontamination of B. cereus spores. N/A

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2022-12-21T19:31:54Z No. of bitstreams: 1 Italo Jose Batista Durval.pdf: 1815528 bytes, checksum: cab851fb72bcd916e5a321992400269b (MD5) Made available in DSpace on 2022-12-21T19:31:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Italo Jose Batista Durval.pdf: 1815528 bytes, checksum: cab851fb72bcd916e5a321992400269b (MD5) Previous issue date: 2021-07-30 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq The present study characterized and evaluated the biosurfactant produced by Bacillus cereus UCP 1615 in various industrial applications. The production of the biomolecule was carried out in a low-cost medium composed of 2% residual frying soybean oil and 0.12% peptone. The interfacial tension reducing capacity and the critical micelle concentration (CMC) were defined as 6 mN/m and 500 mg/L, respectively. Large-scale production was carried out in 1.2, 3.0 and 50 L bioreactors, reaching surface tension values of 28.7, 27.5 and 32 mN/m and yields around 4.3, 4.6 and 4.1 g/L, respectively. The biosurfactant was classified as an anionic lipopeptide from analyzes to determine ionic charge, thin layer chromatography (TLC), gas chromatography (GC) and nuclear magnetic resonance (NMR). Long-term conservation tests with the additive potassium sorbate (0.2%) demonstrated the stability of the surface-active properties of the biosurfactant, suggesting its application in a possible commercial formulation. To evaluate the application of the biosurfactant in environmental processes, it was applied in tests containing seawater, soil and rocks contaminated with petroleum derivatives and its toxicity was also evaluated against marine organisms Artemia salina (microcrustacean), Poecilia vivipara (fish) and Anomalocardia brasiliana (bivalve) and to the seeds of vegetables Brassica oleracea (cabbage), Solanum lycopersicum (tomato) and Cucumis anguria (gherkin). The biosurfactant proved to be efficient and biocompatible for bioremediation tests in seawater, promoting the growth of the microbiota, and showed removal rates of hydrophobic compounds in sandy soil and rocks of 84 and 69%, respectively. The application of the biomolecule as a bioemulsifier in food was also evaluated through its use in the composition of a cookie type cookie, with cytotoxicity using the L929 and Vero cell lines and the antioxidant activity determined. A biscuit with preserved typical characteristics and benefits compared to the standard without biosurfactant was obtained. Cytotoxicity tests reinforced the biosurfactant's biocompatibility, and the antioxidant activity indicative corroborated with the biosurfactant's contribution to the biscuit preservation. The biosurfactant was also tested as a stabilizer in the synthesis of silver nanoparticles as an antimicrobial agent. Nanoparticles of size around 20 nm were obtained using the green Tollens method. The nanoparticles showed fungicidal activity against human and plant pathogenic fungal genera. The results obtained demonstrate that the biosurfactant from Bacillus cereus UCP 1615 has potential for use in several economic sectors, proving the biotechnological versatility of this biomolecule and its industrial importance. O presente estudo caracterizou e avaliou o biossurfactante produzido por Bacillus cereus UCP 1615 em diversas aplicações industriais. A produção da biomolécula foi feita em meio de baixo custo composto por 2% de óleo de soja residual de fritura e 0,12% de peptona. A capacidade de redução da tensão interfacial e a concentração micelar crítica (CMC) foram definidas como 6 mN/m e 500 mg/L, respectivamente. A produção em larga escala foi feita em biorreatores de 1,2, 3,0 e 50,0 L, alcançando valores de tensão superficial de 28,7, 27,5 e 32,0 mN/m e rendimentos em torno de 4,3, 4,6 e 4,1 g/L, respectivamente. O biossurfactante foi classificado como um lipopetídeo aniônico a partir de análises para determinação da carga iônica, cromatografia em camada delgada (TLC), cromatografia gasosa (GC) e ressonância magnética nuclear (RMN). Testes de conservação a longo prazo com o aditivo sorbato de potássio (0,2%) demonstraram a estabilidade das propriedades tensoativas do biossurfactante, sugerindo sua aplicação em uma possível formulação comercial. Para avaliar a aplicação do biossurfactante em processos ambientais, o mesmo foi aplicado em ensaios contendo água do mar, solo e rochas contaminadas com derivado de petróleo e sua toxicidade também foi avaliada frente ao microcrustáceo Artemia salina, ao peixe Poecilia vivipara e ao bivalve Anomalocardia brasiliana, bem como frente às sementes de vegetais Brassica oleracea (repolho), Solanum lycopersicum (tomate) e Cucumis anguria (maxixe). O biossurfactante mostrou-se eficiente e biocompatível para biorremediação em água do mar, promovendo o crescimento da microbiota, e ainda apresentou índices de remoção de compostos hidrofóbicos em solo arenoso e rochas de 84 e 69%, respectivamente. A aplicação da biomolécula como bioemulsificante em alimentos também foi avaliada através da sua utilização na composição de um biscoito tipo cookie, tendo a citotoxicidade utilizando as linhagens celulares L929 e Vero e a atividade antioxidante determinados. Um biscoito com características típicas preservadas e com benefícios em relação ao padrão sem biossurfactante foi obtido. Os testes de citotoxicidade reforçaram a biocompatibilidade do biossurfactante, e o indicativo de atividade antioxidante corroborou com a contribuição do biossurfactante para preservação do biscoito. O biossurfactante também foi avaliado como estabilizante na síntese de nanopartículas de prata como agente antimicrobiano. Nanopartículas de tamanho em torno de 20 nm foram obtidas através do método verde de Tollens. As nanopartículas apresentaram atividade fungicida diante de gêneros de fungos patogênicos humanos e vegetais. Os resultados obtidos demonstram que o biossurfactante de Bacillus cereus UCP 1615 tem potencial de utilização em diversos setores econômicos, comprovando a versatilidade biotecnológica desta biomolécula e sua importância industrial.

Mestrado em Engenharia Alimentar na Escola Superior de Tecnologia e Gestão do Instituto Politécnico de Viana do Castelo A segurança alimentar é uma das principais preocupações para a saúde pública em todo o mundo. A indústria alimentar tem demonstrado uma preocupação crescente com a qualidade e segurança alimentar dos produtos produzidos, e desta forma, um maior cuidado na eliminação de possíveis contaminações durante as etapas de receção, produção, transformação e distribuição. Neste domínio, o processamento térmico assume particular relevância, na medida em que é utilizado extensivamente na indústria alimentar para inativar a carga microbiana associada a produtos alimentares por forma a maximizar a segurança do alimento e, consequentemente, do consumidor. No entanto existem microrganismos, com elevada capacidade para sobreviver a temperaturas elevadas, e que são prevalentes em algumas das matérias-primas utilizadas nas formulações dos preparados FRULACT, como por exemplo, a bactéria Bacillus cereus. Assim, as atividades desenvolvidas durante o presente estágio concentraram-se em verificar de que forma a produção de soluções de cereais permitem controlar o crescimento de determinadas espécies pertencentes ao género Bacillus, por forma a que o tratamento térmico seja uma garantia de estabilidade microbiológica para os preparados FRULACT. Durante o estágio efetuado, e cujo trabalho desenvolvido se descreve no presente documento, foram inicialmente caracterizadas microbiologicamente as matérias-primas utilizadas na elaboração dos preparados de cereais FRULACT, os quais foram produzidos com duas formas de ingredientação distintas: a primeira utilizando soluções acidificadas de cereais e a segunda utilizando o cereal cru. Todos os preparados de cereais foram sujeitos às mesmas condições e a um processamento térmico com um bínomio tempo/temperatura 5 min / 95 °C. Relativamente aos iogurtes dosificados com os preparados de cereais - formulados com solução acidificada e com cereal cru – foram cumpridos os limites de especificação em termos de critérios microbiológicos em vigor na FRULACT. No que diz respeito à presença de Bacillus cereus, este patogénico não foi detetado nos preparados e iogurtes de cereais estudados. O trabalho efetuado consistiu numa abordagem inicial à questão da influência da acidificação dos cereais na estabilidade microbiana dos respetivos preparados, tendo permitido obter alguns dados indicativos, sendo necessário ainda alargar o âmbito do estudo realizado, em particular com um maior numero de amostras para uma maior robustez dos resultados e das conclusões. Food safety is a major public health concern worldwide. The food industry has shown a growing concern with the quality and safety of the products produced, and thus, great care in the elimination of possible contamination during the stages of reception, production, transformation and distribution. In this domain, thermal processing assumes particular relevance, as it is used extensively in the food industry to inactivate the microbial load associated with food products to maximize the safety of the food and, consequently, of the consumer. However, there are microorganisms, with a high capacity to survive high temperatures, which are prevalent in some of the raw materials used in the formulations of FRULACT preparations, such as the bacterium Bacillus cereus. Thus, the activities developed during the present stage were focused on justifying how the production of cereal solutions allows controlling the growth of certain species belonging to the genus Bacillus, so that the heat treatment is a guarantee of microbiological stability for FRULACT preparations. During the internship carried out, and whose work is described in this document, the raw materials used in the preparation of FRULACT cereal preparations were initially characterized microbiologically. These preparations were produced with two different forms of ingredient: the first using acidified cereal solutions and the second using raw cereal. All cereal preparations were subjected to the same conditions and to 5 min / 95 °C thermal processing. Regarding yoghurts dosified with cereal preparations - formulated with acidified solution or with raw cereal - the specification limits in terms of microbiological criteria in force at FRULACT were met. Concerning the presence of Bacillus cereus, this pathogen was not detected in the studied cereal preparations and yoghurts. The work carried out consisted of an initial approach to the question of the influence of the acidification of cereals on the microbial stability of the respective preparations, allowing to obtain some indicative data. It is still necessary to broaden the scope of the study carried out, in particular with a greater number of samples for a greater robustness of results and conclusions.

Submitted by Igor Pereira (igor.spereira@uniceub.br) on 2021-01-28T16:39:53Z No. of bitstreams: 1 TCC-Thifany-01122020.pdf: 1234537 bytes, checksum: cb70fc089289ebae687069697f29c048 (MD5) Approved for entry into archive by Heres Pires (heres.pires@uniceub.br) on 2021-04-29T13:16:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TCC-Thifany-01122020.pdf: 1234537 bytes, checksum: cb70fc089289ebae687069697f29c048 (MD5) Made available in DSpace on 2021-04-29T13:16:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TCC-Thifany-01122020.pdf: 1234537 bytes, checksum: cb70fc089289ebae687069697f29c048 (MD5) Previous issue date: 2021-01-28 B. anthracis, o agente etiológico da doença antraz, B. cereus, uma bactéria que pode causar infecções gastrointestinais e B. thuringiensis. produtora de cristais tóxicos (Cry) que atuam como inseticidas espécie-específicos naturais são bactérias muito parecidas geneticamente entre si. Diferenciá-las através de métodos moleculares é um grande desafio. O objetivo deste trabalho foi aplicar abordagens de genômica comparativa para classificar estas espécies. Para isso, as proteínas preditas de 45 genomas sendo 10 genomas de cada espécie disponíveis publicamente no NCBI, 14 genomas de B. thuringiensis do banco de dados interno da Embrapa e uma espécie outgroup foram usadas para a identificação de grupos ortólogos e confecção de uma árvore filogenética, totalizando 268.898 proteínas. A análise filogenética separou, em termos gerais, B. anthracis das demais, ainda que as três espécies se misturem entre si em maior ou menor grau. Cepas de B. thuringiensis com ação bio-inseticidas de lepidópteros ficaram separadas daquelas que atuam em coleópteros. B. anthacis é a espécie que apresenta, em média, o menor número e B. thuringiensis, o maior número de ilhas de patogenicidade por genoma. Este trabalho mostrou que através da classificação em grupos ortólogos e análise de ilhas de patogenicidade é possível melhorar a classificação destas três espécies baseado em dados moleculares

Neste trabalho pretendeu-se implementar técnicas que permitam a Recuperação Avançada do Petróleo Melhorada por Microrganismos (MEOR). Assim, estudou-se a capacidade das bactérias Pseudomonas aeruginosa e Bacillus cereus sintetizarem biosurfactantes, realizando-se também, um ensaio para isolar colónias de bactérias presentes em areias contaminadas com petróleo. O crescimento das bactérias deu-se inicialmente em meio de Luria-Bertani, fase de pré-cultura, e posteriormente em meios enriquecidos em nutrientes. O crescimento bacteriano foi monitorizado através das medições de densidade ótica. Para a avaliação da produção de biosurfactante, foram realizados testes qualitativos, nomeadamente o ensaio de propagação do petróleo e a análise de emulsão, bem como a determinação da tensão superficial dos extratos com biosurfactante. Com o objetivo de avaliar a recuperação do petróleo num reservatório, foi contruído um modelo de coluna com areia empacotada de forma a realizarem-se simulações das operações de recuperação de petróleo na presença de biosurfactantes. A reduzida quantidade de biosurfactante produzida, indiciada pelos resultados negativos dos testes qualitativos, foi confirmada pela medição da tensão superficial do sobrenadante. De facto, a tensão superficial ao longo da fermentação não sofreu reduções significativas, como seria previsto se houvesse produção de biosurfactante. Adicionalmente, na simulação da recuperação de petróleo na coluna com areia não foi verificada qualquer melhoria pela presença dos biosurfactantes. Estes resultados permitem confirmar que as bactérias sem contacto prévio e duradouro com o petróleo não se encontram adaptadas para a produção do biosurfactantes. Nos testes de corrosão, a massa da amostra não sofreu alterações significativas mesmo após 45 dias, não significando necessariamente a falta de oxidação, mas provavelmente que a massa da amostra não foi adequada neste estudo. This work aimed to implement techniques that allow Microbial Enhanced Enhanced Oil Recovery (MEOR). Thus, the ability of the bacteria Pseudomonas aeruginosa and Bacillus cereus to synthesize biosurfactants was studied, as well as an assay to isolate colonies of bacteria present in oil contaminated sands. Bacterial growth was initially in Luria-Bertani broth, preculture phase, and later in nutrient-enriched broth. Bacterial growth was monitored by optical density measurements. For the evaluation of biosurfactant production, qualitative tests were performed, namely the oil propagation test and emulsion analysis, as well as the determination of the surface tension. In order to evaluate oil recovery in a reservoir, a packed sand column model was constructed to simulate oil recovery operations in the presence of biosurfactants. The reduced amount of biosurfactant produced, indicated by the negative results of the qualitative tests, was confirmed by measuring the supernatant surface tension. In fact, the surface tension throughout the fermentation did not decrease significantly, as would be expected if biosurfacant was produced. Additionally, in the simulation of oil recovery in the sand column no improvement was verified by the presence of the biosurfacant. These results confirm that bacteria without previous and lasting contact with oil are not adapted for the production of biosurfactants. In corrosion test, sample mass did not suffer meaningful changes even after 45 days, does not meaning necessarly the lack of oxidation but most likely sample mass was not suitable in this study.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Bacillus cereus é um dos microrganismos de maior preocupação na indústria de alimentos, pois possui alta capacidade de se aderir e formar biofilmes, podendo contaminar os alimentos que entram em contato com as superfícies. Estratégias de controle devem ser buscadas a fim de eliminar esta possibilidade de ocorrência desse microrganismo na cadeia alimentar. Para isso, é necessário conhecer as condições que propiciam sua adesão. Modelos matemáticos podem ser usados para descrever o comportamento microbiano sob diferentes condições ambientais. Assim, o objetivo desse estudo foi avaliar a adesão e formação de biofilmes de diferentes estirpes de B. cereus, isoladas de bebida láctea, leite pasteurizado e ricota, frente a diferentes valores de pH (4,5, 6,0, 7,5 e 9,0) e temperatura (5, 15, 25 e 32 oC). A adesão e formação de biofilmes microbianos foi avaliada utilizando-se placas de 24 poços contendo cupons de aço inoxidável e caldo Brain Heart Infusion (BHI), ajustado com HCl e NaOH 1 mol.L -1 para os valores de pH citados acima e incubadas sob diferentes temperaturas, sendo realizadas contagens em placas a cada 24 h, durante 48 e 120 h de incubação para adesão e formação de biofilmes, respectivamente. Os resultados foram expressos em UFC.cm - 2. As estruturas dos biofilmes foram visualizadas por meio de microscópio eletrônico de varredura. Modelos probabilísticos de regressão logística foram construídos para descrever a probabilidade de adesão e formação de biofilmes de cada estirpe. Os modelos foram validados estatisticamente e em meio de cultura e matriz alimentícia para determinar sua confiabilidade e versatilidade. Os fatores pH e temperatura influenciaram nas respostas de adesão e formação de biofilmes, em que altas temperaturas de 25 e 32 oC e valores de pH 6,0, 7,5 e 9,0 favoreceram esses mecanismos, sendo observada uma maior capacidade de adesão em uma das 3 estirpes testadas em relação às demais, quando submetida à temperatura de 15 oC. A combinação entre pH 4,5 e temperatura de 5 oC conseguiu impedir a adesão e formação de biofilmes durante todo o período de incubação. A visualização por microscopia eletrônica de varredura corroborou com os resultados obtidos por contagem em placas. Os modelos probabilísticos de regressão logística construídos se mostraram eficazes para descrição da região de interface de adesão/não adesão e formação de biofilme/não formação de biofilme. A validação dos modelos probabilísticos em meio de cultura e matriz alimentícia confirmou que os modelos desenvolvidos são adequados para avaliação da adesão e formação de biofilmes das estirpes de B. cereus estudadas. A utilização da modelagem probabilística é de grande utilidade para a indústria de alimentos que pode utilizar das informações sobre combinações de fatores que afetam a adesão e formação de biofilmes por B. cereus para análise de riscos, visando garantir a qualidade dos alimentos, assegurando desse modo, a saúde dos consumidores. Bacillus cereus is one of the microorganisms of major concern in the food industry, as it has a high capacity to adhere and form biofilms. Control strategies should be sought in order to eliminate this possibility of this microorganism occurring in the food chain. Mathematical models can be used to describe microbial behavior under different environmental conditions. The objective of this study was to evaluate the adhesion and biofilm formation of different strains of B. cereus, isolated from dairy products against different pH (4.5, 6.0, 7.5 and 9.0) and temperature values (5, 15, 25 and 32 ° C). The adhesion and formation of microbial biofilms was monitored using 24-wells plates containing stainless steel coupons and Brain Heart Infusion (BHI) broth. This adjusted with 1 mol.L-1 HCl and NaOH at the above mentioned pH values and incubated under different temperatures. The plaque counts were performed every 24 h for 48 and 120 h incubation for adhesion and biofilm formation, respectively. The structures of the biofilms were visualized by scanning electron microscope. Probabilistic logistic regression models were constructed to describe the probability of adhesion and formation of biofilms of each strain. The models were validated statistically, in culture medium and food matrix to determine their reliability and versatility. The pH and temperature factors influenced the adhesion and biofilm formation responses, where high temperatures of 25 and 32 oC and values of pH 6.0, 7.5 and 9.0 favored these mechanisms, with a higher adhesion capacity in one of the three strains tested in relation to the others when submitted to a temperature of 15 oC. The combination between pH 4.5 and 5 ° C was able to prevent adhesion and formation of biofilms throughout the incubation period. The scanning electron microscopy confirmed the results obtained by plate. The probabilistic logistic regression models were effective for describing the adhesion / non-adhesion interface region and biofilm formation / non-biofilm formation. The validation of the probabilistic models in culture medium and food matrix confirmed the good fit of the models. The use of probabilistic modeling is very useful for the food industry, which can utilize information on combinations of factors that affect the adhesion and formation of biofilms by B. cereus for risk analysis, in order to guarantee the quality of the food, thus ensuring, consumer health.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Bacillus cereus tem causado preocupação na indústria de alimentos, sendo que esse patógeno causa duas síndromes distintas que atingem os humanos, a diarreica é ocasionada que pelas toxinas não hemolítica (nhe), hemolítica (hbl) e citotoxina (cytk) e a emética, causada pela toxina denominada de cereulide. Estudar o comportamento de micro-organismos frente às várias mudanças dos parâmetros ambientais é fundamental para compreender e obter maiores conhecimentos do comportamento microbiano. Assim, modelos preditivos podem ser usados como ferramentas para descrever tais informações, além de prever o crescimento, sobrevivência e, ou inativação de micro-organismos na cadeia produtiva de alimentos. Com base nisso, esse trabalho consistiu em descrever matematicamente a multiplicação microbiana de 11 estirpes de B. cereus em função do pH (4,9; 5,5; 6,5; 7,0) e temperatura (15 oC, 25 oC, 32 oC e 37 oC), determinar as curvas de crescimento das 11 estirpes de B. cereus em caldo nutriente, modelar as curvas de crescimento determinandoo tempo de lag e a taxa de crescimento empregando o modelo primário de Baranyi e Roberts e modelar a taxa de crescimento e tempo de lag em função do pH e temperatura empregando os modelos secundários de Raiz Quadrada e Arrhenius–Davey modificado. O inóculo foi padronizado realizando leitura da densidade óptica (D.O) em espectrofotômetro no comprimento de onda de 630 nm, em que a absorbância foi ajustada para 0,100, equivalente a 1,0 x 10 8 UFC·mL -1 . Após o ajuste, foram feitas diluições em caldo BHI para a obtenção de 1,0 x 10 5 UFC·mL -1 . A multiplicação microbiana foi observada utilizando o equipamento Elisa com leitura de densidade óptica em 600 nm, até que todas as estirpes alcançassem a fase estacionária. Como resultados, foram obtidas 704 curvas para caracterizar o crescimento das estirpes. O modelo de Baranyi e Roberts (1994) ajustou bem os dados para todas as temperaturas estudadas com coeficiente de determinação (R 2 ) > 0,95. Pode ser observado neste trabalho que as maiores taxas de multiplicação ( máx ) acontecem nas temperaturas de 32 oC e 37 oC e nos valores de pH entre 6,5 e 7,0 e a 15 oC nota-se que a taxa de multiplicação foi menor e o tempo de permanência na fase lag ( ) foi maior. Foram obtidos bons ajustes do modelo secundário da Raiz Quadrada aos dados dos parâmetros máx em função da temperatura e do pH, com valores de R 2 maiores que 0,75, e menores que 0,96, para todos os casos. Com relação ao modelo secundário de Arrhenius–Davey modificado, os modelos podem ser considerados ótimos aos dados dos parâmetros em função da temperatura e do pH, apresentando valores de R 2 maiores que 0,88, e menores que 0,99. Portanto, observando o exposto acima, os modelos apresentados nesta pesquisa possuem boa confiabilidade para predizer os parâmetros de crescimento das diferentes estirpes de B. cereus. Bacillus cereus has caused concern in the food industry, and this pathogen causes two distinct syndromes that affect humans, the diarrhea that is caused by non- hemolytic toxins, hemolytic (hbl) and cytotoxin (cytk) and emetics, caused by cereulide toxin. The study of the behavior of microorganisms in the face of various changes in environmental parameters is fundamental to understanding and gaining knowledge of microbial behavior. Thus, predictive models can be used as tools to describe such information, in addition to predicting the growth, survival, or inactivation of microorganisms in the food production chain. Based on this, this work consisted in describing mathematically the microbial multiplication of 11 strains of B. cereus as a function of pH (4.9, 5.5, 6.5, 7.0) and temperature (15 oC, 25 oC, 32 °C and 37 °C), determine the growth curves of the 11 strains of B. cereus in nutrient broth, model the growth curves determining lag time and growth rate using the Baranyi and Roberts primary model and model the rate of growth and lag time as a function of pH and temperature using the modified Secondary Root and Arrhenius- Davey models. The inoculum was standardized by reading the optical density (O.D.) in a spectrophotometer at the wavelength of 630 nm, where the absorbance was adjusted to 0.100, equivalent to 1.0 x 10 8 CFU • mL -1 . After adjustment, dilutions were made in BHI broth to obtain 1.0 x 10 5 CFU • mL -1 . Microbial multiplication was observed using the Elisa equipment with optical density reading at 600 nm until all strains reached the stationary phase. As results, 704 curves were obtained to characterize the growth of the strains. The model of Baranyi and Roberts (1994) fitted the data well for all temperatures studied with coefficient of determination (R2)> 0.95. It can be observed in this work that the highest multiplication rates ( max ) occur at temperatures of 32 °C and 37 °C and at pH values between 6.5 and 7.0 and at 15 °C it is noted that the multiplication rate was lower and the residence time in the lag ( ) phase was higher. Good adjustments of the secondary model of the Square Root were obtained for the parameters max as a function of temperature and pH, with R 2 values higher than 0.75 and less than 0.96 for all cases. With respect to the modified Arrhenius-Davey secondary model, the models can be considered optimal for the parameter data as a function of temperature and pH, with R 2 values greater than 0.88 and less than 0.99. Therefore, considering the above, the models presented in this research have good reliability to predict the growth parameters of the different strains of B. cereus.

As bactérias patogênicas são os principais agentes que contaminam alimentos e podem prejudicar a saúde humana. Para tentar combater e controlar a contaminação de alimentos investigam-se novos compostos que apresentam atividade antimicrobiana. O ramnolipídeo (RL) é um biossurfatante (BS) produzido por Pseudomonas spp. que apresenta elevada biodegradabilidade e, baixa toxicidade além de potencial antimicrobiano. O objetivo desse trabalho foi estudar a atividade antimicrobiana do RL frente às bactérias patogênicas Gram positivas, Bacillus cereus (ATCC 33018), Listeria monocytogenes (ATCC 19112), Staphylococcus aureus (ATCC 8095) e Gram negativas, Escherichia coli (EHEC) (ATCC 43895) e Salmonella enterica (ATCC 13076) além de contribuir na elucidação do mecanismo de ação destes compostos. Os testes de susceptibilidade ao RL foram realizados a partir da determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM) utilizando a técnica de micro-diluição. O efeito do pH sobre a atividade antimicrobiana foi avaliado na faixa de pH 5 a 9. Para avaliação do mecanismo de ação foram realizados ensaios de permeabilidade celular, espectroscopia de infravermelho e hidrofobicidade celular. O RL apresentou atividade antimicrobiana para as bactérias B. cereus em CIM 19,5 &#956g/mL e CBM 39,1 &#956g/mL, e para L. monocytogenes CIM 156,2 &#956g/mL e CBM 312,5 &#956g/mL. Para B. cereus apresentou efeito bactericida a partir de 30 minutos na CBM, e para L. monocytogenes em 8 horas de incubação com o RL na CBM. As bactérias Gram negativas E. coli e S. enterica mostraram-se resistentes ao RL. O pH influenciou a ação antimicrobiana do RL sendo mais efetivo em pH mais ácidos. O tratamento com RL promoveu redução da hidrofobicidade da superfície celular das bactérias sensíveis. Os espectros infravermelhos evidenciaram alterações na composição química da membrana/parede celular principalmente para bactérias Gram positivas. A permeabilidade da membrana celular aumentou de acordo com o aumento da concentração de RL. A atividade antimicrobiana do RL foi evidenciada para as bactérias Gram positivas sendo mais sensíveis B. cereus e L. monocytogenes. Os resultados obtidos neste trabalho sugerem que o RL promove alterações na permeabilidade e composição química da membrana celular bacteriana sendo um agente potencial para controle de bactérias Gram positivas de importância alimentar. Pathogenic bacteria are main agents that contaminate food and are harmful to human health. The search for new compounds to combat and control food pathogens is of increasing interest. Rhamnolipid (RL) is a biosurfactant (BS) typically produced by Pseudomonas spp., showing high biodegradability, low toxicity and antimicrobial activity. This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of RL against the food pathogenic Gram positive bacteria Bacillus cereus (ATCC 33018), Listeria monocytogenes (ATCC 19112), Staphylococcus aureus (ATCC 8095) and Gram negative, Escherichia coli (EHEC) (ATCC 43895) and Salmonella enterica (ATCC 13076) and also contribute to the elucidation of RL mechanism of action. Susceptibility tests were performed by determination of the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimal bactericidal concentration (MBC) using the broth microdilution method. The effect of pH on antimicrobial action was also investigated ranging from 5 to 9. Mechanism of action was studied using membrane permeability, infrared spectroscopy and cell hydrophobicity assays. The MIC value for B. cereus was 19.5 &#956g/mL and MBC was 39.1 &#956g/mL. L. monocytogenes was inhibited at concentration 156.2 &#956g/mL showing MBC of 312.5 &#956g/mL. B. cereus presented bactericidal effect after 30 minutes and for L. monocytogenes after 8 hours. The Gram-negative E. coli and S. enterica were resistant to RL. The pH influence antimicrobial activity of the RL showing decreasing MIC values at acidic conditions. Cell hydrophobicity was reduced by RL for the sensitive bacteria. Infrared spectroscopy showed that RL induced changes in chemical composition of cell membrane/ wall especially for the Gram positive bacteria. Cell permeability also increases as RL concentration increases. Antimicrobial activity of RL was evidenced for Gram positive bacteria and the most sensitive were B. cereus and L. monocytogenes. The results of this study suggest that rhamnolipid biosurfactant promotes changes in the permeability and membrane chemical composition showing potential to control foodborne Gram positive bacteria.

Submitted by Helena Bejio (helena.bejio@unioeste.br) on 2017-11-22T12:21:24Z No. of bitstreams: 2 Dout_2016_Luciana_Iurkiv.pdf: 1597492 bytes, checksum: 9d65dcec576d4cb6c86826074cfeb38e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Made available in DSpace on 2017-11-22T12:21:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dout_2016_Luciana_Iurkiv.pdf: 1597492 bytes, checksum: 9d65dcec576d4cb6c86826074cfeb38e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-09-12 The induced resistance efficiency in the control of pathogens is recognized, however there are costs related to its use that are still little researched, as the case of fitness and ecological costs. This research aims to verify the efficiency of use of the acibenzolar-S-methyl (ASM), mannanoligosaccharide (MOS) and B. cereus inductors in the control of spot blotch wheat disease, and its relation with the induction of enzymes related to the plant defense, as well as the interference on gas exchanges, on the non-target microrganisms A. brasilense, and on the crop production. The experiment was conduced in green house growing at the Núcleo de Estações Experimentais of the Universidade Estadual do Oeste do Paraná, Marechal Cândido Rondon Campus. The experimental design was made in randomized block design in a factorial schema 4 x 2 x 2, with four replications. The first factor "Resistance Inductors" was constituted by ASM, MOS, B. cereus inductors and water (control). The second factor "Pathogen" was constituted by the presence or absence of B. sorokiniana pathogen. The third factor "PGPR" was made up by the presence or absence of the PGPR A. brasilense. The seeds were inoculated with A. brasilense 24 h before sowing. The treatment with the resistance inductors was done 25 days after the plant emergency and 24 h after it, the inoculation with the pathogen was done. Evaluations for the quantification of peroxidase enzyme, phenylalanine ammonia-lyase and β-1.3-glucanase enzymes activities were done at 0 h, 24 h, 48 h, 72 h and 96 h after treatment. Gas exchanges were evaluated at 0 h, 24 h, 48 h, 72 h, 96 h and 120 h after treatment. The quantification of diazotrophic was made in the implementation of the experiment, at the moment of the use of the resistance inductors and in the flowering. At the flowering, biometric evaluations were performed, and at the end of the cycle, production analysis were held. The use of resistance inductors was efficient in the control of spot blotch wheat disease. The treatment with inductors did not show any interference on the endophytic diazotrophic microrganism. Higher activity of peroxidases for the MOS treatment was observed, that presented high efficiency on the control of the disease. No relation between the activities of phenylalanine ammonia lyase and β-1.3-glucanase and the control of spot blotch was observed. A higher tax of liquid assimilation of CO2 (A) in the absence of the pathogen and presence of the A. brasilense was observed, however, MOS reduced the “A”. The internal concentration of CO2 and the leaf transpiration showed as superior in the treatment with the absence of the pathogen. The stomatal conduce was affected by MOS treatment. The length of the flag leaf and leaf area were affected by ASM use. But, the total weight of grain did not suffer interference of the treatments, in spite of the weight of 100 grains to have been superior to ASM. É reconhecida a eficiência da indução de resistência no controle de fitopatógenos, no entanto, existem custos relacionados à sua aplicação ainda pouco investigados, como é o caso dos custos adaptativos e ecológicos. No presente trabalho objetivou-se verificar a eficiência da aplicação dos indutores acibenzolar-S-metil (ASM), mananoligossacarídeo fosforilado (MOS) e Bacillus cereus no controle de mancha marrom em trigo, e sua relação com a indução de enzimas relacionadas a defesa, assim como a interferência sobre as trocas gasosas, sobre o microrganismo não alvo Azospirillum brasilense, e a produção da cultura. O experimento foi conduzido sob cultivo protegido no Núcleo de Estações Experimentais da Universidade Estadual do Oeste do Paraná, Campus de Marechal Cândido Rondon. O delineamento experimental foi em blocos ao acaso em esquema fatorial 4 x 2 x 2, com quatro repetições. O primeiro fator “Indutores de Resistência” foi constituído pelos indutores ASM, MOS, Bacillus cereus e a testemunha Água. O segundo fator “Patógeno” foi constituído pela presença ou ausência do patógeno Bipolaris sorokiniana. O terceiro fator “BPCV” constituiu-se pela presença ou ausência da bactéria promotora de crescimento vegetal A. brasilense. As sementes foram inoculadas com A. brasilense 24 h antes da semeadura. O tratamento com os indutores de resistência foi realizado 25 dias após a emergência e 24 horas após foi realizada a inoculação com o patógeno. Foram realizadas avaliações para quantificação das enzimas peroxidase, fenilalanina amônia-liase e β-1,3-glucanase às 0 h, 24 h, 48 h, 72 h e 96 horas após o tratamento. As trocas gasosas foram avaliadas às 0 h, 24 h, 48 h, 72 h, 96 h e 120 horas após o tratamento. A quantificação de diazotróficos foi realizada na implantação do experimento, no momento da aplicação dos indutores de resistência e no florescimento da cultura. No florescimento foram realizadas análises biométricas e no final do ciclo, análise dos componentes da produção. A aplicação dos indutores de resistência foi eficiente no controle da mancha marrom em trigo. Os tratamentos indutores não apresentaram interferência sobre os microrganismos diazotróficos endofíticos. Observou-se maior atividade de peroxidases para o tratamento MOS o qual apresentou grande eficiência no controle da doença. Não observou-se relação entre a atividade de fenilalanina amônia-liase e β-1,3-glucanase e o controle de mancha marrom. Observou-se maior taxa de assimilação líquida de CO2 (A) na ausência do patógeno e presença de A. brasilense, porém MOS reduziu a A. A concentração interna de CO2 e a transpiração foliar apresentaram-se superiores nos tratamentos com ausência do patógeno. A condutância estomática foi afetada pelo tratamento MOS. O comprimento da folha bandeira e a área foliar foram afetados negativamente pela aplicação de ASM. Porém, a massa total de grãos não sofreu interferência dos tratamentos, apesar de a massa de 100 grãos ter sido superior para ASM.

O objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho de carpas capim (Ctenopharyngodon idella) alimentadas com dietas suplementadas com diferentes aditivos no consumo de forragem teosinto (Euchlaena mexicana). O delineamento foi inteiramente casualizado com 4 tratamentos em triplicata, sendo, TCont: dieta controle; TPre: dieta com prebiótico (casca de soja: 5%/Kg de ração); TPro: dieta com probiótico (B. cereus e B. subtilis: 0,5%/Kg de ração) e TSim: dieta com simbiótico (níveis de probiótico e prebiótico juntos). As rações formuladas tinham 30% PB e 3000 kcal/ED/Kg. O período experimental foi de 70 dias nos quais os peixes foram alimentados com 3% PV de ração e forragem ofertada a vontade. Foram avaliados os parâmetros de desempenho zootécnico, conversão alimentar aparente, índices corpóreos, análise centesimal corporal e parâmetros hematológicos. Para análise estatística foi realizada ANOVA com P

Aim: The present study aimed to evaluate the in vitro antimicrobial activity of hydroalcoholic and aqueous extracts from leaves of P. guajava on four bacterial and two fungal samples to determine the range of minimum inhibitory concentration of the extracts. Material and Methods: The antimicrobial activity of extracts of different polarities was compared using the agar dilution method. Differences in susceptibility to the active ingredient could be observed. Results: The results showed that the hydroalcoholic extract was active against Escherichia coli (1024 μg/ml) and Bacillus cereus (900 μg/ml). The aqueous extract showed no antimicrobial activity. Conclusions: Despite demonstrating antimicrobial efficiency, the P. guajava extract may be insufficient or may require a higher concentration to be fully effective.Uniterms: Psidium. Products with antimicrobial action. Traditional medicine.

Tese de mestrado em Biologia Molecular e Genética, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2016 Submitted by Cristina Manessiez (camanessiez@fc.ul.pt) on 2016-09-09T14:19:43Z No. of bitstreams: 1 ulfc118612_tm_Pedro_Fonseca.pdf: 1663371 bytes, checksum: c63225b6ca129653561b67d5070ebcc6 (MD5) Made available in DSpace on 2016-09-09T14:19:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ulfc118612_tm_Pedro_Fonseca.pdf: 1663371 bytes, checksum: c63225b6ca129653561b67d5070ebcc6 (MD5) Previous issue date: 2016

O arroz é um alimento amplamente consumido pela população mundial, que devido a sua composição nutricional pode ser um meio de cultura para bactérias. Diferentes publicações internacionais tem assinalado a Bacillus cereus como o micro-organismo que tem maior prevalência no arroz. Esporos desta bactéria podem contaminá-lo sendo capazes de sobreviver aos processos térmicos e, dependendo de fatores intrínsecos e eivtrínsecos, podem produzir toxinas causadoras de doenças. Pesquisas avaliaram as condições microbiológicas do arroz, mas pouco foi estudado da multiplicação de B. cereus em arroz vitaminado, assim o principal objetivo nesta pesquisa foi avaliar a ocorrência de B. cereus em arroz branco e enriquecido com minerais e vitaminas, além de determinar a influência do enriquecimento do arroz, na multiplicação bacteriana. A ocorrência de B. cereus em um total de 90 amostras de arroz cru, distribuídas entre arroz branco, Ultra Rice® e vitaminado, foi avaliada conforme a Resolução n° 12 de 2001, da ANVISA (Agência Nacional de Vigilância Sanitária). As contagens do patógeno variaram entre 1,0 x 102 e 9,6 x 102 UFC/g, inferiores ao limite máximo de 3,0 x 10 3 UFC/g exigidos pela legislação. Vinte e seis amostras apresentaram isolados típicos de B. cereus em meio MYP (Manitol-Egg Yolk-Polymixyn) e 24 isolados foram confirmados pelos testes morfológicos, bioquímicos e, também, pela identificação genética, realizada pela técnica de PCR convencional para a detecção do gene 16S ribossomal do B. cereus, o que corresponde a prevalência de 29% de B. cereus. O arroz Ultra Rice® apresentou o maior número de amostras (11) contendo isolados de B. cereus, seguido do arroz vitaminado (9) e do arroz branco (4). A multiplicação de B. cereus foi avaliada em arroz branco e vitaminado, ambos inoculados com cerca de 1,0 x 10 3 UFC/g de esporos, antes da cocção, sob condições domésticas. O arroz cozido foi armazenado às temperaturas de 10 °C e 25 °C e nos tempos de 24 h, 48 h, 72 h, 96 h e 120 h. Quanto ao tempo de armazenamento, verificou-se que os valores de μ para o arroz branco e para o arroz vitaminado ambos adicionados de esporos de B. cereus não diferiram (p>0,05) entre si. Por outro lado, houve diferença (p 0.05) between these types of rice and control the white rice not added spores. However, it was found that the μ values for the types of rice added spores B. cereus showed difference (p

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2017-02-23T14:03:29Z No. of bitstreams: 1 Juliana Maria Aderaldo Vidal.pdf: 784041 bytes, checksum: f927beb63f5c3c304d4098214b0dd629 (MD5) Made available in DSpace on 2017-02-23T14:03:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Juliana Maria Aderaldo Vidal.pdf: 784041 bytes, checksum: f927beb63f5c3c304d4098214b0dd629 (MD5) Previous issue date: 2015-07-27 Bacteria with probiotic effect have been used in marine shrimp production like antibiotics substitution, contributing to the health of the host, by antagonistic action to pathogenic micro-organisms or by competition for space and nutrients, and improving appetite and lead the further growth of the animals. When isolated from the host itself is safe to use, being able to adhere and colonize the intestine. The objective was to isolate probiotic bacteria from intestine of juvenile Litopenaeus vannamei and evaluate the effects of probiotic administration in the performance of cultivated animals experimental challenged infection. Intestinal bacteria were from cultivated shrimp in oligohaline water and saltwalter in dry and rainy seasons, and confronted with Vibrio parahaemolyticus, Vibrio vulnificus, Vibrio alginolyticus and Aeromonas hydrophila. Bacteria showed antimicrobial effect have been identified by molecular biology. Twenty-nine isolates showed antagonistic effect at least one of the tested pathogens. The species that most occurred was Bacillus cereus, the producing of the largest zones of inhibition to the V. alginolyticus and V. vulnificus. The bacterium Citrobacter freundii, from oligohaline water showed the best antimicrobial effect before the four pathogens. The probiotic Bacillus cereus was tested in diet for marine shrimp post-larvae against challenge with V. parahaemolyticus, and V. alginolyticus which evaluated the growth performance of animals, colonization capacity of the probiotic bacteria, pathogens count and histopathological lesions. The use of probiotic had no effect on animals survival, but not for treatments which was used probiotic had a lower weight gain. Animals fed dietary supplementation of probiotic had lower pathogens count those fed without the use. Histopathological lesions were observed in organs and tissues of animals. It can be concluded that it was possible to isolate bacteria having probiotic effect of marine shrimp intestine, wherein the strain Bacillus cereus demonstrated high capacity to colonize the host itself, causing a significant reduction of pathogens. Bactérias com efeito probiótico contribuem para saúde de camarões marinhos em cultivo, em substituição aos antibióticos, exercendo ação antagonista à micro-organismos patogênicos ou por competição por espaço e nutrientes, além de melhorar o apetite levando a um maior crescimento dos animais. Quando isolados do próprio camarão seu uso é seguro, por serem capazes de aderir ou colonizar o intestino destes. Neste sentido, objetivou-se isolar bactérias probióticas do intestino de juvenis de Litopenaeus vannamei e avaliar os efeitos da sua administração sobre o desempenho dos animais cultivados frente infecção experimental. Foram isoladas bactérias do intestino de camarão cultivado em águas oligohalina e salgada, em períodos seco e chuvoso, e confrontadas com Vibrio parahaemolyticus, Vibrio vulnificus, Vibrio alginolyticus e Aeromonas hydrophila, em testes in vitro. As bactérias que produziram efeito antimicrobiano foram identificadas através de biologia molecular.Vinte e nove isolados apresentaram efeito antagônico a pelo menos um dos patógenos testados. A espécie que mais ocorreu foi Bacillus cereus, produzindo os maiores halos de inibição frente ao V. alginolyticus e V. vulnificus. A bactéria Citrobacter freundii, proveniente de água oligohalina apresentou melhor efeito antimicrobiano, perante os quatro patógenos. O probiótico Bacillus cereus foi testado em ração para pós-larvas de L. vannamei, frente a desafio com V. parahaemolyticus, e V. alginolyticus quando avaliou-se o desempenho zootécnico dos animais, a capacidade de colonização das bactérias probióticas, contagem de patógenos e lesões histopatológicas. O uso do probiótico não influenciou nas taxas de sobrevivência dos animais, porém nos tratamentos em que não se utilizou probiótico houve menor ganho de peso. Os animais que receberam ração suplementada de probiótico, tiveram contagem de patógenos inferior aqueles alimentados sem o uso. Não foram observadas lesões histopatológicas nos órgãos e tecidos dos animais. Concluiu-se que é possível isolar bactérias com efeito probiótico do intestino do camarão marinho, sendo que a cepa de Bacillus cereus demonstrou maior capacidade de colonizar o próprio hospedeiro, diminuindo os patógenos.

Objetivo: O objetivo deste estudo foi monitorizar o número de Bacillus cereus e de bolores em especiarias (canela, cominhos, noz moscada e colorau) e ervas aromáticas desidratadas (salsa, orégãos e coentros), acondicionadas em embalagem de marca própria dos estabelecimentos de venda (marcas brancas).

Submitted by Élida Maeli Fernandes Quirino (maely_sax@hotmail.com) on 2018-05-15T17:53:27Z No. of bitstreams: 1 JOSÉ NILDO VIEIRA DEODATO - DISSERTAÇÃO PPGSA PROFISSIONAL 2015..pdf: 1086003 bytes, checksum: 950808ed6f7e78ee6247df21a718613b (MD5) Made available in DSpace on 2018-05-15T17:53:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JOSÉ NILDO VIEIRA DEODATO - DISSERTAÇÃO PPGSA PROFISSIONAL 2015..pdf: 1086003 bytes, checksum: 950808ed6f7e78ee6247df21a718613b (MD5) Previous issue date: 2015-03-20 As cactáceas constituem um importante elemento da paisagem, apresentando caules suculentos, cobertos por espinhos de diversas formas, tamanhos e dimensões, junto a outras espécies de cactáceas, formam a paisagem típica da região semiárida do Brasil. O facheiro é uma cactácea xerófila, robusta, pouco ramificada, de cor verde-escura, armada de espinhos agudos; com flores grandes isoladas e altas. A proposta do trabalho foi obter farinhas da casca e da polpa do facheiro e determinar as características microbiológica, físico-químicas e toxicológicas, a fim de utilizar no desenvolvimento de produtos da panificação, aceitáveis pelos consumidores. Foram preparadas quatro formulações (5, 10, 15 e 20%), variando-se a quantidade adicionada à formulação básica das broas. Utilizou-se o Teste de aceitação com escala hedônica estruturada de nove pontos, incluindo questões sobre consumo e compra do produto. Os resultados das análises microbiológicas atenderam aos padrões exigidos pela legislação vigente, apresentando resultados negativos para coliforme a 45° C, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, bactérias aeróbios mesófilos, bolores e leveduras e Salmonella sp. Nos resultados físicoquímicos obtidos a partir da casca e polpa do facheiro, apresentaram baixos valores de umidade e elevado teor de cinzas, fibras alimentares e lipídeos e quantidades razoáveis de proteínas. Nenhum efeito tóxico foi observado. A farinha de facheiro como substituição a farinha tradicional produziram broas pretas sensorialmente aceitáveis em relação à aceitabilidade global e intenção de compra dos provadores. Comprovando a eficácia na produção da farinha, e a qualidade higiênica sanitária das mesmas, podendo ser utilizada em formulações de inúmeros alimentos, sem comprometer a qualidade de seus produtos junto a saúde do consumidor. The cacti are an important element of the landscape, with succulent stems, covered with spines of many shapes, sizes and dimensions, where it grows in rocky soils and, along with other cactus species, form the typical landscape of the semi-arid region of Brazil. The facheiro (Pilosocereus chrysostele) is a xerophytic cactus, rugged, sparsely branched, dark green color, armed with sharp thorns; with large isolated and tall flowers. he purpose of this study was to develop a study to obtain flour from the stems and bark facheiro in four different temperatures and determine the microbiological characteristics, physicochemical and toxicological in order to investigate the potential use in the food industry and check for the possibility of developing new products of baking, acceptable by consumers. Four formulations (5, 10, 15 and 20%), by varying the amount added to the basic formulation of the cookie, in order to support product development in the field of baking, the bread black production process. We used the acceptance test with hedonic scale of nine points, including questions about consumption and purchase. The results of the microbiological analyzes in the four flours met the standards required by law, with negative results for coliform 45 ° C, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, aerobic mesophilic bacteria, molds, yeasts and Salmonella sp. In physical-chemical results obtained from the pulp and peel facheiro showed lower values of moisture and high ash content, fiber and lipids and reasonable amounts of protein. No toxic effects were observed, indicating the safety of this product for supplementation in food. Facheiro flour as a replacement to traditional flour produced black bagel sensorial quality in the overall acceptability and purchase intent of tasters. Proving the efficiency in the production of flour, and sanitary hygienic quality of the same and can be used in many food formulations without compromising the quality of their products to consumers' health. Keywords: Facheiro wheat product development.

The participation in proficiency testing (PT) is essential for testing laboratories to prove their technical competence. The aim of this study was to produce a quantitative reference material (RM) for PT containing Bacillus cereus in milk powder. A sterile solution of 10% skim milk containing 100 mM sucrose was contaminated with a B. cereus strain in a specific concentration. The homogenized matrix was distributed into vials and freeze-drying. The batch produced was considered sufficiently homogeneous assigning a target standard deviation of 0.25. The RM was stable at ≤ -70 ºC and (-20 ± 4) ºC for 1,058 and 60 days, respectively. In the evaluation of temperatures for the transport of material, the RM was stable at 4, 25 and 35 ºC during four days. It is concluded that the batch produced had all the necessary requirements to be used as items of PT. A participação em ensaios de proficiência é essencial para que um laboratório de ensaio possa ter seu desempenho avaliado por meio de uma comparação interlaboratorial. O objetivo deste trabalho foi produzir um material de referência (MR) quantitativo para EP contendo Bacillus cereus em leite em pó. Uma solução estéril de leite desnatado a 10% contendo 100 mM de sacarose foi contaminada com uma cepa de B. cereus em uma concentração previamente determinada. A matriz foi homogeneizada, distribuída em frascos e liofilizada. O lote produzido foi considerado suficientemente homogêneo atribuindo-se um desvio-padrão alvo de 0,25 log10 UFC/mL. O MR apresentou-se estável a ≤ -70 ºC e (-20 ± 4) ºC durante 1.058 e 60 dias, respectivamente. Na avaliação da influência de diferentes temperaturas para o transporte deste material, o MR se apresentou estável a 4 ºC, 25 ºC e 35 ºC durante o período de quatro dias de estudo. Conclui-se que o lote produzido apresentou todos os requisitos necessários para ser utilizado como itens de EP.

Mestrado em Biotecnologia - Biotecnologia Industrial e Ambiental Os endósporos bacterianos representam riscos significativos em muitas atividades humanas, pelo que é fundamental descobrir formas de inativar estas estruturas. A terapia fotodinâmica (PDT) têm-se revelado uma alternativa promissora para inativar microrganismos patogénicos. Com este trabalho pretendeu-se avaliar o efeito da alta pressão como coadjuvante do efeito fotodinâmico, na inativação de endósporos de Bacillus cereus, usados como modelo biológico de endósporos bacterianos. Endósporos de B. cereus foram preparados em meios de esporulação e conservados a -20 °C até à realização dos ensaios. Como fotossensibilizador (PS), utilizou-se uma porfirina tetracatiónica (Tetra-Py+-Me), aplicada nas concentrações de 5 e 20 􀈝M. Os endósporos foram incubados durante 30 min a 37 °C no escuro, na presença de PS, para permitir a adsorção do PS ao material do endósporo. A potência da luz branca usada na irradiação foi 1690 W.m-2. O efeito dos vários tratamentos foi avaliado por comparação dos resultados com os valores iniciais da concentração de endósporos viáveis na suspensão não tratada. As variáveis em estudo foram a concentração de PS, a pressão aplicada, a temperatura de incubação e o tempo de exposição à luz branca. Em cada experiência foram incluídos os seguintes controlos: controlo claro (exposto à luz sem PS), controlo escuro (com PS mas não irradiado), controlo de pressão (pressurizado sem PS e não irradiado) e controlo escuro pressurizado (exposição ao PS a 300 MPa, sem exposição à luz). A concentração de endósporos viáveis antes e depois de cada tratamento foi determinada por contagem de colónias após sementeira em meio sólido. O tempo de congelação do stock de endósporos afetou a adsorção de PS. Alíquotas com períodos de armazenamento a - 20 °C, entre 15 e 43 dias, produziram valores de adsorção de PS entre 3,63×105 e 8,01×105 moléculas de PS.UFC-1, quando expostas a 5 μM de PS. O aumento da temperatura de préincubação no escuro de 37 para 50 °C, resultou no aumento da quantidade de PS adsorvido de 13,1×105 para 26,3×105 moléculas de PS.UFC-1, na presença de 5 μM de PS. A aplicação de pressão (300 MPa, durante 30 minutos) resultou num aumento de 30 a 90% na quantidade de PS ligado aos endósporos nas experiências realizadas com 5 μM de PS. Com 20 μM de PS, os valores de adsorção com pressurização foram 2,3 a 76,1 vezes superiores aos obtidos com pré-exposição ao PS à pressão atmosférica. Os fatores de inativação máximos foram registados para o tratamento correspondente à aplicação de pressão durante o período adsorção do PS, e variou entre 1,1 e 2,4 log. Embora os fatores de inativação obtidos sejam ainda modestos, os resultados demonstram que a aplicação de alta pressão melhora a ligação do PS aos endósporos e pode funcionar como um fator coadjuvante da inativação fotodinâmica de endósporos bacterianos. Bacterial endospores represent significant risks in many human activities, therefore it is essential to find ways to inactivate these structures. Photodynamic therapy (PDT) have proven to be a promising alternative to inactivate pathogenic microorganisms. The aim of this work was to evaluate the effect of high pressure as an adjunct to photodynamic effect in the inactivation of Bacillus cereus endospores, used as biological models of bacterial endospores. Endospores of B. cereus were prepared in sporulation culture media, and stock suspensions were preserved at – 20 ºC. A tetracationic porphyrin (Tetra-Py+-Me) applied at concentrations 5 and 20 μM was used as photosensitizer (PS). Endospores were incubated in the dark for 30 min at 37 °C, in the presence of PS to allow the adsorption of the PS to the endospore material. For the assessment of the photodynamic inactivation, samples were irradiated with white light of 1690 W.m-2 of intensity. The effect of the different treatments was assessed by comparing the results with the initial concentration of viable endospores in the untreated endospore suspension. The variables assessed in this study were PS concentration, applied pressure, incubation temperature and white light exposure time. Each experiment included the following controls: light controls (exposed to light without PS), dark controls (with PS but not irradiated), pressurized controls (pressure without exposure to light or PS) and pressurized dark controls (PS exposure at 300 MPa, without irradiation). The concentration of viable endospores before and after each treatment was determined by colony counting after pour-plating in solid medium. The storing time of the endospore stock affected the uptake of PS. Aliquots with periods of storage at -20 °C between 15 and 43 days produced PS adsorption values between 3.63×105 and 8.01×105 PS molecules.UFC-1, when exposed to 5 μM of PS. An increase in the pre-incubation temperature, from 37 to 50 °C, improved the adsorption of PS, which increased from 13.1×105 to 26.3×105 PS molecules.UFC-1, in the presence of 5 μM of PS. Pressurized samples (300 MPa for 30 minutes in the presence of PS) showed values of PS adsorption 30 to 90% higher than the controls, in which the dark exposure to 5 μM of PS was conducted at atmospheric pressure. With 20 μM of PS, pressured treatments revealed 2.3 to 76.1-fold increases in PS binding. The maximum inactivation factors were observed in the treatment corresponding to photodynamic inactivation after high pressure processing during PS adsorption and ranged between 1.1 and 2.4 log. Although the obtained inactivation factors are still modest, the results show that the application of high pressure improves the binding of PS to endospores and can function as a co-factor in photodynamic inactivation of bacterial endospores.

Dissertação para obtenção do Grau de Mestre em Tecnologia e Segurança Alimentar Atualmente o grande desafio do sector alimentar é o de restabelecer a confiança dos consumidores, dando-lhes a conhecer todas as medidas de prevenção e controlo utilizadas nas atividades de manuseamento alimentar. Embora genericamente conhecidas como toxinfeções alimentares, as doenças transmitidas por alimentos são classificadas como uma doença que resulta da ingestão de alimentos contaminados com agentes etiológicos prejudiciais. O Bacillus cereus é um bacilo Gram-positivo, produtor de esporos que tem como reservatório natural o solo. Este microrganismo é reconhecido como um agente etiológico de doenças de origem alimentar há mais de 40 anos. Os surtos associados ao Bacillus cereus estão relacionados com várias matrizes alimentares tais como arroz e massas. A presença de grande quantidade de microrganismos (≥106) no alimento é indicativo de crescimento e proliferação do organismo constituindo deste modo, um potencial perigo para a saúde. O arroz é um cereal que faz parte da dieta habitual dos habitantes de todo o mundo e é também o alimento que tem estado mais envolvido em toxinfeções alimentares associadas ao Bacillus cereus. O objetivo principal deste trabalho de investigação, realizado na empresa SGS, é a implementação de uma metodologia que permite a pesquisa e enumeração de Bacillus cereus no arroz e produtos à base de cereais. Esta metodologia tem por base um procedimento específico (EN ISO 7932:2005), dando resultados com maior rapidez que o método tradicional (ISO 7932:2004) e foi desenvolvido pela empresa Bio-Rad®. Os resultados dos testes realizados a 15 amostras alimentares, dos quais as contagens de colónias em placa de MYP® e BCM®, visualização da produção de β-Hemolisina em agar sangue -5%- (Bio-rad®) e resultados do perfil bioquímico identificados em galerias API 50 CH® e API 20 E® (BioMérieux®), foram concordantes em ambos os métodos o que permite que o novo método implementado seja validado.

Bacillus cereus is a thermoduric bacteria, spore former and able to multiply in freezing temperatures. It may cause two food-borne illnesses: emetic and diarrhoeal syndromes. Besides of epidemiologic issues, B. cereus causes technological defects on dairy products, due to proteases and lipases production. The presence of B. cereus in dairy products has been reported by researches worldwide as those caused defects associated to the product contamination by these bacteria. The present review aim to explore the main aspects related on B. cereus presence in dairy products. To this end, we selected the classic and innovative work about B. cereus in several databases, including, Science Direct, SciELO, Scirus and Google Scholar. Bacillus cereus é uma bactéria termodúrica, formadora de esporos, capaz de se multiplicar em temperatura de refrigeração. Pode causar dois tipos de doenças de origem alimentar: a síndrome emética e a síndrome diarréica. Além do aspecto epidemiológico, B. cereus causa defeitos tecnológicos em produtos lácteos, relacionados com a produção de lipases e proteases. A presença de B. cereus em produtos lácteos vem sendo relatada por pesquisas feitas em vários países, bem como os defeitos tecnológicos associados à contaminação dos produtos por essa bactéria. Destacam-se, na presente revisão, os principais aspectos relacionados à presença de B. cereus em produtos lácteos. Para tanto, foram selecionados trabalhos relevantes e inovadores sobre B. cereus em várias bases de dados, entre elas, Science Direct, SciELO, Scirus e Google Acadêmico.