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Submitted by Natália Alves de Freitas null (36903826882) on 2017-04-19T02:21:52Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Mestrado - Natália Alves de Freitas .xps: 1038194 bytes, checksum: 9b9ffa985a298e87c4597326e35d35d2 (MD5) Rejected by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: A versão final da dissertação/tese deve ser submetida no formato PDF (Portable Document Format). O arquivo PDF não deve estar protegido e a dissertação/tese deve estar em um único arquivo, inclusive os apêndices e anexos, se houver. Por favor, corrija o formato do arquivo e realize uma nova submissão. Agradecemos a compreensão. on 2017-04-19T13:51:40Z (GMT) Submitted by Natália Alves de Freitas (36903826882) on 2017-04-24T14:00:45Z No. of bitstreams: 1 23 01 17 - Dissertação Mestrado - Natália Alves de Freitas.pdf: 939757 bytes, checksum: 0f0aee5e382d6ac7dbe20e516c55609c (MD5) Rejected by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: Incluir o número do processo de financiamento nos agradecimentos da dissertação/tese. Corrija esta informação e realize uma nova submissão com o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-04-25T14:48:08Z (GMT) Submitted by Natália Alves de Freitas (36903826882) on 2017-05-17T18:33:31Z No. of bitstreams: 2 23 01 17 - Dissertação Mestrado - Natália Alves de Freitas.pdf: 939757 bytes, checksum: 0f0aee5e382d6ac7dbe20e516c55609c (MD5) 17 05 17 - Dissertação Mestrado - Natália Alves de Freitas - agardecimento fapesp.pdf: 837369 bytes, checksum: 72f718b50f1e46e6daf15c4d33947b54 (MD5) Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-05-19T13:08:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 freitas_na_me_bot.pdf: 837369 bytes, checksum: 72f718b50f1e46e6daf15c4d33947b54 (MD5) Made available in DSpace on 2017-05-19T13:08:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 freitas_na_me_bot.pdf: 837369 bytes, checksum: 72f718b50f1e46e6daf15c4d33947b54 (MD5) Previous issue date: 2017-01-21 Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Introdução: Na fisiopatologia da pré-eclâmpsia (PE) há importante participação de mediadores inflamatórios, cujas concentrações encontram-se alteradas tanto na placenta como no sangue materno. Entretanto, o efeito da pré-eclâmpsia nos imunocomponentes do leite materno ainda é pouco conhecido. Objetivo: Investigar se a PE altera os níveis de citocinas no leite materno. Método: Estudo prospectivo longitudinal de corte transversal, envolvendo puérperas cujo parto foi realizado na Maternidade da Faculdade de Medicina de Botucatu – UNESP, em 2014-2016. Critério de inclusão: diagnóstico de PE, gestação única, sorologias negativas, ausência de diabetes e de corioamnionite, sem uso de drogas ilícitas e/ou álcool, recém-nascido sem malformação congênita múltipla. Critério de exclusão: não obtenção da quantidade necessária de colostro, diagnóstico de mastite, uso contínuo de medicamento pela puérpera. Foram estudadas 228 puérperas, divididas em 2 grupos: PE (n=114) e Normotensas (controle, n=114), pareados pela idade gestacional, o grupo PE foi subdividido em PE de início precoce e tardia. O colostro foi coletado entre 24-72 horas pós-nascimento e o leite maduro no final do primeiro mês. Foram dosadas as citocinas (IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12 e TNF-α) por citometria de fluxo. Teste Qui-quadrado ou Exato de Fisher, teste t Student ou Mann-Whitney, bem como um modelo linear generalizado com distribuição gama foram utilizados para analisar as diferenças entre grupos e as alterações dependentes do tempo. Resultados: A maioria das puérperas teve PE tardia (≥ 34 semanas) e a idade gestacional média foi de 36 semanas. No colostro de mães com PE foram detectados níveis aumentados de IL-1 e IL-6, e menores níveis de IL-12 em comparação ao grupo controle. Alterações ocorreram durante a lactação e menores níveis e IL-6 e IL-8 foram encontrados no leite maduro de mães com PE. A PE de início precoce associou-se a valores aumentados de IL-6 no colostro e no leite maduro. Conclusão: A pré-eclâmpsia está associada com aumento dos níveis de citocinas inflamatórias no colostro e menores níveis de IL-6 e IL-8 no leite maduro. Os níveis de IL-6 no leite materno são maiores na pré-eclâmpsia precoce em comparação à tardia. Introduction: IInflammatory mediators have an important role In the pathophysiology of preeclampsia (PE), and increased levels of these mediators have been found in the placenta and maternal circulation. However, the effect of preeclampsia on immune-components of breast milk is still unknown. Objective: To investigate whether PE affects breast milk cytokines levels. Method: Prospective longitudinal cross-sectional study involving nursing mothers whith childbirth at Maternity of the Botucatu Medical School - UNESP, during 2014-2016. Inclusion criteria: diagnosis of PE, single gestation, negative serologies, no history of diabetes, chorioamnionitis, drug use or alcohol consumption, and newborn without multiple congenital anomalies. Exclusion criteria: Insufficient volume of colostrum, mastitis, continuous use of medication by the mother. A total of 228 mothers were included and divided into 2 groups: PE (n = 114) and Normotensive (control, n = 114). Groups were matched by gestational age and PE was further divided into early and late PE. Colostrum was collected between 24-72 hours postpartum and mature milk at the end of the first month. IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12 and TNF-α were measured by flow cytometry. Chi-square or Fisher's Exact test, Student t-test or Mann-Whitney, and a general linear model with Gama distribution were used to analyse diffrences between groups and changes dependet on time. Results: Most preeclamptic women had late onset PE (≥ 34 weeks) and the mean gestational age was 36 weeks. In colostrum of PE mothers the levels of IL-1 and IL-6 were significantly increased, whereas IL-12 was decreased, compared to control group. Changes occured during lactation and lower concentrations of IL-6 and IL-8 were found in mature milk of PE mothers. Early-onset PE was associated with increased IL-6 values in colostrum and mature milk. Conclusion: Preeclampsia was associated with higher levels of pro-nflammatory cytokines in colostrum and lower levels of IL-6 and IL-8 in mature milk. The levels of IL-6 in breast milk are increased in early onset PE. FAPESP: 2014/12784-9

JUSTIFICATIVA E OBJETIVOS: A Síndrome da Resposta Inflamatória Sistêmica é uma ocorrência habitual em cirurgias cardíacas com circulação extracorpórea (CEC). O objetivo deste estudo foi avaliar os níveis sistêmicos e pulmonares de citocinas e a correlação com a função pulmonar em pacientes submetidos à revascularização miocárdica (RM) com CEC. MÉTODOS: O estudo foi aprovado pela Comissão de Ética institucional, com a avaliação de 13 pacientes submetidos à RM com CEC. Após a indução anestésica, ao término da CEC, realizaram-se dosagens plasmáticas e no lavado broncoalveolar de IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-α. Foram avaliados o tempo de CEC e de cirurgia, a relação PaO2/FiO2, o gradiente alvéolo-arterial de oxigênio (GA-aO2), o shunt e a complacência pulmonares. Os resultados foram submetidos à análise de variância para medidas repetidas (*p < 0,05) e coeficiente de correlação de Spearman. RESULTADOS: Observaram-se aumento dos níveis de citocinas no plasma e no lavado broncoalveolar após a CEC e relação direta entre o aumento da IL-1β e a diminuição da complacência pulmonar (p = 0,0439), assim como relação inversa entre o aumento da IL-10 e a redução da complacência (p = 0,0325). O aumento da IL-6 teve relação direta com o tempo de CEC (p = 0,012), enquanto o aumento da IL-8 teve relação direta com o tempo de cirurgia (p < 0,0001). Os níveis de IL-1β, IL-8 e TNF-α foram maiores no LBA em relação ao plasma. CONCLUSÕES: Ocorre aumento dos níveis de citocinas no plasma e lavado broncoalveolar após a CEC e há correlação entre o aumento dos níveis de citocinas e o tempo de CEC e de cirurgia e as alterações na complacência pulmonar. BACKGROUND AND OBJECTIVES: Systemic inflammatory response syndrome is commonly observed in coronary artery bypass grafts (CABG) with cardiopulmonary bypass (CB). The objective of this study was to evaluate the systemic and pulmonary levels of cytokines and their correlation with lung function in patients undergoing myocardial revascularization (MR) with CB. METHODS: This study was approved by the Institutional Ethics Committee, and 13 patients undergoing MR with CB were evaluated. After anesthetic induction and at the end of CB, plasma and bronchoalveolar lavage levels of IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, and TNF-α were determined. The dur ation of CB and surgery, PaO2/FiO2 ratio, alveolar-arterial oxygen gradient (A-a gradient), shunt, and lung compliance were evaluated. Results were submitted to analysis of variance for repeated measurements (*p < 0.05) and Spearman's correlation coefficient. RESULTS: We observed increased levels of cytokines in plasma and bronchoalveolar lavage after CB and a direct relationship between the increase in IL-1β and decrease in lung compliance (p = 0.0439), as well as the inverse relationship between the increase in IL-10 and a decrease in compliance (p = 0.0325). The increase in IL-6 was directly related to the duration of CB (p = 0.012), while the increase in IL-8 was directly related to the duration of surgery (p < 0.0001). Levels of interleukin-1β, IL-8, and TNF-α in bronchoalveolar lavage were higher than in plasma. CONCLUSIONS: There is an increase in cytokine levels in plasma and bronchoalveolar lavage after CB, as well as a correlation between increased cytokine levels and CB duration and surgery and changes in lung compliance. JUSTIFICATIVA Y OBJETIVOS: El Síndrome de la Respuesta Inflamatoria Sistémica es algo habitual en las cirugías cardíacas con circulación extracorpórea (CEC). El objetivo de este estudio fue evaluar los niveles sistémicos y pulmonares de citocinas y la correlación con la función pulmonar en los pacientes sometidos a la revascularización miocárdica (RM) con CEC. MÉTODOS: El estudio fue aprobado por la Comisión de Ética Institucional, con la evaluación de 13 pacientes sometidos a la RM con CEC. Después de la inducción anestésica al término de la CEC, se realizaron dosificaciones plasmáticas y también en el lavado broncoalveolar de IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10 y TNF-α. Se evaluaron el tiempo de CEC y de cirugía, la relación PaO2/FiO2, el gradiente alvéolo-arterial de oxígeno (GA-aO2), el shunt y la complacencia pulmonares. Los resultados fueron sometidos al análisis de variancia para medidas repetidas (*p < 0,05) y al coeficiente de correlación de Spearman. RESULTADOS: Se observó un aumento en los niveles de citocinas en el plasma y en el lavado broncoalveolar después de la CEC y una relación directa entre el aumento de la IL-1β y la disminución de la complacencia pulmonar (p = 0,0439), como también una relación inversa entre el aumento de la IL-10 y la reducción de la complacencia (p = 0,0325). El aumento de la IL-6 tuvo una relación directa con el tiempo de CEC (p = 0,012), mientras que el aumento de la IL-8 tuvo una relación directa con el tiempo de cirugía (p < 0,0001). Los niveles de IL-1β, IL-8 y TNF-α fueron mayores en el LBA con relación al plasma. CONCLUSIONES: Ocurre un aumento de los niveles de citocinas en el plasma y en el lavado broncoalveolar después de la CEC, con una correlación entre el aumento de los niveles de citocinas y el tiempo de CEC y de cirugía, y las alteraciones en la complacencia pulmonar.

As citocinas vem sendo estudadas como biomarcadores inflamatórios e podem estar envolvidas desde a patogênese até a neurotoxicidade no Acidente Vascular Cerebral (AVC). Portanto diversos estudos vêm sendo conduzidos para inibir ou estimular a produção destes biomarcadores após AVC, com o objetivo de melhorar a progressão das consequências da doença. Os exercícios físicos alteram as citocinas circulantes, e podem auxiliar neste processo de recuperação no período pós-AVC. Nosso objetivo foi realizar uma revisão sistemática e metanálise sobre os efeitos do exercício físico nas citocinas após AVC, e, em seguida, analisar os níveis de citocinas circulantes e verificar a correlação com a gravidade da doença e força muscular. Para a revisão sistemática foram utilizadas sete bases de dados em busca de artigos com estratégia Patient-Intervention-Comparison- Outcomes-Study (PICOS). Para avaliação do risco de viés utilizamos os critérios descritos no Cochrane Handbook for Systematic Review of Interventions e a escala Physiotherapy Evidence Database e posteriomente foi realizada metanálise dos estudos com desfechos homogêneos. Nos pacientes na fase aguda de AVC os níveis de citocinas foram avaliados por meio dos métodos Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and Cytometric bead array (CBA). Estes níveis foram comparados entre pacientes e controles e correlacionados com força muscular manual e gravidade da doença avaliada pelo NIHSS. Na revisão obtivemos 14489 artigos nas bases de dados, sendo incluídos apenas 5 de acordo com critérios. Dos cinco artigos selecionados todos analisaram o marcador IL-6. Dois ensaios randomizados analisaram os níveis séricos de TNF-α. A análise qualitativa destes estudos mostrou divergências nas metodologias e dos resultados. Três estudos foram classificados para metanálise. Nenhum dos três ensaios randomizados correlacionaram os níveis das citocinas a nenhum desfecho clínico ou funcional, porém pode haver redução dos níveis de IL-6 e TNF- quando analisados de forma associada. No estudo experimental, foram avaliados 17 pacientes com AVC na fase aguda. Foi observado redução dos níveis séricos de TNF- e aumento de IL-6 e IL-10 no grupo AVC comparado ao controle. Observamos maior tendência na resposta anti-inflamatória dos pacientes. Além disso, os pacientes apresentaram uma baixa correlação positiva entre os níveis séricos de IL-6 e IL-10. Uma associação foi constatada entre IL12p70 com NIHSS e força de preensão palmar do lado afetado; IL-1β com força de preensão palmar do lado afetado; IL-6 com força de preensão palmar do lado nãoafetado. Portanto concluímos que a revisão e metanálise mostrou que apesar dos indícios de redução de IL-6 e TNF- associado ao exercício, a quantidade de estudos relacionados ao tema ainda é reduzida. A comparação entre pacientes e controles apontou correlação entre algumas citocinas e escala de gravidade e força de preensão palmar. Cytokines has studied as inflammatory biomarkers and can be involved from pathogenesis to neurotoxicity in stroke. Therefore, several studies have been conducted to inhibit or stimulate the production of these biomarkers after a stroke, with the objective of improving the progression of the consequences of the disease. The physical exercises alter circulating cytokines, and can assist in this recovery process in the post-stroke period. Our objective was perform a systematic review and meta-analysis of the physical exercise effects on cytokines after stroke, and then analyze the levels of circulating cytokines and to verify the correlation with the severity of the disease and muscle strength. For the systematic review, seven databases were used in search of articles with the Patient-Intervention-Comparison- Outcomes-Study (PICOS) strategy. To assess the risk of bias, we used the criteria described in the Cochrane Handbook for Systematic Review of Interventions and the Physiotherapy Evidence Database scale and subsequently a meta-analysis of the studies with homogeneous outcomes was performed. In patients with acute stroke, cytokine levels were assessed using the Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and Cytometric bead array (CBA) method. These levels were compared between patients and controls and correlated with manual muscle strength and disease severity assessed by NIHSS. In the review, we obtained 14489 articles in the databases, of which only 5 were included according to criteria. Five selected articles, all analyzed the IL6. Two randomized trials analyzed serum levels of TNF-α. The qualitative analysis of these studies showed differences in methodologies and results. Three studies were classified for metaanalysis. None of the three randomized trials correlated cytokine levels with any clinical or functional outcome, but there may be a reduction in IL-6 and TNF- levels when analyzed in an associated way. In the experimental study, 17 patients with stroke in the acute phase were evaluated. A reduction in serum TNF- levels and an increase in IL-6 and IL-10 were observed in the stroke group compared to the control group. We observed a greater tendency in the patients' anti-inflammatory response. In addition, patients had a low positive correlation between serum IL-6 and IL-10 levels. An association was found between IL12p70 with NIHSS and hand grip strength on the affected side; IL-1β with handgrip strength on the affected side; IL-6 with handgrip strength on the unaffected side. Therefore, we conclude that the review and meta-analysis showed that despite the signs of reduced IL-6 and TNF- associated with exercise, the number of studies related to the topic is still reduced. The comparison between patients and controls showed a correlation between some cytokines and the severity scale and handgrip strength.

Submitted by George Silva (georgevillarouco@hotmail.com) on 2019-10-15T03:32:26Z No. of bitstreams: 4 Tese Final _ George 2019_vers??o_corrigida_p??s_defesa.pdf: 913705 bytes, checksum: bc43266c705d448235dbe7829843b617 (MD5) Carta_encaminhamento_autodeposito.pdf: 1705060 bytes, checksum: 361f95865bdb43b1d22362b2c53c471a (MD5) Ata_Defesa_Doutorado_George.pdf: 307778 bytes, checksum: aaa77d51de41fd99c547ec658192784a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Approved for entry into archive by PPGIBA Imunologia B??sica e Aplicada (imunologia.ppgiba.ufam@gmail.com) on 2019-10-15T17:18:56Z (GMT) No. of bitstreams: 4 Tese Final _ George 2019_vers??o_corrigida_p??s_defesa.pdf: 913705 bytes, checksum: bc43266c705d448235dbe7829843b617 (MD5) Carta_encaminhamento_autodeposito.pdf: 1705060 bytes, checksum: 361f95865bdb43b1d22362b2c53c471a (MD5) Ata_Defesa_Doutorado_George.pdf: 307778 bytes, checksum: aaa77d51de41fd99c547ec658192784a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Approved for entry into archive by Divis??o de Documenta????o/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2019-10-16T19:17:07Z (GMT) No. of bitstreams: 4 Tese Final _ George 2019_vers??o_corrigida_p??s_defesa.pdf: 913705 bytes, checksum: bc43266c705d448235dbe7829843b617 (MD5) Carta_encaminhamento_autodeposito.pdf: 1705060 bytes, checksum: 361f95865bdb43b1d22362b2c53c471a (MD5) Ata_Defesa_Doutorado_George.pdf: 307778 bytes, checksum: aaa77d51de41fd99c547ec658192784a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Made available in DSpace on 2019-10-16T19:17:07Z (GMT). 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Feactures of CL pathogenicity to be associated with as host immunogenetics components to determine for the outcome of the disease. We investigated whether single nucleotide polymorphisms in IL1B, IL1RN and IFNG may be associated with elevated or decreased risk in the development of the CL. Nucleotide sequencing and PCR-RFLP were performed in 881 patients with CL and 837 controls. Circulating plasma cytokines were also assayed between CL patients and control subjects. The cytokine levels of IL-1??, IL-6, IL-8, MCP-1 and IFN-?? were significantly higher in patients compared to controls (p < 0.0001), levels elevated of IL-1ra were observed among the controls. IL1B and IFNG polymorphisms are associated with CL and cytokine levels. The IL1B rs16944 C/C genotype is related with lower levels of IL-1ra and associated with susceptibility to CL (OR=1.5 [95%CI 1.1???2.0]; p=0.004). Different SNPs and microsatellite of the IFNG gene were associated with protection and susceptibility to CL, those rs2069705 T and rs2430561 T were associated for the risk to CL (OR=1.5 [95%CI 1.2-2.0]; p=0.0004 / OR=1.4 [95%CI 1.2-1.6]; p=0.0002). IFNG alleles related with risk to CL are combined into haplotype (H1), this associated with susceptibility to CL (OR=1.7 [95%CI 1.2-2.2]; p=5x10-5) and related with lower levels of IFN-??. Although, SNPs present in IL1B and IFNG may mark to the development of CL caused by Leishamania guyanensis, genetic variants are associated with the production of the IL-1??, IL-1Ra and IFN-??. A Leishmaniose Cut??nea (LC) ?? causada por diferentes esp??cies de protozo??rios Leishmania, apresenta importante impacto na sa??de p??blica, com significante morbidade e tamb??m letalidade dos casos mais graves da doen??a. Diferentes estudos cl??nicos e experimentais t??m relatado o envolvimento de citocinas inflamat??rias no desenvolvimento da LC. Aspectos da patogenicidade da LC t??m sido relacionados a caracter??sticas imunogen??ticas do hospedeiro como determinantes para o resultado da doen??a. Neste estudo investigamos se polimorfismos gen??ticos em IL1B, IL1RN e IFNG est??o associados com a suscetibilidade ou a prote????o a LC. A genotipagem dos SNPs foi realizada atrav??s do sequenciamento nucleot??dico e pela PCR-RFLP em 881 pacientes com LC e 837 indiv??duos controles. As concentra????es de citocinas foram tamb??m avaliadas entre pacientes e indiv??duos controles atrav??s do Luminex. Os n??veis das citocinas IL-1??, IL-6, CXCL-8, MCP-1 e IFN-?? foram significativamente superiores em pacientes com LC (p < 0,0001), enquanto elevados n??veis de IL-1Ra foram observados em controles. Polimorfismos gen??ticos de IL1B e IFNG est??o associados com o desenvolvimento da LC e com os n??veis de citocinas. O gen??tipo rs16944 C/C IL1B est?? relacionado a baixos n??veis de IL-1Ra e associado com a suscetibilidade a LC (OR=1.5 [95%CI 1.1???2.0]; p=0.004). Microssat??lite e diferentes SNPs do gene IFNG foram associados com a resist??ncia e a suscetibilidade a LC, como rs2069705 T e rs2430561 T est??o associados ao risco a LC (OR=1.5 [95%CI 1.2-2.0]; p=0.0004 / OR=1.4 [95%CI 1.2-1.6]; p=0.0002). Alelos de IFNG associados ao risco a LC est??o combinados em hapl??tipo (H1), este associado com a suscetibilidade a LC (OR=1.7 [95%CI 1.2-2.2]; p=5x10-5) e relacionado aos baixos n??veis de IFN-??. Polimorfismos gen??ticos em IL1B e IFNG s??o determinantes para o resultado da LC causada por Leishmania guyanensis, portanto varia????es gen??ticas est??o relacionadas com a produ????o de citocinas, como IL-1??, IL-1Ra e IFN-??.

RESUMO Objetivo: Examinar a associação entre os níveis de citocinas no plasma do doador e o desenvolvimento de disfunção primária do enxerto de órgãos transplantados a partir de doadores falecidos. Métodos: Foram incluídos no estudo de forma prospectiva 17 doadores falecidos e os respectivos 47 pacientes receptores de transplante. Os receptores foram divididos em dois grupos: grupo 1, de pacientes que desenvolveram disfunção primária do enxerto, e grupo 2, de pacientes que não desenvolveram disfunção primária do enxerto. Os níveis de TNF, IL-6, IL-1β, e IFN-γ, avaliados por meio de ELISA, foram comparados entre os grupos. Resultados: Obtiveram-se 69 órgãos, sendo realizados 48 transplantes. Os níveis plasmáticos de citocinas nos doadores não diferiram entre os grupos (em pg/mL): TNF no grupo 1, com 10,8 (4,3 - 30,8) versus no grupo 2, com 8,7 (4,1 - 33,1), com valor de p = 0,63; IL-6 no grupo 1: 1.617,8 (106,7 - 5.361,7) versus no grupo 2: 922,9 (161,7 - 5.361,7), com p = 0,56; IL-1β, no grupo 1: 0,1 (0,1 - 126,1) versus no grupo 2: 0,1 (0,1 - 243,6), com p = 0,60; e IFN-γ, no grupo 1: 0,03 (0,02 - 0,2) versus no grupo 2: 0,03 (0,02 - 0,1), p = 0,93). Obtivemos resultados similares ao examinar separadamente os casos de transplante renal. Conclusão: Nesta amostra de receptores de transplante, os níveis plasmáticos das citocinas TNF, IL-6, IL-1β e IFN-γ nos doadores não se associaram com o desenvolvimento de disfunção primária do enxerto. ABSTRACT Objective: To examine the association between donor plasma cytokine levels and the development of primary graft dysfunction of organs transplanted from deceased donors. Methods: Seventeen deceased donors and the respective 47 transplant recipients were prospectively included in the study. Recipients were divided into two groups: group 1, patients who developed primary graft dysfunction; and group 2, patients who did not develop primary graft dysfunction. Donor plasma levels of TNF, IL-6, IL-1β, and IFN-γ assessed by ELISA were compared between groups. Results: Sixty-nine organs were retrieved, and 48 transplants were performed. Donor plasma cytokine levels did not differ between groups (in pg/mL): TNF, group 1: 10.8 (4.3 - 30.8) versus group 2: 8.7 (4.1 - 33.1), p = 0.63; IL-6, group 1: 1617.8 (106.7 - 5361.7) versus group 2: 922.9 (161.7 - 5361.7), p = 0.56; IL-1β, group 1: 0.1 (0.1 - 126.1) versus group 2: 0.1 (0.1 - 243.6), p = 0.60; and IFN-γ, group 1: 0.03 (0.02 - 0.2) versus group 2: 0.03 (0.02 - 0.1), p = 0.93). Similar findings were obtained when kidney transplants were analyzed separately. Conclusion: In this sample of transplant recipients, deceased donor plasma cytokines TNF, IL-6, IL-1β, and IFN-γ were not associated with the development of primary graft dysfunction.

Introdução: A monitorização das alterações de biomarcadores desencadeadas por terapia baseada em citocinas pode fornecer informações relevantes capazes de subsidiar o desenvolvimento e a identificação de preditores de resposta terapêutica. Nesse estudo, investigou-se a associação entre níveis séricos de quimiocinas e citocinas com a resposta ao tratamento da hepatite C crônica com interferon peguilado-alfa (PEG-IFN) associado a ribavirina (RBV), que são drogas antivirais e imunomoduladoras. Métodos: Níveis séricos de quimiocinas/citocinas foram quantificados em medidas longitudinais por citometria de fluxo em pacientes com hepatite C crônica e relacionados com a resposta ao tratamento com PEG-IFN e RBV, categorizada como falha terapêutica (nãoresposta/NR ou recidiva/REC) e resposta virológica sustentada (RVS). Resultados: Pacientes com RVS apresentaram menor estado pró-inflamatório no prétratamento, com níveis reduzidos de CXCL8/IL-8, IL-12 e IL-17, enquanto falha terapêutica foi associada a um padrão predominantemente inflamatório no pré-tratamento, com elevação dos níveis de CCL5/RANTES, IFN-á, IFN-ã, redução de IL-10 em NR e elevação de IL-6 e TNF. A inabilidade de sustentar níveis elevados de IFN-á durante o tratamento foi notada em pacientes com NR. O ambiente pró-inflamatório exacerbado no período pré-tratamento observado em pacientes com NR e REC foi acompanhado de uma rede restrita de conexões entre biomarcadores, enquanto pacientes com RVS apresentaram uma rede com conectividade integrada de citocinas. Também foi notável que, ao longo do tratamento, pacientes com RVS apresentaram tendência ao desenvolvimento de um padrão de citocinas/quimiocinas semelhante ao observado em pacientes NR e REC no pré-tratamento. O perfil de citocinas de pacientes com REC no per- e pós-tratamento foi semelhante ao de pacientes com RVS no período pré-tratamento. A análise das alterações do índex 12 semanas de tratamento/pré-tratamento (baseline-fold ou índice T12/T0) distinguiu o IFN-á e o TNF como biomarcadores de elevado desempenho na avaliação do resultado do tratamento com PEG-IFN e RBV. Conclusão: Um perfil de resposta imune pró-inflamatório no pré-tratamento parece ser preditor de falha terapêutica em pacientes infectados pelo HCV, genótipo 1, tratados com PEG-IFN e RBV. Por outro lado, a habilidade de desenvolver um perfil de resposta imune pró-inflamatória ao longo do tratamento parece ser preditora de resposta virológica sustentada. Os resultados distinguem o IFN-á e o TNF séricos no pré-tratamento como biomarcadores de RVS de alta performance em pacientes infectados pelo GT1 tratados com Peg-IFN e RBV. Este modelo de análise poderá contribuir para o desenvolvimento de estratégias imunoterapêuticas para infecções virais emergentes. Background: The follow-up of biomarker changes triggered by cytokine-based therapy may provide relevant insights to subsidize the development and identification of predictors of therapeutic response. This study related serum chemokine/cytokine levels to the response to chronic hepatitis C treatment with the antiviral and imunomodulator drugs PEG-IFN and RBV. Methods: Longitudinal measurements of serum chemokine/cytokine levels were performed by cytometric-bead-array in patients with chronic hepatitis C, categorized according to virological response as non-responder/NR, relapser/REL and sustained-virologic-responder/SVR. Results: Data demonstrated an overall increase of serum chemokine/cytokine levels in HCV patients. In general, therapeutic failure was associated with a predominant baseline proinflammatory pattern with enhanced CCL5/RANTES, IFN-á, IFN-ã, along with decreased IL-10 levels in NR and increased levels of IL-6 and TNF in REL. SVR patients displayed lower baseline proinflammatory status with decreased CXCL8/IL-8, IL-12 and IL-17 levels. The inability to uphold IFN-á levels during treatment was characteristic of NR. The prominent baseline proinflammatory milieu observed in NR and REL patients yielded a restricted biomarker network, whereas SVR displayed a network with integrated cytokine connectivity. Noteworthy was that SVR presented a shift towards a proinflammatory pattern upon immunotherapy, assuming a pattern similar to that observed in NR and REL at baseline. Moreover, REC patients presented cytokines levels after or along treatment towards a profile similar to SVR at baseline. Analysis of baseline-fold changes during treatment pointed out IFN á and TNF as high-performance biomarkers to monitor immunotherapy outcome. Conclusion: The baseline proinflammatory status seems to predict non-response to PEG-IFN e RBV therapy in patients with chronic hepatitis C infected with HCV GT1. The ability to develop a proinflammatory profile during the treatment seems to predict SVR. The results highlight baseline IFNá and TNF as high performance biomarkers of SVR in GT1 infected patients treated by Peg-IFN and RBV. This knowledge may contribute for novel insights into the treatment and control of the continuous public health threat posed by the spreading/emerging viral infections.

Em recém-nascidos prematuros, os procedimentos realizados nas primeiras horas de vida podem desencadear resposta inflamatória sistêmica e potencializar o desenvolvimento de desfechos desfavoráveis bem como complicações imediatas e tardias. Objetivo: Avaliar os níveis das Interleucinas (IL) 2, 4, 6, 8, 10, Interferon gama (IFN- ), Fator de Necrose Tumoral alfa (TNF-) e Fator estimulador de colônias degranulócitos e mastócitos (GM-CSF) nas primeiras três horas de vida de recémnascidos prematuros e a sua relação com os principais desfechos desfavoráveis da população estudada. Método: Trata-se de um estudo analítico observacional prospectivo realizado naMaternidade Unimed-BH Unidade Grajaú. Foram incluídos no estudo 34 recémnascidos prematuros com idade gestacional entre 28 e 32 semanas, admitidos no período de julho de 2012 a dezembro de 2014. As citocinas foram dosadas a parti de amostras coletadas em papel filtro com 10 minutos, 1 hora e 3 horas de vida. Resultados: Foi possível dosar as citocinas investigadas a partir de sangue coletado em papel filtro. Foi evidenciada correlação entre os níveis séricos de TNF- naprimeira hora de vida e o desenvolvimento de sepse na população estudada e níveis aumentados de GM-CSF foram identificados nos pacientes que apresentaram hipotermia à admissão na unidade neonatal. Foi detectada a presença de IL-6, IL-8, IL-10, IFN-, TNF- e GM-CSF nas três primeiras horas de vida, com diferença significativa entre os tempos para as citocinas IL-6, IL-8 e IFN-. IL-2 e IL-4 nãoforam observadas em nenhum dos tempos investigados. Não foi evidenciada correlação entre a expressão das citocinas nos tempos estudados e o desenvolvimento de displasia broncopulmonar, retinopatia da prematuridade, hemorragia peri intraventricular e óbito, mesmo após estratificação da população de acordo com o peso, entre maiores e menores de 1500 gramas. Conclusão: A detecção de citocinas a partir de material coletado em papel de filtro demonstrou ser um método viável tendo como vantagens a facilidade de coleta,armazenamento e transporte, além da utilização de pequenos volumes. A relação da expressão de TNF- e sepse pode sugerir sua utilização como marcador precoce e a correlação de hipotermia com o aumento de GM-CSF sugere o potencial danoso desse quadro clínico nas primeiras horas de vida de recém-nascidos prematuros, apontando a necessidade de adoção de medidas preventivas eficazes de controletérmico. Mais estudos são necessários para confirmar e esclarecer estas correlações e evidenciar o impacto das intervenções precoces no padrão de expressão das citocinas. thProcedures performed on preterm neonates within the first hours of birth may trigge systemic inflammatory responses and boost the development of unfavorable outcomes, in addition to immediate and late complications. Objective: This study aimed to look into the correlations between levels of Interleukin (IL) 2, 4, 6, 8, 10, Interferon gamma (IFN-·), tumor necrosis factor alpha (TNF-·), and granulocytemacrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) in neonates withinree hours of birth and the main unfavorable outcomes observed in this population.Method: This prospective observational study was carried out at the Unimed-B Unidade Grajaú Maternity Hospital. Thirty-four preterm neonates with gestational ages ranging between 28 and 32 weeks seen from July 2012 to December 2014 were enrolled in the study. Cytokine levels were measured from samples collected on filter paper within 10 minutes, one hour, and three hours of birth. Results: Cytokine levels were measured from blood spots collected on filter paper. A correlation was found between TNF- serum levels within one hour of birth and theoccurrence of sepsis in the studied population. Increased levels of GM-CSF were observed in patients with hypothermia upon admission to the neonatal care unit. IL-6, IL-8, IL-10, IFN-, TNF-, and GM-CSF were detected in the blood samples taken within three hours of birth, with statistically significant differences between each of the sample collection times for cytokines IL-6, IL-8, and IFN-. IL-2 and IL-4 were notdetected in any of the tests. No correlation was found between the expression of cytokines at the sample collection times and the occurrence of bronchopulmonary dysplasia, retinopathy of prematurity, periventricular/intraventricular hemorrhage, o death, even after the studied population was divided into groups of individuals weighing less than 1,500 grams or 1,500 grams and more. Conclusion: The detection of cytokine levels from blood spots on filter paper proved to be a viable testing method. Its advantages include easier sample collection,storage, and transportation, in addition to the low volume of blood required to perform the tests. The study findings suggested that TNF- might be used as an early marker for sepsis. The correlation between increased GM-CSF levels and hypothermia indicates the potentially harmful nature of hypothermia in preterm neonates within thefirst hours of birth, and the relevance of providing effective preventive thermal control measures. More studies are needed to confirm and clarify these correlations an underline the impact early intervention may have on cytokine expression patterns.

Allergic rhinitis with symptomatology and IgE (S-IgE+) is a classical disease with a pattern of inflammation of the upper airways well characterized by Th2 pathway regulation. However, the rhinitis with symptomatology triggered by house dust exposure and no systemic IgE (S-IgE-) is involved by an unknown IgE- independent mechanism, which is not well understood yet. The aims of this study were to investigate antibody responses to house dust mite (HDM) Dermatophagoides pteronyssinus (Dp), cytokine levels, relative expression of mRNA cytokines and microRNA (miRNA) in patients and control (CT) subjects. Three groups of subjects divided in S-IgE+ (n = 32), S-IgE- (n = 19), and CT (n = 31) by clinical symptoms, skin prick test (SPT) and levels of specific IgE to Dp were analyzed. Blood samples were collected and sera were used to measure IgG1, IgG3, IgG4, and IgA specific to crude Dp allergen extract by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from subjects (S-IgE+, 15; S-IgE-, 11; CT, 10) were isolated and stimulated with mitogen (phytohemagglutinin-PHA), crude Dp allergens extract, and medium alone for control. Supernatants were collected after 4 days to evaluate the cytokine levels, and cells were harvested for RNA extraction to assess the relative expression of cytokines and miRNA by reverse transcription PCR (RT-qPCR). Specific IgE and IgG4 anti- Dp showed seropositivity rate significantly higher in S-IgE+ than S-IgE- or CT subjects. Specific IgG3 to Dp showed significant higher levels in S-IgE+ than CT group. Levels of Dpspecific IgA and IgG1 showed no significant difference among the groups. The cytokine IL-5 was significantly higher in cell culture supernatants after Dp stimulation from S-IgE+ patients than S-IgE- or CT subjects. However, levels of IL-4, IL-10, IL-13, IL-17 and IFN-γ were not significantly different among groups, as well as the cytokine levels in sera, including IL-5. Relative expression of IL-5, IFN-γ and TGF-β in PBMCs stimulated with Dp allergens showed significant values, with higher levels of IL-5 in S-IgE+ compared to S-IgEand CT groups; IFN-γ showed higher expression in S-IgE+ when compared to CT; and TGF-β presented higher expression in S-IgE- group. miRNAs relative expression was similar among groups. In the overall, our data suggested that S-IgE- patients showed serum antibodies, cytokines in the supernatant of the cell culture stimulated with Dp allergens and in sera more similar to CT individuals than to S-IgE+, although the symptoms in S-IgE- patients were triggered after house dust exposure like S-IgE+ patients, demonstrating that the mechanism of the antibody and cytokine responses are quite different between S-IgE- and SIgE+ groups. In addition, the relative expression of IL-5, IFN-γ and TGF-β was quite different of seen in cytokine levels measure, explained by the difference between the relative expression of gene and its protein. For miRNA in PBMCs stimulated with Dp allergens were not significantly different among the three groups, and a reason could be the small sample tested. Our findings showed that antibody, cytokine and miRNAs profiles analyzed in this study were not able do discriminate these groups, additional studies will be needed for elucidation of the real immunopathogenic mechanisms of this complex S-IgE- group of patients. A rinite alérgica é uma doença com padrão de resposta clássico que apresenta sintomatologia e IgE (S-IgE+), caracterizada por inflamação das vias aéreas superiores regulada pelo perfil Th2. Contudo, existe outro quadro de rinite que também apresenta sintomatologia desencadeada por exposição a poeira domiciliar, mas sem a presença de IgE (S-IgE-) sistêmica, demonstrando um mecanismo independente de IgE envolvido e ainda não compreendido. Os objetivos do presente trabalho foram investigar a resposta anticórpica ao ácaro da poeira domiciliar Dermatophagoides pteronyssinus (Dp), os níveis de citocinas e a expressão relativa do RNAm para citocinas e microRNAs (miRNAs) nos pacientes e indivíduos controle (CT). Os indivíduos foram divididos em três grupos S-IgE+ (n = 32), SIgE- (n = 19) e CT (n = 31) por meio dos sintomas clínicos, teste cutâneo de puntura (TCP) e níveis séricos de IgE específica a Dp. Amostras de sangue foram coletadas e o soro utilizado para mensurar IgG1, IgG3, IgG4 e IgA específicas ao extrato alergênico bruto de Dp pelo imunoensaio enzimático (ELISA). Células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) dos grupos (S-IgE+, 15; S-IgE-, 11; CT, 10) foram isoladas e estimuladas com mitógeno (fitohemaglutinina PHA), extrato bruto de Dp e somente com meio para controle. O sobrenadante foi coletado depois de 4 dias para avaliar os níveis de citocinas, e as células foram utilizadas para extração de RNA para a avaliação da expressão relativa das citocinas e miRNAs por reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-qPCR). Os níveis de IgE e IgG4 específicos a Dp apresentaram soropositividade significantemente maiores nos pacientes do grupo S-IgE+ comparados aos grupos S-IgE- e CT. A dosagem de IgG3 específica a Dp mostrou níveis significantemente maiores no grupo S-IgE+ somente quando comparada ao grupo CT. Níveis de IgA e IgG1 não apresentaram diferença significante entre os grupos. Se por um lado os níveis de IL-5 no sobrenadante de cultura foram maiores no grupo S-IgE+ e com diferença estatística quando comparados aos outros grupos, por outro lado não foi observada diferença significante nos níveis de IL-4, IL-10, IL-13, IL-17 e IFN-γ entre os grupos, assim como os níveis das citocinas dosadas no soro incluindo a IL-5. A expressão relativa de IL-5, IFN-γ, TGF-β e miRNA em PBMCs estimuladas com alérgenos de Dp mostrou valores significantes, com valores de IL-5 aumentados no grupo S-IgE+ quando comparados aos valores dos grupos S-IgE- e CT; IFN-γ apresentou valor maior e significante no grupo S-IgE+ apenas quando comparado ao grupo CT e TGF-β foi mais expressivo no grupo S-IgE-. A expressão relativa dos miRNAs (miR-21 e miR-126) não mostrou diferença significante. Nossos dados sugerem que houve maior similaridade nos níveis de anticorpos e citocinas no sobrenadante de cultura de células estimuladas com Dp e no soro entre os pacientes S-IgE- e o grupo CT do que com o grupo S-IgE+, apesar dos sintomas nos pacientes S-IgE- serem desencadeados depois da exposição a poeira domiciliar assim como nos pacientes S-IgE+, demonstrando que o mecanismo da resposta por anticorpos e citocinas é diferente entre os grupos S-IgE- e S-IgE+. Além disso, a expressão relativa das citocinas mostrou diferenças o que foi parcialmente visto na dosagem das citocinas, o que pode ser explicado pela diferença que ocorre entre a tradução e transcrição das proteínas. Não foi observada diferença na expressão relativa dos miRNAs, sendo que uma possível causa seria devido ao reduzido número de amostras testadas. Desta forma, nossos dados mostraram que os perfis de anticorpos, citocinas e miRNAs analisados neste estudo não foram capazes de discriminar estes grupos, assim estudos adicionais serão necessários para elucidar o real mecanismo imunopatogênico deste complexo grupo de pacientes do grupo S-IgE-. Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Introdução: A compreensão do envolvimento do sistema imune na Deficiência de Fenilalanina Hidroxilase (PAH) e na Deficiência de Piruvoil Tetraidropterina Sintase (PTPS), doenças genéticas que cursam com hiperfenilalaninemia (HPA) e cujos pacientes podem ser beneficiados pela administração de tetraidrobiopterina (BH4), é de fundamental importância haja vista que o estado inflamatório parece influenciar a síntese e a oxidação do cofator BH4. Ambas são consideradas erros inatos do metabolismo que cursam com déficit mental quando o diagnóstico e tratamento não são estabelecidos precocemente. A Deficiência de PAH, apesar de rara, é muito relevante para o Sistema Único de Saúde visto que pertence ao grupo de doenças incluídas no Programa Nacional de Triagem Neonatal. Objetivo: Avaliar a relação entre BH4, fenilalanina (Phe), citocinas e marcadores de estresse oxidativo em uma amostra de pacientes brasileiros com Deficiência de PAH submetidos ao teste de responsividade ao BH4 e em pacientes com Deficiência de PTPS. Métodos: Estudo transversal, controlado, com amostragem por conveniência. Foram incluídas amostras de plasma de 17 pacientes com Deficiência de PAH coletadas antes e 27 horas após a administração de L-Phe (100mg/kg) e após 27 horas da administração combinada de L-Phe+BH4 (100mg/kg de L-Phe e 20mg/kg de BH4), para medida dos níveis de Phe, citocinas e marcadores de estresse oxidativo. Nos pacientes com Deficiência de PTPS (n= 2), foram realizadas coletas antes e após 4 horas da administração de BH4 para análise dos mesmos parâmetros. Todas as amostras foram pareadas com indivíduos hígidos de acordo com sexo e idade. Para determinação das citocinas foi utilizado o kit Human Cytokine Magnetic 10-Plex Panel - InvitrogenTM (Luminex®), o qual disponibiliza as dosagens de citocinas pró-inflamatórias (IL-1β, IL-8, IL6, TNF-α, IFN-γ e GM-CSF) e anti-inflamatórias (IL-2, IL-4, IL-5 e IL-10). Em relação aos marcadores de estresse oxidativo, foram analisados o conteúdo de Carbonilas e Sulfidrilas, a atividade da Superóxido Dismutase (SOD) e os níveis de Glutationa (GSH). Resultados: Os pacientes com Deficiência de PAH (mediana (IQ) de Phe basal= 236,0 (140-407,10)µmol/L) apresentaram níveis elevados de 4/6 citocinas pró-inflamatórias (IL-1β, IL-6, IL-8, TNF-α) assim como níveis aumentados de GSH em relação aos controles. Os pacientes responsivos e não responsivos ao BH4 não diferiram no período basal, após sobrecarga isolada de L-Phe e após sobrecarga combinada de L-Phe+BH4 em relação aos parâmetros analisados. Também, não foi observada diferença entre os pacientes com Deficiência de PAH Clássica e Leve na coleta basal. Aproximadamente 30% dos pacientes apresentavam excelente controle metabólico. Os pacientes com Deficiência de PTPS não apresentavam HPA e não diferiram dos controles em relação aos níveis de citocinas. Apesar de moderadas, obtivemos correlações negativas significativas entre os níveis de algumas citocinas pró-inflamatórias (IL-1β, IL-8 e TNF-α) com os níveis de Phe. Conclusões: Os nossos dados sugerem que as citocinas são marcadores sensíveis do efeito biológico da HPA. A elevação dos níveis destas na Deficiência de PAH sugere um perfil inflamatório, mesmo entre pacientes considerados com bom controle metabólico e sem evidência de estresse oxidativo. Esta característica pode ser decorrente do aumento crônico dos níveis de Phe, talvez associado à deficiência relativa de BH4. Já os níveis de Phe encontrados nos pacientes com Deficiência de PTPS estavam dentro dos valores considerados normais para a população em geral, não sendo observada elevação dos níveis de citocinas pró-inflamatórias e, por consequência, inflamação. Em relação à correlação negativa encontrada, o presente estudo sugere que os níveis de Phe podem exercer algum efeito inibitório que resulte na diminuição da expressão de algumas citocinas. Assim, sugerimos que estudos adicionais sobre o efeito da administração crônica do BH4 em pacientes com Deficiência de PAH, tomando como desfecho os níveis de citocina, sejam realizados. Introduction: It is crucially important to understand the involvement of the immune system in the deficiencies of phenylalanine hydroxylase (PAH) and pyruvoyl tetrahydropterin synthase (PTPS), genetic diseases that present with hyperphenylalaninemia (HPA) and whose patients may benefit from the administration of tetrahydropterin (BH4), since inflammatory status may influence the synthesis and oxidation of the cofactor BH4. Both deficiencies are considered inborn errors of metabolism that cause mental deficits when diagnosis and treatment are not established early. Although being rare, PAH deficiency is extremely relevant for the Brazilian Unified Health System because it belongs to the group of diseases included in the National Neonatal Screening Program. Objective: To evaluate the relationship between BH4, phenylalanine (Phe), cytokines, and markers of oxidative stress in a sample of Brazilian patients with PAH deficiency undergoing a test of responsiveness to BH4 and of patients with PTPS deficiency. Methods: Controlled cross-sectional study with a convenience sampling strategy. We analyzed plasma samples of 17 patients with PAH deficiency collected before and 27 hours after the administration of L-Phe (100mg/kg) and 27 hours after the combined administration of L-Phe+BH4 (100mg/kg of L-Phe and 20mg/kg of BH4) to measure the levels of Phe, cytokines, and markers of oxidative stress. In patients with PTPS deficiency (n=2), samples were collected before and 4 hours after the administration of BH4 for the analysis of the same parameters. All samples were paired with healthy individuals according to sex and age. Cytokine levels were determined using the Human Cytokine Magnetic 10- Plex Panel kit (InvitrogenTM) for the Luminex® platform, which provides the doses of proinflammatory (interleukin 1β [IL-1β], IL-8, IL6, tumor necrosis factor α [TNF]- α, interferon γ [IFN-γ], and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor [GMCSF]) and anti-inflammatory (IL-2, IL-4, IL-5 e IL-10) cytokines. Additionally, the following markers of oxidative stress were analyzed: content of carbonyls and sulfhydryls, activity of superoxide dismutase, and levels of glutathione (GSH). Results: Patients with PAH deficiency (median [interquartile range] for baseline Phe levels=236.0 [140-407.10] µmol/L) showed increased levels for 4/6 proinflammatory cytokines (IL-1β, IL-6, IL-8, TNF-α), as well as increased GSH levels compared to controls. Patients who were responsive and unresponsive to BH4 did not differ at baseline, after isolated L-Phe overload, and after combined overload of L-Phe+BH4 in terms of the parameters analyzed in this study. Similarly, no difference was observed between patients with classical and mild PAH deficiency at baseline. Nearly 30% of patients had excellent metabolic control. Patients with PTPS deficiency did not present with HPA and did not differ from controls in terms of cytokine levels. Although moderate, significant negative correlations were found between the levels of some proinflammatory cytokines (IL1β, IL-8, and TNF-α) and Phe levels. Conclusions: Our data suggest that cytokines are extremely sensitive biomarkers of the biological effect of HPA. The increase in cytokine levels in PAH deficiency suggests an inflammatory profile even among patients considered as having good metabolic control and showing no evidence of oxidative stress. This characteristic may result from the chronic increase in Phe levels, which may be associated with relative BH4 deficiency. On the other hand, Phe levels found in patients with PTPS deficiency were within values considered normal for the general population; additionally, no increase in proinflammatory cytokine levels was observed, and therefore no inflammation was observed as well. With regard to the negative correlation found, the present study suggests that PhE levels may exert some inhibitory effect that results in the decreased expression of some cytokines. Therefore, we suggest that additional studies on the effect of the chronic administration of BH4 in patients with PAH deficiency should be conducted, considering cytokine levels as outcomes.

OBJETIVO: Avaliar parâmetros clínicos, laboratoriais e citocinas séricas em 55 neonatos que desenvolveram sepse precoce. MÉTODOS: Avaliamos os parâmetros clínicos dos neonatos relacionados com sepse precoce. No dia do diagnóstico de sepse e 48 horas após, foram realizados o leucograma diferencial e a dosagem de proteína C reativa e glicemia. As citocinas IL-1β, IL-10, IL-6 e TNF-α foram determinadas no sangue do cordão, no dia do diagnóstico de sepse, 48 e 96 horas após o início do tratamento. RESULTADOS: O tempo de internação dos neonatos foi inversamente proporcional ao peso no nascimento. Os parâmetros clínicos foram variados, especialmente a temperatura corpórea. Alterações de glicemia foram frequentes, principalmente a hipoglicemia. A alteração de hemograma mais prevalente foi a leucopenia, devido principalmente à neutropenia. Os níveis de proteína C reativa se mostraram correlacionados com o índice neutrofílico. Observamos uma correlação positiva entre os níveis de TNF-α e IL-10 entre o curso da sepse precoce e os níveis observados no cordão umbilical. CONCLUSÕES: As alterações clínicas e laboratoriais entre os neonatos com sepse são variadas. Neonatos que apresentam elevações no padrão de citocinas no momento do parto permanecem com seus níveis elevados durante o processo infeccioso. OBJECTIVE: To assess clinical and laboratory parameters and serum cytokine levels in 55 neonates who developed early-onset sepsis. METHODS: Clinical parameters associated with early-onset neonatal sepsis were assessed. White blood cell differential and serum C-reactive protein and glucose levels were measured upon diagnosis of sepsis and 48 hours later. IL-1β, IL-10, IL-6, and TNF-α levels were measured in cord blood samples obtained on the day of diagnosis and from samples collected 48 and 96 hours after treatment onset. RESULTS: Among newborns with early-onset sepsis, the length of hospital stay was inversely correlated with birth weight. Clinical parameters varied widely, especially body temperature. Blood glucose changes - particularly hypoglycemia - were common. Leukopenia, usually due to neutropenia, was the most prevalent change in blood cell count. C-reactive protein levels correlated with the immature-to-total neutrophil ratio. Serum TNF-α and IL-10 levels measured early in the course of sepsis were positively correlated with those detected in cord blood. CONCLUSIONS: Clinical and laboratory parameters varied widely among neonates with sepsis in this sample. In neonates who presented with increased cytokine levels at birth, this abnormality persisted throughout the infectious process.

Introdução: Infecção pelo citomegalovírus (HCMV) e níveis de citocinas têm sido considerados fatores importantes que influenciam o prognóstico do transplante alogênico de células tronco hematopoiéticas (alo-TCTH). A glicoproteína B (gB) do HCMV tem sido relacionada com promoção de infecção viral e indução de resposta imune em pacientes com infecção pelo HCMV. Entretanto, os componentes imunológicos associados com controle de infecção causada pelo HCMV não estão completamente esclarecidos. Objetivo: O objetivo do estudo foi determinar a prevalência dos genótipos da gB em pacientes submetidos ao alo-TCTH e investigar a possível relação entre os genótipos e os níveis das citocinas (IL-1, IL-6, IL-10, IFN- e TNF-) nas amostras de saliva e de sangue destes pacientes. Além de investigar o impacto do nível destas citocinas e da carga viral nas amostras de saliva e de sangue, coletadas sete dias antes e 21 dias após o alo-TCTH, na sobrevida dos pacientes. Materiais e Métodos: Amostras de saliva e de sangue de 63 pacientes submetidos ao alo-TCTH acompanhados semanalmente durante os 100 primeiros dias do transplante foram avaliadas. A genotipagem da gB do HCMV foi realizada através de multiplex-nested-PCR. A quantidade de HCMV nas amostras de saliva e de sangue foideterminada por PCR em tempo real. Os níveis de citocinas foram analisados por ELISA. Resultados: Trinta e seis das 63 amostras de saliva e 52 das 63 amostras de sangue foram negativas para os genótipos da gB do HCMV. O genótipo tipo 2 da gB foi o mais prevalente na saliva (19/36) e no sangue (33/52). Pacientes com gB2 na saliva apresentaram níveis menores de IL-10, em relação aos pacientes sem este genótipo (p=0.023). Níveis menores de IFN- (p=0.040) e de IL-1 (p=0.050) no sangue também foram observados em pacientes que apresentaram o genótipo 4 da gB em comparação com os pacientes que não apresentaram este genótipo. Gênero do paciente, combinação de gênero do paciente com o do doador, fonte de células tronco hematopoiéticas e ocorrência de aDECH influenciaram a sobrevida dos pacientes após o alo-TCTH. Altos níveis de IL-6 na saliva e baixos níveis de IFN- no sangue sete dias antes do alo-TCTH foram associados com aumento do risco de morte. Altos níveis de IL-6 no sangue e alto nível de HCMV na saliva 21 dias após o alo-TCTH foram associados com a redução da sobrevida dos pacientes. Conclusão: O genótipo gB2 foi o mais prevalente na saliva e no sangue de pacientes submetidos ao alo-TCTH. Apesar da associação entre níveis de citocinas no sangue e na saliva em pacientes com diferentes genótipos da gB e também com a sobrevida, os genótipos do HCMV não apresentaram impacto na evolução dos pacientes. O aumento do nível de IL-6 na saliva e a redução do nível de IFN- no sangue estão associados com o pior índice de sobrevida. Esses dados sugerem uma potencial função desses marcadores em determinar a sobrevida de pacientes submetidos ao alo-TCTH. Futuros estudos são necessários para investigar a função da IL-6 salivar como um potencial biomarcador de sobrevida para os pacientes submetidos ao alo-TCTH e sua possível associação com a carga de HCMV na saliva. Introduction: Factors as human cytomegalovirus (HCMV) load, recipient/donor histocompatibility, patient/donor gender, recipient age, graft-versus-host disease (GVHD) and cytokine levels have been considered important prognostic parameters in allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT). Glycoprotein B (gB) protein has proved to be important in HCMV infectivity and in eliciting a immune response in patients with HCMV infection. The immunological components associated with HCMV control are not completely understood. Objective: The aims of the present study were to assess the prevalence of the gB genotypes in patients who underwent allo-HSCT and to investigate the possible relationship between these genotypes and IL-1, IL-6, IL-10, IFN- and TNF- levels in saliva and blood samples. In addition, we evaluated the impact of the gB genotype, cytokines levels and other risk factors on patients survival. Thus, to investigate the impact of IL-1, IL-6, IL-10, IFN- and TNF- levels, HCMV load in saliva and blood in recipients survival Methods: Saliva and blood samples were sampled weekly in 63 allo-HSCT patients until 100 days after transplant. HCMV gB genotyping was carried out by multiplex nested PCR. The cytokines levels were assessed by ELISA and HCMV load was determined by real time PCR assay. Results: Thirty six of 63 saliva samples and 52 of 63 blood samples were negative to gB HCMV genotype. gB2 was the most common genotype in saliva (19/36) and blood (33/52). Patients with gB2 in saliva showed lower IL-10 salivary levels in comparison with patients without this genotype (p=0.023). Reduced blood levels of IFN- (p=0.040) and IL-1 (p=0.050) were also found in recipients presenting the HCMV gB4 genotype comparing patients without it. Recipient gender, combination patient/donor gender, stem cell source and aGVHD presented impact in allo-HSCT survival. High levels of IL-6 in saliva and low levels of IFN- in blood seven days before allo-HSCT were associated with increased risk of death. High levels of IL-6 in blood and high HCMV load in saliva 21 days after allo-HSCT decrease the recipient survival. Conclusions: The gB2 genotype is the most prevalent gB HCMV genotype in saliva and blood of patients who underwent allo-HSCT. Despite an association between blood and saliva cytokine levels in patients with different gB genotypes and also with survival, HCMV gB genotypes have no impact on patient outcome. The increased IL-6 level and HCMV load in saliva, the increased IL-6 level and decreased IFN- level in blood are associated with a worst survival rate. These findings suggest a potential function for these markers in determination of allo-HSCT survival. Further studies are necessary to investigate the function of salivary IL-6 as a potential biomarker of allo-HSCT survival and its possible association with salivary HCMV load.

Objetivos: Comparar os níveis séricos de citocinas entre voluntários saudáveis e em pacientes bipolares tipo 1 em mania, depressão e eutimia. Comparar os níveis séricos de quimiocinas entre voluntários saudáveis e pacientes bipolares tipo 1 em eutimia. Metodologia: Sessenta e um pacientes bipolares foram recrutados para a avaliação dos níveis séricos de citocinas. Desses, 24 estavam eutímicos, e 23 e 24 estavam em mania e depressão, respectivamente. Este grupo foi comparado a outro, composto por 25 voluntários saudáveis. As seguintes citocinas foram exainadas através de citometria de fluxo: TNF-alfa, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-gama e comparadas entre os grupos. Além dessa análise, 30 pacientes bipolares tipo 1 foram comparados a igual número de voluntários saudáveis para estudar os níveis séricos das seguintes quimiocinas: CCL2, CCL3, CCL8, CCL 9, CCL10, CCL11 e CCL24, dosadas através de ELISA sandwich. Resultados: Duarnte a mania, as citocinas pró-inflamatórias IL-2, IL-4 e IL-6 estavam elevadas nos pacientes com TB em comparação com o grupo de voluntários saudáveis. Já os pacientes em episódio depressivo, apresentavam somente elevação da IL-6. Não houve modificação dos níveis de citocinas nos pacientes eutímicos, exceto pelo aumento da IL-4. Quanto as quimiocinas, enquanto os níveis séricos de CXCL10 estavam elevados nos pacientes bipolares, os níveis de CCL24 estavam diminuídos. Objectives: Compare serum levels of cytokines between healthy volunteers and patients with bipolar disorder type 1 in mania, depression and euthymia. Compare serum levels of chemokines between healthy volunteers and bipolar patients in euthymia. Methods: Sixty-one bipolar patients were recruited for assessment of serum cytokine levels. Of these, 14 were in euthymic state, 23 and 24 were in manic and depressive episodes, respectively. A healthy comparison group included 25 healthy volunteers. Cytokines involved in Th1/Th2 balance, such as TNF- , IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN- , were examined by flow cytometry. In addition, serum chemokine levels of 30 euthymic patients with BD type I and 30 healthy volunteers were investigated and compared. The chemokines assessed were CCL2, CCL3, CCL8, CCL 9, CCL10, CCL11, and CCL24. Results: During mania, proinflammatory cytokines, IL-2, IL-4 and IL-6, were increased in comparison with healthy subjects. Patients in depressive episode showed only increased IL-6 levels. There were no significant differences in cytokine levels between patients in remission and healthy subjects, except for IL-4. Regarding chemokines, patients with BD showed significant differences in chemokine levels when compared with healthy subjects. While serum levels of CXCL10 were increased, CCL24 levels were lower in bipolar patients when compared with controls. There was no statistical difference in the serum levels of CCL2, CCL3, CCL24, CXCL9, and CXCL11 between patients and controls.

Borderline personality disorder (BPD) is a serious mental illness that affects up to 6% of population and that it is associated with suicide rates around 50 times higher than general populational indicators. In addition, there is also a high comorbidities prevalence related to other mental disorders, including depression. There are still no effective pharmacological treatments for BPD, what offers a poor prognosis and an impairment of life activities. This study intends to analyze the association between clinical and serum biological parameters - oxidative markers, pro- and anti-inflammatory cytokines and neurotrophins - in patients with BPD accompanied or not by acute depressive episode. For this goal, 26 patients with BPD were interviewed using a structured psychiatric interview - 13 had an acute depressive episode and 13 were euthymic according to the HAMILTON scale 17 – and compared to results given by 8 healthy patients that composed a control group. Both groups were tested using TPB and global functionality (FAST) scales. Meanwhile, serum samples were collected to determine cytokine levels (IL-1b, TNF-α, IL-6, MCP-1, IL-12, IFN-γ, IL-17, IL-2, IL-4 ), brain-derived neurotrophic factor (BDNF) and oxidative markers (nitrite, reduced glutathione and malondialdehyde). In the results, it was found that patients with BPD accompanied or not by depression have significantly higher scores on BPD scale, especially in the emotional dysregulation item, compared to controls (P

Objective: The modified shuttle test is a field test that avoids the ceiling effect, and there are no reports of a multidimensional assessment concerning physical activity in asthmatic patients. Thus, the aim was to evaluate functional capacity by MST, additionally to perform a multidimensional assessment as physical activity in daily life, muscle strength, and cytokine levels in children and adolescents with asthma, and to correlate these variables. Method: This cross-sectional study included volunteers aged between 6 and 18 years who were divided into two groups: asthma group (n = 43) that received regular treatment and control group (n = 24). Functional capacity was evaluated by distance walked during the MST; physical activity in daily life was evaluated using an accelerometer by the number of steps. Quadriceps femoris strength was evaluated by load cell. Results: Distance walked was lower for the asthma group (790 m [222 m]) when compared with the control group (950 m [240 m]; p = 0.007); however, the number of steps was similar between the two groups (asthma group: 7743 [3075]; control group: 7181 [3040]; p = 0.41), and both groups were classified as sedentary behavior. There was no difference in muscle strength. Tumor necrosis factor-α differed, but interleukin levels were similar between groups. Quadriceps strength was correlated to distance walked (r = 0.62; p

Submitted by Daniella Santos (daniella.santos@ufma.br) on 2022-12-06T17:39:16Z No. of bitstreams: 1 Rossy-Eric.pdf: 311783 bytes, checksum: 877cdb39fc1f67e1f47d2438da1cea31 (MD5) Made available in DSpace on 2022-12-06T17:39:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rossy-Eric.pdf: 311783 bytes, checksum: 877cdb39fc1f67e1f47d2438da1cea31 (MD5) Previous issue date: 2021-07-01 CD81, a member of the testraspanin family, is a membrane protein involved in immunosuppressive responses and associated with adverse outcomes in multiple myeloma and acute myoid leukemia (AML). Although studies support the occurrence of dysregulation in the production of cytokines in hematologic malignancies, the relationship between the expression of CD81 in myeloblasts and the cytokine profile in patients with AML is not known. Thus, we evaluated the association between CD81 expression and Th1, Th2 and Th17 cytokine levels, as well as its prognostic value in AML. For this, 121 patients diagnosed with AML and 40 control subjects were studied. We observed the expression of CD81 in 100/121 (82.6%) patients (P

Fibromyalgia (FM) is a syndrome characterized by chronic, diffuse pain and systemic symptoms. Its etiology and pathogenesis are still not completely understood. The therapy used in FM mainly consists of the use of medications (analgesics, antiinflammatories, antidepressants and muscle relaxants), however, nonpharmacological therapies, such as acupuncture, have stood out in the treatment of this syndrome because it provides pain relief and greater physical well-being for patients. The present research aimed to quantify and evaluate the levels of laboratory biomarkers, highlighting some pro- and anti-inflammatory cytokines in patients with FM undergoing acupuncture. A total of 40 female patients between 20 and 60 years old, diagnosed with FM according to the criteria of the American College of Rheumatology, were randomized into two groups: Acupuncture - A (n = 20), which received real acupuncture and Sham - Y (n = 20), who received placebo acupuncture. The interventions took place once a week, for four consecutive weeks, lasting 30 minutes each. The patients underwent two blood samples: one before the first session of A or S and another after the fourth and last session of interventions. A third group (control - C), composed of 16 healthy women, was submitted to a single blood collection, without any intervention. The results obtained through the complete blood count, total cholesterol, triglycerides, uric acid, creatinine, C-reactive protein, creatinokinase, interleukin-2, interleukin-4, interleukin-6, interleukin-10, tumor necrosis factor-α (TNF- α ), interferon-gamma (IFN-ᵧ) and interleukin-17A were analyzed using IBM SPSS Version 25 software, assuming a significance of 5%. Significantly increased values in the distribution range of red blood cells, uric acid, C-reactive protein and triglycerides were detected in patients with FM (A and S) in relation to control, before acupuncture interventions. There was a significant difference in the platelet count of group A compared to group S, before the interventions, however, after 4 weeks of acupuncture, both groups did not show significant difference in the platelet count. Among the dosed cytokines, fibromyalgia patients had reduced serum levels of TNF-α and increased serum levels of IFN-ᵧ compared to control, before interventions. It was observed that patients with FM have some altered biochemical, hematological and immunological results in relation to the control. However, acupuncture did not change cytokine levels significantly. A fibromialgia (FM) é uma síndrome caracterizada por dor crônica, difusa e sintomas sistêmicos. Sua etiologia e patogênese ainda não estão completamente elucidadas. A terapia empregada na FM consiste preponderantemente na utilização de medicamentos (analgésicos, anti-inflamatórios, antidepressivos e relaxantes musculares), no entanto, terapias, não-farmacológicas, como a acupuntura vem se destacando no tratamento desta síndrome pelo fato de proporcionar alívio da dor e maior bem-estar físico aos pacientes. A presente pesquisa teve por objetivo quantificar e avaliar os níveis de biomarcadores laboratoriais, destacando-se algumas citocinas pró- e anti-inflamatórias em pacientes com FM submetidos a acupuntura. Um total de 40 pacientes do sexo feminino entre 20 e 60 anos, com diagnóstico de FM segundo os critérios da American College of Rheumatology, foram randomizadas em dois grupos: Acupuntura - A (n= 20), o qual recebeu acupuntura real e Sham – S (n=20), o qual recebeu acupuntura placebo. As intervenções ocorreram uma vez por semana, durante quatro semanas consecutivas, com duração de 30 minutos cada. As pacientes foram submetidas a duas coletas sanguíneas: uma antes da primeira sessão de A ou S e, outra, após a quarta e última sessão das intervenções. Um terceiro grupo (controle - C), composto por 16 mulheres saudáveis, foi submetido à uma única coleta sanguínea, sem intervenção alguma. Os resultados obtidos através do hemograma completo, colesterol total, triglicerídeos, ácido úrico, creatinina, proteína C reativa, creatinoquinase, interleucina-2, interleucina-4, interleucina-6, interleucina-10, fator de necrose tumoral-α (TNF-α), interferon-gama (IFN-ᵧ) e interleucina-17A foram analisados no software IBM SPSS Versão 25, admitindo-se significância de 5%. Valores significativamente aumentados na amplitude de distribuição dos glóbulos vermelhos, ácido úrico, proteína C reativa e triglicerídeos foram detectados nas pacientes com FM (A e S) em relação ao controle, antes das intervenções com acupuntura. Houve uma diferença significativa na contagem de plaquetas do grupo A em relação ao grupo S, antes das intervenções, porém, após 4 semanas de acupuntura, ambos os grupos não apresentaram diferença significativa na contagem de plaquetas. Entre as citocinas dosadas, as pacientes fibromiálgicas apresentaram níveis séricos reduzidos de TNF-α e níveis séricos aumentados de IFN-ᵧ em comparação ao controle, antes das intervenções. Observou-se que pacientes com FM apresentam alguns resultados bioquímicos, hematológicos e imunológicos alterados em relação ao controle. No entanto, a acupuntura não alterou os níveis de citocinas significativamente.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Neurociências, Florianópolis, 2021. O aumento da sobrevida de pacientes críticos, devido aos avanços tecnológicos, tem resultado em uma população crescente de sobreviventes a síndromes agudas e complexas, como a sepse. Nesta esfera, consequências neuropsiquiátricas têm aumentado nesses indivíduos, como declínio cognitivo, transtorno-depressivo maior e ansiedade. Não obstante, o papel causal de disfunções neurológicas - sejam elas de curto ou longo prazo - relacionadas à sepse ainda permanecem pouco explorados, bem como seus mecanismos fisiopatológicos. Assim, o objetivo deste estudo foi caracterizar as repercussões sistêmicas, os parâmetros comportamentais e neuroinflamatórios em camundongos com pneumosepse induzida por instilação intratraqueal de Klebsiella pneumoniae. Foram utilizados camundongos Swiss, machos, os quais foram separados aleatoriamente nos seguintes grupos: pneumosepse (animais submetidos à instilação intratraqueal de 0,05 mL de uma solução com Klebsiella pneumoniae ? 5,9x109 UFC/animal e controle (animais submetidos à instilação intratraqueal de 0,05 mL de solução tampão - PBS). A fim de ratificar o modelo de pneumosepse, foram avaliados alguns de seus marcadores de lesões sistêmicas características, como níveis de ureia e creatinina, perfil hematológico, presença de unidades formadoras de colônia (UFC) no sangue e no encéfalo e permeabilidade vascular tecidual (Azul de Evans). Em uma segunda etapa experimental, os camundongos foram avaliados quanto aos parâmetros comportamentais nos períodos de 24h, 7, 14 e 30 dias após a pneumosepse. Para tanto, foram realizados teste de campo aberto (TCA), teste do labirinto em cruz elevada (LCE) a fim de avaliar o comportamento tipo ansioso e teste de suspensão pela cauda (TSC) e teste de borrifagem de sacarose (TBS), a fim de avaliar o comportamento tipo-depressivo. O teste de reconhecimento de objetos (RO) foi utilizado a fim de avaliar a memória. O perfil inflamatório, que incluiu a avaliação da atividade da mieloperoxidade (MPO) e a quantificação dos níveis de fator de necrose tumoral alfa (TNF-a), interleucina 1 beta (IL-1ß) e interleucina-6 (IL-6), nos pulmões, hipocampo e córtex pré-frontal foi mensurado 24 horas, 7, 14 e 30 dias após a indução da pneumosepse. Adicionalmente, foi realizada a avaliação da permeabilidade da barreira hematoencefálica (BHE) por meio de Azul de Evans e da ativação microglial, através de imunohistoquímica. Desta forma, este modelo de pneumosepse, resultou em lesão distal ao órgão alvo, com aumento dos níveis de creatinina e ureia nos grupos com pneumosepse, aumento da permeabilidade vascular tecidual em órgãos como pulmão, fígado, intestino e coração. Assim como, alteração da integridade da barreira hematoencefálica em 24 após a lesão, evidenciada por meio de extravasamento de Azul de Evans e disseminação bacteriana no sangue e no encéfalo dos animais nos períodos de 24, 48 e 72 horas. Além disso, ocorreu um aumento significativo dos níveis de MPO no pulmão (até 7 dias) e córtex pré-frontal (24h) com aumento de citocinas pró-inflamatórias no pulmão, hipocampo e no córtex pré-frontal. Paralelamente foi demonstrado a ativação de micróglia no hipocampo, com aumento da porcentagem da área positiva para IBA1. Foi observado comportamento tipo-depressivo e tipo-ansioso nos animais em todos os períodos avaliados que se correlacionaram com os níveis de citocinas no hipocampo (TNF-a, IL-1ß, IL-6), além de alterações na memória de curto prazo nos períodos de 14 e 30 dias após a pneumosepse. Portanto, este estudo demonstrou, pela primeira vez, que a pneumosepse induzida por Klebsiella pneumoniae promoveu resposta neuroinflamatória e comportamentos tipo-depressivo e ansioso; bem como alterações de memória à curto prazo, sugerindo um efeito significativo da inflamação pulmonar e sistêmica no SNC. Abstract: Technological advances increased survival of critically ill patients with acute and complex syndromes, such as sepsis, increasing neuropsychiatric consequences (e.g., cognitive decline, major depressive disorder, and anxiety). Nevertheless, the causal role of neurological disorders - whether short-term or long-term ? and pathophysiological mechanisms related to sepsis remains poorly explored. Thus, this study aimed to characterize systemic repercussions, behavioral and neuroinflammatory parameters in mice with pneumosepsis induced by intratracheal instillation of Klebsiella pneumoniae. Male Swiss mice were randomly divided into the following groups: pneumosepsis (animals submitted to intratracheal instillation of 0.05 mL of Klebsiella pneumoniae ? 5.9x109 CFU/animal) and controls (animals submitted to intratracheal instillation of 0.05 mL of phosphate buffered solution). We also evaluated some markers of systemic lesion (e.g., urea and creatinine levels, hematological profile, presence of colony-forming units [CFU] in blood and brain and tissue vascular permeability ? Evans Blue) to confirm the pneumosepsis model. In a second experimental, behavioral parameters were evaluated 24h, 7, 14, and 30 days after pneumosepsis. Open field test and elevated plus-maze test assessed anxiety-like behavior, whereas tail suspension test and sucrose splash test assessed depressive-like behavior. Object recognition test was used to assess memory. Inflammatory profile, including myeloperoxidation (MPO) activity, tumor necrosis factor alpha (TNF-a), interleukin-1 beta (IL-1ß), and interleukin-6 (IL-6) levels in lungs, hippocampus, and prefrontal cortex, was measured 24 hours, 7, 14, and 30 days after pneumosepsis. The blood-brain barrier (BBB) permeability was performed using Evans Blue. Microglial activation was also assessed using immunohistochemistry. This pneumosepsis model resulted in injury distal to the target organ, increased levels of creatinine and urea in mice with pneumosepsis, increased vascular permeability in lungs, liver, intestine, and heart, altered BBB integrity 24 hours after injury (evans blue extravasation), and bacterial dissemination in the blood and brain of animals after 24, 48, and 72 hours. Furthermore, MPO levels increased significantly in the lung (up to 7 days) and prefrontal cortex (24 h), while proinflammatory cytokines elevated in lungs, hippocampus, and prefrontal cortex. Parallel to this, microglial activation was demonstrated in hippocampus, with increased percentage of positive area for IBA1. Depressive-like and anxious-like behaviors were observed in all periods assessed, which correlated with cytokine levels in hippocampus (TNF-a, IL-1ß, and IL-6), in addition, changes in short-term memory were observed at 14 and 30 days. Therefore, this study demonstrated, for the first time that pneumosepsis induced by Klebsiella pneumoniae promoted neuroinflammatory response and depressive-like and anxious behaviors, as well s short-term memory alterations, suggesting a significant of pulmonary and systemic inflammation in the CNS.

Neste estudo, avaliou-se o potencial anticonvulsivante do fármaco anti-inflamatório dexametasona (DEXA), no modelo animal de kindling induzido por pentilenotetrazol (PTZ). Neste modelo crônico, ratos Wistar machos, diariamente, os tratamentos: salina (NaCl 0,9%), dexametasona (DEXA) 1mg, 2mg ou 4mg/Kg ou diazepam (2 mg/Kg) durante 14 dias e, em dias alternados, PTZ (20 mg/Kg). Nos dias em que receberam o PTZ, classificou-se a intensidade das crises epilépticas segundo Racine (1973). Os animais foram eutanasiados no décimo quinto dia e coletaram-se soro, hipocampo e córtex para dosagem das citocinas interleucina 1β (IL-1β), interleucina-6 (IL-6) e do fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa) pelo método de ELISA. Os animais tratados com DEXA, no modelo de crise epiléptica induzido por PTZ, em todas as doses, apresentaram redução da intensidade das crises epilépticas de acordo com a escala de Racine, quando comparados ao grupo tratado com solução salina. Não houve diferença significativa entre os animais tratados com DEXA e os tratados com diazepam, indicando que o medicamento anti-inflamatório foi eficiente como agente anticonvulsivante. Além disso, o tratamento com DEXA não alterou a capacidade locomotora e exploratória dos animais, avaliados pelo teste de campo aberto, demonstrando a segurança do tratamento proposto. Quanto aos níveis das citocinas, não houve alteração no córtex dos animais. No entanto, no hipocampo, os níveis de IL-1 β diminuíram nos grupos tratados com DEXA (1 mg/Kg e 4 mg/Kg) e diazepam quando comparados ao grupo salina. Também houve redução de TNF-alfa nessa estrutura no grupo que recebeu DEXA 4 mg/Kg em comparação com o grupo salina, DEXA 1 mg/Kg e DEXA 2 mg/Kg e um aumento significativo no grupo DEXA 1 mg/Kg em relação ao grupo salina. A diferença entre os níveis de TNF-alfa nas estruturas do sistema nervoso central estudadas sugere que vias neuroinflamatórias específicas são ativadas de maneira tempo e dose dependente, com papéis distintos na epileptogênese. Finalmente, no soro, verificou-se uma diminuição nos níveis de TNF-alfa nos animais tratados com DEXA 4 mg/Kg em comparação ao grupo salina. Desta forma, o tratamento com DEXA foi responsável pela diminuição da intensidade das crises epilépticas, no modelo utilizado. Além disso, observou-se a diminuição dos níveis de algumas das citocinas pró-inflamatórias avaliadas. Em suma, estes resultados sugerem o potencial efeito benéfico do uso da DEXA no tratamento da epilepsia, embora novos estudos sejam necessários para melhor compreensão dos efeitos observados. In this study, the anticonvulsant potential of the anti-inflammatory drug dexamethasone (DEXA) was evaluated in the pentylenetetrazole-induced (PTZ) kindling animal model. In this chronic model, the animals received daily treatments: saline (0.9% NaCl), dexamethasone (DEXA) 1mg, 2mg or 4mg / kg or diazepam (2mg / kg) for 14 days and every other day. PTZ (20 mg / kg). On the days they received PTZ, seizure intensity was classified according to Racine (1973). Animals were euthanized on the fifteenth day and serum, hippocampus and cortex were collected for interleukin 1β (IL-1β), interleukin-6 (IL-6) and tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) cytokines by ELISA. DEXA-treated animals in the PTZ-induced seizure model at all concentrations had reduced seizure intensity according to the Racine scale when compared to the saline-treated group. There was no significant difference between DEXA-treated and diazepam-treated animals, indicating that the anti-inflammatory drug was effective as an anticonvulsant agent. Moreover, DEXA treatment did not alter the locomotor and exploratory capacity of the animals evaluated by the open field test, demonstrating the safety of the proposed treatment. Regarding cytokine levels, there was no change in the cortex of the animals. However, in the hippocampus, IL-1β levels decreased in the DEXA (1 mg / kg and 4 mg / kg) and diazepam treated groups compared to the saline group. There was also a reduction in TNF alpha in this structure in the group receiving DEXA 4 mg / kg compared to the saline, DEXA 1 mg / kg and DEXA 2 mg / kg groups and a significant increase in the DEXA 1 mg / kg group compared to saline group. The difference between TNF-alpha levels in the central nervous system structures studied suggests that specific neuroinflammatory pathways are activated in a time and dose dependent manner, with distinct roles in epileptogenesis. Finally, in serum, there was a decrease in TNF-alpha levels in the DEXA 4 mg / kg treated animals compared to the saline group. Thus, treatment with DEXA was responsible for decreasing the intensity of seizures in the model used. In addition, there was a decrease in the levels of some of the evaluated proinflammatory cytokines. In sum, these results suggest the potential beneficial effect of using DEXA in the treatment of epilepsy, although further studies are needed to better understand the observed effects.

O transplante de rim é a alternativa de reposição renal mais desejável e com o melhor custo-benefício para pacientes com doença renal crônica, especialmente, em estágio terminal. As citocinas são proteínas solúveis mediadoras da resposta imune. Os polimorfismos de citocinas podem influenciar os seus níveis plasmáticos e, dessa forma, afetar o transplante renal. O objetivo deste estudo foi investigar a influência dos níveis de citocinas e de polimorfismos em seus genes sobre a função do enxerto renal e sobre a presença ou não de episódios prévios de rejeição. Avaliou-se também a relação entre estes biomarcadores e o tempo pós-transplante de receptores do transplante renal. Foram avaliados 146 pacientes distribuídos em grupos de acordo com os níveis de creatinina (C1: 1,4 e C2: >1,4 mg/dL), ritmo de filtração glomerular estimado (R1: A no gene do TNF-á no grupo R1 em relação ao R2, além de uma maior frequência do carreador A no grupo R2. O alelo G do polimorfismo +25G>C no gene do TGF-â1 foi mais frequente no grupo REJ em relação ao grupo INDET. Foram encontrados maiores níveis de TNF-á no grupo nãoREJ em relação ao grupo INDET. Além disso, a razão TNF-á/IL-10 foi maior no grupo nãoREJ quando comparada aos demais grupos. A análise dos níveis de citocinas em função do tempo pós transplante mostrou maiores níveis de IL-6 nos subgrupos T1 (tempo 1 a 24 meses pós transplante) e T3 (tempo 61 a 120 meses pós transplante) e o predomínio de IL-10 no subgrupo T2 (tempo 25 a 60 meses pós transplante). O estudo demonstrou uma correlação positiva entre IL-6 e TNF-á e negativa entre IL-6 e IL-10, bem como entre IL-6 e o tempo pós-transplante. TNF-á também se correlacionou negativamente com IL-10. Concluiu-se que o alelo A do polimorfismo -308G>A no gene de TNF-á está associado a uma melhor função do enxerto. Pacientes que não apresentaram episódios prévios de rejeição tiveram maiores níveis de TNF-á e maior razão TNF-á/IL-10. Além disso, o polimorfismo +25G>C no gene de TGF-â1 foi associado ao histórico de rejeição neste estudo. A influência genética e o balanço entre os níveis de citocinas podem estar associados à função do enxerto e à sobrevida dos pacientes. Estes biomarcadores poderiam ser utilizados como potenciais ferramentas de monitoramento no transplante renal. Kidney transplantation is the most desired and cost-effective alternative of renal replacement for end-stage renal disease patients. Cytokines are soluble proteins that influence the immune response. Cytokines polymorphisms can influence their plasma levels and thus affect kidney transplantation. The aim of this study was to investigate the influence of cytokines levels and their polymorphisms on renal graft function and in the presence or not of previous rejection episode. We also evaluated the relationship between these biomarkers and post-transplant time of renal transplant recipients. A total of 146 patients were classified into groups according to creatinine levels (C1: 1,4 and C2: >1,4 mg/dL), estimated glomerular filtration rate (R1: A polymorphism in the TNF-á gene was observed in the R1 group compared to R2. In addition, it was found a higher frequency of the A carrier in the R2 group. The G allele of +25G>C polymorphism in the TGF-â1 gene was more frequent in the REJ group compared to INDET group. TNF-á higher levels were found in the noREJ group compared to INDET group. Furthermore, TNF-á/IL-10 ratio was higher in noREJ group when compared to other groups. The analysis of the time after transplantation showed higher levels of IL-6 in the T1 (time 1 to 24 months post transplantation) and T3 (time 61 to 120 months post transplantation) groups and predominance of IL-10 in T2 group (time 25 to 60 months after transplantation). This study demonstrated a positive correlation between IL-6 and TNF-á and negative correlation between IL-6 and IL-10 as well as IL-6 and post-transplant time. TNF-á also correlated negatively with IL-10. As conclusion, A allele of -308G>A polymorphism in the TNF-á gene is associated with better graft function. Patients who did not present previous rejection episode had higher levels of TNF-á and higher TNF-á/IL-10 ratio. In addition, the +25G>C polymorphism in the TGF-â1 gene was associated with the history of rejection in this study. Genetic influence and balance between cytokine levels may be associated with graft function and patient survival. These biomarkers could be used as potential monitoring tools in renal transplant.

A malária é uma das mais importantes doenças transmitidas por vectores e que acomete grande parte da população mundial. O P. vivax é a espécie predominante nas Américas, representando 64% dos casos. A área endêmica da malária no Brasil compreende a Região Amazônica, responsável por 99% dos casos autóctones. Trabalhos anteriores demonstraram a alta prevalência da malária em garimpeiros na região Amazônica e a espécie mais frequente envolvida é o P. vivax. A resistência à malária faz parte da interação de diferentes fatores que regulam as relações entre o parasito e o hospedeiro. Essa interação é um fator determinante na resposta imune a infecção. Os polimorfismos de nucleotídeos únicos (SNPs) nos genes de citocinas têm sido explorados em estudos de variação genética humana e tentam explicar a influência dessa variação na susceptibilidade as doenças infecciosas. As variações no número de cópias (CNVs) também podem afetar potencialmente a expressão dos genes de várias maneiras, contudo pouco se sabe sobre o papel dessa variação genética na adaptação humana frente à infecção pelo P. vivax. O estudo objetivou investigar se as alterações genômicas quantitativas e os SNPs nos genes TNFA-308A>G, IFNG+874T>A, IL6-174C>G e do haplótipo -1082/-592/-819 no gene IL10, associados à produção de citocinas podem influenciar na fisiopatogenia da malária vivax. O estudo selecionou 129 pacientes, a partir de 288 atendidos na cidade de Itaituba, estado do Pará, sendo 79 pacientes sem infecção para malária e 50 pacientes positivos para P. vivax e destes, 15 tinham infecção primária a malária e 35 pacientes relataram episódios anteriores a infecção. Foi determinada a carga parasitária pela gota espessa; os parâmetros hematológicos; as citocinas foram dosas por citometria de fluxo; a genotipagem dos SNPs foi feita por PCR-SSP e a variação no número de cópias foi determinada pela técnica do aCGH. A análise estatística foi realizada utilizando o programa Bioestat e Graph-pad prim. Observados que ambos os grupos maláricos (primário e recorrente) apresentaram redução significativa no número de plaquetas; no grupo recorrente observamos aumento significativo na porcentagem de monócitos; não observamos diferenças significativas na frequência dos SNPs; não observamos associações dos SNPs com a infecção pelo P. vivax; observamos diferenças significativas nos níveis plasmáticas das citocinas entre os grupos; observamos níveis significativamente maiores nos indivíduos com o haplótipo IL10GCC/GCC e correlação entre os níveis das citocinas IL-10, TNF-α e IL-6 e a carga parasitária; observamos um aumento significativo no nível das citocinas IFN-γ, IL-6 e IL-10 no grupo com malária primária em comparação ao controle endêmico, bem como um aumento significativo na expressão das citocinas TNF-α, IL-6 e IL-10 no grupo recorrente em comparação ao grupo controle, enquanto que a expressão da citocina IFN-γ foi significativamente maior no grupo primário em comparação com o grupo recorrente. Descrevemos pela primeira as alterações quantitativas no genoma dos pacientes infectados com P. vivax e identificamos 112 genes amplificados e 12 genes deletados na população em estudo, e, apesar das CNVs encontradas não incluírem nenhum gene relacionado com receptores ou fatores de resistência a malária vivax e nem estarem correlacionados com os dados clinico-patológicos da doença, observamos vários genes com alterações no número de cópias relacionados a outras doenças. Este estudo fornece dados adicionais sobre a resposta imune entre P. vivax e o hospedeiro e as alterações genômicas quantitativas no hospedeiro de uma área endêmica de garimpo. In endemic areas of Asia, Oceania, Central and South America and in the horn of Africa P. vivax malaria is a major cause of morbidity with 35 million cases annually. In Brazil, the Amazon region concentrates almost all cases and infections registered countrywide, with more than three hundred thousand cases per year. Several evidences suggest that an exacerbated inflammatory response associated to density parasite is likely to aggravate the malaria symptoms. We assessed the haematological and immunological aspects, genetic alterations related to CNVs that could lead to phenotypic alterations, conferring resistance or susceptibility to malaria, as well the presence of polymorphisms in cytokine genes and their association with the infection in patients living in a gold-mining area in a gold-mining in the Brazilian Amazon Region, establishing patterns of immune response characteristic of primary malaria, recurrent malaria and endemic control. Six SNPs (TNFA-308G/A, IFNG+874T/A, IL6-174G/C, IL10-1082G/A, -819C/T, -592C/A) in four genes were determined; blood cell count was conducted on automatic analyzer; plasmatic cytokines IL-6, IL-10, TNF-α and IFN-γ were quantified by flow cytometry and density parasite was estimated by thick blood films with confirmation by nested-PCR; the CNV was estimated by aCGH and association between copy number and phenotypes (parasite load, mean number of clinical infections of malaria and gender) was assessed. The statistical analyzes were performed by Graph-pad prism 6.0 and Bioestat 5.0. No significant association was found between SNPs and malaria infection; cytokine levels were higher in malaria group when compared to endemic control; production of IL-10 was higher in the presence of GCC/GCC haplotype; IFN-γ levels were correlated with previous malaria episodes; malaria patients showed lower platelet numbers, reduction on white blood cells count and an increased monocyte percentage; significant increase in the IL-6 and IL-10 plasmatic levels in both malaria groups; the primary malaria patients displayed the highest significant plasmatic IFN-γ levels; recurrent malaria patients displayed the highest significant plasmatic TNF-α; malaria infection demonstrated correlation between parasite density and TNF-α, IL-6 and IL-10 levels; a total of 112 amplified genes and 12 deleted genes were observed and the CNVs found did not include any gene related to receptors or vivax malaria resistance factors. There were no statistically significant correlations between the clinical and pathological data (parasite load, mean number of clinical infections of malaria and gender) and the presence of CNVs in the patients studied. This study provides additional data on Plasmodium-host immune response and describes the quantitative changes in the human genome in P. vivax infection in an endemic area of garimpo. Instituto Evandro Chagas

CAPES Em pessoas com doenças associadas ao herpesvírus humano tipo 8 (HHV-8), como o sarcoma de Kaposi (SK), a doença de Castleman multicêntrica (MCD) e o linfoma de efusão primária (PEL) em pessoas vivendo com HIV/aids (PVHA), relatou-se um aumento nos níveis de algumas citocinas, e entre elas destacam-se as citocinas IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF- α e IFN-γ por estarem associadas a estas doenças e a infecção pelo HHV-8. Considerando que o HHV-8 pode influenciar na reação imunológica do hospedeiro aumentando níveis de citocinas e da carga viral do HIV levando ao desenvolvimento de doenças, fomos motivados a realizar o presente trabalho, com o objetivo de comparar os níveis das citocinas IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF- α e IFN-γ em coinfectados HIV/HHV-8 e monoinfectados com HIV. Realizou-se um estudo do tipo caso-controle com 56 amostras de soro de pessoas coinfectadas com HIV/HHV-8 e 95 de monoinfectados com HIV, provenientes do Ambulatório de Doenças Infecciosas e Parasitárias do Hospital das Clínicas da UFPE coletadas no período de julho de 2015 a outubro de 2016. Os dados sócio demográficos foram obtidos a partir do formulário da pesquisa e os exames laboratoriais dos prontuários dos pacientes. A quantificação das citocinas foi realizada pela técnica de citometria de fluxo, com kits comerciais BD (Cytometric Bead Array - CBA) e human soluble protein master buffer kit utilizando o citômetro BD FACSCalibur™. Houve associação dos níveis das citocinas IL-4, IL-6 e IL-10 em coinfectados HIV/HHV-8 comparados com monoinfectados com HIV. A IL-4 foi significativamente aumentada nos coinfectados com carga viral do HIV detectável e indetectável, e os níveis das IL-6 e IL-10 nos coinfectados com carga viral do HIV indetectável. Houve uma correlação inversa entre os níveis da IL-10 e a contagem de TCD4 nos monoinfectados com HIV, mas não foi encontrada associação entre as medianas das contagens de TCD4 entre coinfectados e monoinfectados. O aumento de citocinas em coinfectados pode constituir marcadores preditivos, além disso, ressalta-se a importância do acompanhamento desses pacientes que podem desenvolver doenças associadas ao HHV-8 na coinfecção com o HIV. In people with diseases associated with human herpesvirus type 8 (HHV-8), such as Kaposi's sarcoma (KS), multicentric Castleman's disease (MCD) and primary effusion lymphoma (PEL) in people living with HIV/AIDS, the cytokines IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-α and IFN-γ were reported to be associated with the HHV-8 infection. Considering that HHV-8 may influence the immune response of the host by increasing cytokine levels, increasing HIV viral load and developing diseases, we were motivated to carry out the present study with the objective of comparing IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-α and IFN-γ in HIV/HHV-8 coinfected and monoinfected with HIV. The knowledge that there is an increase in the levels of cytokines in coinfected without diseases associated with coinfection could be predictive markers and inspire to investigate more factors that can develop these clinical manifestations. A case-control study was carried out with 56 serum samples from people co-infected with HIV / HHV-8 and 95 from monoinfected with HIV, from the Infectious and Parasitic Diseases Outpatient Clinic of the Hospital das Clínicas of UFPE collected in the period of July from 2015 to October 2016. The socio-demographic data were obtained from the research form and the laboratory exams of the patients' medical records. Cytokine quantification was performed by flow cytometry using commercial BD (Cytometric Bead Array (CBA) and Human Soluble Protein Master Buffer Kit using the BD FACSCalibur ™ Cytometer. There was an association of IL-4, IL-6 and IL-10 cytokines in HIV / HHV-8 coinfected compared to HIV monoinfected. IL-4 was significantly increased in those co-infected with detectable and undetectable HIV viral load and IL-6 and IL-10 in those co-infected with undetectable HIV viral load. There was an inverse correlation between IL-10 levels and TCD4 counts in HIV monoinfected, but no association was found between the median of CD4 counts between coinfected and monoinfected. The increase in cytokines in coinfected underscores the importance of monitoring these patients, since it may be a predictive marker for HHV-8 associated diseases in HIV / HHV-8 coinfection.

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A doença de Parkinson (DP) é uma afecção do sistema nervoso central (SNC), a qual é expressa de forma crônica e progressiva. É resultante da morte dos neurônios produtores de dopamina cerebrais. Estudos genéticos e epidemiológicos têm destacado o papel da neuroinflamação na fisiopatologia da DP, ressaltando que o processo de neuroinflamação está associado à morte de neurônios dopaminérgicos. No sangue periférico ou nos tecidos, leucócitos ativados por padrões moleculares associados a patógenos (PAMP) e/ou a danos teciduais (DAMP), via receptores Tolllike (TLR), produzem mediadores pró e anti-inflamatórios, cujo desequilíbrio pode levar a um processo inflamatório crônico. Em condições fisiológicas são detectadas três subpopulações de monócitos no sangue periférico humano: os clássicos (CD14++CD16-), os intermediários (CD14++CD16+) e os não clássicos (CD14+CD16++), estas células apresentam diferenças fenotípicas e funcionais que podem influenciar nas características da resposta imune contra DAMPs ou PAMPs. O objetivo deste estudo foi comparar o potencial de leucócitos do sangue periférico de pacientes com DP ou indivíduos sadios na produção de citocinas (TNFα e IL-10) após estímulo celular com agonistas de TLR4 (LPS) ou TLR2/1(Pam3Cys), avaliar o efeito da idade dos pacientes DP na produção de citocinas em hemoculturas, investigar o percentual de subpopulações de monócitos expressando TLR1, TLR2 e TLR10, avaliar a influência da expressão de TLR10 na atividade biológica de TLR2 ao seu agonista, em culturas de CMN. Foram avaliados dois grupos de pacientes com DP (≤ 55 anos e ≥ 65 anos), com idade compatível com os controles saudáveis (n = 26). A produção de TNFα em hemoculturas foi aumentada após a estimulação de TLR4 (6 h), principalmente em pacientes com DP adultos jovens, enquanto que os níveis de TNF-α e IL-10 induzidos por TLR2 diminuíram em pacientes com DP independentemente da idade (p < 0,05). Observou-se uma correlação inversa entre a produção de TNFα induzida pelo LPS e a idade em pacientes com DP e controles, mas o TNFα induzido pelo agonista de TLR2 não estava associado com a idade dos pacientes com DP ou dos controles. A produção de TNFα induzida por TLR4, mas não por TLR2 foi inversamente associada à idade de início e duração da DP. Não foram detectadas associações entre os escores da UPDRS e os níveis de citocnas. Foi observado um maior percentual da subpopulação de monócitos CD14++CD16+ no sangue dos pacientes com DP em relação aos controles sadios, assim como maior percentual de monócitos de pacientes expressando o TLR10. A expressão de TLR2 e TLR10 em monócitos do sangue periférico de pacientes com DP estava aumentada em relação a dos controles sadios. Os resultados sugerem que a resposta de leucócitos do sangue periférico ao ligante de TLR2 é reduzida na DP e que a elevação da expressão de TLR10 em monócitos influencia inibindo a atividade biológica de TLR2 ao seu agonista, demonstrada no experimento de neutralização de TLR10. Verificou-se que o grupo de pacientes DP com maior gravidade da doença, avaliada pela escala UPDRS, apresentava menor percentual de monócitos expressando o TLR10, sugerindo a expressão deste receptor em leucócitos do sangue periférico como um possível marcador prognóstico para a DP. Estes achados, em conjunto, podem desempenhar um importante papel na imunopatologia da DP. O estudo da expressão celular de TLR em leucócitos periféricos e no SNC, das vias de sinalização intracelular e da produção de mediadores pró e antiinflamatórios, é necessário a fim de melhor esclarecer o papel dos TLR na patogênese DP e talvez para a identificação de biomarcadores de prognóstico da doença no sangue dos pacientes. Parkinson's disease (PD) is a condition of the central nervous system (CNS), chronic and progressive, resulting from the death of brain dopamine-producing neurons. Genetic and epidemiological studies have highlighted the role of neuroinflammation in the pathophysiology of PD, emphasizing that the process of neuroinflammation is associated with the death of dopaminergic neurons. In peripheral blood or tissues, leukocytes activated by pathogen-associated molecular patterns (PAMP) and / or tissue damage (DAMP), via Toll-like receptors (TLR), produce pro and antiinflammatory mediators whose imbalance can lead to a chronic inflammation. Under physiological conditions, three subpopulations of human peripheral blood monocytes are detected: the classical monocytes (CD14++CD16-), the intermediates (CD14++CD16++) and the non-classical (CD14+CD16+), these cells present phenotypic and functional differences that can influence the characteristics of the immune response against DAMPs or PAMPs. The aim of this study was to compare the peripheral blood leukocyte potential of patients with PD or healthy individuals in the production of cytokines (TNFα and IL-10) after stimulation of these cells with TLR4 (LPS) or TLR2 / 1 (Pam3Cys) agonists, to evaluate the effect of the age of DP patients on the production of cytokines in blood cultures, to investigate the percentage of monocyte subpopulations expressing TLR1, TLR2 and TLR10, to evaluate the influence of TLR10 expression on the biological activity of TLR2 to its agonist in PBMC cultures. Two groups of patients with PD were evaluated (≤ 55 years old and ≥ 65 years old), age-matched with healthy controls (n = 26). 6 h-TNFα production was increased after TLR4 stimulation, mainly in young PD patients, whereas TLR2-induced TNFα and IL-10 levels were decreased in PD patients independent of age (p < 0.05). A reverse correlation between LPS-induced TNFα production and age was observed in PD patients and controls, but TNFα induced by TLR2 agonist was not associated with age of PD patients or controls. TNFα production induced by TLR4 but not by TLR2 was reversely associated with the age at PD onset and disease duration. No associations between UPDRS scores and cytokine levels were detected. A higher percentage of CD14++CD16+ monocyte subpopulation was observed in the blood of patients with PD compared to healthy controls, as well as a higher percentage of monocytes from patients expressing TLR10. The expression of TLR2 and TLR10 in peripheral blood monocytes from PD patients was increased relative to that of healthy controls. The results suggest that the peripheral blood leukocyte response to the TLR2 ligand is reduced in PD and that the elevation of TLR10 expression in monocytes influences inhibiting the biological activity of TLR2 to its agonist as demonstrated in the neutralization experiment of TLR10. In this study, the group of DP patients with the highest severity of the disease, evaluated by the UPDRS scale, had a lower percentage of monocytes expressing TLR10, suggesting the expression of this receptor in peripheral blood leukocytes as a possible prognostic marker for DP. These findings, together, may play an important role in the immunopathology of PD. The study of TLR cell expression in peripheral leukocytes and CNS, intracellular signaling pathways and the production of pro and anti-inflammatory mediators is necessary in order to better clarify the role of TLR in the PD pathogenesis and perhaps for the identification of biomarkers of disease prognosis in the blood PD patients. Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG

Órgãos provenientes de doadores em morte encefálica (ME) apresentam piores desfechos nos receptores transplantados quando comparados a órgãos de doadores vivos, relacionados ou não relacionados. A lesão desses órgãos dá-se pelos processos relacionados à sua retirada e estocagem e também pela intensa atividade inflamatória presente na ME. Os efeitos dessa inflamação, com aumento da expressão de citocinas, já foram comprovados em rins, fígado, pulmão, coração e pâncreas. A maioria dos estudos avaliou os níveis de citocinas após ter sido estabelecido o diagnóstico de ME ou durante a cirurgia de retirada de órgãos para transplante. Porém, acredita-se que a intensa liberação de catecolaminas que ocorre no momento da instalação da ME possa relacionar-se com elevação precoce desses marcadores. Os pacientes em ME frequentemente apresentam outros insultos que podem desencadear resposta inflamatória sistêmica, como ventilação mecânica, choque hemorrágico, parada cardíaca e sepse. Portanto, o objetivo deste estudo foi comparar o nível de inflamação, por meio de dosagem plasmática de citocinas, entre pacientes em ME e pacientes criticamente doentes, com ou sem sepse, além de avaliar o comportamento das citocinas ao longo do tempo. Demonstramos que a ME está associada a um maior nível de inflamação do que a induzida pela doença crítica e a um nível semelhante à inflamação induzida pela sepse. Mesmo excluindo da análise os pacientes em ME que apresentavam sepse, os achados não se modificaram, corroborando com a hipótese de que a ME, per se, desencadeia uma resposta inflamatória sistêmica. Grafts from brain death (BD) donors in have worse outcomes as compared to grafts from living donors, even HLA-unmatched living donors. Besides the injuries related to organ retrieval and transplantation procedure, organs are also exposed to the intense systemic inflammatory response that occurs in BD. The deleterious effects of inflammation, with upregulation of cytokine expression, have already been documented in kidney, liver, lung, heart and pancreas. Most of these studies evaluated cytokine levels after BD confirmation or before organ retrieval. However, it is possible that the massive catecholamine release present at the time of BD installation might lead to a precocious cytokine increase. Moreover, brain-dead patients frequently suffer from other injuries that might also trigger an inflammatory cascade, such as mechanical ventilation, hemorrhagic shock, cardiac arrest and sepsis. Therefore, the purpose of this study was to compare, by means of plasmatic cytokines measurement, the level of inflammation in braindead patients and in critically ill patients, septic and non-septic, and to evaluate plasmatic cytokine kinetics in BD. We demonstrated that BD is associated with a higher level of inflammation than that induced by critical illness, which was similar to the induced by sepsis. Even when brain-dead patients with sepsis were excluded from the analysis, the results remain, corroborating the hypothesis that BD itself triggers a systemic inflammatory response.

Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Materiais. Departamento de Engenharia Metalúrgica, Escola de Minas, Universidade Federal de Ouro Preto. As modificações nas superfícies de implantes dentários podem, quando intraósseo, acelerar a adesão, migração e proliferação celular, e desta maneira acelerar o processo de osseointegração e quando estas são feitas na superfície supra óssea favorecem a fixação das próteses implanto suportadas. Os tratamentos superficiais são realizados com o objetivo de aumentar as ligações químicas e mecânicas entre o implante e osso e quando supra óssea aumentar o embricamento mecânico com o cimentante. Uma superfície com aumento de sua rugosidade é a almejada para que ocorra a deposição de matriz e crescimento do tecido ósseo, outro desejo é aumentando as rugosidades na superfície supraóssea, facilitando a fixação das próteses sobre implantes. O objetivo deste trabalho foi caracterizar superfícies de implantes dentários tratadas com ácido fosfórico á 37%, bem como avaliar seus efeitos sobre células sanguíneas e correlacionar com os níveis de citocinas. Foram avaliadas superfícies de implantes divididas em grupos com 50 amostras sendo distribuídos em: amostras de porcelana, sem tratamento; amostras de metal sem tratamento; amostras de porcelana com tratamento com ácido fosfórico a 37% por 30 segundos; amostras de metal com tratamento ácido fosfórico a 37% por 30 segundos; amostras de porcelana com tratamento com ácido fosfórico a 37% por 60 segundos; amostras de metal com tratamento com ácido fosfórico a 37% por 60 segundos. As amostras foram caracterizadas por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) e por reometria. Os ensaios biológicos foram realizados com células mononucleares sanguíneas de doadores humanos. As amostras foram incubadas por 24 horas na presença ou ausência de enxague das superfícies. A viabilidade celular foi determinada por métodos colorimétricos e a quantificação de citocinas no sobrenadante pelo método de citometria de fluxo. Após o tratamento com ácido fosfórico foram observadas modificações de porosidade, ampliação da área de contato e presença de placas cobrindo a superfície. Independente do tipo de tratamento, a análise das curvas de fluxo de sangue e de viscosidade foram similares tanto nas superfícies com tratamento como nas não tratadas e altos índices de viabilidade celular foram observados na análise das superfícies de implantes, determinando sua biocompatibilidade. Houve aumento das interleucinas (IL); IL-2, IL-4, IL-6, IL-10 e do fator de necrose tumoral (TNF-α), quando as células foram incubadas com enxague das superfícies tratadas com ácido e com cimento. Obteve-se também correlação positiva entre as concentrações das IL-10 com IL -2 e IL-10 com IL-4 em sobrenadantes de culturas de células incubadas na presença do ácido. Os resultados encontrados sugerem que os tratamentos de superfícies de implantes com ácido fosfórico a 37% foram capazes de ativar a produção de citocinas inflamatórias. Portanto, o aumento de citocinas pode atuar modulando a reposta imunológica e resultando em melhora de processos de biofuncionalidades garantindo desta forma o sucesso das próteses implanto suportadas de uso odontológico. Changes in the surfaces of dental implants can, when intraosseous, accelerate the adhesion, migration and cell proliferation, and in this way accelerate the osseointegration process and when these are made on the supra bone surface favor the fixation of the supported implant prostheses. Surface treatments are performed with the aim of increasing the chemical and mechanical bonding between the implant and bone and when supra-bone increase mechanical bonding with the cement. A surface with increased roughness is the aim for the matrix deposition and growth of the bone tissue, another desire is to increase the roughness on the supraosseous surface, these facilitate the fixation of the prosthesis on implants. The objective of this study was to characterize surfaces of dental implants treated with phosphoric acid at 37%, as well as to evaluate its effects on blood cells and correlate with cytokine levels. Implant surfaces were divided into groups with 50 samples being distributed in: porcelain samples, without treatment; Untreated metal samples; Porcelain samples treated with phosphoric acid at 37% for 30 seconds; Samples of metal with phosphoric acid treatment at 37% for 30 seconds; Porcelain samples treated with phosphoric acid at 37% for 60 seconds; Samples of metal treated with phosphoric acid at 37% for 60 seconds. The samples were characterized by Scanning Electron Microscopy (SEM) and by rheometry. Biological assays were performed with blood mononuclear cells from human donors. The samples were incubated for 24 hours in the presence or absence of surface rinsing. Cell viability was determined by colorimetric methods and the quantification of cytokines in the supernatant by the flow cytometry method. After treatment with phosphoric acid, porosity changes, contact surface magnification and presence of plaques covering the surface were observed. Regardless of the type of treatment, the analysis of blood flow and viscosity curves were similar on both treated and untreated surfaces and high cell viability indices were observed in the analysis of the implant surfaces, determining their biocompatibility. There was an increase in interleukins (IL); IL-2, IL-4, IL-6, IL-10 and tumor necrosis factor (TNF-α), when cells were incubated with rinsed acid and cement treated surfaces. There was also a positive correlation between IL-10 concentrations with IL-2 and IL-10 with IL-4 in supernatants from cultures of cells incubated in the presence of the acid. The results suggest that surface treatments of implants with phosphoric acid at 37% were able to activate the production of inflammatory cytokines. Therefore, the increase of cytokines can act by modulating the immunological response and resulting in improved biofunctional processes, thus guaranteeing the success of supported implant prostheses for dental use.

Schizophrenia is a psychiatric disorder that affects about 1% population around the world and its pharmacological treatment consist in the use of antipsychotics. Haloperidol, a first generation antipsychotic (FGA) acts primarily by blocking dopamine D2 receptors, while risperidone, a second generation antipsychotic (SGA), also acts through antagonism of serotonin receptors 5-HT2A serotonin receptor. Among the side effects related to the use of these drugs are the motor disorders, which are more related to the use of SGA. Tardive dyskinesia (TD), a behavioral disorder associated with chronic antipsychotic treatment, is characterized by involuntary movements, predominantly on the orofacial region, and its pathophysiology is not well understood. This study aimed to evaluate behavioral, inflammatory and dopaminergic changes in rats treated with haloperidol (1.0 mg/kg/day) or risperidone (2 mg/kg/day) for 28 days. There was a significant increase on vacuous chewing movements (VCM) in rats treated with haloperidol, but not risperidone, as well as a decrease in locomotor and exploratory activity. Both antipsychotic increased the levels of pro-inflammatory cytokines (interleukin-1β [IL-1β], interleukin-6 [IL-6], tumor necrosis factor-α [TNF- α] and γ interferon [IFN-γ]) and decreased the anti-inflammatory (interleukin-10 [IL-10]) in the striatum. Correlation analysis showed a positive relation between increased number of VCM and IL-1β and INF-γ levels. Oxidative and antioxidant markers (levels of thiobarbituric acid reactive substances [TBARS], catalase and protein and nonprotein thiols) showed no significant changes in the cortex of rats treated with both antipsychotics. The activity of the enzyme monoamine oxidase (MAO-A and MAO-B) in the cerebral cortex, in rats treated with haloperidol or risperidone remained in the control group levels and the immunoreactivity of the enzyme tyrosine hydroxylase (TH) and dopamine transporter (DAT), showed no significant difference when evaluated also in the cortex of animals treated with both antipsychotics. Analyzing together, the results suggest that elevated levels of inflammatory markers can be linked to the development of DT. However, these results should be treated with reserve, once the risperidone-treated group also showed a change in cytokine levels. Also, suggest that treatment with haloperidol or risperidone does not change the parameters dopaminergic and does not cause oxidative damage in the cerebral cortex, suggesting that the cortex may not be related to the development of motor disorder. A esquizofrenia é uma doença psiquiátrica que atinge cerca de 1% da população mundial e seu tratamento farmacológico consiste na utilização de antipsicóticos. O haloperidol, um antipsicótico de primeira geração (APG) atua principalmente através do bloqueio dos receptores de dopamina D2, enquanto a risperidona, um antipsicótico de segunda geração (ASG), atua também através do antagonismo dos receptores de serotonina 5-HT2A. Dentre os efeitos colaterais relacionados ao uso desses fármacos estão os distúrbios motores, os quais estão mais relacionados ao uso de APG. A discinesia tardia (DT), uma alteração motora associada ao tratamento crônico com antipsicóticos, é caracterizada por movimentos involuntários, principalmente da região orofacial e sua fisiopatologia ainda não está bem elucidada. Este trabalho objetivou avaliar as alterações comportamentais, inflamatórias e dopaminérgicas em ratos tratados com haloperidol (1,0 mg/kg/dia) ou risperidona (2 mg/kg/dia) durante 28 dias. Houve um aumento significativo no número de movimentos de mascar no vazio (MMV) nos ratos tratados com haloperidol, mas não risperidona, além de uma redução na atividade locomotora e exploratória. Ambos os antipsicóticos aumentaram os níveis de citocinas pró-inflamatórias (interleucina-1β [IL-1β], interleucina-6 [IL-6], fator de necrose tumoral-α [TNF-α] e interferon- γ [IFN-γ]) e diminuíram a citocina antiinflamatória (interleucina-10 [IL-10]) no estriado. As análises de correlação mostraram uma relação significativa e positiva entre o aumento do número de MMV e os níveis de IL-1β e INF-γ. Os marcadores oxidativos e antioxidantes (níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico [TBARS], catalase e tióis proteico e não proteico) não mostraram qualquer alteração significativa no córtex de ratos tratados com ambos os antipsicóticos. A atividade da enzima monoaminoxidase (MAO-A e MAO-B) no córtex cerebral, para haloperidol e risperidona, manteve-se aos níveis do grupo controle e a imunorreatividade da enzima tirosina hidroxilase (TH) e do transportador de dopamina (TDA) não apresentou diferença significativa quando avaliada também no córtex de animais tratados com ambos os antipsicóticos. Analisando em conjunto, os resultados sugerem que elevados níveis de marcadores inflamatórios podem estar ligados ao desenvolvimento da DT. No entanto, esses resultados devem ser analisados com cautela, uma vez o grupo tratado com risperidona também apresentou alteração dos níveis de citocinas. Além disso, sugerem que o tratamento com haloperidol ou risperidona não altera os parâmetros dopaminérgicos nem acarreta dano oxidativo ao córtex cerebral, podendo essa estrutura cerebral não estar relacionada ao desenvolvimento dessa desordem motora.

Hepatitis C is an infectious disease caused by Hepatitis C virus (HCV) and characterized by development of inflammation as well as fibrosis. On the other hand, the extracellular nucleotides and adenine nucleosides are important signaling molecules that can modulate inflammatory responses in platelets and lymphocytes. This study sought to determine the activities of ectoenzymes [ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase (E-NTPDase), ecto-5 -nucleotidase (E-5 -NT) and ecto-adenosine deaminase (E-ADA)] that metabolize nucleotides in platelets and lymphocytes and to evaluate cytokine levels of patients with HCV. Twenty five HCV patients and fifty healthy subjects (control group) were selected for this study. In lymphocytes, was observed a lower ATP hydrolysis (P

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-07T15:06:12Z No. of bitstreams: 1 ARQUIVO_FINAL_MARINA_CARVALHO_PRADO_DISSERTACAO.pdf: 1065769 bytes, checksum: 7e636b1f0b93287b2c734c826800f222 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-07T15:06:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ARQUIVO_FINAL_MARINA_CARVALHO_PRADO_DISSERTACAO.pdf: 1065769 bytes, checksum: 7e636b1f0b93287b2c734c826800f222 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Various types of inflammatory mediators are involved in the cascade of biological events that promote tissue remodeling and facilitate orthodontic tooth movement. Thus, a better understanding of the biological mechanisms that facilitate tooth movement and orthodontic treatment is needed. This study aimed to evaluate, at different time intervals, the expression levels of ten cytokines present in the gingival crevicular fluid of patients undergoing orthodontic treatment. The sample comprised 15 patients with a mean age of 13.9 ± 2.5 years. The lower teeth were moved using fixed appliances and 0.014" nickel titanium wires (experimental group), whereas the upper teeth did not receive any orthodontic forces (control group). Samples of gingival crevicular fluid were collected from the incisors at the time of appliance installation and application of force (T0) and after 24 h (T1), 7 days (T2), and 21 days (T3). The levels of ten cytokines, namely, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, IL-17, IFN-γ, GM-CSF, MCP-1, MIP-1β, and TNF-α were quantified using multianalysis Luminex technology. In the experimental group, the expression levels of cytokines remained constant after 21 days of orthodontic activation, whereas in the control group, a statistically significant reduction in cytokine levels was observed 7 days after activation. The greater levels in the expression levels of IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, IL-17, IFN-γ, GM-CSF, MCP-1, MIP-1β, and TNF-α in the moved teeth, as compared to the control teeth, pose for a role of these mediators in underling mechanism of the orthodontic tooth movement. Diversos tipos de mediadores inflamatórios estão envolvidos na cascata de eventos biológicos que propicia a remodelação tecidual, viabilizando a movimentação dentária ortodôntica. O objetivo deste trabalho foi detectar e quantificar, em diferentes intervalos de tempo,os níveis de expressão de citocinas pró-inflamatórias e anti-inflamatórias presentes no fluido gengival crevicular de pacientes submetidos a tratamento ortodôntico. A amostra foi constituída de 15 pacientes com média de idade de 13.9 ±2.5 anos. Os dentes do arco inferior foram movimentados empregando-se aparelhagem fixa e fios de níquel titânio 0.014 (grupo experimental), enquanto que os dentes da arcada superior não receberam nenhum tipo de força ortodôntica (grupo controle). Amostras de fluido gengival crevicular foram coletadas nos incisivos superiores e inferiores no dia da instalação do aparelho e aplicação da força (T0), e após 24 horas (T1), 7 dias (T2) e 21 dias (T3). Os níveis de onze citocinas foram quantificados utilizando a tecnologia multianálise do Luminex. Foram utilizados testes não-paramétricos para as comparações entre os grupos e ao longo do tempo. No grupo experimental, os níveis de expressão das citocinas pró e anti-inflamatórias mantiveram-se constantes após os 21 dias de ativação ortodôntica. No grupo controle, houve uma redução estatisticamente significativa no tempo T2 das citocinas pró-inflamatórias. A constância na expressão dos níveis de todas as citocinas, nos dentes sob movimentação, parece estar compatível com o estímulo mecânico induzido de forma suave e contínua.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, Florianópolis, 2016. Introdução: A ativação do sistema inflamatório está presente desde as fases iniciais da cirrose e está associada a níveis elevados de citocinas. Entretanto, ainda faltam dados sobre o significado prognóstico das citocinas circulantes no cirrose hepática. Buscamos investigar o significado prognóstico da IL-6, IL-10 e IL-17 em pacientes com cirrose estável e em indivíduos internados por descompensação aguda (DA) da cirrose. Métodos: Este estudo prospectivo incluiu duas coortes: (1) cirrose estável atendidos no ambulatório (n = 118), e (2) indivíduos internados por DA (n = 130). Trinta indivíduos saudáveis serviram como grupo de controle. Os critérios de acute-on-chronic liver failure (ACLF) foram aplicados de acordo com o Consórcio EASL-CLIF. Resultados: Níveis de IL-6 e IL-10 se mostraram mais elevados em ambos os grupos de pacientes com cirrose, em comparação com o grupo controle, e também em doentes com DA em relação à cirrose estável (P Abstract : Introduction: Activation of inflammatory system is present from the early stages of cirrhosis and it is associated with elevated levels of cytokines. However, data about the prognostic significance of circulating cytokines in liver cirrhosis is still lacking. We sought to investigate the prognostic significance of IL-6, IL-10 and IL-17 in patients with stable cirrhosis and in subjects admitted for acute decompensation (AD) of cirrhosis. Methods: This prospective study included two cohorts: (1) stable cirrhosis attended in the Outpatient Clinic (n = 118), and (2) subjects hospitalized for AD (n = 130). Thirty healthy subjects served as control group. The acute-on-chronic liver failure (ACLF) criteria were applied according to the EASL-CLIF Consortium. Results: IL-6 and IL-10 levels were higher in both groups of patients with cirrhosis as compared to control group and also in patients with AD in relation to stable cirrhosis (P < 0.05). In stable cirrhosis, during a median follow-up of 17 months, an event (hospitalization, death or liver transplantation) occurred in 26 patients and was associated with higher IL-6 (3.56 pg/mL vs. 2.13 pg/mL, P = 0.013) and IL-10 (0.54 pg/mL vs. 0.22 pg/mL, P = 0.021), but not IL-17 levels. In the hospitalized cohort, 39 patients died after 90 days of follow-up. Logistic regression analysis showed that death in AD cohort was independently associated with ascites (OR 6.286, 95% CI 1.826 ? 21.635; P = 0.004), MELD (OR 1.300, 95% CI 1.175 ? 1.439; P < 0.001) e IL-6 (OR 1.002, 95% CI 1.000 ? 1.004, P = 0.029). The AUROC of IL-6 to predict 90-day mortality was 0.779 ± 0.046 and the Kaplan?Meier survival probability was 90.0% for IL-6 < 21 pg/mL and 46.7% for IL-6 = 21 pg/mL (P < 0.001). Cytokine levels were evaluated in the prediction of bacterial infection. Regression analysis showed that bacterial infection diagnosed during the first 48 hours after admission was associated with IL-6, CRP and ascites. IL-6 exhibited higher AUROC than CRP for predicting bacterial infection (0.831 ± 0.043 vs. 0.763 ± 0.048, respectively). Higher IL-6 levels were observed in ACLF patients even in the absence of bacterial infection whereas IL-10 was higher only in subjects with infection-related ACLF. Cytokines levels were reassessed at the third day of hospitalization in 74 subjects. No differences between admission and third-day levels were noted for IL-6. Lower IL-10 levels were observed at third day regardless of the presence of ACLF or death during follow-up. However, IL-17 levels dropped significantly only in those who died during follow-up. Conclusion: Circulating IL-6, IL-10 and IL-17 are of prognostic value in patients with cirrhosis.

Submitted by ROBERTO PAULO CORREIA DE ARAÚJO (ppgorgsistem@ufba.br) on 2016-03-31T12:23:56Z No. of bitstreams: 1 PDF Final 11.03.pdf: 6124430 bytes, checksum: 32e0beca7261414b74bb431f4d37f3f0 (MD5) Made available in DSpace on 2016-03-31T12:23:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF Final 11.03.pdf: 6124430 bytes, checksum: 32e0beca7261414b74bb431f4d37f3f0 (MD5) FAPESB, CNPq, e CAPES Introdução: A periodontite é uma doença inflamatória que afeta a inserção do tecido conjuntivo e do osso de suporte que rodeia os dentes. Os osteoclastos estão implicados na homeostasia do tecido ósseo em situações patológicas, como na doença periodontal. O desequilíbrio na remodelação óssea pela indução de inflamação e perda óssea mediada pelos osteoclastos pode ser desencadeado pelo LPS de P. gingivalis (PgLPS). Alguns fatores e fármacos podem restaurar a homeostase do osso, com a regulação de mediadores inflamatórios como o extrato metanólico de Allium cepa L. (AcE) e a quercetina (Qt), que têm demonstrado possuir propriedades anti-inflamatórias. Objetivos: Nossos objetivos foram analisar os efeitos imunomoduladores in vitro do AcE e da Qt na osteoclastogênese em condições inflamatórias (PgLPS-induzida). Métodos: Células precursoras de osteoclastos (RAW 264.7) foram diferenciadas com 30 ng/mL de RANKL, coestimuladas com PgLPS (1 μg/mL) e tratadas com AcE (50-1000 μg/mL) ou Qt (1,25, 2,5 ou 5 μM). Ensaios de redução da resazurina e ensaio para mensuração de proteína total foram utilizados para avaliar a viabilidade celular. Ensaio de fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP) foi utilizado para determinar a quantidade de p-nitrofenol libertado; e coloração de TRAP foi utilizada para avaliar o número e o tamanho dos osteoclastos multinucleados. Os níveis de citocinas foram quantificados por ELISA em sobrenadantes de cultura celular. Utilizando-se ensaios de Western blot, foi avaliada a fosforilação e a degradação do IκBα. Resultados: Foram determinadas concentrações não citotóxicas de AcE e de Qt em culturas celulares. A osteoclastogênese foi modulada negativamente nas concentrações testadas de AcE e de Qt em comparação com o controle. Todas as concentrações de AcE e de Qt diminuíram significativamente o número de osteoclastos grandes, presumivelmente mais ativos, e as concentrações de AcE a 1000 μg/mL μM reduziram o número de osteoclastos pequenos. Observou-se um decréscimo da produção de IL-6 e IL-1α e um aumento da produção de IL-3 e IL-4. Além disso, tanto o AcE quanto a Qt regularam negativamente a via do NF-κB. Conclusão: Esses resultados sugerem que o AcE e a Qt podem ser inibidores de osteoclastogênese em condições inflamatórias, por meio da diminuição da ativação da via do NF-κB induzida por PgLPS e RANKL. Mais estudos são necessários para apoiar o uso do AcE e da Qt para tratar doenças que envolvam perda óssea patológica, incluindo-se a periodontite. Introduction: Periodontitis is an inflammatory disease that affects connective tissue attachment and the supporting bone that surrounds the teeth. Osteoclasts are implicated in normal bone remodeling and bone loss. P. gingivalis LPS (PgLPS) can cause an imbalance in the remodeling by inducing inflammation and osteoclast-mediated bone loss. Allium cepa L. (AcE) and quercetin (Qt) have been shown to possess anti-inflammatory properties. Objectives: Our aims were to examine the in vitro modulatory effects of AcE and Qt on osteoclastogenesis under inflammatory conditions (LPS-induced). Methods: RAW 264.7 cells were differentiated with 30ng/mL of RANKL, co-stimulated with PgLPS (1μg/mL) and treated with AcE (50-1000 μg/mL) or Qt (1.25, 2.5 or 5 μM). Resazurin reduction and total protein content assays were used to detect cell viability. Tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) assays were used to determine the amount of released p-nitrophenol that indicates the degree of differentiation in RANKL-stimulated cells; and TRAP staining was used to evaluate the number and size of TRAP-positive multinucleated osteoclast cells. Cytokine levels were measured using ELISA on osteoclast precursor cell culture supernatants. Using western blot analysis IκBα phosphorylation and IκBα degradation were evaluated. Results: Both AcE and Qt did not affect cell viability. Osteoclastogenesis was significantly affected by AcE and Qt when compared to control. Small (less active) osteoclast counts were decreased by AcE (1000 μg/mL) and Qt (2.5 and 5 μM), while all concentrations of AcE and Qt significantly decreased the number of large and presumably active osteoclasts. We observed lower production of IL-6 and IL-1α and an increased production of IL-3 and IL-4. Also both AcE and Qt downregulated NF-κB pathway. Conclusion: These findings suggest that AcE and Qt may be inhibitors of osteoclastogenesis under inflammatory conditions (LPS-induced) via attenuation of RANKL/ PgLPS-induced NF-κB activation. Further studies are needed in other to support the use of AcE and Qt to treat diseases involving pathological bone loss including periodontitis.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2015. A sepse induzida por pneumonia é responsável por cerca de 50% do casos de pneumonia no mundo. A bactéria gram-negativa Klebsiella pneumoniae é uma das bactérias mais comuns na sepse nosocomial e contribui para a alta taxa de mortalidade desta condição. Os pacientes que evoluem para sepse grave e choque séptico apresentam disfunção de órgãos e níveis elevados de citocinas plasmáticas, as quais podem ser responsáveis pela morte de muitos pacientes. Uma forma de se avaliar o quadro dos pacientes sépticos e predizer como será a progressão desta síndrome é por meio dos escores clínicos, sendo assim, o objetivo deste estudo foi verificar a aplicabilidade de escore clínico murino e correlacioná-lo com a mortalidade e disseminação bacteriana em diferentes órgãos, como também avaliar a produção de citocinas nestes órgãos, além dos níveis plasmáticos. O modelo utilizado no estudo foi a sepse induzida por pneumonia em camundongos machos. A indução da sepse foi realizada por meio da inoculação intratraqueal de Klebsiella pneumoniae 1x109 CFU/animal. A avaliação de escore clínico foi realizada ao longo do tempo e em todos os experimentos. Os resultados mostraram que animais que apresentam escores clínicos mais elevados (> 3) possuem maior probabilidade de morrerem. Animais com escore > 3 têm bacteremia transitória, porém, mostram disseminação para diferentes órgãos como coração, rim, fígado e cérebro, a partir de 2 horas após a inoculação da bactéria. A disseminação apresentou-se ainda maior 6 e 24 horas após a infecção. Observou-se também que animais com escores > 3 demonstram mais do que 3 tecidos infectados, ou seja, quanto mais órgãos afetados, maior o escore clínico e, consequentemente, maior o risco de morte. Além disso, nestes mesmos animais que apresentaram alta disseminação bacteriana e escores altos, mensurou-se o nível de 4 citocinas (TNF-a, MCP-1, IL-6 e IL-10), tanto no plasma e foco infeccioso (pulmão), quanto no coração, fígado, rim e cérebro. As citocinas também começaram a se elevar a partir de 2 horas em diferentes tecidos, mantendo-se altas até 24 horas. Os níveis de ureia, creatinina, alanina transferase e aspartato transferase aumentaram significativamente, principalmente 24 horas após a infecção. Diante do exposto, osdados deste trabalho sugerem que: i) escores de gravidade têm poder preditivo em modelos experimentais de sepse e ii) altas concentrações de citocinas teciduais podem contribuir para inflamação localizada e ser um dos fatores responsáveis pelo dano de órgãos. Abstract : The pneumonia-induced sepsis is responsible for about 50% of cases in the world. The gram-negative bacterium Klebsiella pneumoniae is one of the most common bacteria involved in nosocomial sepsis and contributes to the high mortality rate. Patients who develop severe sepsis and septic shock present organ dysfunction and elevated plasma cytokine levels which may lead to the death of many of them. Clinical scores are observations to evaluate the framework of septic patients. They can predict the syndrome progress and also the mortality. Therefore, the objective of our study was to verify the applicability of a murine clinical score system and to correlate it with mortality and bacterial dissemination in different organs. In addition, to evaluate cytokines production from these organs which present high bacterial load. The model used in our experiments was pneumonia-induced sepsis in male mice. The induction was performed by Klebsiella pneumonia inocculation of 1x109 UFC/animal intratracheally. The clinical score evaluation was performed over time in all experiments. The results demonstrated animals which present higher clinical scores (> 3) are more likely to die. Animals presenting clinical scores > 3 presented transient bacteremia, however, displayed bacterial spreading to different organs as heart, kidney, liver, and brain. The bacterial dissemination starts at 2 hours after the bacterial inoculation. The spreading was even higher 6 and 24 hours after infection. It was also observed that animals with scores above 3 present more than 3 infected tissues by K. pneumoniae. There is a correlation between clinical scores and bacterial dissemination, as many more organs are infected, major clinical scores will be showed and consequently the greatest risk of death. In addition, animals which showed bacterial dissemination in more than three organs and high clinical scores (> 3) present high levels of 4 cytokines (TNF-a, MCP-1, IL-6 and IL-10), at plasma and focus of infection (lung), as well as heart, liver, kidney and brain. The cytokines also started to rise 2 hours after infection in different tissues and remained high until 24 hours. Tissue cytokine concentrations might contribute to the organ damage of pneumoseptic animals. The levels of urea, creatinine, and aspartate transaminase and alanine transferase increasedsignificantly, especially 24 hours after infection. Therefore, this study data suggest that: i) severity scores have predictive power in experimental models of sepsis and ii) high concentrations of tissue cytokines may contribute to localized inflammation and be one of the factors responsible for the loss of function and organ damage.

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-27Bitstream added on 2014-11-10T11:57:30Z : No. of bitstreams: 1 000783135.pdf: 4785949 bytes, checksum: 6679e25c8d6dcfd9b73004d8151c331e (MD5) O vírus da hepatite C crônica (VHC) é causa de doença hepática crônica afetando cerca de 3% da população mundial, aproximadamente 170 milhões de pessoas. Investigações sobre a resposta imune em indivíduos infectados com HCV é justificável pelo fato desta constituir doença infecciosa cujas alterações imunológicas têm relação direta com o desenvolvimento e a manutenção da infecção. Este projeto visou avaliar aspectos que compõem a resposta imune de pacientes com hepatite C crônica com diferentes graus de lesão hepática. Foram incluídos no estudo pacientes VHC+ (n=83), genótipo 1, pré-tratamento, os quais foram estratificados conforme o grau de fibrose hepática determinada por biópsia (classificação METAVIR), compondo: G1 (n = 15) pacientes nos estágios F0 (nenhuma fibrose) + F1 (fibrose em expansão dos espaços porta); G2 (n = 21) pacientes no estágio F2 (poucas fontes de fibrose nos espaços porta); G3 (n = 15) pacientes em estágio F3 (início da formação de nódulos); G4 (n = 32) pacientes em estágio F4 (fibrose severa); G5 (n = 16) doadores de sangue voluntários (grupo controle). Foram avaliadas características imunofenotípicas de subpopulações de leucócitos do sangue periférico (células NK totais, NKdim, NKbright, células dendríticas mielóides e plasmocitóides, monócitos clássicos e pro-inflamatórios, linfócitos T CD4+/CD8+), níveis de citocinas e quimiocinas plasmáticas (TGF-β, TNF-α, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CXCL8, CXCL9, CXCL10), analisando a relação destes com a progressão da fibrose. Todas as frequências das subpopulações leucocitárias avaliadas estão alteradas em portadores de hepatite C crônica comparados com indivíduos saudáveis. Além disso, há correlação entre o grau de fibrose e a quantidade de linfócitos T CD4, T CD8, monócitos pro-inflamatórios e células NKbright circulantes. Níveis aumentados de TNF-α foram observados ... The chronic hepatitis C virus (HCV) is the cause of chronic liver disease affecting about 3% of world population, approximately 170 million people. Investigations of the immune response in individuals infected with HCV is justifiable because this form infectious disease whose immunological changes are directly related to the development and maintenance of infection. This project aimed to evaluate aspects that make up the immune chronic hepatitis C patients with different degrees of liver damage response. The study included patients HCV+ (n = 83), genotype 1, pretreatment, which were classified according to the rate of hepatic fibrosis determined by biopsy (METAVIR classification), composed of: G1 (n = 15) patients in stages F0 (no fibrosis) + F1 (fibrosis expansion of port spaces), G2 (n = 21) patients in the F2 stage (few sources of fibrosis in portal ), G3 ( n = 15 ) patients with stage F3 (early nodule formation), G4 (n = 32) patients with stage F4 (severe fibrosis), G5 (n = 16) volunteer blood donors (control group). Immunophenotypic characteristics of subpopulations of peripheral blood leukocytes (total NK cells, NKdim , NKbright , myeloid dendritic cells and plasmacytoid , classical monocytes, pro- inflammatory CD4 + / CD8 + cells), cytokine levels and plasma chemokines (were evaluated TGF- β , TNF - α , CCL2 , CCL3 , CCL4 , CCL5 , CXCL8 , CXCL9, CXCL10), analyzing their relationship with the progression of fibrosis. All frequencies of evaluated leukocyte subpopulations are altered in patients with chronic hepatitis C compared with healthy subjects. In addition, no correlation between the degree of fibrosis and the amount of CD4, CD8, pro-inflammatory monocytes and circulating NKbright cells. Increased levels of TNF-α were observed in cirrhotic patients (G4) and TGF - β in HCV + groups with moderate hepatic fibrosis (G2 and G3). Plasma chemokine CXCL9/MIG, CXCL10/IP-10, CXCL8/IL-8, CCL2/MPC-1, ...

A periodontite crônica (PC) é a principal forma de doença periodontal destrutiva e resulta da interação entre bactérias e resposta inflamatória do hospedeiro, podendo ser afetada por fatores ambientais como o fumo. O objetivo do estudo foi avaliar a expressão de citocinas e quimiocinas, assim como a densidade de células dendríticas (CDs) imaturas e maduras, e densidade do infiltrado inflamatório no tecido gengival de indivíduos não-fumantes (NF) e fumantes (F), diagnosticados com periodontite crônica. O estudo foi aprovado pelo COEP-UFMG (423/11) e foram recrutados 24 indivíduos NF e 21 F. Seis amostras de mucosa normal (MN) foram usadas como controle de quimiocinas e citocinas. Foi realizado exame periodontal para avaliação de profundidade de sondagem (PS), nível de inserção clínica (NIC) e sangramento à sondagem (SS). Indivíduos que apresentavam NIC 3 mm na proximal em 2 dentes não adjacentes foram diagnosticados com PC. Imunoistoquímica foi feita para avaliar a densidade (células/mm2) de CDs imaturas CD1a+ e Fator XIIIa+, e CDs maduras CD83+. A densidade do infiltrado inflamatório em cortes corados por hematoxilina e eosina também foi avaliada. As quimiocinas CCL2, CCL3, CCL5, CCL19, CCL20 e CXCL8 foram medidas usando o ensaio ELISA e as citocinas IL-2, IL-10, IL-4, IL-6, IFN-, TNF-, IL-17A foram medidas usando o método CBA, nas amostras de tecido gengival. Os indivíduos foram questionados em relação ao tempo do hábito de fumar (HF/anos) e o número de cigarros fumados por dia (C/dia). A densidade de CDs maduras CD83+, níveis de CCL3 e CXCL8 diminuíram nos fumantes. Os níveis de CCL5 estavam aumentados nos fumantes. Negativas correlações entre o número de C/dia com níveis de IL-17A e o número de dentes, e entre o tempo do HF/anos e níveis de CCL19 foram observadas. As expressões de IL-6, CCL2 e CCL20 foram positivamente correlacionadas com o número de CDs imaturas CD1a+. Os níveis de IL-2, TNF-, IFN-, IL-10, IL-17A, CCL3, CCL5, CCL19 e CXCL8 estavam aumentados no tecido com PC quando comparados com MN. A porcentagem de sítios com NIC3 mm foi positivamente correlacionada com densidade do infiltrado inflamatório, níveis de expressão de CCL3 e CXCL8, e negativamente correlacionada com densidade de CDs imaturas CD1a+ e níveis de IL-2. Pode-se concluir que o hábito de fumar afeta células e mediadores inflamatórios da resposta imune de indivíduos diagnosticados com PC. Além disso, o aumento das CDs imaturas pode estar associado com maiores níveis de IL-6, CCL2 e CCL20, embora somente os níveis de IL-2, TNF-, IFN-, IL-10, IL-17A, CCL3, CCL5, CCL19 e CXCL8 apresentaram aumentados nos tecidos gengivais com PC. Maior densidade de infiltrado inflamatório, níveis de CCL3 e CXCL8, e menor densidade de CDs imaturas CD1a+ e níveis de IL-2 parecem estar associados com maior gravidade da doença. Chronic periodontitis (CP) is the most frequent form of destructive periodontal disease, and results from the interaction between bacterial biofilm and the host inflammatory response. Environmental factor as smoking is essential in determining to individual susceptibility. The present study aimed to evaluate chemokine and cytokine expressions, densities of immature and mature dendritic cells (DCs), and inflammatory infiltrate density in the gingival tissue of non-smokers (NS) and smokers (S) diagnosed with CP. The effect of smoking in chemokines, cytokines and immature and mature DCs were also evaluated. The study was approved by COEP-UFMG (423/11), and it was selected 24 NS and 21 S. Six samples of normal mucosa (NM) were used to control of chemokine and cytokine levels. It was performed periodontal examination to determine probing depth (PD), clinical attachment level (CAL), bleeding on probing (BOP). Individuals presented proximal CAL 3 mm in 2 non-adjacent teeth were diagnosed with CP. Immunohistochemistry was performed to evaluate the density (cell/mm2) of Factor XIIIa+ and CD1a+ immature DCs, and CD83+ mature DCs. Inflammatory infiltrate density was measured using hematoxylin and eosin stained sections. Chemokines (CCL2, CCL3, CCL5, CCL19, CCL20, and CXCL8) were measured using ELISA assay, whilecytokines (IL-2, IL-10, IL-4, IL-6, IFN-, TNF-, and IL-17A) were measured using CBA method, in samples of gingival tissue. The individuals were asked about the time of their smoking habit in years (SH/years) and how many cigarettes they smoked per day (C/day). CD83+ mature DCs, CCL3 and CXCL8 levels decreased in smoker group. While CCL5 levels were increased in smokers. Negative correlations between C/day and IL-17A levels and number of teeth, and between SH/years and CCL19 were observed. IL-6, CCL2, CCL20 levels were positively correlated with CD1a+ immature DCs densities. IL-2, TNF-, IFN-, IL-10, IL-17A, CCL3, CCL5, CCL19, and CXCL8 levels were increased in gingival tissue with CP when compared with NM. The percentage of sites with CAL3 mm were positively correlated with inflammatory infiltrate density, CCL3 and CXCL8 levels, and negatively correlated with CD1a+ immature DCs and IL-2 levels. In conclusion, it was observed that the smoking affect cells and inflammatory mediators of the immune response, and this can contribute for increase the susceptibility at CP in smokers. In addition, the increase of CD1a+ immature DCs was associated with higher levels of IL-6, CCL2, and CCL20. However, only IL-2, TNF-, IFN-, IL-10, IL-17A, CCL3, CCL5, CCL19, and CXCL8 levels presented increased in gingival tissues with CP. Higher density of inflammatory infiltrate, CCL3 and CXCL8 levels, as well as lower density of CD1a+ immature DCs, and IL-2 levels can result in a more severe degree of human CP.

O Transplante de Células Tronco Hematopoiéticas (TCTH) baseia-se no princípio de infusão de Células Tronco Hematopoiéticas (CTH) CD34 + num receptor condicionado. Sabe-se que tais células são capazes de gerar uma nova hematopoiese bem como que o benefício do aumento de dose de CD34 + estende-se de aproximadamente 2 x 106 CD34/Kg a 5 x 106 CD34/Kg do receptor. A determinação do número de CD34 baseia-se no número total de CD34, porém sabe-se que apenas uma pequena porção celular do grupo de CD34 está associada à recuperação medular. Uma maneira de refinar a detecção desse grupo de células quando comparado com a quantificação do CD34 total, é a análise citométrica dos padrões de tamanho e granularidade citoplasmática. No contexto do TCTH autólogo e algumas vezes no TCTH alogênico, onde a infusão das células precursoras é feita com intervalo superior a três dias após a sua coleta, o congelamento das CTH CD34 +as faz-se necessário para que as células permaneçam viáveis. O agente crioprotetor mais comumente usado é o Dimetilsulfóxido (DMSO), que em temperaturas extremamente baixas protege as CTH da morte celular, porém em temperatura ambiente torna-se tóxico. As reações adversas do receptor no momento da infusão são atribuídas, em geral, ao DMSO. Portanto existem diferentes protocolos de congelamento de CTH que usam diferentes concentrações desse agente, com o intuito de reduzir as reações adversas e, ao mesmo tempo, evitar a morte celular decorrente de temperaturas baixas. Alguns estudos concluem que a viabilidade das CTH congeladas pode ser mantida com concentrações baixas de DMSO ou com celularidade elevada nos produtos congelados. Além do DMSO, a albumina e o Hidroxetilamido (HES) são usados como adjuvantes na proteção celular ao frio. Alguns protocolos de criopreservação usam apenas o DMSO enquanto outros indicam a necessidade do uso dos três agentes juntos. Não há consenso a respeito do protocolo de criopreservação ideal. Um expressivo número de trabalhos sugere o uso do DMSO 5 a 10% juntamente com a albumina 20% e HES 6% em enxertos com celularidade até 3 x 108 células nucleadas/ml, porém existem sugestões de protocolos diferentes desse padrão que usam o DMSO como agente único assim como concentrações menores de DMSO. Com relação ao efeito tóxico do DMSO, os eventos adversos do paciente no momento da infusão são atribuídos diretamente a ele. Porém evidências recentes apontam outras possíveis causas: citocinas liberadas durante o período de armazenamento e infundidas com o enxerto e micro-agregados leucocitários decorrentes da elevada celularidade do enxerto. O presente estudo pretendeu verificar a viabilidade das CTH através da medida da Anexina-V e 7-AAD pela técnica de citometria de fluxo usando-se diferentes concentrações de DMSO, bem como comparou tal desfecho entre amostras que foram congeladas apenas com DMSO e amostras congeladas com DMSO, HES e albumina. Além disso, foram verificados os níveis de citocinas inflamatórias nos enxertos e sua relação com a concentração de DMSO. Bone Marrow Transplantation (BMT) is based on the principle of hematopoietic CD34 stem cells infusion in a conditioned recipient. It is known that such cells are capable of generating a new hematopoiesis, as well as known that the benefit of the increase of CD34 dose is goes best when it is between from 2 and to 5 x 106 CD34 by patient’s body weight. The CD34 determination is based on the total CD34 number. However it is known that only a small portion of the CD34 population is related to the marrow repopulating capacity. An alternative way of detecting such cells when compared to total CD34 dose is the cytometric analysis of citoplasmatic granularity and size patterns. In the autologous BMT context and, sometimes in the allogeneic type where the graft infusion occurs more than three days after the graft harvest, the CD34 cells freezing is necessary to keep their viability. The crioprotective agent most commonly used is the DMSO, which at extremely low temperatures this agent protects the CD34 cells from dying. However at temperatures above 30°C it became toxic and causing adverse events in the patient receiving them. The adverse reactions at the infusion moment in general are linked to DMSO, thus there are some different cryopreservative protocols using different DMSO concentrations aiming to reduce the incidence of collateral damage and at the same time avoid the CD34 from dying at low temperatures. Some studies conclude that CD34 viability can be maintained with the use of high mononuclear cellularity in the graft or with low DMSO concentrations. Besides DMSO, albumin and Hydroxietilstarch (HES) are cryoprotectants adjuvants. Some Cryopreservation protocols only use DMSO as cryoprotective agent, while others indicate the three agents together. There is no consensus about the ideal cryopreservation protocol. An important number of studies suggests the use of DMSO 5 to 10% with albumin 20% and HES 6% in grafts with cellularity number of no more than 3 x 108 cells/ml, however there are some new different protocols that use DMSO alone and at lower concentrations. As to adverse events during the infusion moment, it is known that DMSO causes the effects. However, there are evidences that other causes could cause these events: cytokines released during the storage freezing time and infused with the graft and leukocyte micro-clots caused by the high cellularity in the graft. The present study aimed to study the viability of CD34 cells using the Annexin-V and 7-AAD apoptosis reagents through the flow cytometry technique in different DMSO concentrations as well as compared such outcome among the samples only frozen with DMSO and samples frozen with DMSO, HES and albumin. Besides, it was verified the inflammatory cytokine levels and their relationship with the DMSO concentration.

Introduction: The relationship between severe clinical manifestations of visceral leishmaniasis (VL) and immune response profi les has not yet been clarifi ed, despite numerous studies on the subject. This study aimed to investigate the relationship between cytokine profi les and the presence of immunological markers associated with clinical manifestations and, particularly, signs of severity, as defi ned in a protocol drafted by the Ministry of Health (Brazil). Methods: We conducted a prospective, descriptive study between May 2008 and December 2009. This study was based on an assessment of all pediatric patients with VL who were observed in a reference hospital in Maranhão. Results: Among 27 children, 55.5% presented with more than one sign of severity or warning sign. Patients without signs of severity or warning signs and patients with only one warning sign had the highest interferon-gamma (IFN-γ) levels, although their interleukin 10 (IL-10) levels were also elevated. In contrast, patients with the features of severe disease had the lowest IFN-γ levels. Three patients who presented with more than two signs of severe disease died; these patients had undetectable interleukin 2 (IL-2) and IFN-γ levels and low IL-10 levels, which varied between 0 and 36.8pg/mL. Conclusions: Our results showed that disease severity was associated with low IFN-γ levels and elevated IL-10 levels. However, further studies with larger samples are needed to better characterize the relationship between disease severity and cytokine levels, with the aim of identifying immunological markers of active-disease severity.

Submitted by Simone Maisonave (simonemaisonave@hotmail.com) on 2020-06-26T17:01:51Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Rodrigo_Rodrigues.pdf: 933618 bytes, checksum: a1415614b3baf8326c1cea340bf6b36d (MD5) Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2020-06-29T12:46:54Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_Rodrigo_Rodrigues.pdf: 933618 bytes, checksum: a1415614b3baf8326c1cea340bf6b36d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Made available in DSpace on 2020-06-29T12:46:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_Rodrigo_Rodrigues.pdf: 933618 bytes, checksum: a1415614b3baf8326c1cea340bf6b36d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2013-03-28 A Síndrome de Down (SD) é uma alteração cromossômica caracterizada pela presença de uma cópia extra do cromossomo 21. Indivíduos com SD tem uma maior susceptibilidade a infecções e doenças autoimunes. O ATP, a adenosina e a acetilcolina contribuem para a modulação das respostas imunes, cujas as concentrações são controladas pelas enzimas NTPDase, adenosina desaminase (ADA) e acetilcolinesterase (AChE). Sendo assim, neste estudo foram avaliadas as atividades destas enzimas, os parâmetros hematológicos, bem como os níveis de citocinas pró e anti-inflamatórias em amostras de indivíduos saudáveis ou com SD. A população foi composta por 23 indivíduos com SD e 23 indivíduos saudáveis como grupo controle. Os resultados demonstraram que a atividade da NTPDase usando ADP como substrato foi significativamente aumentada em linfócitos de portadores com SD em relação ao grupo controle (P ≤0,05), entretanto, não foram observadas alterações na hidrólise do ATP assim como nos parâmetros hematológicos. Um aumento significativo foi observado na atividade da AChE em linfócitos e da ADA em soro de indivíduos com SD quando comparado com indivíduos saudáveis (P ≤0,05). Nesse estudo também foi observado um aumento sérico das citocinas pró-inflamatórias como IL-1, IL-6, TNF-α e IFN-γ, respectivamente, e uma diminuição nos níveis de IL-10, uma citocina anti-inflamatória (P≤0,0001) no grupo SD. Estes resultados sugerem que alterações na atividade da NTPDase, ADA e AChE, bem como as mudanças dos níveis de citocinas podem contribuir para alterações imunológicas observadas nessa desordem genética. Down Syndrome (DS) is a chromosomal alteration characterized by the presence of an extra copy of chromosome 21. Subjects with DS exhibit an increased susceptibility to infections and autoimmune disorders. ATP, adenosine, and acetylcholine modulate immune responses and NTPDase, adenosine deaminase (ADA) and acetylcholinesterase (AChE) are important enzymes that control of extracellular levels of these molecules at inflammatory sites. In this study we evaluated the activities of these enzymes, hematological parameters, as well as cytokine levels in samples of DS individuals and healthy subjects. The population consisted of 23 subjects with DS and 23 healthy subjects as a control group. Results showed that NTPDase activity using ADP as substrate was significantly increased in lymphocytes of DS patients in relation to the control group (P≤0.05); however, no alterations were observed on ATP hydrolysis. A significant increase was observed on AChE and ADA activities, respectively, in samples of DS patients when compared to healthy subjects (P≤0.05). In DS subjects an increase in the levels of pro-inflammatory cytokines such as of IL-1, IL-6, TNF-α and IFN-γ, respectively, and a decrease of IL-10 levels, a anti-inflammatory cytokine, were also observed (P≤0.0001). These findings suggest that alterations in NTPDase, ADA and AChE activities as well changes the cytokines levels may contribute to immunological alterations observed in this genetic disorder.

Introdução: Esquizofrenia é a mais grave das doenças psiquiátricas, sendo que prejuízo cognitivo é uma característica nuclear. Transtorno delirante é transtorno psicótico correlato à esquizofrenia, de menor gravidade. Pacientes tendem ainda a apresentar baixa qualidade de vida, que é relacionada ao prejuízo cognitivo. Evidências recentes têm implicado alterações imunológicas nas funções cognitivas em várias doenças neuropsiquiátricas. Objetivo: Analisar correlações entre níveis séricos de citocinas em pacientes com esquizofrenia ou transtorno delirante, estabilizados e medicados, desempenho cognitivo e qualidade de vida. Métodos: 63 pacientes diagnosticados com esquizofrenia ou transtorno delirante foram avaliados através da BACS (bateria neuropsicológica) e da SCoRS (escala) para testagem cognitiva, e pela QLS-BR para avaliação da qualidade de vida. Amostras de sangue foram coletadas e dosagem sérica de citocinas (IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A, IFN- e TNF) foi realizada por cytometric beads array. A seleção e o controle de variáveis foram realizados através das escalas: PANSS, ECDE, SAS e AIMS, além de dados sócio-demográficos e medicação. Análise estatística: correlação de Spearman. Fator de redução dimensional foi criado para BACS, representando o escore geral da escala. Resultados: Níveis de IL-6 mostraram correlação inversa e significativa com fluência verbal fonética, velocidade motora e cognição geral, com valores de rho= -0,322, -0,315 e - 0,320 e p=0,042, 0,047 e 0,044 (respectivamente). IL-4 correlacionou-se positiva e significativamente com qualidade de vida, com p=0,013 e rho=0,361. IL-4 mostrou ainda associação inversa com sintomas depressivos aferidos pela ECDE. Níveis de TNF tiveram associação inversa com idade de pacientes e IL-6 mostrou associação direta com equivalentes de clorpromazina (em miligramas). Conclusão: Citocinas pró-inflamatórios estariam relacionados ao uso de doses mais altas de antipsicóticos e pior cognição. Citocinas imunomodulatórios podem estar associados a redução de sintomas depressivos e melhor qualidade de vida. Dados sugerem correlação entre cognição e inflamação. Possível associação entre citocinas e qualidade de vida / sintomas depressivos abre novas possibilidades para pesquisa em esquizofrenia. Introduction: Cognitive impairment is a nuclear finding in schizophrenia. This disorder is also characterized by low quality of life. Delusional disorder is a similar, but less serious mental condition. Recent evidence has implicated immune and inflammatory changes to cognitive performance in many diseases, including schizophrenia. Objectives: The objective of the present study was to analyze correlations between serum cytokine levels, cognitive performance and quality of life in a sample of stable, medicated, schizophrenic outpatients in Brazil. Methods: 63 outpatients diagnosed with schizophrenia or delusional disorder were evaluated with a cognitive battery (BACS), coprimary measure (SCoRS) and quality of life scale (QLS-BR). Blood samples were taken and serum levels of IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A, IFN- and TNF were measured by cytometric beads array. Selection and control of variables was assessed through other scales (MINI-Plus, PANSS, ECDE, AIMS, and SAS), medication and demographic status. Statistic analysis: Spearman correlation test. A dimensional reduction factor for BACS was created, to account for its total score. Results: IL-6 levels were inversely correlated to phonetic verbal fluency, motor speed and cognition total score (BACS reduction factor), with significant p values: 0,042, 0,047 and 0,044 (respectively) and rho: -0,322, -0,315 and -0,320. IL-4 was positively correlated to quality of life (QLS-BR), with p=0,013 and rho=0,361; and inversely correlated to depressive symptoms (ECDE). TNF was inversely correlated to age and IL-6 was also correlated positively to chlorpromazine equivalents (in miligrams). Conclusions: Cognitive impairment in schizophrenia may be partially mediated by proinflammatory cytokines, which also appear to be associated to higher doses of antipsychotic medication. Immunomodulatory cytokines may be associated with quality of life and mood in the disease. Further research is needed to clarify the topic and the possible associations between cognition, quality of life and immune system in schizophrenia.

Orientador: André Fattori Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Estudos demonstram a importância da anemia no contexto da senilidade, tanto por sua relação com perdas funcionais e redução da sobrevida, como também por ser identificada como um fator adicional para o desenvolvimento do fenótipo. De fato, a fragilidade e a anemia em indivíduos idosos parecem compartilhar alguns eventos fisiopatogênicos comuns relacionados ao processo inflamatório crônico. Doenças associadas ao envelhecimento, como aterosclerose, diabetes, doenças renais, alterações cardiovasculares e osteodegenerativas cursam com inflamação crônica e podem ter o seu impacto clínico agravado pelaconcomitância com a anemia. Os modelos mais utilizados no entendimento da fisiopatologia da fragilidade baseiam-se na interpretação da síndrome como resultado do acúmulo de déficits ao longo da vida33, resultando em maior vulnerabilidade biológica ou, ainda, como um estado de decréscimo do metabolismo global do individuo, associado a desregularão neuroendócrina e imunológica, que, também neste caso, cursa com redução da capacidade homeostática. Neste trabalho sugerimos que as alterações hematimétricas contribuem para o fenótipo como um agente estressor, mas também, representa um componente equivalente das perdas relacionadas à sarcopenia no modelo proposto por Friedet al. OBJETIVO GERAL:Este trabalho foi conduzido usando os dados do estudo multicêntrico populacional sobre fragilidade designada pela sigla FIBRA, acrônimo de Fragilidade em Idosos Brasileiros, em uma amostra de 255 idosos recrutados no domicilio, na urbana de Campinas. O fenótipo de fragilidade foi determinado utilizando os critérios do Cardiovascular Health Study e no Women Health andAgingStudy, já demonstrados e validados em publicações anteriores; os pontos de corte das variáveis de fragilidade, ajustados para a população brasileira, foram anteriormente publicados por nosso grupo.As amostras de sangue foram coletadas por de punção venosa utilizando material estéril, e acondicionadas protegidas da luz em tubo seco e tubo de EDTA. O material foi encaminhado ao laboratório de Hematologia do Hospital Universitário da Unicamp para a realização de hemograma e contagem de reticulócitos. Resultados: No modelo I da regressão multivariada, no qual foram incluídas apenas as variáveis hematimétricas, a classificação geral de fragilidade esteve relacionada à idade e o nível de HGB sérica; a contagem de RETAbs (contagem de reticulocitos absolutos) apareceu associada aos critérios individuais perda ponderal e atividade física (dados não mostrados em tabelas). No modelo II, no qual se introduziram as quantificações de citocinas inflamatórias, foram selecionadas como variáveis significativas a idade e a PCRus (proteína C reativa ultra sensível), sendo que cada um ano de avanço etário representou aumento de 1,20 vezes na chance de ser frágil, e cada aumento de 1 unidade no nível de PCRus sérica significou uma elevação de 5,56 vezes na chance de apresentar o fenótipo. Também no modelo II da análise multivariada verificou-se que para a diminuição de 10x106/mL na contagem de RETAbs, o grupo apresentou aumento de 40% na chance de ser frágil, enquanto que a cada elevação de 10x106/mL na contagem de RETAbs houve também aumento de 30% da chance de ser frágil. CONCLUSAO: estes achados sugerem que no conjunto de fragilidade, queda da concentração de hemoglobina, diminuição da contagem absoluta de reticulócitos e níveis séricos de PCRus talvez devam ser compreendidos como um componente constitutivo da fragilidade, estreitamente correlacionada ao processo de sarcopenia evidenciado pela perda ponderal. Neste sentido, os valores reduzidos dos índices hematimétricos, não somente indicam a participação da baixa oxigenação tecidual no processo fisiopatogênico da fragilidade, como também podem ser utilizados como mais um critério definidor do fenótipo. Este estudo FIBRA indica que futuras pesquisas de caráter longitudinal possam indicar os valores de hemoglobina e de reticulócitos absolutos que possam ser utilizados como critério definidor de fragilidade Abstract: Studies have shown the importance of anemia in the context of senility both because of its relationship with functional loss and reduced survival and because it has been identified as an additional factor leading to the development of the phenotype. In fact, frailty and anemia in the elderly appear to share certain common pathophysiological events related to chronic inflammatory processes. Diseases associated with aging, such as atherosclerosis, diabetes, kidney disease, cardiovascular changes and osteodegenerative diseases, progress with chronic inflammation and their clinical impact may be aggravated if they occur concomitantly with anemia. The models most commonly used to understand the pathophysiology of frailty are based on an interpretation of the syndrome as the result of an accumulation of deficits during an individual's life, resulting in greater biological vulnerability or even a reduction in an individual's overall metabolism associated with neuroendocrine and immune dysregulation, which in this case is also accompanied by reduced homeostatic capacity19,34. We suggest that abnormal red cell indices contribute to the phenotype as a stressor but also play a similar role to that of sarcopenia in the model proposed by Fried et al., 2001. GENERAL OBJECTIVE: The study data were collected from a sample of residents in urban Campinas as part of the FIBRA (Frailty in Brazilian Seniors) multicenter population-based study. The frailty phenotype was determined using the criteria in the Cardiovascular Health Study and the Women's Health and Aging Study, which were described and validated in previous publications; the cut-off points for frailty variables adjusted for the Brazilian population were published previously by our group. Blood samples were collected by venipuncture using sterile material and stored away from light in dry collection tubes and EDTA tubes. The samples were sent to the Hematology Laboratory at Unicamp University Hospital for complete blood counts and reticulocyte counts. RESULTS: In multivariate regression model I, which included only red cell variables, the general frailty classification was related to age and serum hemoglobin (Hb) level. Absolute reticulocyte count (RetAbs) was associated with the individual criteria weight loss and reduced physical activity (data not shown in the tables). In model II, which also included inflammatory cytokine levels, age and hsCRP (high sensible C Reactive Protein) were selected as significant variables. Each additional year of age represented a 1.2-fold increase in the chance of being frail, and each 1-unit increase in serum hsCRP represented a 5.56-fold increase in the chance of having the frailty phenotype. Multivariate analysis using model II revealed that a reduction of 10x106/mL in RetAbs count resulted in a 40% increase in the chance of being frail, and that each 10x106/mL increase in this parameter also led to an increase (30%) in the chance of being frail. CONCLUSION: Our findings suggest that reduced Hb (hemoglobin) concentration, reduced RetAbs count and elevated serum hsCRP levels should perhaps be considered components of frailty, which is closely correlated with sarcopenia, as evidenced by weight loss. In this context, reduced red cell indices not only indicate that poor tissue oxygenation plays a role in the pathophysiology of frailty but can also be used as another criterion to define the phenotype. This FIBRA study has shown that future longitudinal studies may help determine Hb levels and RetAbs counts that can be used as criteria to define frailty Mestrado Gerontologia Mestre em Gerontologia

Orientadores: Simone Appenzeller, Lilian Tereza Lavras Costallat, Roberto Marini Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES) e uma doença autoimune, crônica e mutissistemica, caracterizada por períodos de atividade e remissão. Anormalidades hematológicas e imunológicas são comumente encontrados. A avaliação laboratorial, incluindo o perfil de citosinas, auxilia no diagnostico e na determinacao da atividade da doença. O presente estudo, de característica transversal, teve como objetivo avaliar os níveis de IL- 17 em pacientes com LESj (inicio da doença ?16 anos), familiares de primeiro grau e controles sadios e ainda elucidar sua associação com a atividade da doença, dados laboratoriais e de tratamento. Foram selecionados pacientes consecutivos com LESj acompanhados na Unidade de Reumatologia Pediátrica da UNICAMP entre 2009/2011. Manifestações clinicas, laboratoriais, atividade da doença [SLE Disease Activity Index (SLEDAI)], dano cumulativo [Lúpus International Collaborating Clinics / American College of Rheumatology Damage Index (SDI)] e medicação em uso foram avaliados. Os transtornos de humor foram determinados através dos inventários de Depressão (BDI) e Ansiedade (BAI) de Beck. A dosagem da citosina foi realizada por ELISA. Níveis séricos de IL-17 estavam aumentados no LESj (p?0,05) quando comparado controles sadios. Observamos uma associação entre os níveis séricos de IL-17 e migranea (p = 0,03) e nefrite (p = 0,01). Níveis de IL-17 não foram associados com atividade da doença (p = 0,32), dano cumulativo (p = 0,34), medicação (p = 0,63), ansiedade (p = 0,42) e depressão (p = 0,42). Estudos longitudinais sao necessários para determinar se a dosagem de IL-17 pode ser utilizado como um biomarcador em LESj Abstract: Systemic lupus erythematosus (SLE) is a chronic, multisistemic autoimmune disease, , characterized by periods of activity and remission. Haematological and immunological abnormalities are commonly observed. Laboratory evaluation, including the cytokine profile, aids in the diagnosis and determination of disease activity. The present transverse study, we aimed to evaluate levels of IL-17 in patients with childhood-onset SLE (cSLE) (disease onset ? 16 years), first-degree relatives and healthy controls and to determine the association between IL-17 levels and disease activity, laboratory data and treatment. We selected consecutive patients with cSLE followed at the Pediatric Rheumatology Unit at UNICAMP between 2009/2011. Clinical, laboratory, disease activity [SLE Disease Activity Index (SLEDAI)], cumulative damage [Systemic Lupus International Collaborating Clinics / American College of Rheumatology Damage Index (SDI)] and medication use were assessed. Mood disorders were measured using the Beck's Depression Inventory (BDI) and Anxiety Inventory (BAI). Determination of cytokine levels was carried out by ELISA. Serum levels of IL-17 were increased in SLE (p ? 0.05) when compared to healthy controls. An association was observed between serum IL-17 levels and migraine (p = 0.03) and nephritis (p = 0.01). IL-17 levels were not associated with disease activity (p = 0.32), cumulative damage (p = 0.34), medication (p = 0.63), anxiety (p = 0.42) and depression (p = 0.42). Longitudinal studies are needed to determine if serum IL-17 levels can be used as a biomarker in SLE Mestrado Clínica Médica Mestra em Ciências

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-30Bitstream added on 2014-06-13T19:41:20Z : No. of bitstreams: 1 peresi_e_dr_botfm.pdf: 1052630 bytes, checksum: e59a57f6f635bf2f461011c84b7d7f71 (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Universidade Estadual Paulista (UNESP) It is estimated that one-third of the total world population is latently infected with M. tuberculosis and only 5-10% of the infected individuals will develop active TB disease during their life-time. The reason why some infected individuals develop active disease, while others do not is not yet entirely understood. Given the central role of TLR-2 in the incitement of inflammation, polymorphisms in its gene might be involved in both infectious and inflammatory diseases. The aim of this study was to evaluate the influence of TLR2 - 16934A/T and GT repeat polymorphisms on the immune response of PTB patients undergoing anti-TB treatment at different time points of anti-tuberculosis treatment: T1 (beginning), T2 (3 months) and T3 (end). For this we genotyped TLR2 -16934 and (GT)n repeats polymorphisms and evaluated the immune response of pulmonary tuberculosis patients during the time of anti-tuberculosis treatment. The present study suggests that TLR2 - 16934A/T and GT repeats polymorphisms can influence differential TLR-2, NF-κB and cytokine levels during anti-TB treatment. We also suggest that PTB patients with TLR2 - 16934 AA genotype may have a worst outcome of the disease, since they have a lower IFN-γ, cytokine essential to initiate the protective immunity to active TB. This association could not be made in our study due to the low number of patients evaluated. Since TLR-2 play a major role in initiating immune response against M. tuberculosis other polymorphisms in TLR2 would be crucial to better understand protective immune responses and may serve as biomarkers of protection or susceptibility to TB

O envelhecimento está relacionado a uma ativação crônica sublimiar do processo inflamatório, com aumento da produção de mediadores inflamatórios. Níveis elevados desses marcadores biológicos são preditores do declínio da função muscular e capacidade funcional na população idosa. A atividade física pode atenuar o processo inflamatório crônico decorrente do envelhecimento, no entanto, não há consenso sobre qual a modalidade e parâmetros de exercício que seriam os mais adequados para influenciar os mediadores inflamatórios. Com o aumento da idade ocorre também uma diminuição dos níveis de fatores neurotróficos os quais podem contribuir para o risco de depressão em idosos. Estudos relataram uma redução significativa dos níveis do fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) em idosos deprimidos. O exercício físico apresenta efeitos benéficos sobre a depressão e induz um aumento dos níveis de BDNF. Entretanto, pouco é conhecido sobre o padrão de produção do BDNF em resposta ao exercício no idoso. Variações genéticas funcionais, denominadas de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) podem determinar diferenças na síntese e produção de mediadores inflamatórios. O objetivo geral desta tese foi comparar o efeito de dois programas de exercícios físicos, fortalecimento muscular e aeróbico, sobre os níveis plasmáticos de BDNF, receptores solúveis do fator de necrose tumoral alfa (TNF- ), interleucina-6 (IL-6), interleucina -10 (IL-10) e capacidade funcional; e, investigar se há interação entre os polimorfismos rs1800629 do gene TNF- , rs1800795 do gene da IL6 e rs1800896 do gene da IL10 com o efeito do exercício físico em mulheres idosas. Foi realizado um ensaio clínico, registrado no Registro Brasileiro de Ensaios Clínicos (ReBEC) sob identificador RBR9v9cwf, no qual participaram 451 idosas residentes na comunidade (71,03 ± 4,8 anos). As dosagens de BDNF e dos mediadores inflamatórios foram mensuradas pelo método de ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay); a genotipagem dos SNPs foi realizada pelo método TaqMan (Applied Biosystems, Foster City, CA); a capacidade funcional foi pelos testes Timed Up and Go (TUG), sentar e levantar da cadeira (TSL) e velocidade da marcha de 10 metros (VM10M). A Escala de Depressão Geriátrica foi usada para rastreamento de transtornos depressivos. A capacidade aeróbica foi avaliada pelo Teste de Caminhada de 6 minutos (TC6M) e a força muscular de membros inferiores (FMI) por meio do dinamômetro isocinético (Biodex Medical Systems Inc, USA). Foram realizados dois programas de exercícios físicos: fortalecimento muscular (GF) e aeróbico (GA), ambos com duração de dez semanas, totalizando trinta sessões, realizadas três vezes por semana. Os resultados foram apresentados em quatro estudos. No primeiro estudo foi investigado o impacto dos programas de exercício fortalecimento muscular e aeróbico sobre os níveis de BDNF e sintomas depressivos. Houve um aumento dos níveis de BDNF apenas no GF (F= 17,63, p = 0,001) e uma diminuição dos sintomas depressivos em ambos os grupos (p = 0,001). As dosagens de BDNF não se correlacionaram com a redução dos sintomas depressivos em resposta ao treinamento. No segundo estudo foi avaliado o efeito dos exercícios de fortalecimento muscular e aeróbico sobre os níveis plasmáticos dos mediadores inflamatórios sTNFR1, sTNFR2, IL-6 e IL-10, desempenho no TC6M e FMI. O programa de fortalecimento muscular diminuiu significativamente os níveis de sTNFR1 e sTNFR2 (F = 4,58, p = 0,033), mas não das citocinas IL-6 6 (F = 0,96, p = 0,326) ou IL-10 (F = 1,87, p = 0,172). Não foram observadas mudanças significativas nos níveis dos mediadores inflamatórios em resposta ao treinamento aeróbico (p>0,05). Houve aumento significativo da FM no GF (p=0,001) e aumento da distância percorrida no TC6M no GA (p=0,001). No terceiro estudo foi analisado o efeito dos níveis plasmáticos dos receptores solúveis de TNF- , IL-6 e IL-10 sobre as mudanças na funcionalidade após a intervenção. Ambos os programas de exercício promoveram aumento significativo do desempenho TUG (F = 149,8, p = 0,001); TSL (F = 151,7, p = 0,001); e VM10 (F = 63,7, p = 0,001). Os níveis plasmáticos dos mediadores inflamatórios no baseline não influenciaram os ganhos observados na CF, independentemente do tipo de exercício realizado (p>0,05). Apesar da redução dos níveis de sTNFR1 e sTNFR2 no GF, essa alteração não influenciou o desempenho das idosas nos testes funcionais. No quarto estudo a interação entre os SNPs das citocinas TNF- , IL-6 e IL-10 e o efeito do exercício foi investigada. Houve uma interaçã o significativa do SNP -308 do gene do TNF- e o efeito do exercício sobre a mobilidade das idosas, avaliada pelo TUG (F = 10,5; p = 0,001). Igualmente, foi observada interação significativa entre os genótipos dos três polimorfismos e a melhora no desempenho do TUG em resposta ao exercício (F = 13,9; p = 0,001). Idosas com a combinação dos genótipos GG do TNF- , CC+CG do IL6 -174 e GG do IL10 -1082 (baixa produção de TNF- e IL-6 e alta produção de IL-10) apresentaram uma melhora maior no desempenho do TUG quando comparado aos outros genótipos. No entanto, os SNPs analisados não influenciaram o efeito do exercício sobre os parâmetros inflamatórios. Os resultados dos estudos demonstraram que os programas de exercício de fortalecimento muscular e aeróbico constituíram intervenções efetivas para a melhora de sintomas depressivos e da CF em idosas da comunidade. No entanto, apenas o programa de fortalecimento muscular promoveu aumento dos níveis de BDNF e diminuição dos parâmetros inflamatórios em idosas da comunidade. Idosas com uma combinação de genótipos relacionada a um perfil antiinflamatório apresentaram maior percentual de melhora na mobilidade funcional, independente da modalidade de exercício realizada. Esses achados dão suporte à influência interativa de fatores genéticos e ambientais, como a prática de exercício físico, contribuindo para a melhora da CF em idosas. Aging is associated with a chronic low-grade inflammatory process with an elevation of the production of inflammatory mediators. High levels of these biological markers are predictors for muscle function and physical performance deterioration in the elderly. Even though physical activity can mitigate the chronic inflammatory process related to aging, there is no consensus neither on the exercise modality nor on the parameters that would be the most appropriate to influence these mediators. Aging is also related to a reduction on neutrotrophic levels that could increase the risk for depression in the elderly. Studies report a significant reduction on levels of the brain-derived neurotrophic factor (BDNF) in depressed elderly. Physical activity has positive effects on depression and induces an elevation on BDNF levels. However, little is known about its pattern of production in response to exercise in the elderly. Functional genetic variations, named single nucleotide polymorphism, may lead to differences in the synthesis and production of inflammatory mediators. The general aim of this thesis was to compare the effect of two physical activity regimen, muscle strengthening exercise and aerobic exercise, in plasma levels of BDNF, soluble tumor necrosis factor alpha (TNF-) receptors, interleukin-6 (IL6), interleukin-10 (IL-10) and in physical performance; to investigate the occurrence of an interaction between TNF- rs1800629, IL6 rs1800795, IL10 rs1800896, and BDNF rs6265 and rs4923463 genes polymorphisms and the effect of physical activity in elderly women. We performed a clinical trial, registered on the Brazilian Register of Clinical Trials -Registro Brasileiro de Ensaios Clinicos (ReBEC: RBR9v9cwf), in which 451 community-dwelling older women were enrolled (71.03 ± 4.8 anos). BDNF and inflammatory mediators were measure by the ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) method; SNP genotyping was performed by the TaqMan method (Applied Biosystems, Foster City, CA); and physical performance by the Timed Up and Go (TUG), 5-chair sit to stand from a chair, and 10-meter walk (10MWT) tests. TheGeriatric Depression Scale was selected as an instrument to screen for depressive disorders. Aerobic capacity was assessed by the 6-minute walk (6MWT) and the Shuttle Walking tests; lower limbs muscle strength, by an isokinetic dinamometer (Biodex Medical Systems Inc, USA). Two physical activity protocols were performed three times a week for ten weeks, 30 sessions in total: muscle strengthening exercise (SE) and aerobic exercise (AE). Results were shown in four different studies. In the first study we investigated the impact of both SE and AE regimen over the BDNF levels and depressive symptoms. There was a significant increase in BDNF levels only for the SE group (F= 17.63, p = 0.001) and a reduction on depressive symptoms for both groups (p = 0.001). BDNF dosages did not correlate with the decrease of depressive symptoms in response to training. The second study aimed to assess the effect of SE and AE protocols on plasma levels of the inflammatory mediators TNFR1, sTNFR2, IL-6 e IL-10, and on performance in 6MWT and muscle strength. The SE regimen significantly reduced sTNFR1 and sTNFR2 levels (F = 4.58, p = 0.033), but not the IL-6 (F = 0.96; p = 0.326) nor the IL-10 (F = 1.87, p = 0.172) cytokine levels. No significant changes were seen on the inflammatory mediators in response to AE (p > 0.05). A significant increase in muscle strength happened for the SE (p = 0.001) and an increase in the walked distance in the 6MWT for the AE protocol (p = 0.001). In the third study we analyzed the effect of plasma levels of the soluble TNF- receptors, IL-6 and IL10 on the physical performance changes after the intervention. Both exercise regimens promoted a significant increase in TUG (F = 149.8, p = 0,001); 5-chair sit to stand from a chair (F = 151.7, p = 0. 001); and 10MWT (F = 63.7, p = 0.001) performances. Baseline plasma levels of the inflammatory mediators did not have an influence on the observed effects for physical performance, regardless of the performed exercise modality (p > 0.05). Despite the reduction in sTNFR1 and sTNFR2 levels in the SE, this outcome did not influence the performance of the participants in the functional tests. Finally, we investigated the interaction between the SNPs of TNF-, IL-6 e IL-10 cytokines and the effect of exercise in the fourth study. A significant interaction between the -308 SNP of TNF- gene and the effect of exercise in mobility, assessed by TUG (F = 10.5, p = 0.001) occurred. Likewise, same interaction was observed between the three genotype polymorphisms and the improvement in TUG performance in response to intervention (F = 13.9, p = 0.001). Elderly women who had the combination of genotypes GG of TNF-, CC+CG of IL6 -174 and GG of IL10 -1082 (low production of TNF- and IL-6, high production of IL-10) presented a greater improvement in TUG performance. However, the analyzed SNPs had no influence on the effect of the exercise over the inflammatory parameters. The results of the study demonstrated that both SE and AE protocols were effective intervention to reduce depressive symptoms and physical performance in community-dwelling older women. Still, only the SE regimen promoted an elevation of BDNF levels and a reduction of inflammatory parameters in the studied sample. Elderly women with a combination of genotypes related to an anti-inflammatory profile presented a higher percentage of improvement in functional mobility, regardless of the performed exercise modality. These findings give support to the interactive influence of genetic and environmental factors, such as the practice of physical activity, contributing to improve physical performance in elderly women.

Orientador: Mary Luci de Souza Queiroz Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A sílica cristalina, ou quartzo, é um mineral abundante na areia, rochas e solo, cuja exposição crônica predispõe a lesões pulmonares, proliferação de fibroblastos e produção excessiva de colágeno no pulmão causando silicose, uma forma de fibrose pulmonar. A exposição ocupacional à sílica cristalina também tem sido considerada um fator predisponente a doenças autoimunes como artrite reumatóide, esclerodermia e lúpus eritematoso sistêmico. Neste sentido, a sílica tem mostrado agir como adjuvante, aumentando os níveis de imunocomplexos e imunoglobulinas de forma inespecífica, podendo estar relacionado ao desenvolvimento de doença autoimune. Porém, a relação entre exposição à sílica e o desenvolvimento de autoimunidade não está clara devido à falta de conhecimento dos mecanismos envolvidos. Não se sabe se a silicose constitui apenas um marcador de exposição a altos níveis de sílica em pó ou se é uma patologia que pode predispor à doença autoimune. Assim, uma investigação mais acurada de indicadores de autoimunidade em indivíduos com silicose é necessária. Nossos resultados apresentam evidências de alterações compatíveis com autoimunidade nos indivíduos expostos à sílica comparado com a população controle ao demonstrar ativação da resposta imune humoral e celular, além de alterações funcionais nos linfócitos T (LT). Isto foi verificado pelos níveis elevados de fator anti-núcleo, fator reumatóide e anticorpos anti-células endoteliais; pelo aumento da resposta proliferativa de células mononucleares do sangue periférico, dos níveis séricos de Fas ligante solúvel, do número de células Natural Killer e alteração dos níveis das citocinas IFN-_, TNF-_, IL-1_, IL-2, IL-6, IL-10 e TGF-_ bem como alterações funcionais nos LT pela menor expressão das moléculas regulatórias CTLA-4 e PD-1. Além disso, nosso estudo sugeriu uma influência genética na expressão do receptor PD-1 pela menor expressão deste na superfície das células T CD4+ em indivíduos com o genótipo GG no estudo do polimorfismo PD1.3 e também demonstrou que a autoimunidade pode ocorrer anteriormente às manifestações clínicas de silicose Abstract: Crystalline silica, or quartz, is a mineral abundant in sand, rock and soil which chronic exposure is known to predispose to pulmonary lesions, fibroblasts proliferation and excessive collagen production in the lungs that leads to silicosis, a form of pulmonary fibrosis. Occupational exposure to crystalline silica dust has been examined as a possible risk factor with respect to several autoimmune diseases, such as rheumatoid arthritis, scleroderma and systemic lupus erythematosus. In this regard, silica has been known to have an adjuvant effect on immunocomplexes and immunoglobulins production in a nonspecific manner, thus reinforcing its relation with the appearance of autoimmunity. However, the relationship between silica exposure and the development of autoimmunity remains to be elucidated because the mechanisms underlying this association are unknown. It is unclear whether silicosis is only a marker for high-level silica dust exposure or whether it represents a pathologic process that may predispose some individuals to the development of autoimmune disease. Therefore, an accurate investigation of the autoimmunity indicators in silicotic individuals is required. Our results present evidences of alterations compatible with autoimmunity in silica-exposed individuals as compared to the control population by demonstrating an activation of humoral and cellular immune responses as well as functional alterations in T lymphocytes (LT). It was shown by the increased levels of antinuclear antibodies, rheumatoid factor and anti-endothelial cell antibodies, by the increased proliferative response of peripheral blood mononuclear cells, augmented levels of serum soluble Fas ligand, number of Natural Killer cells and alterations of IFN-_, TNF-_, IL-1_, IL-2, IL-6, IL-10 and TGF-_ cytokine levels as well as by functional LT alterations by thelower expression of CTLA-4 and PD-1 regulatory molecules. In addition, our study suggested a genetic influence in the expression of PD-1 receptor by its lower expression in the surface of T CD4+ cells in individuals carrying GG genotype in the study of PD1.3 polymorphism and also demonstrated that autoimmunity can occur before the clinical manifestations of silicosis Doutorado Farmacologia Doutor em Farmacologia

A malária é a principal e a mais grave doença parasitária da humanidade. A Malária cerebral (MC) tem sido definida como uma encefalopatia aguda, difusa, potencialmente reversível, caracterizada por coma e presença de formas assexuadas do P. falciparum em esfregaço sanguíneo, com exclusão de outras causas de encefalopatias. Apresenta uma fisiopatologia complexa e pouco elucidada, na qualalterações vasculares, imunológicas e metabólicas têm sido descritas. No presente trabalho foi investigado possíveis associações entre alterações cognitivas e comportamentais e processos inflamatórios e neuroquímicos no sistema nervoso central (SNC) utilizando o modelo experimental de MC por Plasmodium berghei ANKA (PbA). Camundongos C57BL/6 fêmeas foram infectados, intraperitonealmente, com a cepa PbA, por meio de inóculo padronizado (106 hemácias parasitadas). Alterações neurológicas e comportamentais significativas, avaliadas pela bateria de testes SHIRPA, foram encontradas no 6º dia após a infecção. Paralelamente às alterações encontradas nos domínios funcionais da bateria SHIRPA, foi observado aumento significativo da liberação de glutamato no córtex cerebral e da concentração de glutamato no líquido cefalorraquidiano dos camundongos infectados, mensurado por meio de umespectrofluorímetro. Além disso, os camundongos com MC apresentaram altos níveis de ansiedade no 5º dia após a infecção, indicados pela redução significativa da porcentagem de tempo gasto e do número de entradas realizadas nos braços abertos dolabirinto em cruz elevado. Associado aos transtornos de ansiedade foram observadas alterações histopatológicas em diferentes regiões do encéfalo, em especial na região CA1 do hipocampo, e aumento significativo nas concentrações de citocinas próinflamatórias(IL-1 e TNF-) no tecido cerebral dos camundongos infectados,avaliadas por meio da técnica ELISA. Dessa forma, os resultados encontrados sugerem que o glutamato pode desempenhar um importante papel na patogênese da MC e que a produção exacerbada de citocinas pró-inflamatórias no SNC, em especial IL-1 e TNF-, durante a infecção, pode contribuir significativamente para o desenvolvimento das alterações comportamentais observadas nos camundongos com MC. Malaria is the main and most serious parasitic disease of mankind. Cerebral Malaria (CM) has been defined as a potentially reversible diffuse encephalopathy characterized mainly by coma and the presence of asexual forms of P. falciparum parasites in peripheral blood smears in the absence of other causes of encephalopathy.This condition presents a complex and incompletely understood pathogenesis, in which vascular, immunological and metabolic changes have been described. In the present work were investigated possible associations between cognitive and behavioral alterations and neurochemical and inflammatory processes in the CNS using thePlasmodium berghei ANKA (PbA) model of CM. Female C57BL/6 mice were infected with PbA by the intraperitoneal route (i.p), using a standardized inoculation of 106 parasitized red blood cells. Significant neurological and behavioral changes, as assessed by the SHIRPA battery, were found on day 6 post- infection. In parallel to thealterations found in the functional domains of the SHIRPA battery, were observed a significant increase of glutamate release in the cerebral cortex and of glutamate levels in the cerebrospinal fluid of infected mice, as measured by a spectrofluorimeter. Furthermore, CM mice presented high levels of anxiety on day 5 post-infection, as indicated by the significant decrease in the percentage of time spent on and in thenumber of entries made onto the open arms of the elevated plus maze. In association with the anxiety symptoms were observed histopathological changes in different brain regions, particularly in the CA1 region of hippocampus, and a significant increase of proinflammatory cytokine levels (IL-1 and TNF-) in the brain tissue of infected mice,as assessed by ELISA technique. Thus, our results suggest that glutamate may play an important role in the pathogenesis of CM and that the exacerbated production of proinflammatory cytokines in the CNS, especially IL-1 and TNF-, during the infection, could contribute significantly to the development of the behavioral alterationsobserved in CM mice.

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais The Toxoplasma gondiii infection during pregnancy is associated with adverse pregnancy outcome. Groups of C57BL/6 and BALB/c females were orally infected with 5 cysts of ME49 strain of T. gondii on day 1 of pregnancy and sacrificed on days 8 and 19 after. Another group was infected on day 14 of pregnancy and sacrificed 5 days later. The females were evaluated for resorption ratio, tissue parasitism, expression of iNOS by immunohistochemistry and inflammatory changes in the uterus/placenta, lungs and CNS. It was observed that only one C57BL/6 from 9 pregnant and infected animals presented fetuses on day 19 of pregnancy and infection, meaning high resorption rate. This lineage of mice also presented higher leukocyte infiltration in the uterus and inflammatory changes in the lung on day 8 of pregnancy and infection, and higher inflammatory changes in the CNS on day 19 of pregnancy and infection when compared to BALB/c mice. In addition, some females of the C57BL/6 mice presented necrotic foci in the implantation sites on day 8 of pregnancy and infection. Furthermore, C57BL/6 mice showed higher number of parasites in the lungs on day 8 of pregnancy and infection and in the CNS on day 19 of pregnancy and infection compared to BALB/c mice. However, the parasite was seldom found in the uterus and placenta in both lineages of mice irrespective of the day of infection. C57BL/6 mice also demonstrated higher mast cell infiltration and higher degranulation index on day 19 of pregnancy and infection, compared to BALB/c mice. C57BL/6 presented higher interferon- γ (IFN-γ and tumor necrosis factor (TNF) levels in serum samples on day 8 of pregnancy and infection and lower interleukin-10 (IL-10) levels on day 19 of pregnancy and infection compared to BALB/c mice. Concerning iNOS expression, there was no difference in the enzyme expression between C57BL/6 and BALB/c lineages on day 8 or 19 of pregnancy and infection, indicating that iNOS is not related to the occurrence of abortion. Our data suggest that the worst pregnancy outcome observed in C57BL/6 mice could be associated to the higher inflammatory alterations in the uterus/placenta and higher proinflammatory cytokine levels systemically better than presence of the parasite in this site of infection. Additionally, the major impaired pregnancy outcome occurs when the infection happens in the early phase of the pregnancy, and this result is related to the genetic background of mice, being the C57BL/6 more susceptible than BALB/c mice. A infecção por Toxoplasma gondii durante a gestação é associada com resultados adversos. Grupos de fêmeas de camundongos BALB/c e C57BL/6 foram oralmente infectados com 5 cistos da cepa ME49 de T. gondii no 1º dia de gestação e sacrificados aos 8 e 19 dias após o inoculo. Outro grupo foi infectado no 14º dia de gestação e sacrificado 5 dias após a infecção. As fêmeas foram avaliadas quanto ao índice de aborto/reabsorção fetal, parasitismo tecidual, expressão de iNOS por imunohistoquímica e alterações inflamatórias no útero/placenta, pulmão e SNC. Foi observado que somente 1 fêmea C57BL/6 entre as 9 fêmeas infectadas e analisadas apresentou fetos no 19º dia de gestação e infecção, demonstrando altas taxas de reabsorção fetal. Esta linhagem também apresentou maior infiltração leucocitária no útero e alterações inflamatórias no pulmão aos 8 dias de gestação e infecção, além de maiores alterações inflamatórias no SNC aos 19 dias de gestação e infecção comparada à linhagem BALB/c. Além disso, algumas fêmeas C57BL/6 apresentaram focos de necrose nos sítios de implantação aos 8 dias de gestação e infecção. Esta linhagem apresentou maior carga parasitária no pulmão aos 8 dias de gestação e infecção e no SNC aos 19 dias de gestação e infecção comparadas às fêmeas BALB/c. Entretanto, o parasito foi raramente encontrado no útero e placenta em ambas as linhagens, independente do dia de infecção. Fêmeas C57BL/6 também demonstraram maior infiltração de mastócitos e maiores índices de desgranulação, aos 19 dias de gestação e infecção comparadas às fêmeas BALB/c. Animais C57BL/6 apresentaram maiores níveis de interferon-y (IFN-y) e de fator de necrose tumoral (TNF) nas amostras de soro aos 8 dias de gestação e infecção e menores níveis da interleucina-10 (IL-10) aos 19 dias de gestação e infecção em comparação aos BALB/c. Não observou-se diferença na expressão iNOS entre as linhagens, aos 8 ou 19 dias de gestação e infecção, indicando que iNOS não está relacionada com as ocorrências de aborto. Nossos dados sugerem que os maiores prejuízos gestacionais observados na linhagem C57BL/6 podem estar associados às maiores alterações inflamatórias no útero/placenta e maiores níveis sistêmicos de citocinas pró-inflamatórias ao invés da própria presença do parasito. Ainda, os maiores danos gestacionais ocorrem quando a infecção acontece nos estágios precoces da gestação, sendo a linhagem C57BL/6 mais suscetível do que a linhagem BALB/c. Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas