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Vibrio harveyi è una specie patogena emergente per l’acquacoltura marina a livello globale, nelle specie ittiche e nei gamberi peneidi. In Dicentrarchus labrax, V. harveyi è stato isolato in episodi di mortalità durante le fasi di ingrasso (40-160 gr). 41 ceppi identificati biochimicamente come V. harveyi, appartenenti alla ceppoteca dell’Università di Bologna e del CSI (IZSVe), isolati in branzino a partire dal 2008 da 12 impianti di allevamento italiani (gabbie a mare e vasche a terra), sono stati sottoposti ad analisi comparative fenotipiche, genetiche e del profilo proteico. La capacità discriminante dei vari metodi è stata valutata raffrontando questi ceppi di campo con ceppi di referenza di V. harveyi e di Vibrionaceae filogeneticamente associate al clade Harveyi quali V. rotiferianus, V. owensii, V. campbelli, V. alginolyticus, V. parahaemolyticus, V. natriegens, V. mytili. Sono state inoltre comparate specie causa di patologia in branzino (Photobacterium damselae ssp. piscicida, P. damselae ssp. damselae, V. anguillarum, V. ordalii, V. scophthalmi) e specie isolate in ambiente marino con caratteristiche fenotipiche simili (V. vulnificus, V. gigantis, V. xuii). I ceppi rivitalizzati sono stati valutati a 25°C con prove biochimiche in macrometodo, prove in micrometodo con inoculo al 2% NaCl (API 20E, bioMérieux) e crescita su terreni differenziali e selettivi (TCBS, CHROMAgar™ Vibrio, MacConkey). L’analisi molecolare è stata condotta mediante il sequenziamento e l’analisi filogenetica del gene uridina monofosfato chinasi (PyrH) e l’amplificazione mediante PCR-end point specie-specifica (gene toxR). La metodica in spettrometria di massa MALDI-TOF ha analizzato mediante il MALDI Biotyper Microflex LT con software Maldi Biotyper 3.0 (BrukerDaltonics), il contenuto proteico ribosomiale di colonie di 24 h. Gli spettri MSP ottenuti dai ceppi in esame sono stati comparati con il database BrukerDaltonics implementato con ceppi Vibrio spp. di referenza standardizzati (93 ceppi) in quanto privo di queste specie. I risultati dei dati fenotipici (28 parametri) elaborati statisticamente applicando il coefficiente di Gower hanno permesso una clusterizzazione efficace (40 ceppi su 41 analizzati) dei ceppi di campo con i due V. harveyi di referenza. Sono risultate discriminanti le prove in micrometodo di arginina deidrolasi (ADH), lisina decarbossilasi (LDC), ornitina decarbossilasi (ODC), e del citrato (CIT) associate alla colorazione di CHROMAgar™ Vibrio a 48 h e TCBS. L’analisi molecolare delle sequenze del gene PyrH ha permesso una clusterizzazione coerente dei ceppi di campo e di referenza con le sequenze in letteratura. L’analisi del gene toxR speciespecifico ha prodotto un amplificato di 380 bp unicamente nei ceppi di V. harveyi di campo e di referenza L’esito MALDI-TOF ha rispecchiato l’assegnazione di specie ottenuta dal genotipo. 40 ceppi di campo sono stati assegnati con I e II best match a V. harveyi (score > 2,3); un solo ceppo di campo ha presentato best match (score 2,25) con V. diabolicus e II match (score 2,24) con V. harveyi. Le analisi sin qui condotte hanno evidenziato un’ottima concordanza nell’identificazione di ceppi di V. harveyi. Le prove fenotipiche sono state complessivamente in grado di discriminare V. harveyi dai congeneri, tuttavia dai dati in bibliografia si riscontra una certa variabilità nei risultati biochimici per le prove ritenute discriminanti. L’analisi del gene toxR risulta più rapida del sequenziamento del gene PyrH. L’identificazione mediante MALDI-TOF appare economica, rapida ed efficiente grazie all’implementazione preliminare del database BrukerDaltonics.

Vibrio harveyi (sin. V. carchariae ) è un batterio Gram negativo ampiamente riconosciu to in passato quale importante agente patogeno di invertebrati qu ali crostacei e molluschi. Episodi di Vibriosi da V. harveyi sono stati descritti negli ultimi anni anche in ve rtebrati marini selvatici e di allevamento, comprese diverse specie ittiche allevate nel mar Me diterraneo fra cui in particolare la spigola ( Dicentrarchus labrax ). Il quadro delle manifestazioni cliniche e delle les ioni istologiche in corso di Vibriosi da V. harveyi nella spigola è ancora poco caratterizzato e richie de studi di approfondimento anche alla luce della crescente emergenza di episodi di malattia in diver se tipologie di allevamento ed in esemplari di diversa età/taglia. Vengono qui descritte le lesioni istopatologiche os servate in 21 esemplari di avannotti di spigola (ci rca 3 mesi di età) nel corso di un episodio di Vibriosi da V. harveyi verificatosi nel corso del 2013 presso un allevamento intensivo a terra. L’esame istologico permetteva di evidenziare nelle branchie iperplasia dell’epitelio, teleangectasie, emorragie e necrosi con sfaldamento cellulare. La c ute presentava edema nelle tasche dermali con estensione e protrusione delle squame. A carico del sistema nervoso centrale si rilevava congestione meningea e disseminati focolai di necrosi. In tutti i soggetti esaminati si evidenziava grave peritoni te associata a presenza di colonie batteriche. Il mass ivo infiltrato infiammatorio a livello peritoneale, nei soggetti maggiormente colpiti, si presentava in est ensione al tessuto muscolare scheletrico contiguo e d al fegato. L’epatite era accompagnata da necrosi zo nale del parenchima. Foci necrotici erano presenti anche nel rene e più raramente nel miocardio. Aree emorragiche erano inoltre rilevabili nel grasso periviscerale. Questo episodio, associato ad altre recenti segnala zioni, conferma l’importanza della Vibriosi da V. harveyi quale malattia emergente per la spigola d’allevame nto anche nelle prime fasi di produzione. Ulteriori studi su questa malattia dovranno prevede re indagini volte a tipizzare genotipicamente gli isolati di V. harveyi , a definirne i fattori di virulenza per caratteriz zare meglio i diversi quadri clinici ed istopatologici della Vibriosi da V. harveyi nella spigola e ad individuare i possibili fattori condizionanti l’emergenza della malattia al fine di applicare possibili misure di controllo in allevamento.

Il presente studio ha valutato la presenza di specie di Arcobacter in due caseifici; ventidue campioni ambientali e dieci campioni alimentari sono stati raccolti presso un caseificio artigianale ed uno industriale; la ricerca di Arcobacter spp. è stata effettuata tramite arricchimento e gli isolati sono stati identificati mediante multiplex-PCR. Ceppi di Arcobacter spp. sono stati isolati, nel caseificio artigianale, in numerosi campioni ambientali, di latte crudo vaccino e bufalino e ricotta mentre, nello stabilimento industriale, in alcuni campioni di superfici a contatto e non a contatto con alimenti; nessun Arcobacter spp. è stato rilevato in campioni alimentari. Tutti gli isolati sono stati identificati come A. butzleri. Il presente studio è il primo report della presenza di A. butzleri in un formaggio pronto per la vendita al dettaglio; l'isolamento di A. butzleri in superfici di lavorazione di entrambi i caseifici potrebbe essere una potenziale fonte di contaminazione per la produzione di formaggi.

Nel corso dei primi mesi del 2012 si sono verificati alcuni episodi di ingente mortalità in larve, post-larve ed avannotti di spigola allevati in un impianto a terra a bassa salinità (3-4‰). I pesci mostravano una sintomatologia aspecifica con atteggiamento asfittico, rigonfiamento addominale e deformità scheletriche. Per stabilire la causa mortis sono stati eseguiti esami necroscopici, parassitologici, batteriologici e RT-PCR per ricerca di Betanodavirus secondo metodiche di laboratorio standard su 3 lotti diversi (1 lotto di post-larve di 59 gg e 2 di avannotti di 74 e 86 gg di età) composti da circa 20 soggetti ciascuno. Per quanto concerne questi lotti, nonché per alcuni lotti di larve di 38 gg e di avannotti di 95 gg d’età, alcuni soggetti venivano inoltre fissati sul campo in formalina tamponata al 10% ed inviati in laboratorio per l’esame istologico. All’esame necroscopico si evidenziava con elevata frequenza iperinsufflazione vescicale associata ad iperdistensione dell’intestino, contenente materiale alimentare solo parzialmente digerito. La concomitanza delle due alterazioni sembrava avere un effetto meccanico compressivo sulla colonna vertebrale che si presentava deformata “ad arco”, come nei casi di grave cifosi. Tutti i soggetti esaminati sono risultati negativi sia all’esame parassitologico sia alla RT-PCR per Betanodavirus. L’esame batteriologico ha permesso di isolare in quantità significativa dal cervello di tutti i soggetti dei 3 lotti esaminati Aeromonas veronii var. sobria. In tutti i lotti esaminati, l’esame istologico metteva in evidenza a livello branchiale iperplasia e necrosi con congestione dei filamenti ed anemia delle lamelle, ipertrofia delle cellule mucipare, sfaldamento cellulare, infiltrato linfocitario e aggregati batterici. Si rilevavano inoltre erosioni ed ulcere cutanee, talvolta con interessamento della muscolatura scheletrica in cui si evidenziava presenza di emorragie interstiziali, infiltrazione macrofagica e linfocitaria e aggregati di batteri. In fegato, rene e milza si osservava un quadro setticemico con aree di necrosi associate a presenza di batteri anche nel lume vasale. In particolare a livello renale era possibile apprezzare dilatazione del lume dei tubuli con degenerazione vacuolare dell'epitelio, congestione, glomerulonefrosi e presenza di batteri nel tessuto emopoietico. Nella maggior parte dei soggetti il cervello presentava congestione diffusa e aree di necrosi con presenza di batteri. Le osservazioni istologiche hanno confermato l’iperinsufflazione della vescica natatoria e la presenza di deformità scheletriche riconducibili a quadri di marcata cifosi. A differenza delle precedenti segnalazioni di Aeromonosi in spigole allevate in Italia, riguardanti pesci di taglia superiore a 50g, nel caso qui riportato l’infezione da A. veronii var. sobria è stata rilevata solo in stadi larvali, post-larvali e giovanili. Gli isolati hanno mostrato un quadro di resistenza in vitro alle molecole antibiotiche autorizzate per l’acquacoltura in Italia, ad eccezione della flumechina che è stata utilizzata con successo nel trattamento dell’infezione. A. veronii var. sobria si conferma un agente patogeno opportunista che può rappresentare una problematica sanitaria di rilievo per la spigola in sistemi produttivi che utilizzano acque a bassa salinità.

L’intensificazione delle attività di maricoltura, intese sia come produzioni d’avannotteria sia come produzioni d’ingrasso, comporta il frequente verificarsi di condizioni predisponenti l’emergenza di malattie diffusive, fra cui in primis quelle di natura batterica. Per tale motivo nelle specie ittiche allevate nel bacino del Mediterraneo, nonostante le patologie batteriche di maggior impatto economico vengano riferite ad un numero ristretto di agenti eziologici [es. Photobacterium damselae subsp. piscicida, Listonella (Vibrio) anguillarum e Tenacibaculum maritimum], si sta registrando una crescente attenzione verso quegli agenti batterici patogeni opportunisti o non usuali che possono determinare malattia sotto la spinta di fattori ambientali e gestionali predisponenti. A tale proposito si segnalano alcuni episodi di malattia osservati nel periodo 2009-2011 in spigole (Dicentrarchus labrax) ed orate (Sparus aurata) allevati in Italia, nel corso dei quali sono state isolate specie batteriche fino ad oggi ritenute di non comune riscontro nella maricoltura nazionale, quali in particolare Vibrio splendidus, V. harveyi, V. mediterranei, Shewanella putrefaciens, Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida e A. sobria. Vengono riportate le osservazioni cliniche e anatomopatologiche correlate agli episodi morbosi presi in considerazione. Vibrio splendidus è stato isolato in una decina di casi in corso di episodi di mortalità larvale verificatisi in spigole ed orate in diverse avannotterie italiane e, sempre a livello sistemico, anche da spigole di taglia commerciale che mostravano mortalità a stillicidio in presenza di grave malattia branchiale, ascite, splenomegalia ed ectasia del tratto gastro-intestinale. Già segnalato quale agente causale di gravi episodi patologici in larve di merluzzo (Gadus morhua) e rombo (Psetta maxima) allevati rispettivamente in Norvegia ed in Spagna, V. splendidus potrebbe quindi avere un ruolo eziologico di rilievo nel determinismo di malattia anche in pesci marini mediterranei. L’isolamento di Vibrio harveyi è stato condotto a livello cutaneo e sistemico da due riproduttori di spigola che presentavano al decesso gravi lesioni cutanee quali ulcere profonde ed estese aree necrotiche, similmente a quanto già riportato in recenti segnalazioni condotte nel Mediterraneo su orate e spigole. Shewanella putrefaciens è stata isolata a livello sistemico in due casi, sia da avannotti che da soggetti adulti di spigola che presentavano concomitanti infezioni parassitarie (es. parassitosi branchiali da Ichthyobodo sp.) o batteriche. Sebbene descritto quale agente patogeno opportunista soprattutto in pesci dulciacquicoli, questo microrganismo è stato segnalato recentemente quale agente di malattia anche in pesci marini d’allevamento. Di particolare interesse appare l’isolamento di Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida nel corso di un episodio morboso osservato in spigole adulte allevate a terra che presentavano lieve mortalità, splenomegalia e congestione cerebrale. Parallelamente, la stessa specie è stata isolata da giovanili di spigola allevati in gabbia in Croazia che presentavano splenomegalia associata a moderata mortalità. Ben descritto quale agente patogeno in salmonidi allevati sia in acqua dolce sia in mare e nel rombo allevato in areali atlantici, A. salmonicida subsp. salmonicida potrebbe rappresentare un futuro fattore di rischio sanitario per la maricoltura mediterranea. Sono poi da segnalare alcuni isolamenti di A. sobria, A. veronii biovar veronii e V. mediterranei condotti in corso di episodi morbosi registrati in situazioni di elevata densità di biomassa e/o di concomitanti fattori stressanti di natura ambientale che hanno rappresentato senz’altro importanti condizioni predisponenti l’insorgenza della malattia. Obiettivo comune dei laboratori diagnostici e di ricerca operanti nel campo dell’ittiopatologia in Italia dovrebbe essere quello di raccogliere e conservare gli isolati di questi “potenziali patogeni emergenti” al fine di condurne la caratterizzazione geno-fenotipica ai fini epidemiologici, studiarne i fattori di virulenza e patogenicità e monitorarne l’eventuale profilo di antibiotico resistenza.

The atypical mycobacteriosis should be considered zoonotic agents, since they can penetrate through skin wounds and abrasions, causing the formation of granuloma in the skin. The purpose of this work is to evaluate the susceptibility to certain antibiotics of Mycobacterium marinum, one of the most important zoonosis agent among non-tuberculous mycobacteria. All strains were susceptible to ethanbutol, while only 6 were sensitive to rifampicin. 90% of strains were resistant to isoniazid, while 8 strains out of 10 were resistant to streptomycin.

Silurus glanis or European catfish belongs to the family Siluridae. It eat mainly fish, but also crustaceans, annelids, and insect larvae. From February 2007 to February 2009 105 samples of European catfish from the Po River were examined. Bacteriological examination was performed, the bacterium most frequently isolated was Aeromonas hydrophila. The presence of European catfish in our rivers is a threat to the indigenous populatins of fish and could alter the environmental balance, leading to a reduction in the number of species and individuals.

During 2007-2008 a survey aimed to investigate the diffusion of mycobacteria infections in Italian aquaculture was carried out. A total of 565 farmed fish, coming from 45 marine and freshwater farming systems, were examined. Mycobacterium marinum was isolated from striped bass showing symptoms and lesions referable to mycobacteriosis, and from European sea bass showing only histological lesions. Furthermore M. gordonae was isolated from 1 carp, M. fortuitum from i Siberian sturgeon and 1 rainbow trout, and Mycobacterium spp. from 2 European sea bass, always without macroscopical and microscopical lesions referable to mycobacteriosis.

Con il termine di Micobatteriosi o Tubercolosi ittica viene indicato un complesso di malattie sistemiche ad andamento cronico, sostenute da batteri acido-alcool resistenti (BAAR) appartenenti al genere Mycobacterium. Essi colpiscono numerose specie ittiche d'acqua dolce e salata, sia di allevamento che delle acque libere, sono diffusi nel suolo, nei pascoli e nelle paludi (6). I micobatteri sono germi molto resistenti agli agenti fisici e sono in grado di permanere e sopravvivere molti mesi nell’ambiente. Le Micobatteriosi atipiche sono state segnalate soprattutto in pesci d'acquario tropicali, ma anche in pesci allevati da consumo; non si conoscono specie refrattarie a questa infezione, naturale o sperimentale (1, 4, 8). Presentano un andamento enzootico e un decorso cronico. La sintomatologia dei pesci affetti da micobatteriosi appare aspecifica: si manifesta con ritardo della crescita e/o dello sviluppo sessuale, anoressia ed emaciazione, tachipnea, apatia, letargia, lepidortosi, atassia natatoria, esoftalmo, melanosi, distensione addominale. (4, 8). Sulla cute, quando coinvolta, si osservano ulcere e tumefazioni, associate a sfilacciamento delle pinne ed emorragie diffuse. In alcuni casi l'infezione può estendersi al sistema scheletrico, causando deformità. Nei soggetti colpiti si ha un progressivo indebolimento e caduta delle difese organiche, questo processo ha come esito la morte del pesce (8, 10). All'esame anatomopatologico si osservano versamenti in cavità celomatica, presenze di pseudomembrane sui visceri, e splenomegalia, noduli biancastri diffusi in milza, fegato e rene (1, 8, 10); molto frequenti sono i portatori asintomatici. Le specie di micobatteri maggiormente coinvolte nel determinismo della tubercolosi ittica sono Mycobacterium marinum, M. fortuitum e M. chelonae, ma ad esse si affiancano altre specie, quali M. abscessus, M. peregrinum, M. gordonae, M. kansasii e M. nonchromogenicum ritenute ad oggi specie patogene emergenti (8, 10). L’interesse per questa patologia nasce dal fatto che essendo considerata una “zoonosi minore”, può essere trasmessa all’uomo, rappresentando un reale rischio soprattutto per gli operatori del settore ittico. Tali microrganismi possono penetrare attraverso ferite e abrasioni cutanee provocando la formazione di granulomi a carico della cute e non sono da escludere forme linfonodali, polmonari ed ossee ad andamento molto più drammatico, soprattutto nei soggetti giovani e in quelli immunodepressi. (2, 3). Il riscontro di casi da micobatteri ittici, riguardante i proprietari di un acquario, sottolinea la necessità di far luce su una patologia di interesse ispettivo finora poco considerata, anche in virtù del fatto che il settore acquariofilo ha raggiunto una grande importanza commerciale in tutti i paesi industrializzati e, in particolar modo in Italia, dove i pesci ornamentali rappresentano gli animali da compagnia più comuni (10). Il quadro, già complesso per la concorrenza di molte specie nel determinismo della malattia, è complicato dalla alta resistenza di tali specie ai comuni farmaci anti-tubercolari. La terapia lunga e difficile nell’uomo, è, al momento, impraticabile nei pesci (1, 7, 9). In questi episodi assume, quindi, fondamentale importanza l’isolamento e la tipizzazione del micobatterio coinvolto, necessaria per ottenere un esito corretto e soprattutto con il giusto significato diagnostico. Scopo del presente lavoro è quello di evidenziare la presenza di tali patologie nei pesci ornamentali d’importazione durante il triennio preso in considerazione, confrontandoli con i dati dei monitoraggi precedenti effettuati sul territorio nazionale

La capacità dei molluschi bivalvi di filtrare elevati volumi di acqua li rende in grado di accumulare microrganismi potenzialmente patogeni per l’uomo. Tra questi Giardia spp. e Cryptosporidium spp. assumono oggi notevole interesse in relazione al possibile ruolo zoonosico. I protozoi flagellati appartenenti al genere Giardia (Metamonadida, famiglia Hexamitidae), sono parassiti che possono vivere nell’acqua e possono causare problemi di salute sia nell’ospite uomo che in diverse specie animali. Causa una zoonosi che si trasmette per via oro-fecale, causando nell’organismo ospite diarrea e disidratazione (4). Le spore dei parassiti appartenenti al genere Cryptosporidium (Apicomplexa, Coccidia) causano un’infezione parassitaria sia di importanza medica, sia veterinaria, che colpisce le cellule epiteliali del tratto gastro-intestinale, l’epitelio dei dotti biliari e del tratto respiratorio sia dell’uomo che di altri vertebrati. Anche in questo caso si tratta di una zoonosi trasmissibile per via oro-fecale, causando diarrea profusa (3, 4). A tal proposito 2340 molluschi bivalvi allevati e/o pescati in Emilia-Romagna (comprensorio Alto Adriatico), sono stati sottoposti ad indagini parassitologiche al fine di stabilirne il possibile ruolo nella trasmissione all’uomo di questi parassiti. Di questi soggetti, 780 sono stati inoltre sottoposti alla ricerca di metalli pesanti, quali cadmio, piombo e mercurio per i quali esiste un limite massimo indicato dal Regolamento CE 1881/2006 (7). È stata inoltre valutata anche la presenza del cromo, in quanto molto diffuso nell’ambiente e per il quale non esiste ad oggi una normativa specifica che ne sancisca i limiti.

Le micobatteriosi ittiche sono patologie studiate sia per il loro riscontro nell’allevamento intensivo, sia in quanto zoonosi. Di esse esistono modelli sperimentali creati per inoculazione parenterale. E’ stato messo a punto un modello di infezione “per immersione” in branzini utilizzando il M. fortuitum con l’obiettivo di riprodurre una situazione spontanea ed individuare la via di entrata. Due gruppi di branzini di 10g sono stati tenuti, per due ore, in due sospensioni di M. fortuitum contenenti rispettivamente 102 germi/ml e 105germi/ml, un terzo gruppo è stato utilizzato come controllo. Soggetti per ogni gruppo sono stati prelevati a 16 e 24 ore p.i., quindi giornalmente per i successivi 6 giorni ed infine settimanalmente per 9 settimane per l’indagine istologica e batteriologica. Per l’istologia i soggetti venivano fissati in toto in formalina tamponata 10%. Sono stati osservati complessivamente 39 soggetti “esposti” e 9 controlli. Dagli organi (cute, branchie, occhio, intestino, fegato, rene, peritoneo, milza) dei soggetti fissati in formalina sono state allestite sezioni istologiche seriate colorate poi con ematossilina-eosina, Ziehl-Neelsen e con metodica immunoistochimica (IHC) impiegante l’anticorpo policlonale anti-Mycobacterium bovis (Dako) diluito1:3000 con rivelazione medinte sistema Kit LSAB perossidasi (Dako). Mentre l’esame batteriologico ha dato positività solo dalla quarta settimana p.i., l’istologia ha mostrato lesioni già a partire dalla I settimana p.i.. La lesione riscontrata era un granuloma, da singolo e focale a multiplo e confluente, inizialmente caratterizzato dall’accumulo di aggregati nodulari di istiociti e rari linfociti alla periferia. In seguito mostrava necrosi di singole cellule che con il progredire della lesione tendeva a coinvolgere tutta la porzione centrale. Lesioni granulomatose specifiche, con presenza di acido-resistenti e di positività specifica con l’IHC, sono state riscontrate, in ordine di frequenza decrescente, nelle branchie, milza, rene anteriore, fegato e peritoneo. In 15 soggetti su 39 osservati (38,46%) le branchie mostravano lesioni così distribuite: in 10 casi alla base delle lamelle e nello stroma della lamella primaria; in 1 solo caso lo stroma della lamella primaria; in 4 casi solo la base delle lamelle. Altri siti, quali tratto anteriore e tratto posteriore dell’intestino, cute a livello di linea laterale e occhio, campionati come le branchie per valutare le possibili vie di entrata, non hanno mostrato lesioni specifiche. Il modello sperimentale ha riprodotto la malattia e, circa le possibili vie di entrata, i risultati sembrerebbero indicare nelle branchie la prima sede di replicazione batterica riconoscendo a questo organo un ruolo importante come “porta” di entrata per il micobatterio.

Le micobatteriosi ittiche, già note in natura, sono patologie studiate sempre più di frequente sia per le problematiche legate all’allevamento intensivo, sia per le eventuali potenzialità zoonosiche. Modelli sperimentali, che prevedevano una inoculazione (peritoneale o muscolare), sono stati riprodotti in diversi teleostei, con specie differenti di batteri appartenenti al genere Mycobacterium. In base a risultati precedenti (Sarli et al., Atti APIV 2003) è stato creato un modello di infezione “per immersione” in branzini utilizzando il M. fortuitum, allo scopo di valutare l’insorgenza delle lesioni precoci ed individuare la più probabile via di entrata, fornendo così nuove conoscenze alla patogenesi della malattia. Due gruppi di 60 branzini di 10g sono stati tenuti immersi, per due ore, in due sospensioni di M. fortuitum contenenti rispettivamente 102 germi/ml e 105germi/ml. Un terzo gruppo, sempre di 60 soggetti, è stato utilizzato come controllo negativo. Tre soggetti per ogni gruppo sono stati prelevati a 16 e 24 ore p.i., quindi giornalmente per i successivi 6 giorni e settimanalmente per 9 settimane. Dei tre soggetti, previamente sottoposti ad eutanasia, due venivano fissati in toto in formalina tamponata 10% ed uno utilizzato per reisolare il ceppo batterico impiegato per l’infezione. Per l’esame istologico sono stati campionati: occhio, branchie, stomaco, intestino anteriore e posteriore, cute (linea laterale anteriormente alla pinna caudale), milza, rene anteriore, fegato, peritoneo. Sezioni istologiche seriate sono state impiegate per la colorazione ematossilina-eosina e Ziehl-Neelsen. L’esame batteriologico, negativo in tutti i soggetti del gruppo di controllo, è risultato positivo nei soggetti “esposti” solo dalla quarta settimana p.i. Sono stati sottoposti ad esame istologico complessivamente gli organi di 47 soggetti (9 controlli e 38 esposti). Nei soggetti di controllo era presente solamente una statosi epatica, da lieve e focale a diffusa e grave, peraltro riscontrata anche nei soggetti esposti. In questi ultimi la lesione elementare rilevata era un granuloma, da singolo e focale a multiplo e confluente, caratterizzato dall’accumulo di aggregati nodulari di istiociti e rari linfociti alla periferia (grado 1, prevalentemente ad 1 settimana p.i.). Con la progressione del granuloma iniziava a comparire la necrosi di singole cellule (grado 2, prevalentemente a 2 settimane p.i.) o era evidente un centro necrotico del granuloma (grado 3, prevalentemente dopo la terza settimana p.i.). Lesioni granulomatose specifiche con presenza di acido-resistenti sono state riscontrate, in ordine di frequenza decrescente, nella milza, rene anteriore, branchie, fegato, peritoneo. Nella milza in 15 casi su 38 era presente iperplasia dei centri melanomacrofagici (6 casi) e/o lesioni granulomatose (10 casi). Nel rene anteriore vi era iperplasia dei centri melanomacrofagici (1 caso) o granulomi (7 casi). Nelle branchie (8 casi) erano riscontrabili lesioni focali di branchite a livello di lamelle secondarie, caratterizzate da iperplasia delle cellule epiteliali, accumulo di monociti e presenza di rari acido-resistenti a livello intracellulare. Alla base delle lamelle primarie, nello stroma dell’arco branchiale, erano reperibili le tipiche lesioni granulomatose. Granulomi a livello epatico sono stati osservati in 4 casi, mentre, su 5 casi di reazione peritoneale, essa era riconducibile alla variante granulomatosa in 2 casi ed a una peritonite acuta iniziale in 3 casi. Alla luce dei risultati ottenuti si enfatizza la riproduzione sperimentale della malattia con un modello mai utilizzato in letteratura e, si sottolinea, tra le vie di entrata valutate su base istologica, quella branchiale come la più verosimile in base alla frequenza delle lesioni riscontrate.