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Iron is an essential element to the well functionning of the organism and requires careful maintenance of its homeostasis. This is mainly due to hepcidin, a hormone secreted by the liver that controls the flow of iron within the body. It has a hyposideremic action by reducing the expression of ferroportin, the only protein known to this day, which can export iron into the extracellular environment. This has the effect of decreasing intestinal absorption and increasing intracellular retention, especially in macrophages. Hepcidin is stimulated by elevation of iron and inflammation while activation of erythropoiesis inhibits it. Understanding its regulation allows a better understanding of the pathophysiological mechanisms of overload diseases and iron deficiency. Therefore, hepcidin analysis is interesting for the exploration of iron homeostasis. In combination with other biological parameters of iron status, it is possible to find better instructions for therapeutic managements of iron metabolism diseases. Thus, an assaying method by coupling liquid chromatography and tandem mass spectrometry has been implemented at Grenoble University Hospital and the analytical performances of this assay met the laboratory requirements in terms of reliability of the analysis. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

The retina is one of the vertebrate tissues with the highest content in polyunsaturated fatty acids (PUFA). A large proportion of retinal glycerophospholipids, especially those found in photoreceptor membranes, are dipolyunsaturated molecular species. Among them, dipolyunsaturated phosphatidylcholine (PC) molecular species are known to contain very-long-chain polyunsaturated fatty acids (VLC-PUFA) from the n-3 and n-6 series having 24-36 carbon atoms and four to six double bonds. Recent interest in the role played by VLC-PUFA arose from the findings that a protein called Elongation of very-long-chain fatty acids 4 (ELOVL4) is involved in their biosynthesis and that mutations in the ELOVL4 gene are associated with Stargardt-like macular dystrophy (STGD3), a dominantly inherited juvenile macular degeneration leading to vision loss. In this context, PC molecular species containing VLC-PUFA in retina must be precisely characterized to improve our understanding of the pathogenesis of STGD3. For 25 years, several current approaches using gas chromatography or gas chromatography-mass spectrometry have been used for the characterisation and quantification of VLC-PUFA. These methods allowed characterizing with precision the structures (carbon chain length and double bond positions) of the different VLC-PUFA in bovine retina. Thus, retinal C28-C36 fatty acids are polyunsaturated and belong to the n-3 and n-6 families. The n-6 family of C28-C36 fatty acids has four or five double bonds, while the n-3 family of VLC-PUFA contains five or six double bonds. Moreover, some studies allowed determining the position of VLC-PUFA in the VLC-PC species. But most of these conventional approaches are timeconsuming, requiring successive extraction, chromatographic steps and often a derivatization step before. Recently, a normal LC-ESI-MS/MS method was proposed for the structural characterization and the quantification of VLC-PC species in retinas from bovines and human donors. It directly analyses phospholipids as intact molecules and preserves the information based on the relative position of acyl radicals on the glycerol backbone. Since the results from molecular and biochemical studies led to the conclusion that VLC-PUFA are involved in the pathogenesis of STGD3, this specific and accurate method may be useful to more precisely investigate the molecular mechanisms leading to photoreceptor dysfunction and death in STD3.

Introduction: Fully automated, and coupled with a mass spectrometric detection, on-line extraction is a very powerful and less time consuming tool than the classical extraction techniques. The objective of this study was to develop an on-line automated sample preparation using a Turboflowr® device coupled to a LC/MS/MS for measurement of methoxetamine (MXE) in human plasma. Methods: Samples (100 µL) were vortex mixed with internal standard solution (ketamine-d4 in acetonitrile). After centrifugation, 20 µL of the supernatant were injected onto a 50 × 0.5-mm C18XL column. The retained analytes were then back-flushed onto a 50 × 3-mm (3 µm) Hypersil GOLD analytical column, then eluted with formate buffer/actonitrile gradient.MXE and IS were ionized by electrospray in positive mode. Parent [M + H]+ ions were m/z 248.1 for MXE and m/z 242.1 for IS. The most intense product ion of MXE (m/z 203.1) and IS (m/z 224.1) were used for quantification. Results: The assay was accurate ([96.8% - 108.8%] range) and precise (intra- and inter-day coefficient of variation <8.8%) over the range of 2.0 (LOQ) to 1000.0 ng/mL (upper limit of quantification). No matrix effect was observed. Conclusion: Turboflowr® device coupled with LC/MS/MS allows rapid determination of compounds like MXE in plasma without extraction and without matrix effect. This method has been successfully applied to one case report after acute intoxication, showing a plasma concentration of 136 ng/mL. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

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Objectif: L’hyperplasie compensatoire des îlots pancréatiques est un trait caractéristique de l’état de résistance à l’insuline chez la souris et l’homme pré-diabétique. Afin d’identifier de nouveaux acteurs responsables de cette réponse adaptative, nous avons étudié les altérations du protéome des îlots pancréatiques murins de modèles animaux résistants à l’insuline non diabétiques. Matériels et méthodes: Des îlots isolés à partir de souris contrôles, de souris soumises à un régime gras (RG) et de souris (Ob/Ob) insulino-résistantes sans diabète ont été analysés par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse (LC-MS). Les variations du niveau d’expression des protéines de ces îlots ont été évaluées par ű accurate mass and time tag Ƈ (AMT-Tag) et ű selected reaction monitoring Ƈ (SRM). Résultats: La LC-MS quantitative du protéome des îlots pancréatiques révèle ˜1,700 protéines dans les modèles étudiés. L’identification et la quantification des protéines ont été obtenues par au moins deux peptides uniques avec une estimation du taux d’erreurs < 1 %. Nous avons observé des variations significatives de l’abondance de ˜ 400 protéines entre les îlots isolés à partir de souris contrôles en comparaison aux souris résistantes à l’insuline. La majorité de ces altérations sont communes aux deux modèles d’insulino-résistance étudiés (RG ou Ob/Ob). Ces protéines jouent un rôle dans des voies impliquées dans le métabolisme, la synthèse protéique, la sécrétion d’hormones, la survie et la prolifération cellulaire. Discussion: Ce travail représente la première étude quantitative du protéome dans la réponse hyperplasique des îlots pancréatiques de souris insulino-résistantes non diabétiques. Cette étude a permis l’identification de nouveaux candidats (CDK5RAP3, PRDX6, SEL1L, SEPT5 et SEPT7) pour l’étude de la prolifération des cellules endocrines du pancréas. La base de données acquise représente une source nouvelle pour une meilleure réflexion sur la manière d’appréhender le choix de stratégies thérapeutiques à adopter pour augmenter le nombre de cellules β fonctionnelles chez les patients diabétiques. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Introduction: La fonctionnalité des HDL des patients diabétiques de type 1 (DT1) est altérée. Ces anomalies sont en partie attribuables à des modifications glycoxydatives mais pourraient également s’expliquer par des variations de la composition en phospholipides et sphingolipides à la surface des HDL, molécules qui jouent un rôle important dans les différentes fonctions des HDL. Patients et méthodes: Nous avons recruté 43 patients DT1 (âge : 44,3±16,1 ; 17 hommes, 19 femmes) et 36 sujets contrôles normolipidémiques (âge : 40,3±14,6 ; 18 hommes, 25 femmes). Nous avons établi la composition en phospholipides et sphingolipides des HDL par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem. Résultats: L’HbA1c était de 8,9±2,0 % et la glycémie à jeun de 9,14±4,38mmol/l chez les patients DT1. La HDL-cholestérolémie était équivalente entre les patients DT1 et les contrôles (1,61±0,17 vs 1,61±0,25 mmol/l). Nous n’avons pas observé de différence significative entre les patients DT1 et les contrôles, pour la concentration au sein des HDL des phosphatidylcholines (1 021±181 vs 1 003±97μmol/l), sphingomyélines (235±79 vs 244±53μmol/l), phosphatidyléthanolamines (44,4±24,7 vs 39,6±17,8μmol/l), phosphatidylinositols (44,0±7,7 vs 45,5±7,8μmol/l), lysophosphatidylcholines (9,9±4,7 vs 10,7±4,9μmol/l). Par rapport aux HDL des sujets contrôles, les HDL des sujets DT1 étaient appauvries en sphingosine-1-phosphate (581±165 vs 659±148nmol/l, p=0,033), ainsi qu’en céramides (8 248±3 349 vs 10 851±5 501 nmol/l, p=0,013). L’activité phospholipid transfer protein (PLTP) plasmatique était augmentée de 21 % chez les sujets DT1 par rapport aux contrôles (p=0,001). Nous n’avons pas observé de corrélation entre les variations de sphingosine-1-phosphate ou céramides et l’HbA1c, la glycémie à jeun ou l’activité PLTP. conclusion: L’appauvrissement des HDL en sphingosine-1-phosphate est susceptible de contribuer à l’altération de leur fonctionnalité au cours du DT1, compte tenu de l’importance de cette molécule dans le pouvoir anti-inflammatoire, antioxydant, vasodilatateur et protecteur de l’endothélium des HDL. [ABSTRACT FROM AUTHOR]