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IATE : Axe 4 Biotechnologie microbienne et enzymatique des lipides et des agropolymères; International audience; Latex from Caricaceae has been known since 1925 to contain strong lipase activity. However, attempts to purify and identify the enzyme were not successful, mainly because of the lack of solubility of the enzyme. Here, we describe the characterization of lipase activity of the latex of Vasconcellea heilbornii and the identification of a putative homologous lipase from Carica papaya. Triacylglycerol lipase activity was enriched 74-fold from crude latex of Vasconcellea heilbornii to a specific activity (SA) of 57 lmolÆmin)1Æmg)1 on long-chain triacylglycerol (olive oil). The extract was also active on trioctanoin (SA = 655 lmolÆmin)1Æmg)1), tributyrin (SA = 1107 lmolÆmin)1Æmg)1) and phosphatidylcholine (SA = 923 lmolÆmin)1Æmg)1). The optimum pH ranged from 8.0 to 9.0. The protein content of the insoluble fraction of latex was analyzed by electrophoresis followed by mass spectrometry, and 28 different proteins were identified. The protein fraction was incubated with the lipase inhibitor [14C]tetrahydrolipstatin, and a 45 kDa protein radiolabeled by the inhibitor was identified as being a putative lipase. A C. papaya cDNA encoding a 55 kDa protein was further cloned, and its deduced sequence had 83.7% similarity with peptides from the 45 kDa protein, with a coverage of 25.6%. The protein encoded by this cDNA had 35% sequence identity and 51% similarity to castor bean acid lipase, suggesting that it is the lipase responsible for the important lipolytic activities detected in papaya latex.

Membranes with specific enzymatic activities and low pore sizes (a few nanometers) have been recently developed at the European Membrane Institute. They represent "natural" assemblies of multiple microreactors placed in parallel, on which it is easy to favour the meeting between substrates -that one can force to cross the pores using the transmembane pressure- and catalyst -deposited onto the surface of material-. One can thus optimise the performance of reactions, as demonstrated with various low viscosity solvents (water, organic or even supercritical CO2 solutions). With highly viscous liquids such as oils, classical filtration is much more difficult. In this work the idea to decrease oil viscosity by injecting supercritical CO2 following a technique recently developed by the French Nuclear Commission, and then to modify oil characteristics through an active membrane, has been tested. The interesterification between castor oil triglycerides (TG) and methyl oleate, using a lipase as catalyst, in the presence of SC CO2 has been chosen as model system. A specific analytic method has been set up which uses planar chromatography for product separation, and clearly shows disappearance of methyl oleate as well as formation of methyl ricinoleate. The first experimental results make it possible to validate the new concept and show that the technology opens very interesting prospects for the biotransformation of biological products with a high viscosity. (Texte intégral)

Enzymes are used more and more in various applications of different fields such as pharmaceutical, cosmetic or food industry. In the past years, a better understanding of enzymes functionalities and catalytic behaviors, together with the progress of molecular engineering has lead to new applications for various types of enzymes. Concerning lipases, they are used in various sectors, as pharmaceutical, food or detergency industry. Their advantages versus classical chemical catalysts is that they exhibit a improved substrate specificity and operate in milder reaction conditions. Moreover, the fact that they retain their activity in organic solvents extends their range of application. In the pharmaceutical industry, lipases can be used for racemic mixtures resolution or as biocatalysts for the synthesis of chiral synthesis intermediates. In the food sector, these enzymes are principally employed in oils and fats restructuration processes allowing the production of specific triacylglycerols with predetermined fatty acids composition and distribution.. Similar processes are also described for the synthesis of partial glycerides or fatty acids concentrates. Besides their application in oils and fats processes, these enzymes have proved to be very attractive for others lipase-catalyzed reactions with unusual substrates. In particular, they appear to be very effective for the synthesis of molecules involving the grafting of a lipophilic moiety or a hydrophilic one. The major example of this capacity is certainly the synthesis of glycolipids derivatives such as sugar esters that can be used as surfactants in the food, pharmaceutical or cosmetic industry. In this presentation, will be described and discussed some of the recent results in the field of the lipase assisted lipophilization of bioactive compounds such as phenolic derivatives in order to modify the hydrophilic/lipophilic properties of the initial molecules to obtain new products with multi-functionnal properties combining for example, microbial, antioxidant and emulsifying properties. More specifically, to illustrate this topic, will be presented in details the enzymatic lipophilization of phenolic acids from green coffee, namely chlorogenic acids, via esterification by fatty alcohols, in order to obtain new antioxidant molecules with improved activity in emulsified systems. (Texte intégral)

The use of poultry abdominal adipose tissue in delicatessen processing leads to unacceptable products. The reasons of this problem are 1) its low melting point owing to its high unsaturated fatty acids content and 2) its lack of consistency due to the absence of connective tissue. The objective of this study is to product fat solid fraction using dry-fractionation in order to elaborate 100% poultry delicatessens. Dry-fractionation was performed at pilot scale using Tirtiaux process which enables a good control of cooling and agitation parameters. The fat crystals were separated from liquid oil by the use of a membrane filter press. Initial fat and stearin fraction were analyzed in terms of fatty acids composition, iodine value, melting point, solid fat content and thermal properties were characterized by differential scanning calorimetry. Whereas the initial chicken fat presents a melting point of 24°C, the stearin fraction obtained is solid at ambient temperature (mp = 45°C). The stearin fatty acids content is 42% (w/w) of SFA, 37% of MUFA and 21% of PUFA while the raw chicken fat profile is 30, 45 and 25% for SFA, MUFA and PUFA respectively. The stearin already find applications as grease coating of pâté and others poultry products. Complementary works must be performed in order to elaborate products needing firm fats (dry-fermented sausages, "mortadelle", etc). (Texte intégral)

Biocatalytic activities of bromelain preparations were carried out in proteolytic (4500 units g-1), lipolytic (67 units g-1) and, more particularly, in fatty acid ester synthetic reactions. The ester synthesis reactions were studied and several thermodynamic parameters and non-biological reference reactions were also investigated. Only temperature had a strong influence on the maximum reaction yield (30% after 10 days) and revealed that thermal catalysis, which exists in esterification, raises doubts concerning the real biocatalytic activity of the plant extract. When this thermal catalysis is taken into account, the intrinsic lipase activity of the bromelain preparations in esterification reactions is nil.

Cet article traite du travail effectué sur deux substrats différents de protéine, les isolats protéiques de farine de soja et de gluten de blé avec pour objectif de trouver des applications dans des secteurs tels que les surfactants et les agromatériaux. La première étape fut de développer une lipophilisation chimique de l'isolat de la farine de soja et du gluten de blé pour l'utiliser pour la production de biomatériel. La lipophilisation enzymatique des protéines de farine de soja avec pour objectif de les utiliser comme nouveaux surfactants dans les produits consmétiques est un autre exemple mentionné

La présente invention a pour objet de nouveaux complexes amphiphiles, un procédé pour leur préparation et les compositions en renfermant. Lesdits complexes amphiphiles résultent de la réaction, à une température comprise entre la température ambiante et 80 deg.C, entre d'une part une (ou plusieurs) protéine(s) et/ou un (ou plusieurs) polypeptide(s), dont la masse moléculaire moyenne est supérieure ou égale à 2 000 Daltons et d'autre part une (ou plusieurs) chaîne(s) grasse(s) dont le nombre d'atomes de carbone est compris entre 4 et 30 choisie(s) parmi les acides gras, les alcools gras, les amines grasses et leurs dérivés à l'exclusion de l'acide undécylénique.

Les esters d'acides phénols sont synthétisés par estérification directe catalysée par une lipase immobilisée issue de Candida antarctica. Les rendements des estérifications sont de 3 à 98 %. Ils semblent être liés à la distribution électronique des acides phénols qui affecte la réactivité de la fonction carboxyle. La longueur de la chaîne carbonée des alcools joue aussi un rôle important. Il est observé que même pour de bons rendements, les temps d'estérification sont de deux jours ou plus

Le procédé DRUPALM conçu par le CIRAD et développé conjointement par le CIRAD et la Société FLOTTWEG GmbH avec l'aide de l'ANVAR, consiste à extraire en un seul passage la plus grande partie des corps gras présents dans le fruit du palmier. L'huile, dénommée DRUPALM(R), est constituée d'un mélange d'environ 95% d'huile de palme et 5% d'huile de palmiste selon la composition des fruits traités. Les essais se sont déroulés en trois campagnes au Cameroun, à l'usine de Nkapa de la SOCAPALM sur un an. Dans cette partie on trouve les éléments chiffrés permettant d'établir la supériorité du nouveau pocédé sur le procédé classique. Les taux d'extraction ont toujours été supérieurs à ceux obtenus sur la chaîne classique. Les avantages sont multiples sur le plan technique (bilan énergétique favorable), sur le plan environnemental (réduction du volume et de la charge polluante des effluents liquides) et sur le plan économique (investissements réduits, coûts de production inférieurs). Les inconvénients sont limités : introduction d'un produit nouveau sur le marché (mélange de deux huiles) et perte d'une partie de la valeur marchande potentielle des huiles, l'huile de palmiste bénéficiant d'une prime par rapport à l'huile de palme sur le marché mondial

La synthèse stéréospécifique d'un triglyceride chiral et de son racemique, effectuée en 3 étapes avec 95% de pureté, offre une méthode efficace pour déterminer les spécificités des différentes lipases et des acyltransferases et pour différencier la stéréospécificité sn-1 ou sn-3 et la typo-sélectivité pour les chaines courtes. L'étude porte sur 3 enzymes d'origines différentes : la lipase gastrique de lapin, la lipase de Candida antartica et la lipase de Pseudomonas aeruginosa

La séparation d'un mélange d'acide caprylique et de caprylates de fructose obtenus par biocatalyse est effectuée au moyen de la distillation moléculaire, distillation conduite à basse température et à très basse pression. Ces composés étant particulièrement sensibles à la chaleur, la température optimum utlisée est de 60¼C et la pression de 0,1 micronbar

L'aptitude qu'ont les bromures d'alkyl magnésium pour réagir à froid et de manière non spécifique en milieu éthéré sur les fonctions esters des glycérides est mise à profit pour déterminer la composition en acides gras des huiles. Déjà utilisés dans l'étude de la régio-distribution des acides gras des triglycérides et dans l'analyse des cires, les réactifs de Grignard pourraient trouver une application efficace, notamment dans le cas des corps gras possédant les chaînes courtes. En effet, dans ce dernier cas, les problèmes rencontrés lors de la dérivation des acides gras ou lors de l'analyse chromatographique sont sensiblement minimisés par la diminution de la volatilité des constituants. Les compositions en alcools tertiaires, obtenues par réaction des bromures de méthyl, éthyl et butyl magnésium à partir d'huiles lauriques (huile de coco), de matière grasse laitière et d'huile de palme, servant de référence, sont comparées à celles obtenues par les techniques traditionnelles de dérivation des acides gras en esters méthyliques ou isopropyliques

L'aptitude qu'ont les bromures d'alkyl magnésium pour réagir à froid et de manière non spécifique en milieu éthéré sur les fonctions esters des glycérides est mise à profit pour déterminer la composition en acides gras des huiles : la transformation en alcools tertiaires des acides gras qui en résulte permet d'accroître la condensation en carbone des chaînes grasses de 2nC (n étant le nombre d'atomes de carbone du reste alkyl du réactif de Grignard). Déjà utilisés dans l'étude de la régio-distribution des acides gras des triglycérides et dans l'analyse des cires, les réactifs de Grignard pourraient trouver une application efficace, notamment dans le cas des corps gras possédant les chaînes courtes. En effet, dans ce dernier cas, les problèmes rencontrés lors de la dérivation des acides gras ou lors de l'analyse chromatographique sont sensiblement minimisés par la diminution de la volatilité des constituants. Les compositions en alcools tertiaires, obtenues par réaction des bromures de méthyl, éthyl et butyl magnésium à partir d'huiles lauriques, de matière grasse laitière et d'huile de palme, servant de référence, sont comparées à celles obtenues par les techniques traditionnelles de dérivation des acides gras en ester méthyliques ou isopropyliques

Ce travail a été entrepris dans le but d'augmenter les qualités nutritionnelles et commerciales de l'huile de palme et des fractions concrètes par interestérification enzymatique catalysée par des lipases 1-3 régiosélectives dans un milieu fondu. Les buts principaux sont de développer des matériels de base pour margarine de table ou de pâtisserie, et de produire des huiles fluides pour l'assaisonnement et la friture éventuellement enrichies en acides gras essentiels répondants aux besoins technologiques et nutritionnels

A method for lipase activity determination by spectrophotometry is described. Rhodamme 60 reagent is used for complexation with the free fatty ac1ds liberated during lipolysis This method uses toluene as the Rhodamine 6G solvent in the presencc of fatty acids, a pink coloration appears and absorbance is read at 513 nm it is shown this method is pH independent and gives results similar to those obtained with TCL technique. This method is utilized for lipase activity determination in a yeast strain Candida steatolytica. (Résumé

Oleylhydroxamic acid (Oleyl HA) was produced by acylation of neutralized hydroxylamine with oleic acid in buffered or in solvent media using the broad-spectrum amidase activity of #Brevibacterium# (BB) sp 19 cells.

La synthèse d'acides gras hydroxamiques par voie enzymatique en présence de lipozyme (lipase fixée de Mucor miehei), est réalisée sur plusieurs huiles que l'on oppose à l'hydroxylamine en présence de lipozyme. On montre que la synthèse a lieu indépendamment de la nature des acides gras et de leur position dans les triglycérides utilisés