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BACKGROUND: Patients with a previous history of cancer of the upper respiratory and digestive tracts (URDT) frequently develop a bronchial carcinoma (synchronous or metachronous) that may affect their survival. OBJECTIVE: To determine the prevalence of bronchial carcinoma at an early stage in a population of patients treated for cancer of the URDT. MATERIALS AND METHODS: This was a single centre prospective study (2002-2006). Patients in remission following treatment of cancers of the buccal cavity, pharynx (stages I -II) and larynx (stages I - III), were examined by a spiral CT scan and fibreoptic bronchoscopy (white light and autofluorescence), with biopsies, and cytology of the bronchial aspirate. RESULTS: 60 patients (55 men) were included. Two peripheral bronchial carcinomas were detected by scanning and two more (proximal) by endoscopy. All 4 bronchial tumours were squamous carcinomas (stage IA). Three patients had surgery, the fourth declined intervention. CONCLUSION: Our study confirms the high prevalence (6.7%) of bronchial carcinoma in patients with a past history of cancer of the URDT. It emphasises the complimentary roles of spiral scanning and bronchoscopy in early diagnosis. It is still too early to evaluate the impact of these investigations on the survival of the patients.

Resume Introduction Les nodules pulmonaires partiellement ou totalement en verre depoli en tomodensitometrie sont d’identification recente. Etat des connaissances Ces nodules representent 2,9 % a 19 % des nodules detectes dans des populations a risque de cancer bronchique. Les correlations anatomo-radio-cliniques revelent une origine benigne (pneumonie chronique, fibrose localisee, hyperplasie adenomateuse atypique) ou maligne (cancer bronchiolo-alveolaire, adenocarcinome, plus rarement metastase). Le risque de cancer est superieur pour ces nodules que pour les nodules solides. Cependant, le temps de doublement des cancers a forme nodulaire en verre depoli est en moyenne superieur a celui des cancers a forme partiellement en verre depoli et largement superieur aux adenocarcinomes a forme solide. Le pronostic des patients est donc correle a la presence et a la proportion de verre depoli au sein du nodule. Perspectives La prise en charge de ces nodules impose une surveillance prolongee pour les nodules 10 mm persistant sur un scanner de controle entre 1 et 3 mois apres leur decouverte et traitement anti-inflammatoire et ou infectieux. Conclusion Les nodules totalement ou partiellement en verre depoli necessitent une prise en charge particuliere.

Introduction : Durant la derniere decennie, des cellules tumorales capables de s’auto-renouveler indefiniment ont ete qualifiees de cellules souches cancereuses (CSC). Des etudes ont montre que la reparation des lesions epitheliales pulmonaires est induite par une sous-population de cellules progenitrices multipotentes. Apres une (des) mutation(s) initiale(s), ces cellules pourraient etre a l’origine des CSC et donc agir comme des precurseurs dans l’initiation de la tumorigenese. En effet, des etudes faites sur des modeles murins suggerent fortement que certains adenocarcinomes proviennent de cellules souches au niveau de la jonction bronchiolo-alveolaire. Leur presence pourrait avoir un impact en therapie puisque les cellules souches sont chimio-resistantes. Grâce a nos modeles murins du carcinome bronchique a petites cellules (CBPC) humain, nous mettons en place des methodes ou identifier et caracteriser les cellules progenitrices impliquees dans l’initiation et la progression de ce cancer. Methodes : Dans nos modeles de souris, les genes suppresseurs de tumeurs, Trp53 et Rb, peuvent etre inactives de facon somatique et conditionnelle grâce au systeme Cre/lox, par intubation intratracheale d’un adenoCrevirus. Les tumeurs pulmonaires developpees chez ces souris sont fortement similaires au CBPC humain. Les poumons entiers sont digeres de facon enzymatique pour obtenir des cellules epitheliales pulmonaires qui sont ensuite triees (FACSAria). Nous basons le tri cellulaire sur l’expression de marqueurs de surface : les cellules Sca1+, CD34+, Pecam- et CD45- sont isolees et mises en culture. Resultats : Les premiers tris cellulaires ont montre que les cellules Sca1+, CD34+, Pecam- et CD45- representent moins de 0,5 % de la population epitheliale totale et qu’elles sont capables de former des spheres en culture. Des souris Rb -/- ; Trp53 -/- ont ete infectees et elles developpent des lesions neuroendocrines hyperplasiques precoces dans lesquelles nous verifierons la presence de cellules progenitrices. Ceci constituerait une premiere preuve de la presence de cellules souches capables de s’auto-renouveler dans les lesions cancereuses precoces. Conclusions : A l’aide de nos modeles de souris, nous devrions pouvoir detecter les CSC et elucider leur role dans le cancer du poumon. De plus, nos resultats pourront etre valides sur des echantillons de CBPC humain et ils seront, par consequent, tres utiles en clinique.

Introduction : L’incidence du cancer du poumon augmente de maniere exponentielle avec l’âge. Parallelement, les cellules senescentes s’accumulent dans les tissus au cours du vieillissement. Ces cellules secretent de nombreux facteurs qui modifient le microenvironnement et favorisent le developpement tumoral. Par consequent, la senescence cellulaire pourrait faire le lien entre cancer et vieillissement. Dans ce contexte, notre etude vise a identifier et caracteriser de nouveaux facteurs secretes par les cellules senescentes pouvant jouer un role dans la tumorigenese. Methodes et resultats : Par microarrays dans des fibroblastes pulmonaires, nous avons identifie le gene codant pour la proteine WNT16B WNT16B appartient a une famille de proteines secretees (les WNT) impliquees dans de nombreux cancers. Par PCR temps reel et western blot nous avons confirme la surexpression de la proteine WNT16B et valide son statut de marqueur de la senescence grâce a deux modeles de reversion de la senescence : l’inhibition de p53 et l’expression de la telomerase. L’expression de WNT16B a egalement ete testee dans trois modeles de senescence prematuree induite par un stress, pour observer que WNT16B est surexprime dans chaque experience. Afin de preciser la fonction de WNT16B au cours de la senescence, nous avons induit l’expression d’un ARN interference dans des cellules pre-senescentes. L’inhibition de WNT16B empeche l’entree en senescence des cellules. Ce resultat montre que WNT16B est necessaire pour l’entree en senescence des fibroblastes. De plus, la surexpression de WNT16B dans des fibroblastes jeunes entraine un ralentissement de la croissance cellulaire. Conclusion : Cette etude decrit la proteine WNT16B (1) comme un marqueur et (2) comme impliquee dans le processus de senescence cellulaire dans les fibroblastes pulmonaires MRC5.

Introduction The angiogenesis is an absolute requirement for tumor survival and progression. The Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF-A) is one of the most potent angiogenic factor and is upregulated in many tumors. VEGF-A exists in most tissues as multiple pro-angiogenic isoforms, termed VEGFxxx, generated by alternative splicing of a single gene product. A novel family of splice variants formed by the use of a distal splice acceptor site in the terminal exon 8 of the VEGF-A gene has been recently described. These isoforms, termed VEGFxxxb possess anti-angiogenic properties and are downregulated in tumors. To date, the cellular signaling pathways controlling this VEGF-A splicing switch remain unknown. In this study, we have investigated the potential role of the transcription factor E2F1 in the control of VEGF-A alternative splicing. Methods To analyze VEGF mRNA and protein levels, RT-PCR, RT-qPCR, ELISA assays, RNA interference and WB experiments were performed in stable inducible clones derived from H358 pulmonary adenocarcinoma cells, in which E2F1 is overexpressed upon doxycyclin addition. Results In our cells, deprived of p53 function, we provide evidence that E2F1, but not the mutant E2F1(E132) unable to bind DNA, down-regulates the VEGF promoter activity in normoxic conditions, leading to a decrease of all VEGFxxx isoforms, at both mRNA and protein levels. More importantly, we further provide evidence that E2F1 increases the level of anti-angiogenic VEGFxxxb mRNAs, as well as leads to the accumulation of the VEGF165b protein isoform. These data indicate that E2F1 selectively enhances the inclusion of VEGF-A alternative exon 8b. We recently identified the splicing factor SC35, a member of the Ser-Rich Arg (SR) proteins family that play a key role in constitutive and alternative splicing events, as a new direct transcriptional target of E2F1. Finally, we demonstrate that SC35 is absolutely required for upregulation of VEGFxxxb splice variants in response to E2F1, while it is dispensable for E2F1-mediated VEGF-A transcriptional repression. Conclusion These findings demonstrate that E2F1 regulates the angiogenic switch of VEGF-A, in favor of anti-angiogenic splice variants, and identify the splicing factor SC35 as a key component of this process. Such effects could have a physiological relevance during tumoral neo-angiogenesis of lung carcinoma, in which E2F1 is abnormally expressed.

Introduction La proteine E2F-1 est un facteur de transcription situe a l’interface des voies de signalisation des proteines suppressi-ves de tumeur p53 et RB. E2F-1 est un facteur-cle de la transition Gl/S du cycle cellulaire et est aussi capable d’induire une apoptose p53-dependante ou independante. Nous avons decrit son expression differentielle dans les tumeurs pulmonaires de notre banque et notamment sa faible expression dans les carcinomes pulmonaires non a petites cellules (Eymin et coll., Oncogene 2001). Dans la mesure ou les souris knock-out pour E2F-1 developpent des adeno-carcinomes pulmonaires, et sur la base de notre observation dans les tumeurs humaines, nous avons emis l’hypothese que la perte de E2F-1 pourrait participer a la carcinogenese de ce type de tumeurs par defaut d’apoptose. Methodes Nous avons etabli au laboratoire un modele de clones stables inductibles par la doxycycline pour l’expression de E2F-1 dans la lignee d’adenocarcinome pulmonaire H358 (Systeme Tet-On, Clontech). Resultats Dans ce modele, nous avons montre qu’E2F-l induit l’apoptose par un mecanisme original impliquant une diminution de l’expression de la proteine anti-apoptotique c-FLIP courte conduisant a l’activation de la caspase-8 au niveau du DISC (Death Inducing Signaling Complex). De facon importante, nous avons aussi montre qu’E2F-l, en diminuant l’expression de c-FLIP courte, sensibilise les cellules tumorales mais aussi les cellules normales a l’apoptose induite en reponse a la stimulation des recepteurs de mort Fas et TRAIL. Finalement, nous avons observe la surexpression specifique de c-FLIP courte dans les adenocarcinomes pulmonaires de notre banque de tumeurs qui expriment un faible niveau d’expression de E2F-1. Conclusions Nos resultats identifient donc E2F-1 comme un determinant critique de la sensibilite des cellules tumorales a l’apoptose mediee par la voie des recepteurs de mort et suggerent que la faible expression de E2F-1 detectee dans les carcinomes pulmonaires non a petites cellules pourrait contribuer a l’echappement des cellules tumorales a la reponse immunitaire via la surexpression de c-FLIP courte.