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An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) on the surface of a glass open-well microchip (4 mmφ, 10 μm Depth) was developed. The analytical principle of this method for the determination of immunoglobulin A (IgA) was the same as the conventional sandwich-type ELISA. Firstly, a primary antibody (anti-IgA) was adsorbed on the surface of an open-well microchip, and then an antigen (IgA) and secondary antibody (anti-IgA HRP labeled) were reacted with the adsorbed antibody. The HRP remained on the surface of the open-well microchip, which was determined by using Amplex® Red System with an incident-light fluorescence microscope after the reacyion for 90 seconds. The calibration curve of the IgA standard solution was linear in the range up to 5 ng/ml on 10 μl of the substrate volume. The proposed method with the openwell microchip shortened the reaction time compared to the conventional ELISA with a 96-well plate.

多糖類の一種であるセルロースは，食品添加物として幅広く使用されているだけでなく，医薬品における賦形剤としてもはん用されている．糖類や穀物製品が自動酸化により極微弱化学発光（CL）を示すことが報告されているが，本研究では，セルロースと糖類に着目し，化学構造と発光の関係及びその発光メカニズムを検討した．9種類の糖を対象とし，極微弱化学発光法を用いて熱励起及び光励起によるCL強度及びCLスペクトルを測定した．また，半経験的分子軌道法（MOPAC）を用いて，糖類に対する酸素吸着のエンタルピー変化を計算し，発光メカニズムの理論的解明を行った．得られた知見より，糖類の極微弱化学発光には，糖類表面に吸着した酸素が関与していることが明らかになった．CL法は，自動酸化だけでなく，吸着酸素による極微弱化学発光の測定も可能であることが確かめられた．

酸化的ストレスやフリーラジカル反応との関連性などから，その生理活性が注目されているアラントインについて高感度分析法を検討した．アラントインは高極性物質であるため，通常のODSカラムでは保持が弱く，生体試料に存在する他の共存成分との分離が困難であることから，親水性相互作用クロマトグラフィーによる分離を試み，質量分析法による高感度かつ選択的分析法を検討した．更にヒト生体試料（血清，唾液，尿）中アラントインの定量を試みた．本法を適用した結果，血清の検出限界は0.03 μM（S/N ＝3），定量限界は0.10 μM（S/N ＝10）であった．また，アラントインの内標準物質であるアラントイン-1,3-15N2を酵素反応によって調製して使用した．その結果，補正を行うことですべての試料より90％ 以上（RSD

唾液中に含まれるイムノグロブリンA（IgA）の簡便かつ迅速な定量法の開発を目的として，安価な使い捨てタイプの免疫分析マイクロチップを開発した．マイクロチップの材料にはポリジメチルシロキサンを用い，チャネル内壁に第一抗体（anti-IgA）を吸着させた．試料である抗原（IgA）を捕捉させた後，西洋ワサビペルオキシダーゼ標識化第二抗体（anti-IgA HRP labeled）を反応させた．チャネル内に基質溶液（Amplex® Red及びH2O2を含む溶液）を満たし，蛍光強度を測定した．酵素基質反応時間5分における検量線は濃度0～50 ng/mlの範囲で良好な直線関係を示した．96穴マイクロプレートを用いる方法では測定に150分を要するが，本法を用いることにより測定時間を35分に短縮することが可能となった．唾液中のIgAの定量を行ったところ，96穴マイクロプレートを用いる方法とほぼ一致した値が得られ，本法により唾液中のIgAの迅速定量が可能であることが明らかになった．また，フロー法を用いてもIgA分析が可能なことが示唆された．

ニトロセルロースメンブランフィルター上にこん跡量のタンパク質を吸着濃縮し,N-ヒドロキシスクシンイミドビオチンでタンパク質をビオチニル化した.次いで,ペルオキシダーゼ標識アビジンにより形成させたアビジン-ビオチン複合体を4-クロロ-1-ナフトール-過酸化水素で発色させ光音響定量に供した.試料溶液中に100mMの塩化マグネシウムを添加したとき,信号強度は極大を示した.一方,試料溶液中にドデシル硫酸ナトリウム(SDS)を添加したとき,信号強度はSDS濃度の増加に伴って減少した.試料タンパク質としてオボアルブミンを用いた場合,信号強度とタンパク質量の間にはタンパク質の量が1~300ngの範囲で直線性が認められ,検出限界は約0.8ng(S/N=2)であった.発色させたアビジン-ビオチン複合体はHe-Neレーザーの連続照射によって退色した.5種類の水試料,すなわち氷,水道水,日本製,カナダ製,スイス製の天然水に含まれるタンパク質を測定したところ,それぞれオボアルブミン換算で150,58,26,14ng/ml及びN.D.のタンパク質を検出した.水道水に対する添加回収率は104.3%であった.

pH指示薬であるクレゾールレッドは可視部に吸収を示すが,二酸化塩素により酸化され可視部の吸光度の減少が認められる.そこでこの酸化による可視部の吸光度減少を利用し,二酸化塩素の定量を行った.クレゾールレッドと二酸化塩素の反応におけるpHの影響は,1.0-3.0では吸光度が徐々に減少し,pH4.0以上では吸光度が増加し,不安定であったため,pH3.0を用いた.又吸光度測定時において,pH12.0以下では感度が悪いためpHは13.0とした.本法は二酸化塩素0.004-1.36ppmの範囲で各種イオンの妨害を受けることなく定量できた.定量下限は4ppbと他の方法に比べて高感度であり,簡便であった.

開発した電流積分型定電圧分極電流滴定装置を用いて,二酸化塩素及び塩素酸化物の分別定量の諸条件と妨害イオンの影響について検討した.二酸化塩素及び塩素酸化物の定量はヨウ素滴定に基づいて行い,酸化力が異なることを利用しpH7で次亜塩素酸,二酸化塩素,pH2で二酸化塩素,亜塩素酸がそれぞれ定量され,混合試料を窒素でパージすることで二酸化塩素を除けることから分別定量が可能であった。本定量にはNa+,Mg2+,K+,Ca2+,Zn2+,Pb2+,SO32-,グリシン,グルコースは10ppmまでは影響が認められず,Fe3+,Cu2+,Mn2+,NH4+は影響が認められるが,水質法の基準内の濃度では妨害物質を前処理なしで分別定量できた.又,次亜塩素酸,亜塩素酸,二酸化塩素の再現性はそれぞれRSD0.16,0.17,0.90%と良好であった.

二酸化塩素及び塩素酸類を高感度に定量するために感度が良好でノイズの影響を受けにくい電流積分型定電圧分極電流測定装置を考案試作した.装置は電流を積分するためのコンデンサー,その端子電圧を測定するためのエレクトロメーター,基準電圧を発生するD/Aコンバーター,ロジック部,トラックホールドアンプ及び表示用デジタル電圧計から成る.本装置は電極間に流れた拡散電流をコンデンサーに積分し,コンデンサーの端子電圧からその間の平均電流を求めるためランダムノイズが平均化され見掛けのS/N比が良好であった.本装置を用いたときヨウ素の滴定の再現性はR.S.D.0.2%以下と良好であり,塩素酸類の検出限界は1 ppb以下と高感度であった.又電流の測定分解能は数pAと非常に高い感度を得ることができた.

The oxygen absorption method with an induction period meter made it possible to measure oxygen uptake of petroleum products placed under severe conditions. The results by this method were correlated with those by the direct oxygen determination. These two oxygen determination methods were found to be simpler and capable of higher precision than the spectrophotometry and peroxide value test.

電子捕獲型検出器付きガスクロマトグラフィー(GC-ECD)を用い,海産物中のトリブチルスズ化合物及びジブチルスズ化合物の同時定量法を検討した.海産物中のトリブチルスズ化合物,ジブチルスズ化合物を塩酸酸性下でそれぞれ塩化トリブチルスズ(TBTC),塩化ジブチルスズ(DBTC)に変換し,ヘキサン-ジエチルエーテル(3:1,v/v)混液で抽出し,フロリジールカラムでクリーンアップ後,Thermon-Hgのキャピラリーカラムを用い,GC-ECDで定量した.本法における定量限界はTBTC 0.77ng/g,DBTC 1.15ng/gであり,添加回収率はTBTC 94.8%,DBTC 85.7%であった.又TBTC,DBTC各々3ngを用いたとき,相対標準偏差はTBTC 3.8%,DBTC 4.1%であった.本法を実試料に応用し,ハマチ,タイ,サケ,コンブ中のTBTC及びDBTCの含量を測定したところ,最高 TBTC 1.61ppm,DBTC 13.60ppmであった.