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Resumen Introducción. Los fibroblastos gingivales (FGs) son células del tejido conjuntivo gingival que han tomado en los últimos años una relevancia promisoria por su probable utilización en la terapia celular, dadas sus capacidades de multipotencialidad y de autorrenovación. Objetivo. Conocer y describir el impacto de la ausencia en la suplementación de Suero Fetal Bovino (SFB) en la supervivencia de fibroblastos gingivales en cultivos. Materiales y métodos. Fibroblastos gingivales fueron aislados de tejido gingival de pacientes sanos y cultivados en medios de cultivos DMEM (Dulbecco's Modified of Eagle Medium) en ausencia y suplementados con 0.2% de SFB a 37°C en una atmósfera húmeda con 5% de CO2. Se llevó a cabo una evaluación morfológica, de supervivencia y proliferación de los FGs, así como la identificación mediante la técnica de inmunofluorescencia de marcadores del citoesqueleto celular como la actina y mitocondrias. Resultados. Los FGs cultivados en ausencia y con suplementación de 0.2% de SFB evidenciaron una forma fusiforme, con núcleos ovalados y numerosas prolongaciones citoplasmáticas durante el tiempo de cultivo. Un leve aumento en la proliferación de FGs fue observado en aquellas células en contacto con el medio DMEM+0.2% de SFB comparadas con el medio donde estuvo ausente la suplementación. El inmunomarcaje de la actina y las mitocondrias dejó en evidencia que la ausencia y suplementación a 0.2% de SFB no afectó su localización en los FGs evaluados. Conclusión. Los fibroblastos gingivales sobreviven y proliferan en ausencia de SFB, conservando sus características morfológicas celulares. Abstract Introduction. Gingival fibroblasts (GF) are cells of gingival connective tissue that have taken promising relevance in recent years due to their probable use in cell therapy, given their multipotencial and self-renewal capabilities. Objective. To know and to describe the impact of the absence of Fetal Bovine Serum (FBS supplementation on the survival of gingival fibroblasts in cultures. Materials and methods. Gingival fibroblasts were isolated from gingival tissue of healthy patients and cultured in DMEM (Dulbecco's Modified of Eagle Medium) culture media in absence and supplemented with 0.2% FBS at 37 ° C in a humid atmosphere with 5% CO2. A morphological evaluation, survival and proliferation of GF were carried out, as well as the identification by the immunofluorescence technique of cellular cytoskeleton markers such as actin and mitochondria. Results. The GF grown in the absence and with supplementation of 0.2% FBS showed a fusiform shape, with oval nuclei and numerous cytoplasmic extensions during the culture time. A slight increase in the proliferation of GF was observed in those cells in contact with the DMEM medium +0.2% FBS compared to the medium where the supplementation was absent. Immunostaining of actin and mitochondria showed that the absence and supplementation to 0.2% of FBS did not affect its location in the evaluated. Conclusion. Gingival fibroblasts survive and proliferate in the absence of FBS, preserving their cellular morphological characteristics.

espanolResumen El esmalte dental, tejido mas duro del cuerpo humano, es formado por medio de la diferenciacion de celulas epiteliales conocidas como ameloblastos. Recientemente, las celulas epiteliales dentales de incisivo de rata han sido utilizadas como modelo celular de eventos fisiopatologicos durante la formacion del esmalte dental. Sin embargo, en funcion de los eventos estudiados es meritorio comprender su comportamiento, particularmente cuando la concentracion del Suero Fetal Bovino (SFB) varia. El proposito de este trabajo es evaluar el impacto de la concentracion del SFB sobre el crecimiento, proliferacion y supervivencia de las celulas epiteliales dentales. Celulas epiteliales dentales fueron cultivadas en DMEM/F12, en presencia y ausencia de SFB. Observaciones morfologicas e inmunohistoquimicos de la actina, vimentina y fibronectina fueron realizados. Los resultados permitieron constatar que la ausencia de SFB afecto negativamente la proliferacion de las celulas epiteliales dentales, pero mantuvo una expresion optima de la actina y vimentina. Se identifico una alteracion en la expresion de la fibronectina en las celulas tratadas en ausencia de SFB. En conclusion, la carencia de SFB disminuyo drasticamente la supervivencia, proliferacion y expresion de la fibronectina en las celulas epiteliales dentales de rata. EnglishAbstract Dental enamel, the hardest tissue in the human body is formed by the differentiation of epithelial cells known as ameloblasts. Recently rat incisor dental epithelial cells have been used as a cellular model of pathophysiological events during tooth enamel formation. However depending on the events studied, it is necessary to understand the behavior of these cells, particularly when the concentration of Bovine Fetal Serum (FBS) varies. The purpose of this work is to evaluate the impact of FBS concentration on the growth, proliferation, and survival of dental epithelial cells. Dental epithelial cells were cultured in DMEM/F12 culture medium in the absence and presence of 10% FBS. Morphological and immunohistochemical observations of actin, vimentin, and fibronectin were performed. The results confirm that the absence of FBS negatively affected the proliferation of dental epithelial cells but maintained an optimal expression of actin and vimentin. An alteration in the expression of fibronectin in the cells treated in the absence of FBS was identified. In conclusion, the lack of FBS dramatically decreased the survival, proliferation, and expression of fibronectin in rat dental epithelial cells. portuguesRESUMO O esmalte dentario, o tecido mais duro do corpo humano, e formado pela diferenciacao de celulas epiteliais conhecidas como ameloblastos. Recentemente, celulas epiteliais dentarias de incisivo de rato tem sido utilizadas como modelo celular de eventos fisiopatologicos durante a formacao do esmalte dentario. No entanto, dependendo dos eventos estudados, e meritorio entender seu comportamento, particularmente quando a concentracao de soro fetal bovino (FBS) varia. O objetivo deste trabalho e avaliar o impacto da concentracao de SFB no crescimento, proliferacao e sobrevivencia de celulas epiteliais dentarias. Celulas epiteliais dentarias foram cultivadas em DMEM / F12, na presenca e ausencia de SFB. Observacoes morfologicas e imunohistoquimicas de actina, vimentina e fibronectina foram realizadas. Os resultados permitiram confirmar que a ausencia de SFB afetou negativamente a proliferacao de celulas epiteliais dentarias, mas manteve uma otima expressao de actina e vimentina. Uma alteracao na expressao de fibronectina nas celulas tratadas na ausencia de SFB foi identificada. Em conclusao, a falta de SFB diminuiu drasticamente a sobrevivencia, proliferacao e expressao de fibronectina em celulas epiteliais dentarias de ratos

Introduction. Gingivalfibroblasts(GF)arecells of gingivalconnective tissuethat havetakenpromising relevance in recent years due to their probable use incelltherapy,giventheir multipotencial and self-renewal capabilities. Objective.To knowandto describetheimpactof theabsenceof Fetal Bovine Serum(FBS supplementation on the survival of gingival fibroblasts in cultures. Materialsandmethods.Gingivalfibroblasts were isolated fromgingivaltissue of healthypatients andculturedinDMEM(Dulbecco’sModifiedof Eagle Medium)culture mediain absenceand supplemented with 0.2%FBS at 37 ° C in a humid atmosphere with 5% CO2.A morphological evaluation,survivaland proliferation ofGFwere carried out, aswellas theidentificationby the immunofluorescence technique of cellular cytoskeleton markerssuch asactin and mitochondria.Results. The GFgrownin theabsenceand with supplementation of 0.2%FBSshowed a fusiform shape, with oval nuclei and numerous cytoplasmic extensions during the culture time.A slight increase in theproliferationofGFwasobservedin thosecellsincontactwiththe DMEMmedium +0.2%FBScompared to the medium where the supplementation was absent.Immunostainingof actin and mitochondria showed that theabsenceandsupplementationto 0.2% ofFBSdid not affect its location in theevaluated. Conclusion.Gingival fibroblastssurviveand proliferate in theabsenceofFBS, preserving their cellular morphological characteristics. Introducción. Los fibroblastos gingivales (FGs) son células del tejido conjuntivo gingival que han tomado en los últimos años una relevancia promisoria por su probable utilización en la terapia celular, dadas sus capacidades de multipotencialidad y de autorrenovación. Objetivo. Conocer y describir el impacto de la ausencia en la suplementación de Suero Fetal Bovino (SFB) en la supervivencia de fibroblastos gingivales en cultivos. Materiales y métodos. Fibroblastos gingivales fueron aislados de tejido gingival de pacientes sanos y cultivados en medios de cultivos DMEM (Dulbecco’s Modified of Eagle Medium) en ausencia y suplementados con 0.2% de SFB a 37°C en una atmósfera húmeda con 5% de CO2. Se llevó a cabo una evaluación morfológica, de supervivencia y proliferación de los FGs, así como la identificación mediante la técnica de inmunofluorescencia de marcadores del citoesqueleto celular como la actina y mitocondrias. Resultados. Los FGs cultivados en ausencia y con suplementación de 0.2% de SFB evidenciaron una forma fusiforme, con núcleos ovalados y numerosas prolongaciones citoplasmáticas durante el tiempo de cultivo. Un leve aumento en la proliferación de FGs fue observado en aquellas células en contacto con el medio DMEM+0.2% de SFB comparadas con el medio donde estuvo ausente la suplementación. El inmunomarcaje de la actina y las mitocondrias dejó en evidencia que la ausencia y suplementación a 0.2% de SFB no afectó su localización en los FGs evaluados. Conclusión. Los fibroblastos gingivales sobreviven y proliferan en ausencia de SFB, conservando sus características morfológicas celulares.

Objective. Describe the influence of Fetal bovine serum (FBS) on the survival, growth and expression of cellular organelles in rat dental epithelial cells. Material and methods. Cell cultures of rat dental epithelial cells were carried out at 37°C in a humid atmosphere, in the absence and at a concentration of 10% FBS. Morphological evaluation was performed during the proliferation and confluence of cell in culture. Double immunofluorescence labels were made using anti-Actin, anti-TOMM20A, and anti-LAMP1 antibodies. Results. Circular or ovoid dental epithelial cells with bulky nuclei were evidenced during proliferation and confluences in a similar manner in culturing cells in the presence and absence of FBS. The lack of FBS negatively impacts the proliferation of epithelial cells. No alterations were observed in the localization of the anti-actin, anti-TOMM20 and anti-LAMP1 immunomarkers in both conditions of experimental cultures. Conclusions. FBS suppression in rat dental epithelial cells decreased survival, proliferation and suggests not having an impact on the organelles evaluated., Objetivo. Describir la influencia del Suero Fetal Bovino (SFB) en la supervivencia, crecimiento y expresión de organelas celulares en las células epiteliales dentales de rata. Materiales y métodos. Cultivos de células epiteliales dentales de rata fueron llevados a cabo a 37°C en una atmosfera húmeda, en ausencia y a una concentración de 10% de SFB. Una evaluación morfológica fue realizada durante la proliferación y confluencia de las células en cultivo. Dobles marcajes por inmunofluorencia fueron efectuados haciendo uso de anticuerpos anti-actina, anti-TOMM20 y anti-LAMP1. Resultados. Se evidenciaron células epiteliales dentales circulares u ovoides con núcleos voluminosos durante la proliferación y confluencias de manera similar en las células cultivas en presencia y ausencia de SFB. La carencia de SFB impactó negativamente la proliferación de las células epiteliales. No fueron observadas alteraciones en la localización de los inmunomarcajes anti-actina, anti-TOMM20 y anti-LAMP1 en las dos condiciones de cultivos experimentales. Conclusiones. La supresión del SFB en el cultivo de células epiteliales dentales de rata disminuyó la supervivencia, proliferación y sugiere no tener un impacto sobre las organelas evaluadas.

RESUMEN Introducción: Los fibroblastos gingivales (FGs) son células responsables del mantenimiento de la homeostasis, cicatrización y tolerancia inmunitaria del tejido conjuntivo gingival. Por sus características fisiológicas, los FGs pueden ser un candidato en la terapia celular. Sin embargo, la conservación de su fenotipo en cultivo celulares requiere de condiciones estrictamente definidas. Una de ellas es la concentración de Suero Fetal Bovino (SFB). Nuestro objetivo es evaluar el efecto concentración-dependiente de la suplementación de SFB en el medio de cultivo sobre el comportamiento, crecimiento, proliferación y supervivencia de los fibroblastos gingivales humanos. Materiales y métodos: FGs fueron cultivados con DMEM (Dulbecco's modification of Eagle médium) y concentraciones de 0%, 0.5% y 10% de SFB durante tres semanas. Análisis morfológico, de proliferación e inmunohistoquímicos fueron llevados a cabo en el presente trabajo. Se llevó a cabo un análisis factorial de varianza (ANOVA) por medio el software R Project. Los resultados fueron considerados significativos con un valor de p

RESUMEN Introducción: Los fibroblastos gingivales (FGs) son células responsables del mantenimiento de la homeostasis, cicatrización y tolerancia inmunitaria del tejido conjuntivo gingival. Por sus características fisiológicas, los FGs pueden ser un candidato en la terapia celular. Sin embargo, la conservación de su fenotipo en cultivo celulares requiere de condiciones estrictamente definidas. Una de ellas es la concentración de Suero Fetal Bovino (SFB). Nuestro objetivo es evaluar el efecto concentración-dependiente de la suplementación de SFB en el medio de cultivo sobre el comportamiento, crecimiento, proliferación y supervivencia de los fibroblastos gingivales humanos. Materiales y métodos: FGs fueron cultivados con DMEM (Dulbecco's modification of Eagle médium) y concentraciones de 0%, 0.5% y 10% de SFB durante tres semanas. Análisis morfológico, de proliferación e inmunohistoquímicos fueron llevados a cabo en el presente trabajo. Se llevó a cabo un análisis factorial de varianza (ANOVA) por medio el software R Project. Los resultados fueron considerados significativos con un valor de p

Fil: Micheloud, Gabriela Analía. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. Anticarsia gemmatalis Hübner (Lepidoptera: Noctuidae), una de las principales plagas de los cultivos de soja, puede ser controlada mediante la utilización de insecticidas de origen biológico. Entre ellos, se encuentran el virus de la poliedrosis nuclear múltiple de Anticarsia gemmatalis (AgMNPV) y las entomotoxinas producidas por la bacteria Bacillus thuringiensis var. kurstaki (Btk). A pesar de sus innegables ventajas ambientales, la aceptación de estos plaguicidas, y la expansión de su aplicación, están condicionadas por sus propiedades insecticidas menos notables que las de los pesticidas químicos y, por otro lado, por una relación actividad/precio menos ventajosa. Con el objetivo de contribuir a superar estas limitaciones, se propuso estudiar la factibilidad de desarrollar un proceso combinado para obtener un co-producto constituido por ambos bio-insecticidas. Con tal fin se desarrolló una estrategia experimental en cuatro etapas: establecimiento del sistema de cultivo de la línea celular saUFL-AG-286 en frascos con agitación orbital; estudio de la influencia de las condiciones de infección, modelado y optimización de la producción del insecticida viral; escalado de la producción viral en reactores de diseño estándar; y estudio de la factibilidad de obtención del co-producto viral bacteriano. En nuestro conocimiento, esta es la primera descripción de un proceso que permite producir dos insecticidas biológicos en una misma fermentación, y es también la primera descripción de un proceso que combina, en un mismo reactor, la multiplicación de un virus y la propagación de una bacteria. Estos resultados pueden constituir un aporte al desarrollo de procesos fermentativos económicamente factibles de producción de agentes bio-insecticidas. Anticarsia gemmatalis Hübner (Lepidoptera: Noctuidae), a major pest of soybean crops, can be controlled by using insecticides of biological origin. Two of the bio-insecticides used for this purpose are the Anticarsia gemmatalis multicapsid nucleopolyhedrovirus (AgMNPV) and the entomotoxins produced by the bacterium Bacillus thuringiensis var. kurstaki (Btk). Despite its undeniable environmental advantages, acceptance of these pesticides, and the expansion of its application are conditioned by two main factors: its insecticidal properties are less remarkable than those that characterize the chemical pesticides and, moreover, exhibit a less advantageous activity/price relationship. In order to help overcome these limitations, it was proposed to study the feasibility of developing a combined process to obtain a co-product consisting of two bio-insecticides, AgMNPV and Btk. To this end, a four steps experimental strategy was developed: establishment of a suspension culture system for the cell line saUFL-AG-286 in flasks with orbital shaking; study of the influence of the conditions of infection, modelling and optimization of AgMNPV production in suspension cultures of saUFL-AG-286 cells; scaling-up of viral production in standard bio-reactors; and evaluation of the feasibility to obtain the viral-bacterial co-product. To our knowledge, this is the first description of a process that can produce two biological insecticides in the same fermentation, and is also the first description of a process that combines, in the same reactor, the multiplication of a virus in cultures of a eukaryotic cell line and the propagation of a bacterium. These results can make a contribution to the development of economically feasible processes for production of bioinsecticide agents. Universidad Nacional del Litoral Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas