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Gynerium sagittatum is a graminaceous plant widely used in the Caribbean coast of Colombia as a natural fiber source for the elaboration of handicrafts, particularly by the Zenú community. In the present investigation, the effect of different concentrations of cellulase and macerozyme enzymes at different incubation times and their interaction in the isolation of protoplasts was evaluated. Protoplasts were obtained from leaf mesophyll of G. sagittatum vitroplants exposed to enzymatic combinations of cellulase (1.5 and 2.0%), with macerozyme (0.3, 0.6 and 0.9%), for 3, 6 and 9 hours of incubation, for a total of 18 treatments with 5 replicates each. The highest numbers of isolated protoplasts corresponded to T18 (2.0% cellulase, 0.9% macerozyme), T12 (2.0% cellulase, 0.3% macerozyme), T3 (1.5% cellulase, 0.3% macerozyme) and T6 (1.5% cellulase, 0.6% macerozyme); at 9 hours incubation. The protoplast number for these treatments were: 88.625, 83.000, 75.000 and 53.375 protoplasts/mL respectively. Incubation time was significant in the isolation of protoplasts (p<0.05). The predictions between the factors showed that with an interaction of 2.0% cellulase and 0.9% macerozyme it is possible to obtain 44.302 protoplasts/mL, likewise, the incubation time-cellulase and incubation time-macerozyme interactions showed that it is possible to obtain 72.073 and 71.212 protoplasts/mL with 2.0% cellulase and 0.9% macerozyme for 9 hours of incubation respectively. The results indicate that the use of these enzymes and time, allows the isolation of of protoplasts from G. sagittatum in vitro plants., Gynerium sagittatum es una gramínea ampliamente utilizada en la costa Caribe colombiana como fuente de fibra natural para la elaboración de artesanías, particularmente por la comunidad Zenú. En la presente investigación se evaluó el efecto de diferentes concentraciones de enzimas: celulasa y macerozima a diferentes tiempos de incubación y sus interacciones en el aislamiento de protoplastos. Los protoplastos se obtuvieron del mesófilo foliar de vitroplantas de G. sagittatum expuesto a combinaciones enzimáticas de celulasa (1.5 y 2.0%), con macerozima (0.3, 0.6 y 0.9%), durante 3, 6 y 9 horas de incubación, para un total de 18 tratamientos con 5 réplicas cada uno. Los mayores números de protoplastos aislados correspondieron a T18 (2.0% celulasa, 0.9% macerozima), T12 (2.0% de celulasa, 0.3% macerozima), T3 (1.5% de celulasa, 0.3% de macerozima) y T6 (1.5% de celulasa, 0.6% de macerozima) por 9 horas de incubación cada uno, con valores de 88.625, 83.000, 75.000 y 53.375 protoplastos/mL respectivamente. El tiempo de incubación fue significativo en el aislamiento de los protoplastos (p<0.05). Las predicciones entre factores mostraron que una interacción de 2.0% de celulasa y 0.9% de macerozima permite obtener 44.302 protoplastos/mL, mientras que las interaciciones tiempo de incubación-celulasa y tiempo de incubación-macerozima mostraron que es posible obtener 72.073 y 71.212 protoplastos/mL con 2.0% de celulasa y 0.9% macerozima por 9 horas de incubación cada una respectivamente. Los resultados indican que la aplicación de estas enzimas permite obtener cantidades considerables de protoplastos de G. sagittatum a partir de explantes cultivados in vitro.

Gynerium sagittatum is a graminaceous plant widely used in the Caribbean coast of Colombia as a natural fiber source for the elaboration of handicrafts, particularly by the Zenú community. In the present investigation, the effect of different concentrations of cellulase and macerozyme enzymes at different incubation times and their interaction in the isolation of protoplasts was evaluated. Protoplasts were obtained from leaf mesophyll of G. sagittatum vitroplants exposed to enzymatic combinations of cellulase (1.5 and 2.0%), with macerozyme (0.3, 0.6 and 0.9%), for 3, 6 and 9 hours of incubation, for a total of 18 treatments with 5 replicates each. The highest numbers of isolated protoplasts corresponded to T18 (2.0% cellulase, 0.9% macerozyme), T12 (2.0% cellulase, 0.3% macerozyme), T3 (1.5% cellulase, 0.3% macerozyme) and T6 (1.5% cellulase, 0.6% macerozyme); at 9 hours incubation. The protoplast number for these treatments were: 88.625, 83.000, 75.000 and 53.375 protoplasts/mL respectively. Incubation time was significant in the isolation of protoplasts (p<0.05). The predictions between the factors showed that with an interaction of 2.0% cellulase and 0.9% macerozyme it is possible to obtain 44.302 protoplasts/mL, likewise, the incubation time-cellulase and incubation time-macerozyme interactions showed that it is possible to obtain 72.073 and 71.212 protoplasts/mL with 2.0% cellulase and 0.9% macerozyme for 9 hours of incubation respectively. The results indicate that the use of these enzymes and time, allows the isolation of of protoplasts from G. sagittatum in vitro plants., Gynerium sagittatum es una gramínea ampliamente utilizada en la costa Caribe colombiana como fuente de fibra natural para la elaboración de artesanías, particularmente por la comunidad Zenú. En la presente investigación se evaluó el efecto de diferentes concentraciones de enzimas: celulasa y macerozima a diferentes tiempos de incubación y sus interacciones en el aislamiento de protoplastos. Los protoplastos se obtuvieron del mesófilo foliar de vitroplantas de G. sagittatum expuesto a combinaciones enzimáticas de celulasa (1.5 y 2.0%), con macerozima (0.3, 0.6 y 0.9%), durante 3, 6 y 9 horas de incubación, para un total de 18 tratamientos con 5 réplicas cada uno. Los mayores números de protoplastos aislados correspondieron a T18 (2.0% celulasa, 0.9% macerozima), T12 (2.0% de celulasa, 0.3% macerozima), T3 (1.5% de celulasa, 0.3% de macerozima) y T6 (1.5% de celulasa, 0.6% de macerozima) por 9 horas de incubación cada uno, con valores de 88.625, 83.000, 75.000 y 53.375 protoplastos/mL respectivamente. El tiempo de incubación fue significativo en el aislamiento de los protoplastos (p<0.05). Las predicciones entre factores mostraron que una interacción de 2.0% de celulasa y 0.9% de macerozima permite obtener 44.302 protoplastos/mL, mientras que las interaciciones tiempo de incubación-celulasa y tiempo de incubación-macerozima mostraron que es posible obtener 72.073 y 71.212 protoplastos/mL con 2.0% de celulasa y 0.9% macerozima por 9 horas de incubación cada una respectivamente. Los resultados indican que la aplicación de estas enzimas permite obtener cantidades considerables de protoplastos de G. sagittatum a partir de explantes cultivados in vitro.

[ES] La revalorización de residuos es un tema que va ganando importancia cada día, ya que la concienciación sobre el medio ambiente y las leyes más restrictivas respecto a la gestión de residuos van en aumento. Por ello, en este trabajo se intenta realizar la revalorización de tres residuos en concreto, el alga Poseidonia, típica de las playas del mediterráneo, la paja de arroz, un residuo generado en la recolección del arroz y algodón reciclado. La revalorización se trata de la conversión de estos residuos en nanocelulosa, la cual también está tomando importancia debido a sus propiedades mecánicas, su biocompatibilidad y sostenibilidad, a través de un método más sostenible, el tratamiento enzimático utilizando celulasa. Además, ese tratamiento se realiza con celulasa suelta e inmovilizada en nanopartículas de hierro, lo cual permite su recuperación y reutilización, mejorando la eficiencia del proceso y reduciendo el alto coste de la enzima. Previamente al tratamiento enzimático se debe realizar un pretratamiento con NaOH y NaClO2 al alga y a la paja de arroz para mejorar la eficacia de la hidrólisis enzimática, y al algodón únicamente se le realiza un descrudado. Para la caracterización de los materiales resultantes del tratamiento, se realizaron análisis de DLS, FTIR y FESEM. Los ensayos se realizaron sobre los materiales, tras el pretratamiento para determinar si el pretratamiento había sido eficaz, a los materiales tratados con dos concentraciones diferentes de enzima, con el objetivo de determinar si se había obtenido nanocelulosa y de que tamaño, y a las fases de la inmovilización con el fin de determinar si se había realizado correctamente. Los resultados obtenidos del FTIR y el FESEM permiten concluir que los pretratamientos cumplían su función, limpiando y disgregando los materiales, mejorando así la eficacia del tratamiento enzimático. La obtención de la nanocelulosa se consiguió cuando la cantidad de enzima era mayor. Es destacable que se obtuvieron nanop, [EN] The reconversion of waste is an issue that is gaining importance every day, since awareness about the environment and the most restrictive laws regarding waste management are increasing. Therefore, this work attempts to revalue three specific wastes, Poseidonia algae, typical of Mediterranean beaches, rice straw, a waste generated while rice harvesting, and recycled cotton. Specifically, these residues are going to be converted into nanocellulose, which is also gaining importance due to its mechanical properties, biocompatibility, and sustainability, through a more sustainable method, an enzymatic treatment using cellulase. In addition, this treatment is carried out with cellulase alone and immobilized in iron nanoparticles, which allows its recovery and reuse, improving the efficiency of the process and reducing the high cost of the enzyme. Prior to the enzymatic treatment, a pretreatment with NaOH and NaClO2 should be carried out on the algae and rice straw to improve the effectiveness of the enzymatic hydrolysis, and cotton is only going to be cleaned. For the treatment resulting materials characterization DLS, FTIR and FESEM analyses were performed. The essays were performed on the pre-treated materials to determine whether the pretreatment had been effective, on the materials treated with two different concentrations of enzyme, with the aim of determining whether nanocellulose had been obtained and its size, and on the immobilization phases in order to determine if it had been carried out correctly. The results obtained from the FTIR and the FESEM allow to conclude that pretreatments fulfilled their function, cleaning and disintegrating the materials, thus improving the efficiency of the enzymatic treatment. The nanocellulose obtention was achieved when the amount of enzyme was greater. It should be noted that cellulose nanoparticles were obtained when the enzyme was alone and sugar films when the enzyme was immobilized and in high concentrations, which me

[ES] La revalorización de residuos es un tema que va ganando importancia cada día, ya que la concienciación sobre el medio ambiente y las leyes más restrictivas respecto a la gestión de residuos van en aumento. Por ello, en este trabajo se intenta realizar la revalorización de tres residuos en concreto, el alga Poseidonia, típica de las playas del mediterráneo, la paja de arroz, un residuo generado en la recolección del arroz y algodón reciclado. La revalorización se trata de la conversión de estos residuos en nanocelulosa, la cual también está tomando importancia debido a sus propiedades mecánicas, su biocompatibilidad y sostenibilidad, a través de un método más sostenible, el tratamiento enzimático utilizando celulasa. Además, ese tratamiento se realiza con celulasa suelta e inmovilizada en nanopartículas de hierro, lo cual permite su recuperación y reutilización, mejorando la eficiencia del proceso y reduciendo el alto coste de la enzima. Previamente al tratamiento enzimático se debe realizar un pretratamiento con NaOH y NaClO2 al alga y a la paja de arroz para mejorar la eficacia de la hidrólisis enzimática, y al algodón únicamente se le realiza un descrudado. Para la caracterización de los materiales resultantes del tratamiento, se realizaron análisis de DLS, FTIR y FESEM. Los ensayos se realizaron sobre los materiales, tras el pretratamiento para determinar si el pretratamiento había sido eficaz, a los materiales tratados con dos concentraciones diferentes de enzima, con el objetivo de determinar si se había obtenido nanocelulosa y de que tamaño, y a las fases de la inmovilización con el fin de determinar si se había realizado correctamente. Los resultados obtenidos del FTIR y el FESEM permiten concluir que los pretratamientos cumplían su función, limpiando y disgregando los materiales, mejorando así la eficacia del tratamiento enzimático. La obtención de la nanocelulosa se consiguió cuando la cantidad de enzima era mayor. Es destacable que se obtuvieron nanop, [EN] The reconversion of waste is an issue that is gaining importance every day, since awareness about the environment and the most restrictive laws regarding waste management are increasing. Therefore, this work attempts to revalue three specific wastes, Poseidonia algae, typical of Mediterranean beaches, rice straw, a waste generated while rice harvesting, and recycled cotton. Specifically, these residues are going to be converted into nanocellulose, which is also gaining importance due to its mechanical properties, biocompatibility, and sustainability, through a more sustainable method, an enzymatic treatment using cellulase. In addition, this treatment is carried out with cellulase alone and immobilized in iron nanoparticles, which allows its recovery and reuse, improving the efficiency of the process and reducing the high cost of the enzyme. Prior to the enzymatic treatment, a pretreatment with NaOH and NaClO2 should be carried out on the algae and rice straw to improve the effectiveness of the enzymatic hydrolysis, and cotton is only going to be cleaned. For the treatment resulting materials characterization DLS, FTIR and FESEM analyses were performed. The essays were performed on the pre-treated materials to determine whether the pretreatment had been effective, on the materials treated with two different concentrations of enzyme, with the aim of determining whether nanocellulose had been obtained and its size, and on the immobilization phases in order to determine if it had been carried out correctly. The results obtained from the FTIR and the FESEM allow to conclude that pretreatments fulfilled their function, cleaning and disintegrating the materials, thus improving the efficiency of the enzymatic treatment. The nanocellulose obtention was achieved when the amount of enzyme was greater. It should be noted that cellulose nanoparticles were obtained when the enzyme was alone and sugar films when the enzyme was immobilized and in high concentrations, which me

Phytobezoars are a vegetable material collection made up of cellulose and hemicellulose, retained in the gastrointestinal tract. We report the case of a patient with intestinal obstruction caused by phytobezoar and concomitant infection due to COVID-19, in which the resolution of the obstructive condition was achieved with conservative treatement by administering oral cellulase without presenting any adverse effects. In selected cases and without suspicion of intestinal distress, cellulase treatment of intestinal occlusion caused by a phytobezoar could be an alternative to classical surgical treatment., Los fitobezoares son una colección de material vegetal formados por celulosa y hemicelulosa, retenido en el tracto gastrointestinal. Presentamos el caso de un paciente con obstrucción intestinal por fitobezoar e infección concomitante por COVID-19, en el cual se consiguió la resolución del cuadro obstructivo con manejo conservador mediante la administración de celulasa vía oral sin presentar efectos adversos. En casos seleccionados y sin sospecha de sufrimiento intestinal, el tratamiento con celulosa de la oclusión intestinal por un fitobezoar podría ser una alternativa al tratamiento clásico quirúrgico.

[Resumen]: Las enzimas son proteínas capaces de transformar un sustrato específico en productos, acelerando la reacción química. Por ello despiertan gran interés para la industria, y en la actualidad se utilizan en multitud de procesos. Los microorganismos constituyen la mejor fuente para su obtención, y en la búsqueda de nuevas enzimas microbianas podemos hacer uso de técnicas de metagenómica que nos permitan identificar las secuencias que las codifiquen. En el presente Trabajo de Fin de Máster se pretende expresar una celulasa (CelB4) y la caracterización de una lipasa (LipD11) obtenidas de metagenotecas de las aguas termales de Rio Caldo, Lobios, provincia de Ourense. Por un lado, para la enzima CelB4 por el momento no se ha conseguido ningún clon de levadura que sea capaz de expresar la enzima. Por su parte, LipD11 ha demostrado ser una lipasa termoestable, con preferencia por ácidos grasos de 8 carbonos, y que se puede considerar apta para su uso en la formulación de detergentes teniendo en cuenta como su actividad se ve favorecida por la presencia de algunos agentes surfactantes y detergentes comerciales., [Resumo]: As enzimas son proteínas capaces de transformar un substrato específico en produtos, acelerando a reacción química. Por iso despertan grande interese para a industria, e na actualidade utilízanse en multitude de procesos. Os microorganismos constitúen a mellor fonte para a súa obtención, e na procura de novas enzimas microbianas podemos facer uso das técnicas de metaxenómica que permítannos identifica-las secuencias que as codifiquen. No presente Traballo de Fin de Máster preténdese expresar unha celulasa (CelB4) e a caracterización dunha lipasa (LipD11) obtidas de metaxenotecas das augas termais de Río Caldo, Lobios, provincia de Ourense. Por un lado, para a enzima CelB4 polo momento non se conseguiu ningún clon de lévedo que sexa capaz de expresa-la enzima. Pola súa parte, LipD11 demostrou ser unha lipasa termostabel, con preferencia polos ácidos graxos de 8 carbonos, e que pódese considerar axeitada para o seu uso na formulación de deterxentes tendo en conta como a súa actividade vese favorecida pola presenza dalgúns axentes surfactantes e deterxentes comerciais., [Abstract]: Enzymes are proteins which are capable of transforming a specific substrate into products, accelerating the chemical reaction. That is the reason why they awake such interest for industry, and nowadays enzymes are used in multiple industrial processes. Microorganisms constitute the best source for enzyme acquisition, and in the search for new microbial enzymes we can make use of metagenomic techniques which allow us to identify the sequences that codify them. In the present Master’s Dissertation, our goals are the expression of a celulase (CelB4) and the characterization of a lipase (LipD11) which were both obtained from Rio Caldo, Lobios, province of Ourense using metagenomics. On the one hand, we could not manage yet to obtain a yeast clone capable of expressing the CelB4 enzyme. On the other hand, LipD11 has proven to be thermostable, showing preference for 8 carbon fatty acids, and it can be considered suitable for the formulation of detergents, taking into account how the presence of some surfactant agents and commercial detergents promote its activity.

En el presente trabajo de investigación se utilizó Trichoderma sp. el cual fue inducido en un medio sintético y luego adaptado en agar CMC para utilizarlo como inoculo en la fermentación en estado sólido. Para obtener la enzima celulasa, se realizó una fermentación en estado sólido con el inoculo de Trichoderma sp. obtenido y orujo de uva como sustrato, probando tres concentraciones de CMC (0.1%, 0.3% y 0.5%) durante 7 días de incubación. Se realizó la extracción de las enzimas utilizando dos tipos de disolventes (Tween 80 al 0.1% y NaCl al 0.9%); obteniéndose como resultados, que la máxima producción de enzima fue usando CMC al 0.5% en el orujo de uva con Trichoderma sp. durante la fermentación en estado sólido y Tween 80 al 0.1% como disolvente en la extracción de la enzima. Se evaluó la actividad de la enzima a distintos pH (4.0, 4.5, 5.0, 5.3, 5.5 y 6.0) y a distintas temperaturas (37°C, 50°C, y 60 °C), obteniéndose que los mejores resultados se alcanzaron a un pH 5 y una temperatura de 50°C. Con la finalidad de aplicar la enzima celulasa obtenida para la producción de bioetanol, se realizó un pretratamiento de los residuos de la hoja de mazorca de maíz con NaOH al 1% para modificar la estructura química de la lignina, para posteriormente realizar la hidrolisis enzimática durante 48 horas. El producto de la hidrolisis compuesto por solidos solubles fue concentrado a 6 °Brix, para su posterior fermentación alcohólica con Saccharomyces cerevisiae durante 5 días, obteniendo como rendimiento de etanol 12.81 mL por 100 g. de residuo seco. iii Por medio de esta investigación se puede apreciar que existe un potencial uso de los residuos lignocelulósicos como sustratos para la producción de enzima celulasa y como fuente de biomasa para la producción de bioetanol. PALABRAS CLAVE: Celulasa, bioetanol, residuos lignocelulósicos.

En el presente trabajo de investigación se utilizó Trichoderma sp. el cual fue inducido en un medio sintético y luego adaptado en agar CMC para utilizarlo como inoculo en la fermentación en estado sólido. Para obtener la enzima celulasa, se realizó una fermentación en estado sólido con el inoculo de Trichoderma sp. obtenido y orujo de uva como sustrato, probando tres concentraciones de CMC (0.1%, 0.3% y 0.5%) durante 7 días de incubación. Se realizó la extracción de las enzimas utilizando dos tipos de disolventes (Tween 80 al 0.1% y NaCl al 0.9%); obteniéndose como resultados, que la máxima producción de enzima fue usando CMC al 0.5% en el orujo de uva con Trichoderma sp. durante la fermentación en estado sólido y Tween 80 al 0.1% como disolvente en la extracción de la enzima. Se evaluó la actividad de la enzima a distintos pH (4.0, 4.5, 5.0, 5.3, 5.5 y 6.0) y a distintas temperaturas (37°C, 50°C, y 60 °C), obteniéndose que los mejores resultados se alcanzaron a un pH 5 y una temperatura de 50°C. Con la finalidad de aplicar la enzima celulasa obtenida para la producción de bioetanol, se realizó un pretratamiento de los residuos de la hoja de mazorca de maíz con NaOH al 1% para modificar la estructura química de la lignina, para posteriormente realizar la hidrolisis enzimática durante 48 horas. El producto de la hidrolisis compuesto por solidos solubles fue concentrado a 6 °Brix, para su posterior fermentación alcohólica con Saccharomyces cerevisiae durante 5 días, obteniendo como rendimiento de etanol 12.81 mL por 100 g. de residuo seco. iii Por medio de esta investigación se puede apreciar que existe un potencial uso de los residuos lignocelulósicos como sustratos para la producción de enzima celulasa y como fuente de biomasa para la producción de bioetanol. PALABRAS CLAVE: Celulasa, bioetanol, residuos lignocelulósicos.

En el presente trabajo de investigación se utilizó Trichoderma sp. el cual fue inducido en un medio sintético y luego adaptado en agar CMC para utilizarlo como inoculo en la fermentación en estado sólido. Para obtener la enzima celulasa, se realizó una fermentación en estado sólido con el inoculo de Trichoderma sp. obtenido y orujo de uva como sustrato, probando tres concentraciones de CMC (0.1%, 0.3% y 0.5%) durante 7 días de incubación. Se realizó la extracción de las enzimas utilizando dos tipos de disolventes (Tween 80 al 0.1% y NaCl al 0.9%); obteniéndose como resultados, que la máxima producción de enzima fue usando CMC al 0.5% en el orujo de uva con Trichoderma sp. durante la fermentación en estado sólido y Tween 80 al 0.1% como disolvente en la extracción de la enzima. Se evaluó la actividad de la enzima a distintos pH (4.0, 4.5, 5.0, 5.3, 5.5 y 6.0) y a distintas temperaturas (37°C, 50°C, y 60 °C), obteniéndose que los mejores resultados se alcanzaron a un pH 5 y una temperatura de 50°C. Con la finalidad de aplicar la enzima celulasa obtenida para la producción de bioetanol, se realizó un pretratamiento de los residuos de la hoja de mazorca de maíz con NaOH al 1% para modificar la estructura química de la lignina, para posteriormente realizar la hidrolisis enzimática durante 48 horas. El producto de la hidrolisis compuesto por solidos solubles fue concentrado a 6 °Brix, para su posterior fermentación alcohólica con Saccharomyces cerevisiae durante 5 días, obteniendo como rendimiento de etanol 12.81 mL por 100 g. de residuo seco. iii Por medio de esta investigación se puede apreciar que existe un potencial uso de los residuos lignocelulósicos como sustratos para la producción de enzima celulasa y como fuente de biomasa para la producción de bioetanol. PALABRAS CLAVE: Celulasa, bioetanol, residuos lignocelulósicos.

[Resumen]: La pared celular vegetal es una estructura compleja que participa en muchas funciones esenciales para las plantas. Una de ellas es el control del crecimiento celular por parte de la pared primaria. Las enzimas endo-1,4-β-glucanasas actúan sobre diversos polisacáridos de pared y existen evidencias de que podrían ser importantes para el crecimiento vegetal. En este estudio se caracterizaron siete endoglucanasas de Arabidopsis thaliana (GH9B1, GH9B2, GH9B7, GH9B8, GH9B13, GH9C2 y GH9C3), escogidas por presentar una alta coexpresión con celulasas de la pared primaria. La expresión del gen reportero GUS unido a sus promotores se asoció a tejidos en desarrollo y zonas de abscisión de órganos. La sobreexpresión de GH9B1 aceleró la floración. Para la sobreexpresión de GH9C2 no se detectó un fenotipo, y lo mismo sucedió con el mutante triple gh9b1 gh9b2 gh9b13. Otro mutante triple, gh9b7 gh9b8 gh9c2, produjo plantas un poco más pequeñas, fenotipo que se exageró en el mutante cuádruple gh9b7 gh9b8 gh9c2 gh9c3. Estos resultados indican que algunas de las endoglucanasas estudiadas podrían tener un papel importante en el desarrollo y que es posible que exista redundancia genética entre GH9C3 y una o varias de las otras enzimas analizadas en el mutante cuádruple., [Resumo]: A parede celular vexetal é unha estrutura complexa que participa en moitas funcións esenciais para as plantas. Unha delas é o control do crecemento celular pola parede primaria. As enzimas endo-1,4-beta-glucanasas actúan sobre diversos polisacáridos de parede, e existen evidencias de que poderían ser importantes para o crecemento vexetal. Neste estudo caracterizáronse sete endoglucanasas de Arabidopsis thaliana (GH9B1, GH9B2, GH9B7, GH9B8, GH9B13, GH9C2 y GH9C3), escollidas por presentar unha alta coexpresión con celulosa sintasas da parede primaria. A expresión do xene reporteiro GUS unido aos seus promotores asociouse con tecidos en desenvolvemento e zonas de abscisión. A sobreexpresión de GH9B1 acelerou a floración. Para a sobreexpresión de GH9C2 non se detectou ningún fenotipo, de igual forma que no mutante triplo gh9b1 gh9b2 gh9b13. Outro mutante triplo, gh9b7 gh9b8 gh9c2, produzo plantas un pouco máis pequenas, fenotipo que se esaxerou no mutante cuádruplo gh9b7 gh9b8 gh9c2 gh9c3. Estes resultados indican que varias das endoglucanasas estudiadas poderían xogar roles importantes no desenvolvemento de Arabidopsis, e que é probable que exista redundancia xénica entre GH9C3 e algunha ou varias das outras enzimas analizadas no mutante cuádruplo., [Abstract]: The plant cell wall is a very complex structure that takes part in many essential functions for plants. One of them is the regulation of primary growth. The endo-1,4-β-glucanases have activity against a variety of wall polysaccharides and there is evidence of their importance for plant growth. In this study, seven endoglucanases from Arabidopsis thaliana (GH9B1, GH9B2, GH9B7, GH9B8, GH9B13, GH9C2 y GH9C3), chosen because of their high levels of co-expression with cellulose synthases of the primary wall, were characterized. Expression of the reporter gene GUS coupled to their promoters was associated with young, developing tissues and with abscission zones. GH9B1 overexpression accelerated flowering. No phenotype was observed for GH9C2 overexpression nor in the triple mutant gh9b1 gh9b2 gh9b13. Another triple mutant, gh9b7 gh9b8 gh9c2, produced slightly smaller plants, and this phenotype was augmented in the quadruple mutant gh9b7 gh9b8 gh9c2 gh9c3. These results show that some of the studied endoglucanases may play an important role in the development of Arabidopsis, and it is likely that genetic redundancy exists between GH9C3 and one or several of the other enzymes analyzed in the quadruple mutant.

The study was carried out to determine the additive effect of two enzyme complexes (phytase and cellulase) in broiler feed and their influence on weight gain at 45 days. All parameters were used for raising and fattening chickens, being carried out with 400 mixed broiler chickens one day old. The most relevant results were that when supplying Fitasa in the initial stage at a rate of 200gr / Ton, the animals reached a greater weight in the study of the T2 treatment with (719.8 gr), in the growth stage the use of phytase a 200gr / Ton food ratio showed better responses in weight gain (2410gr). Using phytase at a rate of 200gr / Tm of food, the nutritional conversion factor showed only numerical differences, as regards the application of Phytase together with Cellulase, there are no significant differences in the dietary diet., El estudio se realizó para determinar el efecto aditivo de dos complejos enzimáticos (fitasa y celulasa) en la alimentación de pollos broiler y su influencia en la ganancia de peso a los 45 días. Se utilizaron todos los parámetros para la crianza y engorde de pollos, llevándose a cabo con 400 pollos broiler mixtos de un día de nacidos. Los resultados más relevantes fueron que al suministrar Fitasa en la etapa inicial a razón de 200gr/Ton, alcanzaron un mayor peso los animales en el estudio del tratamiento T2 con (719,8 gr), en la etapa de crecimiento la utilización de fitasa a razón de 200gr/Ton de alimento arrojó mejores respuestas en ganancia de peso (2410gr). Utilizando fitasa a razón de 200gr/Tm de alimento el factor de conversión alimenticia evidenció solo diferencias numéricas, en cuanto a la aplicación de Fitasa junto a Celulasa, no existen diferencias significativas en la dieta alimenticia.

The study was carried out to determine the additive effect of two enzyme complexes (phytase and cellulase) in broiler feed and their influence on weight gain at 45 days. All parameters were used for raising and fattening chickens, being carried out with 400 mixed broiler chickens one day old. The most relevant results were that when supplying Fitasa in the initial stage at a rate of 200gr / Ton, the animals reached a greater weight in the study of the T2 treatment with (719.8 gr), in the growth stage the use of phytase a 200gr / Ton food ratio showed better responses in weight gain (2410gr). Using phytase at a rate of 200gr / Tm of food, the nutritional conversion factor showed only numerical differences, as regards the application of Phytase together with Cellulase, there are no significant differences in the dietary diet., El estudio se realizó para determinar el efecto aditivo de dos complejos enzimáticos (fitasa y celulasa) en la alimentación de pollos broiler y su influencia en la ganancia de peso a los 45 días. Se utilizaron todos los parámetros para la crianza y engorde de pollos, llevándose a cabo con 400 pollos broiler mixtos de un día de nacidos. Los resultados más relevantes fueron que al suministrar Fitasa en la etapa inicial a razón de 200gr/Ton, alcanzaron un mayor peso los animales en el estudio del tratamiento T2 con (719,8 gr), en la etapa de crecimiento la utilización de fitasa a razón de 200gr/Ton de alimento arrojó mejores respuestas en ganancia de peso (2410gr). Utilizando fitasa a razón de 200gr/Tm de alimento el factor de conversión alimenticia evidenció solo diferencias numéricas, en cuanto a la aplicación de Fitasa junto a Celulasa, no existen diferencias significativas en la dieta alimenticia.

The study was carried out to determine the additive effect of two enzyme complexes (phytase and cellulase) in broiler feed and their influence on weight gain at 45 days. All parameters were used for raising and fattening chickens, being carried out with 400 mixed broiler chickens one day old. The most relevant results were that when supplying Fitasa in the initial stage at a rate of 200gr / Ton, the animals reached a greater weight in the study of the T2 treatment with (719.8 gr), in the growth stage the use of phytase a 200gr / Ton food ratio showed better responses in weight gain (2410gr). Using phytase at a rate of 200gr / Tm of food, the nutritional conversion factor showed only numerical differences, as regards the application of Phytase together with Cellulase, there are no significant differences in the dietary diet., El estudio se realizó para determinar el efecto aditivo de dos complejos enzimáticos (fitasa y celulasa) en la alimentación de pollos broiler y su influencia en la ganancia de peso a los 45 días. Se utilizaron todos los parámetros para la crianza y engorde de pollos, llevándose a cabo con 400 pollos broiler mixtos de un día de nacidos. Los resultados más relevantes fueron que al suministrar Fitasa en la etapa inicial a razón de 200gr/Ton, alcanzaron un mayor peso los animales en el estudio del tratamiento T2 con (719,8 gr), en la etapa de crecimiento la utilización de fitasa a razón de 200gr/Ton de alimento arrojó mejores respuestas en ganancia de peso (2410gr). Utilizando fitasa a razón de 200gr/Tm de alimento el factor de conversión alimenticia evidenció solo diferencias numéricas, en cuanto a la aplicación de Fitasa junto a Celulasa, no existen diferencias significativas en la dieta alimenticia.

The study was carried out to determine the additive effect of two enzyme complexes (phytase and cellulase) in broiler feed and their influence on weight gain at 45 days. All parameters were used for raising and fattening chickens, being carried out with 400 mixed broiler chickens one day old. The most relevant results were that when supplying Fitasa in the initial stage at a rate of 200gr / Ton, the animals reached a greater weight in the study of the T2 treatment with (719.8 gr), in the growth stage the use of phytase a 200gr / Ton food ratio showed better responses in weight gain (2410gr). Using phytase at a rate of 200gr / Tm of food, the nutritional conversion factor showed only numerical differences, as regards the application of Phytase together with Cellulase, there are no significant differences in the dietary diet., El estudio se realizó para determinar el efecto aditivo de dos complejos enzimáticos (fitasa y celulasa) en la alimentación de pollos broiler y su influencia en la ganancia de peso a los 45 días. Se utilizaron todos los parámetros para la crianza y engorde de pollos, llevándose a cabo con 400 pollos broiler mixtos de un día de nacidos. Los resultados más relevantes fueron que al suministrar Fitasa en la etapa inicial a razón de 200gr/Ton, alcanzaron un mayor peso los animales en el estudio del tratamiento T2 con (719,8 gr), en la etapa de crecimiento la utilización de fitasa a razón de 200gr/Ton de alimento arrojó mejores respuestas en ganancia de peso (2410gr). Utilizando fitasa a razón de 200gr/Tm de alimento el factor de conversión alimenticia evidenció solo diferencias numéricas, en cuanto a la aplicación de Fitasa junto a Celulasa, no existen diferencias significativas en la dieta alimenticia.

The study was carried out to determine the additive effect of two enzyme complexes (phytase and cellulase) in broiler feed and their influence on weight gain at 45 days. All parameters were used for raising and fattening chickens, being carried out with 400 mixed broiler chickens one day old. The most relevant results were that when supplying Fitasa in the initial stage at a rate of 200gr / Ton, the animals reached a greater weight in the study of the T2 treatment with (719.8 gr), in the growth stage the use of phytase a 200gr / Ton food ratio showed better responses in weight gain (2410gr). Using phytase at a rate of 200gr / Tm of food, the nutritional conversion factor showed only numerical differences, as regards the application of Phytase together with Cellulase, there are no significant differences in the dietary diet., El estudio se realizó para determinar el efecto aditivo de dos complejos enzimáticos (fitasa y celulasa) en la alimentación de pollos broiler y su influencia en la ganancia de peso a los 45 días. Se utilizaron todos los parámetros para la crianza y engorde de pollos, llevándose a cabo con 400 pollos broiler mixtos de un día de nacidos. Los resultados más relevantes fueron que al suministrar Fitasa en la etapa inicial a razón de 200gr/Ton, alcanzaron un mayor peso los animales en el estudio del tratamiento T2 con (719,8 gr), en la etapa de crecimiento la utilización de fitasa a razón de 200gr/Ton de alimento arrojó mejores respuestas en ganancia de peso (2410gr). Utilizando fitasa a razón de 200gr/Tm de alimento el factor de conversión alimenticia evidenció solo diferencias numéricas, en cuanto a la aplicación de Fitasa junto a Celulasa, no existen diferencias significativas en la dieta alimenticia.

The study was carried out to determine the additive effect of two enzyme complexes (phytase and cellulase) in broiler feed and their influence on weight gain at 45 days. All parameters were used for raising and fattening chickens, being carried out with 400 mixed broiler chickens one day old. The most relevant results were that when supplying Fitasa in the initial stage at a rate of 200gr / Ton, the animals reached a greater weight in the study of the T2 treatment with (719.8 gr), in the growth stage the use of phytase a 200gr / Ton food ratio showed better responses in weight gain (2410gr). Using phytase at a rate of 200gr / Tm of food, the nutritional conversion factor showed only numerical differences, as regards the application of Phytase together with Cellulase, there are no significant differences in the dietary diet., El estudio se realizó para determinar el efecto aditivo de dos complejos enzimáticos (fitasa y celulasa) en la alimentación de pollos broiler y su influencia en la ganancia de peso a los 45 días. Se utilizaron todos los parámetros para la crianza y engorde de pollos, llevándose a cabo con 400 pollos broiler mixtos de un día de nacidos. Los resultados más relevantes fueron que al suministrar Fitasa en la etapa inicial a razón de 200gr/Ton, alcanzaron un mayor peso los animales en el estudio del tratamiento T2 con (719,8 gr), en la etapa de crecimiento la utilización de fitasa a razón de 200gr/Ton de alimento arrojó mejores respuestas en ganancia de peso (2410gr). Utilizando fitasa a razón de 200gr/Tm de alimento el factor de conversión alimenticia evidenció solo diferencias numéricas, en cuanto a la aplicación de Fitasa junto a Celulasa, no existen diferencias significativas en la dieta alimenticia.

En el presente trabajo de investigación se utilizó Trichoderma sp. el cual fue inducido en un medio sintético y luego adaptado en agar CMC para utilizarlo como inoculo en la fermentación en estado sólido. Para obtener la enzima celulasa, se realizó una fermentación en estado sólido con el inoculo de Trichoderma sp. obtenido y orujo de uva como sustrato, probando tres concentraciones de CMC (0.1%, 0.3% y 0.5%) durante 7 días de incubación. Se realizó la extracción de las enzimas utilizando dos tipos de disolventes (Tween 80 al 0.1% y NaCl al 0.9%); obteniéndose como resultados, que la máxima producción de enzima fue usando CMC al 0.5% en el orujo de uva con Trichoderma sp. durante la fermentación en estado sólido y Tween 80 al 0.1% como disolvente en la extracción de la enzima. Se evaluó la actividad de la enzima a distintos pH (4.0, 4.5, 5.0, 5.3, 5.5 y 6.0) y a distintas temperaturas (37°C, 50°C, y 60 °C), obteniéndose que los mejores resultados se alcanzaron a un pH 5 y una temperatura de 50°C. Con la finalidad de aplicar la enzima celulasa obtenida para la producción de bioetanol, se realizó un pretratamiento de los residuos de la hoja de mazorca de maíz con NaOH al 1% para modificar la estructura química de la lignina, para posteriormente realizar la hidrolisis enzimática durante 48 horas. El producto de la hidrolisis compuesto por solidos solubles fue concentrado a 6 °Brix, para su posterior fermentación alcohólica con Saccharomyces cerevisiae durante 5 días, obteniendo como rendimiento de etanol 12.81 mL por 100 g. de residuo seco. iii Por medio de esta investigación se puede apreciar que existe un potencial uso de los residuos lignocelulósicos como sustratos para la producción de enzima celulasa y como fuente de biomasa para la producción de bioetanol.

En el presente trabajo de investigación se utilizó Trichoderma sp. el cual fue inducido en un medio sintético y luego adaptado en agar CMC para utilizarlo como inoculo en la fermentación en estado sólido. Para obtener la enzima celulasa, se realizó una fermentación en estado sólido con el inoculo de Trichoderma sp. obtenido y orujo de uva como sustrato, probando tres concentraciones de CMC (0.1%, 0.3% y 0.5%) durante 7 días de incubación. Se realizó la extracción de las enzimas utilizando dos tipos de disolventes (Tween 80 al 0.1% y NaCl al 0.9%); obteniéndose como resultados, que la máxima producción de enzima fue usando CMC al 0.5% en el orujo de uva con Trichoderma sp. durante la fermentación en estado sólido y Tween 80 al 0.1% como disolvente en la extracción de la enzima. Se evaluó la actividad de la enzima a distintos pH (4.0, 4.5, 5.0, 5.3, 5.5 y 6.0) y a distintas temperaturas (37°C, 50°C, y 60 °C), obteniéndose que los mejores resultados se alcanzaron a un pH 5 y una temperatura de 50°C. Con la finalidad de aplicar la enzima celulasa obtenida para la producción de bioetanol, se realizó un pretratamiento de los residuos de la hoja de mazorca de maíz con NaOH al 1% para modificar la estructura química de la lignina, para posteriormente realizar la hidrolisis enzimática durante 48 horas. El producto de la hidrolisis compuesto por solidos solubles fue concentrado a 6 °Brix, para su posterior fermentación alcohólica con Saccharomyces cerevisiae durante 5 días, obteniendo como rendimiento de etanol 12.81 mL por 100 g. de residuo seco. iii Por medio de esta investigación se puede apreciar que existe un potencial uso de los residuos lignocelulósicos como sustratos para la producción de enzima celulasa y como fuente de biomasa para la producción de bioetanol.

Pectinases and cellulase were isolated from Trichoderma sp. and Aspergillus niger for the extraction of dyes (betalains) as an alternative for chemical methods, using as culture medium the stubble of quinoa, CMC 0.5% and pectin 0.75% were used as sources of carbón. For getting a dye in a natural way. The evaluation of the enzymatic activities, gives values of 18.13 mg of glucose/ml for the celulolitic extract and a value of 3.70 mg sugar reducer/ml for the pectinolitic extract; with these enzymes the dyes were extracted, having high yields in colors red, violet, orange, and yellow with 22% and 24% respectively, the lowest yield were obtained from the stems and branches giving 11.67%.The betalains were determinated through different tests and an evaluation the antioxidant activity was made. Also a cost analysis was prepared by obtaining a value of US$ 0.55 per gram. Beck fabric and food products testing, determined that they are related to animal fibers (sheep’s wool), and in foods such as milk and yogurt, had better affinity because the thermolabile thereof. Finally a juice was made with natural dye of quinoa., Para la extracción de colorantes (betalaínas) se aislaron pectinasas y celulasas a partir de Trichoderma sp. y Aspergillus niger., empleando como medio de cultivo del rastrojo de la quinua, como fuentes de carbono se usó al Carboximetilcelulosa (CMC) al 0.5% y Pectina al 0.75%, reduciendo costos y obteniendo un colorante de forma natural. Se realizó la evaluación de las actividades enzimáticas, encontrándose valores de 18.13 mg de glucosa/ml del extracto celulolítico y un valor de 3.70 mg de azúcar reductor/ml de extracto pectinolítico; con los que se extrajeron los colorantes obteniéndose altos rendimientos en colores rojos, violáceos, naranjas y amarillos con un 22% y 24% de la muestra de Quinua Phisanqalla hembra (muestra B) y Perlasa (muestra E) respectivamente, el menor rendimiento fue de tallos y ramas dando 11.67%.Se determinó que los colorantes corresponden a las betalaínas mediante un análisis de cromatografía de capa fina y electroforesis en gel de agarosa, asimismo se evaluó su actividad antioxidante. El análisis de costos obtenido fue de un valor de US$ 0.55 por gramo de colorante. Las pruebas de tintura en tela y en productos alimenticios, determinó que son afines a las fibras animales (lana de oveja), y a los alimentos (leche y yogurt) debido a la termolabilidad del mismo. Finalmente se realizó un zumo con colorante natural de quinua.

En el presente trabajo de investigación se utilizó Trichoderma sp. el cual fue inducido en un medio sintético y luego adaptado en agar CMC para utilizarlo como inoculo en la fermentación en estado sólido. Para obtener la enzima celulasa, se realizó una fermentación en estado sólido con el inoculo de Trichoderma sp. obtenido y orujo de uva como sustrato, probando tres concentraciones de CMC (0.1%, 0.3% y 0.5%) durante 7 días de incubación. Se realizó la extracción de las enzimas utilizando dos tipos de disolventes (Tween 80 al 0.1% y NaCl al 0.9%); obteniéndose como resultados, que la máxima producción de enzima fue usando CMC al 0.5% en el orujo de uva con Trichoderma sp. durante la fermentación en estado sólido y Tween 80 al 0.1% como disolvente en la extracción de la enzima. Se evaluó la actividad de la enzima a distintos pH (4.0, 4.5, 5.0, 5.3, 5.5 y 6.0) y a distintas temperaturas (37°C, 50°C, y 60 °C), obteniéndose que los mejores resultados se alcanzaron a un pH 5 y una temperatura de 50°C. Con la finalidad de aplicar la enzima celulasa obtenida para la producción de bioetanol, se realizó un pretratamiento de los residuos de la hoja de mazorca de maíz con NaOH al 1% para modificar la estructura química de la lignina, para posteriormente realizar la hidrolisis enzimática durante 48 horas. El producto de la hidrolisis compuesto por solidos solubles fue concentrado a 6 °Brix, para su posterior fermentación alcohólica con Saccharomyces cerevisiae durante 5 días, obteniendo como rendimiento de etanol 12.81 mL por 100 g. de residuo seco. iii Por medio de esta investigación se puede apreciar que existe un potencial uso de los residuos lignocelulósicos como sustratos para la producción de enzima celulasa y como fuente de biomasa para la producción de bioetanol.

Pectinases and cellulase were isolated from Trichoderma sp. and Aspergillus niger for the extraction of dyes (betalains) as an alternative for chemical methods, using as culture medium the stubble of quinoa, CMC 0.5% and pectin 0.75% were used as sources of carbón. For getting a dye in a natural way. The evaluation of the enzymatic activities, gives values of 18.13 mg of glucose/ml for the celulolitic extract and a value of 3.70 mg sugar reducer/ml for the pectinolitic extract; with these enzymes the dyes were extracted, having high yields in colors red, violet, orange, and yellow with 22% and 24% respectively, the lowest yield were obtained from the stems and branches giving 11.67%.The betalains were determinated through different tests and an evaluation the antioxidant activity was made. Also a cost analysis was prepared by obtaining a value of US$ 0.55 per gram. Beck fabric and food products testing, determined that they are related to animal fibers (sheep’s wool), and in foods such as milk and yogurt, had better affinity because the thermolabile thereof. Finally a juice was made with natural dye of quinoa., Para la extracción de colorantes (betalaínas) se aislaron pectinasas y celulasas a partir de Trichoderma sp. y Aspergillus niger., empleando como medio de cultivo del rastrojo de la quinua, como fuentes de carbono se usó al Carboximetilcelulosa (CMC) al 0.5% y Pectina al 0.75%, reduciendo costos y obteniendo un colorante de forma natural. Se realizó la evaluación de las actividades enzimáticas, encontrándose valores de 18.13 mg de glucosa/ml del extracto celulolítico y un valor de 3.70 mg de azúcar reductor/ml de extracto pectinolítico; con los que se extrajeron los colorantes obteniéndose altos rendimientos en colores rojos, violáceos, naranjas y amarillos con un 22% y 24% de la muestra de Quinua Phisanqalla hembra (muestra B) y Perlasa (muestra E) respectivamente, el menor rendimiento fue de tallos y ramas dando 11.67%.Se determinó que los colorantes corresponden a las betalaínas mediante un análisis de cromatografía de capa fina y electroforesis en gel de agarosa, asimismo se evaluó su actividad antioxidante. El análisis de costos obtenido fue de un valor de US$ 0.55 por gramo de colorante. Las pruebas de tintura en tela y en productos alimenticios, determinó que son afines a las fibras animales (lana de oveja), y a los alimentos (leche y yogurt) debido a la termolabilidad del mismo. Finalmente se realizó un zumo con colorante natural de quinua.

The goals of the study were to evaluate yield of the blackberry juice preparation, and at same time of the extraction of sweetener glycosides from dehydrated stevia leaves (Stevia rebaudiana Bertoni), by using enzymatic preparations. Five enzyme preparations were evaluated during the preparation of the sweetener with these glycosides. Two levels of the variables studied were evaluated: enzyme concentration (100 and 200ppm), and incubation period (15 30min), and using two extraction solvents at two temperatures: water and blackberry juice (at 50 and 35 °C, respectively). Efficiency and yield was analyzed by determining suspended insoluble solids (SIS), soluble solids (SS), and quantitation by cromatografía líquida de alta eficacia o High Performance Liquid Chromatography (HPLC) of the main esteviolglucósidos (stevioside and rebaudioside A). Statistical analysis data shown that the incubation time and the enzyme concentration in the enzyme complex did not affect total soluble solids values, but it does in the concentration of SIS, when using the commercial preparation Pectinex Ultra AFPL, as compared with the rest of the tested samples. Similarly, it is shown statistically significant differences in assessing the enzyme-time binomial, in the steviolglycosides extraction in water and blackberry juice. A high concentration of stevioside and rebaudioside A were achieved when using Pectinex Clear, at a concentration of 200 ppm during 30 seconds. However, the obtained values are similar to concentrations quantified in the control sample showing a slight influence of enzymes in the extraction of both steviolglycosides. This result corroborates that the diffusion of these compounds from the leaves to the medium, occurs primarily by the solubility thereof, rather than by hydrolysis caused by specific enzymes used in the study., Como estrategia para alcanzar mayor rendimiento en el procesamiento de pulpa de mora y al mismo tiempo extraer los esteviolglucósidos presentes en hojas deshidratadas de estevia (Stevia rebaudiana Bertoni), fueron evaluados 5 preparados enzimáticos durante la elaboración de un jugo de mora. Se evaluaron dos niveles de las variables consideradas: concentración de enzima (100 y 200ppm) y tiempo de incubación (15 y 30min) en dos medios de extracción: agua y pulpa de mora (a 50 y 35°C, respectivamente). La eficiencia del tratamiento fue analizado a través de la determinación de sólidos insoluasbles en suspensión, sólidos solubles y cuantificación por HPLC de esteviósido y rebaudiósido A. En base al análisis estadístico aplicado se pudo afirmar que no existe ningún efecto, ni en el tiempo de incubación, ni en la concentración del complejo enzimático, sobre los valores resultantes de sólidos solubles totales, pero si en los SIS, del preparado comercial ®Pectinex Ultra AFPL. En relación a la extracción de esteviolglucósidos, tanto en los ensayos de extracción en jugo de mora como en agua, hay diferencias estadísticamente significativas al valorar el binomio enzima*tiempo. Las concentraciones más altas de esteviolglucósidos fueron alcanzadas empleando 200ppm de ®Pectinex Clear durante 30 segundos. A pesar de ello, los valores obtenidos son similares a las concentraciones cuantificadas en la muestra testigo lo que corrobora que la difusión de estos compuestos de las hojas al medio, ocurre principalmente por la solubilidad de los mismos, más que por la hidrólisis originada por las enzimas especificas empleadas en el estudio.

La interacción macroinvertebrados-microorganismos-biomasa vegetal es un eje fundamental en el ciclaje del carbono. En algunos agroecosistemas resultan abundantes residuos de cosecha que frecuentemente son incinerados, como sucede en la caña de azúcar en Colombia. Se estudió la transformación de residuos de cosecha a través de la interacción entre ensamblajes de poblaciones de larvas de escarabajos y poblaciones de microorganismos propiciadas por los mencionados macroinvertebrados, considerando la cantidad consumida y evaluando la actividad de E-glucosidasa resultante en el suelo. De ésta, se registraron diferencias significativas en los tratamientos aplicados, evidenciándose que son precisamente dos especies selectas de Oryctini (Coleoptera: Scarabaeoidea), históricamente catalogados como plagas, las que a través de su interacción sinérgica con la microbiota edáfica, propician altos niveles de actividad de ß-glucosidasa. Los resultados indican que el escarabajo rinoceronte, Podischnus agenor Oliver, además de ser el mayor consumidor de residuos de cosecha, aporta positivamente al cultivo de la caña de azúcar, toda vez que no se le restrinja el acceso a material que satisfaga sus requerimientos alimentarios. El escarabajo torito, Strategus aloeus Linné, en asocio con P. agenor presentó un comportamiento similar.

La interacción macroinvertebrados-microorganismos-biomasa vegetal es un eje fundamental en el ciclaje del carbono. En algunos agroecosistemas resultan abundantes residuos de cosecha que frecuentemente son incinerados, como sucede en la caña de azúcar en Colombia. Se estudió la transformación de residuos de cosecha a través de la interacción entre ensamblajes de poblaciones de larvas de escarabajos y poblaciones de microorganismos propiciadas por los mencionados macroinvertebrados, considerando la cantidad consumida y evaluando la actividad de E-glucosidasa resultante en el suelo. De ésta, se registraron diferencias significativas en los tratamientos aplicados, evidenciándose que son precisamente dos especies selectas de Oryctini (Coleoptera: Scarabaeoidea), históricamente catalogados como plagas, las que a través de su interacción sinérgica con la microbiota edáfica, propician altos niveles de actividad de ß-glucosidasa. Los resultados indican que el escarabajo rinoceronte, Podischnus agenor Oliver, además de ser el mayor consumidor de residuos de cosecha, aporta positivamente al cultivo de la caña de azúcar, toda vez que no se le restrinja el acceso a material que satisfaga sus requerimientos alimentarios. El escarabajo torito, Strategus aloeus Linné, en asocio con P. agenor presentó un comportamiento similar.

Título en ingles: Characterization of Aspergillus ficuum hydrolytic enzymes produced in solid state fermentation of cold-pressed canola cake Resumen: En el presente trabajo, se describe la caracterización respecto al pH y temperatura de extractos semipurificados mediante ultrafiltración escalonada de las enzimas fitasa, celulasa y xilanasa de Aspergillus ficuum cepa DSM 932 producidos en fermentación en estado sólido (en adelante SSF) y usando torta de canola como sustrato. La fitasa presentó un pH y una temperatura óptima de 5.0 y 60°C respectivamente, en tanto que la celulasa presentó un pH óptimo de 7.0 con una temperatura óptima de 60°C y el extracto de xilanasa un pH óptimo de 5.4 y una temperatura óptima de 45°C. Palabras clave: caracterización enzimas; fitasa; xilanasa; celulasa. Abstract: This paper, describes the characterization respect to pH and temperature of semi-purified extracts by ultrafiltration step of the enzymes phytase, cellulase and xylanase produced by Aspergillus ficuum DSM 932 strain, in solid state fermentation (SSF) using cold-pressed canola cake as substrate. Phytase showed the optimal pH and temperature 6.0 and 60°C, respectively, while cellulase showed a pH optimal of 7.0 with an optimal temperature of 60°C and xylanase extract an optimal pH of 5.4 and an optimal temperature of 45°C

This paper, describes the characterization respect to pH and temperature of semi-purified extracts by ultrafiltration step of the enzymes phytase, cellulase and xylanase produced by Aspergillus ficuum DSM 932 strain, in solid state fermentation (SSF) using cold-pressed canola cake as substrate. Phytase showed the optimal pH and temperature 6.0 and 60°C, respectively, while cellulase showed a pH optimal of 7.0 with an optimal temperature of 60°C and xylanase extract an optimal pH of 5.4 and an optimal temperature of 45°C., En el presente trabajo, se describe la caracterización respecto al pH y temperatura de extractos semipurificados mediante ultrafiltración escalonada de las enzimas fitasa, celulasa y xilanasa de Aspergillus ficuum cepa DSM 932 producidos en fermentación en estado sólido (en adelante SSF) y usando torta de canola como sustrato. La fitasa presentó un pH y una temperatura óptima de 5.0 y 60°C respectivamente, en tanto que la celulasa presentó un pH óptimo de 7.0 con una temperatura óptima de 60°C y el extracto de xilanasa un pH óptimo de 5.4 y una temperatura óptima de 45°C.

This paper, describes the characterization respect to pH and temperature of semi-purified extracts by ultrafiltration step of the enzymes phytase, cellulase and xylanase produced by Aspergillus ficuum DSM 932 strain, in solid state fermentation (SSF) using cold-pressed canola cake as substrate. Phytase showed the optimal pH and temperature 6.0 and 60°C, respectively, while cellulase showed a pH optimal of 7.0 with an optimal temperature of 60°C and xylanase extract an optimal pH of 5.4 and an optimal temperature of 45°C., En el presente trabajo, se describe la caracterización respecto al pH y temperatura de extractos semipurificados mediante ultrafiltración escalonada de las enzimas fitasa, celulasa y xilanasa de Aspergillus ficuum cepa DSM 932 producidos en fermentación en estado sólido (en adelante SSF) y usando torta de canola como sustrato. La fitasa presentó un pH y una temperatura óptima de 5.0 y 60°C respectivamente, en tanto que la celulasa presentó un pH óptimo de 7.0 con una temperatura óptima de 60°C y el extracto de xilanasa un pH óptimo de 5.4 y una temperatura óptima de 45°C.

This paper, describes the characterization respect to pH and temperature of semi-purified extracts by ultrafiltration step of the enzymes phytase, cellulase and xylanase produced by Aspergillus ficuum DSM 932 strain, in solid state fermentation (SSF) using cold-pressed canola cake as substrate. Phytase showed the optimal pH and temperature 6.0 and 60°C, respectively, while cellulase showed a pH optimal of 7.0 with an optimal temperature of 60°C and xylanase extract an optimal pH of 5.4 and an optimal temperature of 45°C., En el presente trabajo, se describe la caracterización respecto al pH y temperatura de extractos semipurificados mediante ultrafiltración escalonada de las enzimas fitasa, celulasa y xilanasa de Aspergillus ficuum cepa DSM 932 producidos en fermentación en estado sólido (en adelante SSF) y usando torta de canola como sustrato. La fitasa presentó un pH y una temperatura óptima de 5.0 y 60°C respectivamente, en tanto que la celulasa presentó un pH óptimo de 7.0 con una temperatura óptima de 60°C y el extracto de xilanasa un pH óptimo de 5.4 y una temperatura óptima de 45°C.

This paper, describes the characterization respect to pH and temperature of semi-purified extracts by ultrafiltration step of the enzymes phytase, cellulase and xylanase produced by Aspergillus ficuum DSM 932 strain, in solid state fermentation (SSF) using cold-pressed canola cake as substrate. Phytase showed the optimal pH and temperature 6.0 and 60°C, respectively, while cellulase showed a pH optimal of 7.0 with an optimal temperature of 60°C and xylanase extract an optimal pH of 5.4 and an optimal temperature of 45°C., En el presente trabajo, se describe la caracterización respecto al pH y temperatura de extractos semipurificados mediante ultrafiltración escalonada de las enzimas fitasa, celulasa y xilanasa de Aspergillus ficuum cepa DSM 932 producidos en fermentación en estado sólido (en adelante SSF) y usando torta de canola como sustrato. La fitasa presentó un pH y una temperatura óptima de 5.0 y 60°C respectivamente, en tanto que la celulasa presentó un pH óptimo de 7.0 con una temperatura óptima de 60°C y el extracto de xilanasa un pH óptimo de 5.4 y una temperatura óptima de 45°C.

690 p., Esta Tesis introduce en primer lugar, las características de las enzimas -naturaleza, mecanismo, correcta manipulación, etc.- y sus usos en procesos de restauración de obras de arte. En segundo lugar, esta investigación incluye un estudio del papel -historia, composición, fabricación, degradación y restauración-. Posteriormente, se explican los materiales y métodos para llevar a cabo la investigación sobre consolidación celulósica con enzimas: papeles, sustancias, instrumentación cámaras climáticas, CCD, microscopio electrónico, etc.-, preparación de probetas y aplicación de un nuevo método para conocer la degradación de materiales celulósicos. Y para finalizar, las dos últimas partes de la investigación describen el desarrollo de un método de consolidación de celulosa del papel, a partir de la síntesis de la celulosa con una enzima hidrolítica: la celulasa. Ésta actúa como una sintetasa, consolidando el papel envejecido de forma natural o artificial, cuando es mezclada en una solución disolvente orgánico en un tampón, en la relación (4:1) en presencia de un sustrato (ß-celobiosa fluorada). Para mejorar el tratamiento se añadió un gel con los reactivos necesarios, se tuvo máximo cuidado en las condiciones de trabajo temperatura, pH- y se estudió el protocolo más adecuado para no afectar a papeles con diferentes técnicas pictóricas. Los resultados fueron positivos y se consiguió la consolidación del papel sin afectar la capa pictórica.

690 p., Esta Tesis introduce en primer lugar, las características de las enzimas -naturaleza, mecanismo, correcta manipulación, etc.- y sus usos en procesos de restauración de obras de arte. En segundo lugar, esta investigación incluye un estudio del papel -historia, composición, fabricación, degradación y restauración-. Posteriormente, se explican los materiales y métodos para llevar a cabo la investigación sobre consolidación celulósica con enzimas: papeles, sustancias, instrumentación cámaras climáticas, CCD, microscopio electrónico, etc.-, preparación de probetas y aplicación de un nuevo método para conocer la degradación de materiales celulósicos. Y para finalizar, las dos últimas partes de la investigación describen el desarrollo de un método de consolidación de celulosa del papel, a partir de la síntesis de la celulosa con una enzima hidrolítica: la celulasa. Ésta actúa como una sintetasa, consolidando el papel envejecido de forma natural o artificial, cuando es mezclada en una solución disolvente orgánico en un tampón, en la relación (4:1) en presencia de un sustrato (ß-celobiosa fluorada). Para mejorar el tratamiento se añadió un gel con los reactivos necesarios, se tuvo máximo cuidado en las condiciones de trabajo temperatura, pH- y se estudió el protocolo más adecuado para no afectar a papeles con diferentes técnicas pictóricas. Los resultados fueron positivos y se consiguió la consolidación del papel sin afectar la capa pictórica.

690 p., Esta Tesis introduce en primer lugar, las características de las enzimas -naturaleza, mecanismo, correcta manipulación, etc.- y sus usos en procesos de restauración de obras de arte. En segundo lugar, esta investigación incluye un estudio del papel -historia, composición, fabricación, degradación y restauración-. Posteriormente, se explican los materiales y métodos para llevar a cabo la investigación sobre consolidación celulósica con enzimas: papeles, sustancias, instrumentación cámaras climáticas, CCD, microscopio electrónico, etc.-, preparación de probetas y aplicación de un nuevo método para conocer la degradación de materiales celulósicos. Y para finalizar, las dos últimas partes de la investigación describen el desarrollo de un método de consolidación de celulosa del papel, a partir de la síntesis de la celulosa con una enzima hidrolítica: la celulasa. Ésta actúa como una sintetasa, consolidando el papel envejecido de forma natural o artificial, cuando es mezclada en una solución disolvente orgánico en un tampón, en la relación (4:1) en presencia de un sustrato (ß-celobiosa fluorada). Para mejorar el tratamiento se añadió un gel con los reactivos necesarios, se tuvo máximo cuidado en las condiciones de trabajo temperatura, pH- y se estudió el protocolo más adecuado para no afectar a papeles con diferentes técnicas pictóricas. Los resultados fueron positivos y se consiguió la consolidación del papel sin afectar la capa pictórica.

Título en inglés: Influence of inoculum concentration on the cellulase and xylanase production by Aspergillus niger Resumen Existe un gran interés por el uso de enzimas lignocelulolíticas en varias industrias, y en la biodegradación de biomasa para la producción de biocombustibles y otras aplicaciones. Entre las fuentes microbianas de enzimas, Aspergillus niger es uno de los microorganismos más utilizados en la producción de enzimas industriales, debido a sus niveles altos de secreción de proteína y a su condición GRAS (generally regarded as safe). El objetivo del presente estudio fue evaluar la influencia de la concentración de inóculo en la morfología y producción de celulasas y xilanasas con A. niger en cultivo sumergido. Para ello, fueron inoculados matraces de 250 mL con 40 mL de medio con 3% (v/v) de una suspensión de 104 o 108 esporas por mililitro e incubados a 28 ºC y 175 rpm durante 120 horas. Se utilizaron 10 g*L-1 de lactosa como fuente de carbono. En cada caso se determinó la cantidad de biomasa, la proteína extracelular soluble, lactosa residual, actividad celulasa total y xilanasa cada 24 horas. Aunque no hubo un efecto notorio en la morfología de crecimiento, salvo en el color y el diámetro de pellets obtenidos, sí se afectó la µmax (0,06 y 0,03 h-1 para 104 y 108 esporas*mL-1, respectivamente) y la concentración máxima de biomasa. Además, mientras que las productividades volumétricas de celulasa (ΓFPA) (8,2 y 8,0 UI.*L-1*h-1 para 104 y 108 esporas*mL-1, respectivamente) fueron similares para ambos inóculos, la productividad de xilanasa (ΓXIL) fue mayor para el inóculo más concentrado (29,7 y 33,4 UI¨*L-1*h-1 para 104 y 108 esporas*mL-1, respectivamente). Los resultados indican que la productividad de celulasas y xilanasas está estrechamente relacionada con la concentración de inóculo. Palabras clave: celulasa; xilanasa; cultivo sumergido; morfología; Aspergillus niger. Abstract There is a great interest for the use of lignocellulolytic enzymes in se

Con este objeto de aprendizaje se prentende mostrar un protocolo sencillo de obtención de protoplastos vegetales (células vegetales sin su pared celular) mediante un método enzimático.

Con este objeto de aprendizaje se prentende mostrar un protocolo sencillo de obtención de protoplastos vegetales (células vegetales sin su pared celular) mediante un método enzimático.

Con este objeto de aprendizaje se prentende mostrar un protocolo sencillo de obtención de protoplastos vegetales (células vegetales sin su pared celular) mediante un método enzimático.

Con este objeto de aprendizaje se prentende mostrar un protocolo sencillo de obtención de protoplastos vegetales (células vegetales sin su pared celular) mediante un método enzimático.

The ability of eighteen isolated ruminal fungi to degrade highly fibrous substrates was evaluated by fermentations lasting 120 hours. The graminea Bothriochloa pertusa was used as the unique carbon source. The experiment involved isolates belonging to the Neocallimastix, Orpinomyces and Piromyces genera. According to the Gompertz model, the establishment phase of the isolated fungi was on average 23,8 h ± 4.20, and reached a gas production level of 195 ml/g DM ± 7,52. The half gas production was achieved between 35 and 55 hours and varied with each ruminal fungi. The highest value of the maximum gas production rate from all the isolated fungi was 5,7 ml/h; this was produced by an isolated of Orpinomyces genus. The degradability of dry matter (DM) and neutral detergent fibre (NDF) of al the isolated fungi was on average 58% ± 2 and 46 % ± 2, respectively. With regard to volatile fatty acids (VFA) production all of the isolates were on average 22,04 mM ± 1,5; with an acetic acid proportion of 93% ± 0,01. The highest values of fibrolytic activity for carboxymetyl cellulase, microcrystalline cellulase and xylase were 9,56, 1,39, 303,12 international units (UI), respectively; this confirmed preferences toward hemi-cellulosic substrates by ruminal fungi. Five isolated fungi with the most diversity in the evaluated parameters, principally in terms of degradability of DM, NDF and enzymatic capacity were selected by principal component analysis (PCA), followed by grouping clusters. These isolates were one Neocallimastix, two Orpinomyces and two Piromyces genera., Se evaluó la capacidad de degradación de sustratos altamente fibrosos por 18 aislados fungales ruminales en fermentaciones de 120 horas utilizando como única fuente de carbono pasto colosuana (Bothriochloa pertusa). Dentro del ensayo se incluyeron aislados pertenecientes a los géneros Neocallimastix, Orpinomyces y Piromyces. De acuerdo con los parámetros del modelo de Gompertz, la fase de adaptación de los aislados fue de 23,8 horas (h) ± 4,20, con una producción de gas promedio de 195 ml/g sustrato ± 7,52, con un tiempo en alcanzar la mitad de la producción de gas entre las 35 y 55 h. La mayor tasa máxima de producción de gas (TMPG) fue de 5,7 ml/h, perteneciente a un aislado del género Orpinomyces. Se observó una degradación de la materia seca (MS) de 58% ± 2, y de la fibra en detergente neutro (FDN) de 46% ± 2 en promedio para todos los aislados fungales. La producción total de ácidos grasos volátiles (AGV) fue de 22,04 ± 1,5 mM, con una proporción molar de ácido acético de 0,93% ± 0,01 para el promedio de los 18 aislados. Los valores máximos de las actividades enzimática carboximetilcelulasa (CMCasa), celulasa microcristalina y xilanasa fueron 9,56, 1,39 y 303,12 UI respectivamente, confirmando la preferencia de los hongos ruminales hacia los sustratos hemicelulósicos. Se realizó un análisis de factores principales, y los aislados se agruparon por medio de un análisis de conglomerados. Fueron seleccionados cinco aislados fungales los cuales presentaron la mayor diversidad en los parámetros evaluados, principalmente en degradación de MS, FDN y las actividades enzimáticas. Se seleccionó un aislado del género Neocallimastix, dos del género Orpinomyces, y dos del género Piromyces.

The ability of eighteen isolated ruminal fungi to degrade highly fibrous substrates was evaluated by fermentations lasting 120 hours. The graminea Bothriochloa pertusa was used as the unique carbon source. The experiment involved isolates belonging to the Neocallimastix, Orpinomyces and Piromyces genera. According to the Gompertz model, the establishment phase of the isolated fungi was on average 23,8 h ± 4.20, and reached a gas production level of 195 ml/g DM ± 7,52. The half gas production was achieved between 35 and 55 hours and varied with each ruminal fungi. The highest value of the maximum gas production rate from all the isolated fungi was 5,7 ml/h; this was produced by an isolated of Orpinomyces genus. The degradability of dry matter (DM) and neutral detergent fibre (NDF) of al the isolated fungi was on average 58% ± 2 and 46 % ± 2, respectively. With regard to volatile fatty acids (VFA) production all of the isolates were on average 22,04 mM ± 1,5; with an acetic acid proportion of 93% ± 0,01. The highest values of fibrolytic activity for carboxymetyl cellulase, microcrystalline cellulase and xylase were 9,56, 1,39, 303,12 international units (UI), respectively; this confirmed preferences toward hemi-cellulosic substrates by ruminal fungi. Five isolated fungi with the most diversity in the evaluated parameters, principally in terms of degradability of DM, NDF and enzymatic capacity were selected by principal component analysis (PCA), followed by grouping clusters. These isolates were one Neocallimastix, two Orpinomyces and two Piromyces genera., Se evaluó la capacidad de degradación de sustratos altamente fibrosos por 18 aislados fungales ruminales en fermentaciones de 120 horas utilizando como única fuente de carbono pasto colosuana (Bothriochloa pertusa). Dentro del ensayo se incluyeron aislados pertenecientes a los géneros Neocallimastix, Orpinomyces y Piromyces. De acuerdo con los parámetros del modelo de Gompertz, la fase de adaptación de los aislados fue de 23,8 horas (h) ± 4,20, con una producción de gas promedio de 195 ml/g sustrato ± 7,52, con un tiempo en alcanzar la mitad de la producción de gas entre las 35 y 55 h. La mayor tasa máxima de producción de gas (TMPG) fue de 5,7 ml/h, perteneciente a un aislado del género Orpinomyces. Se observó una degradación de la materia seca (MS) de 58% ± 2, y de la fibra en detergente neutro (FDN) de 46% ± 2 en promedio para todos los aislados fungales. La producción total de ácidos grasos volátiles (AGV) fue de 22,04 ± 1,5 mM, con una proporción molar de ácido acético de 0,93% ± 0,01 para el promedio de los 18 aislados. Los valores máximos de las actividades enzimática carboximetilcelulasa (CMCasa), celulasa microcristalina y xilanasa fueron 9,56, 1,39 y 303,12 UI respectivamente, confirmando la preferencia de los hongos ruminales hacia los sustratos hemicelulósicos. Se realizó un análisis de factores principales, y los aislados se agruparon por medio de un análisis de conglomerados. Fueron seleccionados cinco aislados fungales los cuales presentaron la mayor diversidad en los parámetros evaluados, principalmente en degradación de MS, FDN y las actividades enzimáticas. Se seleccionó un aislado del género Neocallimastix, dos del género Orpinomyces, y dos del género Piromyces.

Odpady zemědělského a potravinářského průmyslu jsou v dnešní době dostupné ve velkém množství kdekoliv na světě. Většina těchto odpadů obsahuje celulosu (30 - 40 %), hemicelulosu (20 - 40 %) a lignin (10 - 20 %). Proto tyto odpadní materiály mají široké použití jako substráty pro mikrobiální růst a produkci enzymů. Mikroorganismy jsou schopné využívat organické látky z odpadů jako zdroj energie pro růst a uhlík pro syntézu buněčné biomasy [24]. Jako substráty pro kultivaci mikroorganismů a následnou produkci enzymů lze využít pšeničnou a rýžovou slámu. Tuto diplomovou práci jsem zaměřila na využití odpadů z potravinářského průmyslu pro produkci enzymů pomocí mikroorganismů. Sledovalo se využití pšeničné slámy jako zdroje energie pro růst testovaných mikroorganismů a zjišťovala se jejich schopnost produkovat oxidoreduktasy resp. lakasu.V rámci práce se provedla optimalizace podmínek růstu Aureobasidium pullulans. Dále se studovala jeho lakasová aktivita. Jako substrát se používala mletá pšeničná sláma. Kultivace se prováděla v termostatu při teplotě 27°C. Provedená studie neprokázala aktivitu lakasy při kultivaci na slámě. Při optimalizaci růstu Aureobasidium pullulans se Petriho misky kontaminovaly třemi neznámými mikrooganismy. U jednoho z nich se prokázala produkce lakasy při kultivaci se slámou., The waste from agricultural and food industry are accessible in large quantity anywhere in the whole world nowadays. Most of these wastes include cellulose (30 - 40 %), hemicellulose (20 - 40 %) and lignine (10 - 20 %). Therefore these waste materials have wide use as the substrates for the microbial growth and the production of the enzymes. The microorganisms are able to use organic compounds from the wastes as the source of energy for the growth and carbon for synthesis of cellular biomass [24]. Wheat and rice straw are possible to use as the substrates for cultivation of the microorganisms and following production of the enzymes. In this thesis the utilization of the wastes from food industry for the production of the enzymes by the microorganisms was studied. We observed utilization of wheat straw as source of energy for growth of tested microorganisms and investigated their ability for the production of oxidoreductase (laccase). The optimalization of growth conditions of Aureobasidium pullulans was proceeded. Further the activity of laccase was studied. Milled wheat straw was used as the substrate. The cultivation was done in the thermoregulator at the temperature of 27°C. The activity of laccase was not found in this thesis. Petri dishes were contaminated by three unknown microoganisms during optimalization of growth of Aureobasidium pullulans. One of them produced laccase in cultivation with straw.

Studium produkce hydrolytických enzymů bylo zaměřeno na produkci celulasy a polygalakturonasy pomocí dvou mikrobiálních kmenů – Aspergillus niger a Aureobasidium pullulans. Enzymy byly produkovány za podmínek procesu "solid-state fermentation". Jako substrát byla zvolena mletá pšeničná sláma a řepné výlisky zvlhčené vodou, bezuhlíkatým mediem nebo glukosovým mediem. Během kultivace byl sledován vliv bezuhlíkatého media a glukosy na produkci daných enzymů. Nejvyšší produkce polygalakturonasy bylo dosaženo při kultivaci Aspergillus niger na řepných výliscích zvlhčených bezuhlíkatým mediem. Nejvyšší produkce celulasy bylo dosaženo při kultivaci Aspergillus niger na mleté pšeničné slámě zvlhčené glukosovým mediem., The study of production of hydrolytic enzymes dealt with the production of cellulase and polygalacturonase by two microbial strains - Aspergillus niger and Aureobasidium pullulans. The enzymes were produced in solid-state fermentation system. The wheat straw and sugar beet pulp were used as a substrate. The substrates were moistened by water, mineral solution or by medium with glucose. The effect of mineral solution and glucose on production of these enzymes were monitored during cultivation. The highest production of polygalacturonase was achieved by Aspergillus niger during cultivation on sugar beet pulp moistened by mineral solution. The highest production of cellulase was achieved by Aspergillus niger during cultivation on wheat straw moistened by medium with glucose.

Studium možnosti využití odpadního papíru na mikrobiální produkci celulas bylo prováděno za pomoci kultivace Aspergillus niger na zdroji uhlíku, kterým byl odpadní kancelářský papír a karton, zvlhčený bezuhlíkatým médiem, nebo destilovanou vodou. Kultivace probíhala způsobem SSF v Erlenmeyerových baňkách a kolonách. Byla sledována koncentrace extracelulárních proteinů, jejich celulasová akivita a u vybraných vzorků i aktivita proteasová. Bylo zjištěno, že nejvýhodnějším způsobem kultivace z hlediska produkce celulas je kultivace v koloně, promývané bezuhlíkatým médiem v třídenních intervalech., Study of the employment of waste paper to microbial production of cellulase was carried out using Aspergillus niger cultivation on carbon sources that have been waste office paper and cardboard, humidified by no – carbon medium or distiled water. Cultivation took place in the SSF way in Erlenmeyer flasks and columns. Concentration of extracellular proteins, cellulase and protease activity for selected samples were monitored. It was found that the most advantageous method of cultivation in terms of cellulase activity production is the cultivation in the column washing by no – carbon medium in three day intervals.

Produkce celulasy a polygalakturonasy pomocí Aspergillus niger a Aureobasidium pullulans byla sledována při kultivaci solid state fermentation (SSF) a submerzní (SmF). Jako substrát byly použity hroznové výlisky a slupky z mandarinek. Pomocí Aspergillus niger byla celulasa na hroznových výliscích detekována po 72 hodinové SSF kultivaci a po 24 hodinách u SmF. Celulasová aktivita byla vyšší u systému SmF. Větší produkce polygalakturonasy byla u SmF kultivace zaznamenána ke konci období. Polygalakturonasová aktivita byla vyšší u SmF kultivace. SSF fermentace na slupkách z mandarinek byla podobná, nejvyšší aktivita byla detekována po 72 hodinách. Produkce polygalakturonasy u SSF systému byla odlišná od produkce u SmF. Srovnáním produkce enzymu na hroznových výliscích a slupkách z mandarinek vyplývá, že polygalakturonasová aktivita je nejvyšší u kultivace SmF se slupkami z mandarinek. U Aureobasidium pullulans byla celulasa na hroznových výliscích detekována u obou fermentací po 48 hodinách. Aktivita celulasy byly vyšší u kultivace SSF. Vyšší hodnoty polygalakturonasy byly detekovány ve druhé půli kultivačního období. Polygalakturonasová aktivita byla vyšší u kultivace SmF. SSF kultivace se slupkami z mandarinek byla podobná – nejvyšší celulolytická aktivita byla zaznamenána po 48 hodinách. Produkce polygalakturonasy byla rozdílná, ale nejvyšší aktivity bylo dosaženo na slupkách z mandarinek u SmF způsobu. Pro oba systémy a oba odpadní materiály byla sledována i produkce mangan-dependentní peroxidasy. Její nejvyšší aktivity bylo dosaženo na počátku kultivace. Rozdíly v produkci enzymů pomocí Aspergillus niger a Aureobasidium pullulans jsou závislé nejen na použitém substrátu, ale také na způsobu fermentace., Production of cellulase and polygalacturonase by Aspergillus niger and Aureobasidium pullulans was studied in submerged (SmF) and solid state fermentation (SSF) systems. Substrates used in fermentation systems were mandarin peels and grape pomace. With Aspergillus niger used on grape pomace as a sole carbon source, cellulase production was detected after 72 hours in SSF and after 24 hours in SmF systems. The activity of cellulase per gram of substrate was higher in a submerged than in a solid state fermentation system. The longer time for higher polygalacturonase production was necessary in submerged fermentation systems and polygalacturonase activity was higher in SmF. The SSF fermentation with mandarin peels as a sole carbon source was similar, the highest detected activity of cellulase was determined after 72 hours. Different production of polygalacturonase was observed on mandarin peels in SmF systems. A comparison of enzyme productivities on grape pomace and mandarin peels showed that polygalacturonase activity per gram of substrate is highest in SmF system with mandarin peels as a sole carbon source. With Aureobasidium pullulans used on grape pomace as a sole carbon source, cellulase production was detected after 48 hours in SmF and SSF fermentation systems. The activity of cellulase per gram of substrate was higher in solid state system than in a submerged fermentation system. Longer time for higher polygalacturonase production was necessary in both fermentation systems. Polygalacturonase activity was higher in SmF. The SSF fermentation with mandarin peels as a sole carbon source was similar, the highest detected activity of cellulase was determined after 48 hours. Different production of polygalacturonase was observed on mandarin peels in SmF systems. A comparison of enzyme productivities on grape pomace and mandarin peels showed that polygalacturonase activity per gram of substrate is highest in SmF system with mandarin peels as a sole carbon source. For bo

Odpady zemědělského a potravinářského průmyslu jsou v dnešní době dostupné ve velkém množství kdekoliv na světě. Většina těchto odpadů obsahuje celulosu (30 - 40 %), hemicelulosu (20 - 40 %) a lignin (10 - 20 %). Proto tyto odpadní materiály mají široké použití jako substráty pro mikrobiální růst a produkci enzymů. Mikroorganismy jsou schopné využívat organické látky z odpadů jako zdroj energie pro růst a uhlík pro syntézu buněčné biomasy [24]. Jako substráty pro kultivaci mikroorganismů a následnou produkci enzymů lze využít pšeničnou a rýžovou slámu. Tuto diplomovou práci jsem zaměřila na využití odpadů z potravinářského průmyslu pro produkci enzymů pomocí mikroorganismů. Sledovalo se využití pšeničné slámy jako zdroje energie pro růst testovaných mikroorganismů a zjišťovala se jejich schopnost produkovat oxidoreduktasy resp. lakasu.V rámci práce se provedla optimalizace podmínek růstu Aureobasidium pullulans. Dále se studovala jeho lakasová aktivita. Jako substrát se používala mletá pšeničná sláma. Kultivace se prováděla v termostatu při teplotě 27°C. Provedená studie neprokázala aktivitu lakasy při kultivaci na slámě. Při optimalizaci růstu Aureobasidium pullulans se Petriho misky kontaminovaly třemi neznámými mikrooganismy. U jednoho z nich se prokázala produkce lakasy při kultivaci se slámou., The waste from agricultural and food industry are accessible in large quantity anywhere in the whole world nowadays. Most of these wastes include cellulose (30 - 40 %), hemicellulose (20 - 40 %) and lignine (10 - 20 %). Therefore these waste materials have wide use as the substrates for the microbial growth and the production of the enzymes. The microorganisms are able to use organic compounds from the wastes as the source of energy for the growth and carbon for synthesis of cellular biomass [24]. Wheat and rice straw are possible to use as the substrates for cultivation of the microorganisms and following production of the enzymes. In this thesis the utilization of the wastes from food industry for the production of the enzymes by the microorganisms was studied. We observed utilization of wheat straw as source of energy for growth of tested microorganisms and investigated their ability for the production of oxidoreductase (laccase). The optimalization of growth conditions of Aureobasidium pullulans was proceeded. Further the activity of laccase was studied. Milled wheat straw was used as the substrate. The cultivation was done in the thermoregulator at the temperature of 27°C. The activity of laccase was not found in this thesis. Petri dishes were contaminated by three unknown microoganisms during optimalization of growth of Aureobasidium pullulans. One of them produced laccase in cultivation with straw.

Studium možnosti využití odpadního papíru na mikrobiální produkci celulas bylo prováděno za pomoci kultivace Aspergillus niger na zdroji uhlíku, kterým byl odpadní kancelářský papír a karton, zvlhčený bezuhlíkatým médiem, nebo destilovanou vodou. Kultivace probíhala způsobem SSF v Erlenmeyerových baňkách a kolonách. Byla sledována koncentrace extracelulárních proteinů, jejich celulasová akivita a u vybraných vzorků i aktivita proteasová. Bylo zjištěno, že nejvýhodnějším způsobem kultivace z hlediska produkce celulas je kultivace v koloně, promývané bezuhlíkatým médiem v třídenních intervalech., Study of the employment of waste paper to microbial production of cellulase was carried out using Aspergillus niger cultivation on carbon sources that have been waste office paper and cardboard, humidified by no – carbon medium or distiled water. Cultivation took place in the SSF way in Erlenmeyer flasks and columns. Concentration of extracellular proteins, cellulase and protease activity for selected samples were monitored. It was found that the most advantageous method of cultivation in terms of cellulase activity production is the cultivation in the column washing by no – carbon medium in three day intervals.

Studium produkce hydrolytických enzymů bylo zaměřeno na produkci celulasy a polygalakturonasy pomocí dvou mikrobiálních kmenů – Aspergillus niger a Aureobasidium pullulans. Enzymy byly produkovány za podmínek procesu "solid-state fermentation". Jako substrát byla zvolena mletá pšeničná sláma a řepné výlisky zvlhčené vodou, bezuhlíkatým mediem nebo glukosovým mediem. Během kultivace byl sledován vliv bezuhlíkatého media a glukosy na produkci daných enzymů. Nejvyšší produkce polygalakturonasy bylo dosaženo při kultivaci Aspergillus niger na řepných výliscích zvlhčených bezuhlíkatým mediem. Nejvyšší produkce celulasy bylo dosaženo při kultivaci Aspergillus niger na mleté pšeničné slámě zvlhčené glukosovým mediem., The study of production of hydrolytic enzymes dealt with the production of cellulase and polygalacturonase by two microbial strains - Aspergillus niger and Aureobasidium pullulans. The enzymes were produced in solid-state fermentation system. The wheat straw and sugar beet pulp were used as a substrate. The substrates were moistened by water, mineral solution or by medium with glucose. The effect of mineral solution and glucose on production of these enzymes were monitored during cultivation. The highest production of polygalacturonase was achieved by Aspergillus niger during cultivation on sugar beet pulp moistened by mineral solution. The highest production of cellulase was achieved by Aspergillus niger during cultivation on wheat straw moistened by medium with glucose.

Studium možnosti využití odpadního papíru na mikrobiální produkci celulas bylo prováděno za pomoci kultivace Aspergillus niger na zdroji uhlíku, kterým byl odpadní kancelářský papír a karton, zvlhčený bezuhlíkatým médiem, nebo destilovanou vodou. Kultivace probíhala způsobem SSF v Erlenmeyerových baňkách a kolonách. Byla sledována koncentrace extracelulárních proteinů, jejich celulasová akivita a u vybraných vzorků i aktivita proteasová. Bylo zjištěno, že nejvýhodnějším způsobem kultivace z hlediska produkce celulas je kultivace v koloně, promývané bezuhlíkatým médiem v třídenních intervalech., Study of the employment of waste paper to microbial production of cellulase was carried out using Aspergillus niger cultivation on carbon sources that have been waste office paper and cardboard, humidified by no – carbon medium or distiled water. Cultivation took place in the SSF way in Erlenmeyer flasks and columns. Concentration of extracellular proteins, cellulase and protease activity for selected samples were monitored. It was found that the most advantageous method of cultivation in terms of cellulase activity production is the cultivation in the column washing by no – carbon medium in three day intervals.

Tato práce popisuje vlastnosti a využití odpadů rostlinného původu, které vznikají při průmyslovém zpracování, a upřesňuje jejich složení. Kultivací určitých mikroorganismů na těchto materiálech jsou produkovány enzymy, které mohou mít průmyslové využití. V experimentální části je sledována pomocí vybraných mikroorganismů produkce enzymů na použitém odpadním materiálu hroznové výlisky. Odpady, jejich zpracování a využití je a bude neustále velmi diskutované téma v naší společnosti., This thesis describes properties and utilization and specifies the composition of organic plant waste produced during industrial processing. By cultivation of specific micro-organisms from this waste material it is possible to produce enzymes that have further beneficial industrial utilization. The experimental part of this thesis deals with the production of enzymes from the applied waste material grape pomace with the help of chosen micro-organisms. Waste, its processing and utilization is and always will be a key issue in our society.

Odpady zemědělského a potravinářského průmyslu jsou v dnešní době dostupné ve velkém množství kdekoliv na světě. Většina těchto odpadů obsahuje celulosu (30 - 40 %), hemicelulosu (20 - 40 %) a lignin (10 - 20 %). Proto tyto odpadní materiály mají široké použití jako substráty pro mikrobiální růst a produkci enzymů. Mikroorganismy jsou schopné využívat organické látky z odpadů jako zdroj energie pro růst a uhlík pro syntézu buněčné biomasy [24]. Jako substráty pro kultivaci mikroorganismů a následnou produkci enzymů lze využít pšeničnou a rýžovou slámu. Tuto diplomovou práci jsem zaměřila na využití odpadů z potravinářského průmyslu pro produkci enzymů pomocí mikroorganismů. Sledovalo se využití pšeničné slámy jako zdroje energie pro růst testovaných mikroorganismů a zjišťovala se jejich schopnost produkovat oxidoreduktasy resp. lakasu.V rámci práce se provedla optimalizace podmínek růstu Aureobasidium pullulans. Dále se studovala jeho lakasová aktivita. Jako substrát se používala mletá pšeničná sláma. Kultivace se prováděla v termostatu při teplotě 27°C. Provedená studie neprokázala aktivitu lakasy při kultivaci na slámě. Při optimalizaci růstu Aureobasidium pullulans se Petriho misky kontaminovaly třemi neznámými mikrooganismy. U jednoho z nich se prokázala produkce lakasy při kultivaci se slámou., The waste from agricultural and food industry are accessible in large quantity anywhere in the whole world nowadays. Most of these wastes include cellulose (30 - 40 %), hemicellulose (20 - 40 %) and lignine (10 - 20 %). Therefore these waste materials have wide use as the substrates for the microbial growth and the production of the enzymes. The microorganisms are able to use organic compounds from the wastes as the source of energy for the growth and carbon for synthesis of cellular biomass [24]. Wheat and rice straw are possible to use as the substrates for cultivation of the microorganisms and following production of the enzymes. In this thesis the utilization of the wastes from food industry for the production of the enzymes by the microorganisms was studied. We observed utilization of wheat straw as source of energy for growth of tested microorganisms and investigated their ability for the production of oxidoreductase (laccase). The optimalization of growth conditions of Aureobasidium pullulans was proceeded. Further the activity of laccase was studied. Milled wheat straw was used as the substrate. The cultivation was done in the thermoregulator at the temperature of 27°C. The activity of laccase was not found in this thesis. Petri dishes were contaminated by three unknown microoganisms during optimalization of growth of Aureobasidium pullulans. One of them produced laccase in cultivation with straw.

Studium produkce hydrolytických enzymů bylo zaměřeno na produkci celulasy a polygalakturonasy pomocí dvou mikrobiálních kmenů – Aspergillus niger a Aureobasidium pullulans. Enzymy byly produkovány za podmínek procesu "solid-state fermentation". Jako substrát byla zvolena mletá pšeničná sláma a řepné výlisky zvlhčené vodou, bezuhlíkatým mediem nebo glukosovým mediem. Během kultivace byl sledován vliv bezuhlíkatého media a glukosy na produkci daných enzymů. Nejvyšší produkce polygalakturonasy bylo dosaženo při kultivaci Aspergillus niger na řepných výliscích zvlhčených bezuhlíkatým mediem. Nejvyšší produkce celulasy bylo dosaženo při kultivaci Aspergillus niger na mleté pšeničné slámě zvlhčené glukosovým mediem., The study of production of hydrolytic enzymes dealt with the production of cellulase and polygalacturonase by two microbial strains - Aspergillus niger and Aureobasidium pullulans. The enzymes were produced in solid-state fermentation system. The wheat straw and sugar beet pulp were used as a substrate. The substrates were moistened by water, mineral solution or by medium with glucose. The effect of mineral solution and glucose on production of these enzymes were monitored during cultivation. The highest production of polygalacturonase was achieved by Aspergillus niger during cultivation on sugar beet pulp moistened by mineral solution. The highest production of cellulase was achieved by Aspergillus niger during cultivation on wheat straw moistened by medium with glucose.