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One of the recognized issues in prostate cancer research is the lack of animal models allowing the research of pathological, biochemical, and genetic factors in immunocompetent animals. Our research group has successfully employed the gerbil in several studies for prostate diseases. In the present work, we aimed to analyze the effect of chronic bacterial inflammation on N-methyl-N-nitrosourea (MNU)-induced prostate carcinogenesis in gerbils. Histopathological assessment of the prostatic complex revealed that treatment combinations with MNU plus testosterone or bacterial infection resulted in a promotion of prostate cancer, with bacterial inflammation being more effective in increasing premalignant and malignant tissular alterations than testosterone in the prostate. Furthermore, chronic bacterial inflammation itself induced premalignant lesions in the ventral lobe and increased their frequency in the dorsolateral lobe as well as malignant lesions in the ventral prostate. These animals showed a rich inflammatory microenvironment, characterized as intraluminal and periductal foci. These data indicate that chronic inflammation induced by Escherichia coli acts as a potent tumor promoter, in the early stages of carcinogenesis in the gerbil, in line with the hypothesis of inflammation supporting several steps of tumor development in the prostate gland. Fil: Quintar, Amado Alfredo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba;Facultad de Ciencias Médicas;Cátedra de Bioquímica Molecular; ; Argentina Fil: Gonçalves, Bianca F.. Universidade Estadual Paulista Julio de Mesquita Filho; Brasil Fil: Taboga, Sebastião R.. Universidade Estadual Paulista Julio de Mesquita Filho; Brasil Fil: Maldonado, Cristina Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba;Facultad de Ciencias Médicas;Cátedra de Bioquímica Molecular; ; Argentina

The prostate gland is a strictly androgen-dependent organ which is also the main target of infectious and inflammatory diseases in the male reproductive tract. Host defenses and immunity of the gland have unique features to maintain a constant balance between response and tolerance to diverse antigens. In this context, the effects of reproductive hormones on the male tract are thus complex and have just started to be defined. From the classical description of “the prostatic antibacterial factor,” many host defense proteins with potent microbicidal and anti-tumoral activities have been described in the organ. Indeed, it has been proposed a central role for resident cells, that is, epithelial and smooth muscle cells, in the prostatic response against injuries. However, these cells also represent the target of the inflammatory damage, leading to the development of a Proliferative Inflammatory Atrophy-like process in the epithelium and a myofibroblastic-like reactive stroma. Available data on androgen regulation of inflammation led to a model of the complex control, in which the final effect will depend on the tissue microenvironment, the cause of inflammation, and the levels of androgens among other factors. In this paper, we review the current scientific literature about the inflammatory process in the gland, the modulation of host defense proteins, and the influence of testosterone on the resolution of prostatitis. Fil: Quintar, Amado Alfredo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina Fil: Maldonado, Cristina Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina

Prostatic smooth muscle cells (pSMCs) differentiation is a key factor for prostatic homeostasis, with androgens exerting multiple effects on these cells. Here, we demonstrated that the myodifferentiator complex Srf/Myocd is up-regulated by testosterone in a dose-dependent manner in primary cultures of rat pSMCs, which was associated to the increase in Acta2, Cnn1, and Lmod1 expressions. Blocking Srf or Myocd by siRNAs inhibited the myodifferentiator effect of testosterone. While LPS led to a dedifferentiated phenotype in pSMCs, characterized by down-regulation of Srf/Myocd and smooth muscle cell (SMC)-restricted genes, endotoxin treatment on Myocd-overexpressing cells did not result in phenotypic alterations. Testosterone at a physiological dose was able to restore the muscular phenotype by normalizing Srf/Myocd expression in inflammation-induced dedifferentiated pSMCs. Moreover, the androgen reestablished the proliferation rate and IL-6 secretion increased by LPS. These results provide novel evidence regarding the myodifferentiating role of testosterone on SMCs by modulating Srf/Myocd. Thus, androgens preserve prostatic SMC phenotype, which is essential to maintain the normal structure and function of the prostate. Fil: Leimgruber, Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina Fil: Quintar, Amado Alfredo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina Fil: Peinetti, Nahuel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina Fil: Scalerandi, María Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina Fil: Nicola, Juan Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina Fil: Miano, Joseph M.. University of Rochester. School of Medicine and Dentistry; Estados Unidos Fil: Maldonado, Cristina Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina

Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2020 El sistema inmune adaptativo es un componente esencial del sistema inmunológico que permite la inducción de una respuesta específica y de memoria contra antígenos determinados. Entre los principales actores que median este tipo de respuesta se encuentran los linfocitos T CD4+ y CD8+, los cuales se desarrollan y diferencian en timo, y se activan en periferia al contactar a través de su receptor de células T (TCR) a su antígeno (Ag) específico en el contexto de una molécula del Complejo Mayor de Histocompatibilidad (MHC), adquiriendo marcadores de activación y memoria, y generando una respuesta efectora con la finalidad de eliminar el agente extraño. Sin embargo, hace algunos años se describió que en órganos linfáticos secundarios (OLS) de animales WT no expuestos a antígenos, existía entre un 10-15% de células T CD8+ que presentaban un fenotipo similar al de memoria (CD44hi CD122+) con capacidad de producir interferón gamma (IFN) de manera rápida frente a estímulos innatos, independientemente de la señalización del TCR. En base a estas características y a su similitud con células de memoria convencional dependientes de antígeno, estas células fueron designadas originalmente como: “células T CD8+ innatas”, “células con fenotipo de memoria”, “células de memoria innata” (IM, por Innate memory cells) a las presentes en timo o “células de memoria virtual” (VM, por virtual memory cells) a las presentes en periferia. Inicialmente, las células T CD8+ innatas fueron identificadas en timo de animales transgénicos que carecían de la expresión de distintas moléculas involucradas en la señalización a través del TCR. Desde entonces, muchos autores se han abocado a su estudio y a determinar diversas señales que pudieran ser importantes en la inducción de esta población, principalmente en timo (células IM, por innate memory cells). Hoy se sabe que estas células también pueden originarse en OLS, sin embargo, su origen y desarrollo en periferia (células VM) aún es controversial. En este trabajo de tesis aportamos evidencias de la distribución diferencial de las células VM en distintos OLS de animales WT portadores de tumor en condiciones normales y evaluamos además las alteraciones que esta población sufre en un contexto inflamatorio sistémico tipo T cooperador o “helper” (Th)-1 mediado por la expresión de interleuquina (IL-)12 e IL-18. Observamos en animales, que la inyección hidrodinámica (IH) de los plásmidos de expresión de IL-12 e IL-18, logra incrementar la población VM CD122+ en ambos OLS (bazo y ganglio drenante de tumor) y más aún, dentro del tumor, siendo la población CD8+ de memoria preponderante en este tejido, comparado a lo observado en animales libres de estímulo (controles no estimulados con IL-12 e IL-18). Este resultado, a su vez, estuvo correlacionado con un efectivo control del crecimiento del tejido neoplásico, sugiriendo un posible rol de las células T CD8+ innatas en la respuesta antitumoral. Utilizando modelos de animales transgénicos determinamos el aporte de citoquinas como IL-4 e IFNs tipo-I en la adquisición del fenotipo innato en periferia (expresión de Eomesodermina (Eomes) y CD122) y un posible rol de IFN en la expansión de las células VM en OLS y dentro del tumor, principalmente en el contexto de una respuesta pro-inflamatoria. Constanza Savid-Frontera Nuestros datos en animales enriquecidos en células T CD8+ Ag-independientes (animales con células T CD8+ portadoras de TCRs transgénicos para el Ag OVA), demuestran que en un contexto donde prima la respuesta de células T CD8+ no específica del TCR, un proceso pro-inflamatorio es capaz de inducir una respuesta antitumoral eficaz al igual que en un sistema policlonal (animales WT). Más aun, el estímulo con IL-12 e IL-18 en estos animales favorecería el establecimiento de una interacción entre estas células y las células tumorales e incrementaría la respuesta funcional de las células innatas, la cual podría estar siendo mediada por receptores de muerte, como NKG2D, de manera independiente al reconocimiento de un antígeno vía TCR. Los resultados obtenidos en esta tesis doctoral aportan evidencias en la inducción y distribución de las células T CD8+ innatas en periferia, de las alteraciones que estos parámetros sufren durante respuestas inflamatorias sistémicas de tipo Th1 y del posible rol de las células de memoria virtual en la respuesta antitumoral. 2022-08-31 Fil: Savid Frontera, Constanza. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina Fil: Rodríguez Galán, María Cecilia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Fil: Rodríguez Galán, María Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Fil: Stempin, Cinthia Carolina. Universidad Nacional de Córdoba. Faculta de Ciencias Químicas; Argentina. Fil: Stempin, Cinthia Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Fil: Maldonado, Cristina Alicia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas; Argentina. Fil: Maldonado, Cristina Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Fil: Fuertes, Mercedes Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Fil: Gil, Germán Alejandro. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica; Argentina. Fil: Gil, Germán Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina.

Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2018 RESUMEN El cáncer de tiroides es la malignidad más común del sistema endócrino. Todos los tipos de carcinomas tiroideos, excepto el carcinoma medular, derivan de las células foliculares. El cáncer diferenciado es la forma más frecuente de las neoplasias tiroideas e incluye el carcinoma papilar (70-80%) y el carcinoma folicular (10-15%), que suelen relacionarse con buen pronóstico. En contraposición, los carcinomas anaplásicos (2-5%) son altamente malignos, invaden rápidamente tejidos adyacentes y metastatizan a distancia. El 70% de los carcinomas papilares (PTCs) posee alteraciones somáticas que comandan la activación de genes efectores de la vía de señalización de proteínas quinasas activadas por mitógenos (MAPKs), incluyendo mutaciones puntuales de los genes BRAFy RAS,así como rearreglos cromosómicos que implican al RETy NTRK,siendo el evento genético observado con mayor frecuencia la mutación BRAFv600E (30-80%). Por otro lado, los receptores tipo toll (TLRs) que se identificaron originalmente en células del sistema inmune, constituyen una familia de moléculas de superficie y citoplasmáticas capaces de reconocer componentes microbianos o moléculas endógenas. Creciente evidencia sugiere que la señalización desregulada de los TLRspromueve señales de supervivencia que favorecen la progresión turnoral. En coincidencia, en el presente trabajo evidenciamos un aumento de la expresión de TLR4 en carcinomas tiroideos diferenciados respecto al tejido tiroideo normal. Hemos identificado un incremento de TLR4en metástasis a nódulos linfáticos de PTCsrespecto a muestras apareadas de tumores primarios. Además, encontramos niveles incrementados de TLR4 en tejidos de PTCs derivados de ratones transgénicos Tg_BRAFV600E(que poseen actividad oncogénica BRAFv600Edirigida específicamente al tejido tiroideo). Observamos que niveles incrementados de expresión de TLR4 se asocian con menor supervivencia libre de enfermedad en pacientes con PTCsque albergan la mutación BRAFv600EP.or otro lado, nuestros resultados indican que la proteína de unión a Ets 1 (ETS1)es un factor de transcripción esencial para inducir la sobreexpresión de TLR4 en dependencia de la vía de señalización de MAPK/ERK estimulada por el oncogén BRAFv600E. La activación crónica del sistema inmune y la respuesta tisular a través del reconocimiento de patógenos o ligandos endógenos mediado por TLRs, generarían un microambiente rico en factores de crecimiento y de supervivencia que se relaciona con el desarrollo de procesos neoplásicos. Todos los TLRs señalizan a través de la activación del factor de transcripción NF-KB. La actividad de NF-KB está constitutivamente elevada en numerosas neoplasias humanas y generalmente es asociada a mal pronóstico. Se demostró que el comportamiento invasivo y la resistencia a la apoptosis en células tiroideas transformadas por la actividad oncogénica de BRAFv600Eson mediados por la activación de NF-KB. En correspondencia, en el presente trabajo hemos evidenciado que la estimulación del receptor TLR4 incrementa la actividad transcripcional de NF-KBe induce la expresión de genes de respuesta inflamatoria, demostrando que la vía de señalización TLR4/MyD88/IKBa/ NF-KB se encuentra funcionalmente conservada en modelos celulares de cáncer de tiroides que albergan la mutación BRAFv600E. Numerosos reportes han evidenciado una interacción cruzada entre TLR4 y el Receptor del Factor de Crecimiento Epidérmico (EGFR), donde agonistas de TLR4 son capaces de activar el señalamiento de EGFR independientemente de su ligando (efecto referido como transactivación). En el presente trabajo hemos identificado que EGFRse encuentra diferencialmente incrementado en PTCs que albergan el oncogén BRAFv600E. Además, demostramos el efecto de transactivación de EGFRa través de la activación de TLR4 en modelos celulares de cáncer tiroideo BRAFv600Epositivos. En concordancia, observamos que niveles incrementados de expresión de TLR4 se correlacionan con niveles aumentados de EGFRen pacientes con PTCsque albergan la mutación BRAFv600EN.uestros resultados sugieren la adquisición de una potencial hipersensibilidad a estímulos endógenos y exógenos para ambos receptores en el cáncer tiroideo, complejizando los efectos mediados por TLR4 en función de los niveles de expresión de EGFR. En conjunto, nuestros datos indican que la sobreexpresión funcional de TLR4 es una consecuencia de la desregulación de la señalización MAPK/ERK/ETSl inducida por oncogenes promotores de cáncer tiroideo. Considerando el potencial oncogénico de la activación aberrante de la señalización de NF-KBen la promoción del crecimiento tumoral tiroideo y la asociación de niveles incrementados de TLR4 con tumores más agresivos, nuestros resultados sugieren un rol pro-oncogénico de TLR4 en la tumorigénesis tiroidea, dando la base molecular tanto para el diseño de herramientas diagnósticas capaces de identificar carcinomas tiroideos potencialmente más agresivos como para el desarrollo de nuevas modalidades terapéuticas que redunden en el beneficio de los pacientes Fil: Peyret, Victoria. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Fil: Masini de Repiso, Ana María de las Mercedes. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Fil: Masini de Repiso, Ana María de las Mercedes. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Fil: Maccioni, Mariana. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Fil: Maccioni, Mariana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Fil: Maldonado, Cristina Alicia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas; Argentina. Fil: Maldonado, Cristina Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Fil: Montesinos, María Del Mar. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Fil: Montesinos, María del Mar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Fil: Rivolta, Carina Marcela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina; Argentina. Fil: Rivolta, Carina Marcela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentina.

Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2019 Las células T regulatorias (Treg), una subpoblación de linfocitos T (LT) CD4+, son fundamentales para el mantenimiento de la tolerancia inmune hacia antígenos propios y ejercen múltiples funciones regulatorias y supresoras sobre diferentes poblaciones celulares. Las células Treg expresan constitutivamente el factor de transcripción Foxp3, las moléculas CD25 (cadena α del receptor de IL-2), CTLA-4, GITR, entre otras. Numerosos datos experimentales indican que las células Treg tienen una función impedida o alterada en diferentes enfermedades autoinmunes e inflamatorias. En el presente trabajo de tesis investigamos si ratones no obesos diabéticos (NOD), una cepa de ratón que desarrolla espontáneamente diversos procesos autoinmunes como diabetes tipo 1, tiroiditis, sialoadenitis y prostatitis con la edad, tienen una falla en las cantidades y/o funcionalidad de esta población celular. Para ello se realizó un estudio comparativo de la población células Treg en ratones NOD, C57BL/6 (B6), y BALB/c de 4-6 semanas de edad, previo a toda manifestación autoinmune reportada en la cepa NOD. Al comparar la proporción y los números absolutos de células Treg CD4+Foxp3+ en las diferentes cepas en estudio, se observó que, en condiciones basales, sin estimulación y a edades tempranas, ratones de la cepa NOD mostraron menores cantidades de células Treg y menor expresión de Foxp3 en órganos linfoides secundarios y en timo. En ensayos clásicos de inhibición de la proliferación de LT convencionales, observamos que células Treg de ratones NOD tenían menor capacidad supresora y por ende menor funcionalidad. Las diferencias no sólo fueron observadas en estado basal, sino también luego de la estimulación in vitro de las mismas. Tras la estimulación vía TCR en presencia de IL-2, células Treg esplénicas purificadas de ratones NOD mostraron una respuesta débil a IL-2 en comparación a células Treg de ratones B6 y BALB/c, observándose baja expresión de Foxp3, con grados de proliferación menores. Además, luego de la activación in vitro, se observó que expresaban bajos niveles de moléculas relacionadas con su función y activación tales como CD25, LAP-1, CD39, PD-1, PD-L1 y LAG-3. De manera interesante, cuando células Treg fueron cultivadas por tres días con anti-CD3/CD28 en ausencia o presencia de IL-2, células Treg de ratones NOD mostraron ser más dependientes de IL-2 para mantener la expresión de Foxp3, convirtiéndose en células productoras de IFN-γ e IL-17 más fácilmente que células Treg de las demás cepas. En estudios de inducción de pSTAT5, células Treg de ratones NOD mostraron los niveles más bajos de expresión de este factor comparado con células Treg de B6 y BALB/c. Por otra parte, en el presente trabajo reportamos por primera vez que células Treg de ratones NOD exhiben diferencias en la expresión de SOCS3, GRAIL y OTUB-1, factores involucrados en la regulación de la señalización de IL-2. Tanto en condiciones basales como luego de la activación, células Treg de ratones NOD mostraron niveles de expresión más altos de OTUB-1 y niveles más bajos de GRAIL que el resto de las cepas. Por otro lado, en las células Treg de los ratones NOD se observaron diferencias en la expresión de una ubicuitina ligasa E3 y una desubicuitina tales como STUB-1 y USP7, respectivamente, enzimas que se ha demostrado que participan en la degradación proteosomal de la proteína Foxp3. Así, en células Treg de ratones NOD se observó alta expresión de STUB-1 tanto en condiciones basales como después de la estimulación y expresión nula de USP7 en condiciones basales. Por lo tanto, en el presente trabajo reportamos menores cantidades y funcionalidad junto con expresión diferencial de SOCS3, GRAIL/OTUB-1 y STUB1/USP7 en células Treg de ratones NOD, moléculas que afectan la señalización de IL-2 y la estabilidad de Foxp3. Todos estos hallazgos podrían estar relacionados con la insuficiencia de las células Treg para regular la tolerancia a lo propio observada en los ratones de la cepa NOD. 2021-12-31 Godoy, Gloria Janet. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Rivero, Virginia Elena. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Montes, Carolina Lucia Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Maldonado, Cristina Alicia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Nores, Gustavo Alejandro. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina. Docena, Guillermo Horacio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; Argentina.

Tesis (Doctor en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2018 Uno de los últimos grandes avances en la evolución de los vertebrados fue el advenimiento de los ganglios linfáticos y la formación de centros germinales en los mamíferos placentarios. Los centros germinales, estructuras microanatómicas transientes e increíblemente dinámicas, son el escenario de expansión clonal de linfocitos B, diversificación de inmunoglobulinas y maduración de la afinidad; todos eventos claves para la generación de anticuerpos de alta afinidad que conforman el núcleo fuerte de la respuesta inmune humoral. Los linfocitos B que experimentan la reacción de centro germinal se diferencian finalmente a células plasmáticas de larga vida o a linfocitos B de memoria y expresan un repertorio de anticuerpos altamente seleccionado, con mayor afinidad por el antígeno, fenómeno conocido como maduración de la afinidad. El gran número de interacciones moleculares y celulares que se suscitan en los centros germinales no solo tiene como objetivo la generación de clones altamente afines para un antígeno extraño, sino también la eliminación de aquellos clones que puedan reaccionar contra antígenos propios. Esto presenta un gran desafío para el organismo, ya que la aparición de células autorreactivas puede conducir a la generación de autoanticuerpos capaces de unirse a componentes propios, con la consecuente afectación y destrucción de órganos y tejidos. Por tal motivo, resulta imprescindible comprender la complejidad de interacciones celulares y moleculares involucrados en la reacción de centro germinal para intervenir, en consecuencia, eficientemente. En los últimos años, se han dedicado cada vez más esfuerzos al estudio de las galectinas, una familia de proteínas de unión a glicanos conservadas evolutivamente implicadas en una amplia variedad de procesos diológicos, incluida la modulación del sistema inmune. En particular, Galectina-3, surge como una proteína involucrada en la respuesta inmune regulando y modificando el comportamiento tanto de células del sistema inmune innato como del sistema inmune adaptativo. Los resultados obtenidos en esta tesis doctoral proporcionan la primera evidencia de la participación de Salectina-3 como molécula clave en la reacción de centro germinal. En comparación con ratones wild-type, los ratones deficientes en Galectina-3 generan centros germinales espontáneos, mayor porcentaje de células secretantes de anticuerpos e hipergammaglobulinemia, niveles excesivamente elevados de IFN=y en suero y zesarrollan una enfermedad autoinmune de características similares al lupus. IFN-y resulta fundamental para miucir y mantener estas alteraciones puesto que el bloqueo del mismo, en ratones deficientes en Galectina-3, “etuce la formación espontánea de centros germinales y la producción de autoanticuerpos previniendo, así, la zazología renal. A su vez, el uso de ratones quimera de médula ósea permitió evidenciar que la señalización intrínseca de Galectina-3 en los linfocitos B controla la formación espontánea de centros germinales. Te esta forma, los resultados expuestos en esta tesis, integrados junto a reportes previos, demuestran una dssendencia completa entre la presencia de centros germinales espontáneos autorreactivos e IFN-y en ratones B==centes en Galectina-3. Se revela así, un nuevo rol de Galectina-3 en la modulación de la respuesta inmune humoral, poniendo de manifiesto el potencial de esta vía para el diseño de terapias específicas en enfermedades autoinmunes mediadas por autoanticuerpos. Palabras clave: Centros Germinales; Autoinmunidad; Galectina-3; IFN-y, Lupus om N £ Q0 2 2020-12-31 Beccaria , Cristian Gabriel. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Gruppi, Adriana. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Rodríguez Galán, María Cecilia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Maldonado, Cristina Alicia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Guido, Mario Eduardo. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina. Arana, Eloisa Irene. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentina.

Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2016. El timo es un órgano linfático primario de gran importancia para el sistema inmune ya que en él ocurre el desarrollo y diferenciación de los timocitos que van a constituir las células T, una de las poblaciones principales de la inmunidad adaptativa. El estudio del sistema inmune es muy complejo y continuamente existen reportes de nuevas células que participan en el desarrollo de la inmunidad y funciones de las mismas. Hace algunos años se describió la existencia de un grupo de células con características innatas, que derivan, al igual que las células T convencionales, de un timocito doble positivo. Se las llama “células innatas” porque presentan un fenotipo de memoria y al ser estimuladas producen rápidamente una gran cantidad de citoquinas de manera Ag-independiente. En particular se ha descripto una población de células T CD8+ innatas que se desarrollan en animales con diferentes deficiencias genéticas en ciertas quinasas involucradas en la vía de señalización del TCR, presentan una gran diversidad en el repertorio de TCR al igual que las células T convencionales, presentan un fenotipo similar al de memoria (CD44hiCD122hi) y producen rápidamente IFNγ al ser estimuladas. Estas células podrían participar en la primera línea de defensa junto al sistema inmune innato, antes de la generación de respuesta específica (inmunidad adaptativa). Han sido reportadas tanto en animales como en humanos y a su vez en situaciones patológicas como en cáncer. Sin embargo, es una población que está en estudio y de la cual no se dispone de tantos reportes en la actualidad. En este trabajo de tesis estudiamos el desarrollo de células T CD8+ innatas en modelos experimentales patofisiológicos que cursan con un fuerte componente Th1 y una gran producción de IL-12 más IL-18 en la etapa aguda. Los modelos experimentales utilizados son: infección con el parásito Trypanosoma cruzi, el hongo Candida albicans y la expresión sistémica de IL-12 mas IL-18 mediante inyección hidrodinámica. Los resultados obtenidos durante los diferentes procesos infecciosos/inflamatorios tipo Th1 demostraron que el timo sufre diversos cambios, entre ellos, alteraciones morfológicas (como atrofia tímica), cambios en el microambiente de citoquinas y en la diferenciación de los timocitos. Observamos que hay un incremento significativo de timocitos SP CD8+ CD44hi que poseen un fenotipo similar al de una célula de memoria. Más aún, demostramos que estas células son células T CD8+ innatas. Su desarrollo en timo se ve favorecido por la alta producción de IL-4 e IL-15 que hemos detectado en el microambiente tímico durante estos procesos, que provoca el incremento en la expresión del factor de transcripción Eomesodermina (Eomes) y el desvío de la diferenciación de timocitos convencionales hacia el innatos. Éstas células SP CD8+ CD44hi Eomes+ innatas son grandes productoras de IFNγ y poseen propiedades citotóxicas caracterizadas por la elevada expresión de NKG2D y CD107a. Mediante experimentos de transferencia adoptiva describimos que los timocitos SP CD8+ CD44hi innatos ejercen un efecto protectivo durante la infección con T. cruzi aumentando la sobrevida de los animales frente al parásito. Los resultados obtenidos en esta tesis doctoral aportan evidencias en la caracterización y desarrollo de las células T CD8+ innatas en condiciones patofisiológicas y su posible rol en infecciones que producen respuestas de tipo Th1, en particular la infección con T. cruzi. Baez, Natalia Soledad. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Rodríguez Galan, María Cecilia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Motran, Claudia Cristina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Maldonado, Cristina Alicia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Roth, German Alfredo. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica; Argentina. Pérez, Ana Rosa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Inmunología Clínica y Experimental de Rosario; Argentina.

La próstata es un órgano perteneciente al aparato reproductor masculino, tiene como función aportar el líquido prostático al semen para contribuir a la viabilidad de los espermatozoides. Estudios de nuestro laboratorio demostraron que la testosterona, además de su capacidad para inducir sobrevida celular, presenta un rol homeostático en situaciones de injuria de la próstata como es el caso de la inflamación bacteriana. Los mecanismos mediante los cuales testosterona es capaz de activar esta serie de procesos homeostáticos son hasta la actualidad desconocidos. Se ha descripto que la señalización de testosterona puede dividirse en dos grandes grupos: las vías genómicas y las vías no genómicas (VNG) de señalización. El rol de las VNG y sus mecanismos han sido menos estudiados y hasta esta tesis doctoral, su presencia en células musculares lisas prostáticas (CMLp) no había sido investigada. Las células estromales, entre ellas las CMLp, son indispensables para el desarrollo de la próstata y cumplen un rol primordial durante las patologías de la glándula. Por esta razón en esta tesis doctoral nos planteamos el objetivo de determinar el rol de las VNG de testosterona en células estromales prostáticas. Los resultados de esta tesis demostraron que las CMLp de rata in vitro presentan receptores clásicos de andrógenos (AR) en la superficie celular. La estimulación de estos receptores por testosterona indujo la activación de VNG provocando un incremento de la proliferación que fue acompañado por una disminución en la expresión del ARNm para TGFβ, efectos que no se reprodujeron al estimular ambas vías de señalización en simultáneo. A su vez la estimulación de las VNG también indujo un incremento en la expresión de ARNm para IGF-1 y FGF7, al mismo tiempo que un aumento en la expresión de proteínas contráctiles. En concordancia, en ensayos llevados a cabo en células estromales prostáticas humanas in vitro, se demostró que las VNG de testosterona son capaces de inducir un aumento en la proliferación celular hasta niveles mayores a los inducidos por la propia testosterona. En contraparte, la estimulación de receptores de superficie para testosterona en CMLp, no reprodujo el efecto regulador sobre la respuesta inflamatoria anteriormente demostrado en nuestro laboratorio. En conclusión, nuestros resultados proponen efectos diferenciales frente a la estimulación con testosterona dependiendo de la vía estimulada y demuestran la importancia de las VNG de testosterona en células estromales de la próstata, aportando evidencias importantes al campo de la señalización inducida por andrógenos. The prostate is an organ belonging to the male reproductive system; its function is to provide prostatic fluid to the semen to contribute to the viability of sperm. Studies from our laboratory showed that testosterone, in addition to its ability to induce cell survival, has a homeostatic role in situations of injury in the prostate, such as bacterial inflammation. The mechanisms by which testosterone is able to activate these series of homeostatic processes are still unknown. It has been described that testosterone signaling can be divided into two major groups: genomic pathways and non-genomic pathways (NGP). The role of NGP and its mechanisms have been less studied and until this doctoral thesis its presence in prostatic smooth muscle cells (pSMC) had not been investigated. Stromal cells, including pSMC, are essential for the development of the prostate and play a key role during the pathologies of the gland. For this reason in this doctoral thesis we aimed to determine the role of NGP induced by testosterone in prostatic stromal cells. The results from this thesis showed that rat pSMC in vitro present classic androgen receptors (AR) on the cell surface. The stimulation of these receptors by testosterone induced the activation of NGP causing an increase in proliferation that was accompanied by a decrease in mRNA expression for TGFβ, effects that were not reproduced by stimulating both signaling pathways simultaneously. In turn, the stimulation of the NGP also induced an increase in the expression of mRNA for IGF-1 and FGF7 at the same time as an increase in the expression of contractile proteins. In agreement, in experiments carried out on human prostatic stromal cells in vitro, it was demonstrated that testosterone NGP are able to induce an increase in cell proliferation reaching higher levels than those induced by testosterone itself. In contrast, the stimulation of surface receptors for testosterone in pSMC did not reproduce the regulatory effect on the inflammatory response previously demonstrated in our laboratory. In conclusion, our results propose differential effects of testosterone response depending on the pathway stimulated and demonstrate the importance of testosterone NGP in stromal cells of the prostate, providing important evidence in the field of androgeninduced signaling. Fil: Peinetti, Nahuel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electrónica; Argentina

Neutrophils are major effectors of acute inflammation against infection and tissue damage, with ability to adapt their phenotype according to the microenvironment. Although sex hormones regulate adaptive immune cells, which explains sex differences in immunity and infection, little information is available about the effects of androgens on neutrophils. We therefore aimed to examine neutrophil recruitment and plasticity in androgen-dependent and -independent sites under androgen manipulation. By using a bacterial model of prostate inflammation, we showed that neutrophil recruitment was higher in testosterone-treated rats, with neutrophil accumulation being positively correlated to serum levels of testosterone and associated to stronger inflammatory signs and tissue damage. Testosterone also promoted LPS-induced neutrophil recruitment to the prostate, peritoneum, and liver sinusoids, as revealed by histopathology, flow cytometry, and intravital microscopy. Strikingly, neutrophils in presence of testosterone exhibited an impaired bactericidal ability and a reduced myeloperoxidase activity. This inefficient cellular profile was accompanied by high expression of the anti-inflammatory cytokines IL10 and TGFβ1, which is compatible with the "N2-like" neutrophil phenotype previously reported in the tumor microenvironment. These data reveal an intriguing role for testosterone promoting inefficient, anti-inflammatory neutrophils that prolong bacterial inflammation, generating a pathogenic environment for several conditions. However, these immunomodulatory properties might be beneficially exploited in autoimmune and other non-bacterial diseases. Fil: Scalerandi, María Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopía Electrónica; Argentina Fil: Peinetti, Nahuel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopía Electrónica; Argentina Fil: Leimgruber, Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopía Electrónica; Argentina Fil: Cuello Rubio, Mariana Micaela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopía Electrónica; Argentina Fil: Nicola, Juan P.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina Fil: Menezes, Gustavo B.. Universidade Federal de Minas Gerais; Brasil Fil: Maldonado, Cristina Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopía Electrónica; Argentina Fil: Quintar, Amado Alfredo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopía Electrónica; Argentina

Galectins, a family of animal lectins characterized by their affinity for N-acetyllactosamine-enriched glycoconjugates, modulate several immune cell processes shaping the course of innate and adaptive immune responses. Through interaction with a wide range of glycosylated receptors bearing complex branched N-glycans and core 2-O-glycans, these endogenous lectins trigger distinct signaling programs thereby controling immune cell activation, differentiation, recruitment and survival. Given the unique features of mucosal inflammation and the differential expression of galectins throughout the gastrointestinal tract, we discuss here key findings on the role of galectins in intestinal inflammation, particularly Crohn´s disease, ulcerative colitis, and celiac disease (CeD) patients, as well as in murine models resembling these inflammatory conditions. In addition, we present new data highlighting the regulated expression of galectin-1 (Gal-1), a proto-type member of the galectin family, during intestinal inflammation in untreated and treated CeD patients. Our results unveil a substantial upregulation of Gal-1 accompanying the anti-inflammatory and tolerogenic response associated with gluten-free diet in CeD patients, suggesting a major role of this lectin in favoring resolution of inflammation and restoration of mucosal homeostasis. Thus, a coordinated network of galectins and their glycosylated ligands, exerting either anti-inflammatory or proinflammatory responses, may influence the interplay between intestinal epithelial cells and the highly specialized gut immune system in physiologic and pathologic settings. Fil: Sundblad, Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina Fil: Quintar, Amado Alfredo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba; Argentina Fil: Morosi, Luciano Gastón. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina Fil: Niveloni, Sonia I.. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Gastroenterología "Dr. Carlos B. Udaondo"; Argentina Fil: Cabanne, Ana. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Gastroenterología "Dr. Carlos B. Udaondo"; Argentina Fil: Smecuol, Edgardo. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Gastroenterología "Dr. Carlos B. Udaondo"; Argentina Fil: Mauriño, Eduardo. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Gastroenterología "Dr. Carlos B. Udaondo"; Argentina Fil: Mariño, Karina Valeria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina Fil: Bai, Julio C.. Universidad del Salvador; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Gastroenterología "Dr. Carlos B. Udaondo"; Argentina Fil: Maldonado, Cristina Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba; Argentina Fil: Rabinovich, Gabriel Adrián. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina

Fil: Bianchi, Mariana. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. Las endotelinas (ET) son moléculas con importantes funciones en procesos fisiológicos y fisiopatológicos. Sus roles fueron analizados tanto en colon normal como en el patológico, incluyendo además el estudio de los péptidos natriuréticos (NP) ANP y CNP. ET-1 es la principal isoforma en el colon distal, mientras que la ET-2 predomina en el segmento proximal. El principal receptor de endotelinas es ETB, localizado principalmente en los núcleos de células de la mucosa. El receptor ETA exhibe niveles débiles de expresión génica aunque presenta una amplia localización. Los resultados revelaron que tanto las ET como los NP exhiben una distribución que permite postular que estarían involucrados en el mantenimiento de las propiedades mecánicas de las criptas de colon. Para la inducción del cáncer colorrectal murino (CCR), se utilizaron azoximetano y sulfato de sodio dextrano. Las muestras se tomaron en la cuarta, octava, decimosexta y vigésima semana. La progresión tumoral, generada principalmente en el colon distal, se observó mediante técnicas histológicas. Además, se utilizó microscopía de generación de segundo armónico, para analizar la disposición de las fibras de colágeno en la matriz extracelular. En el CRC, el hallazgo más relevante es la remisión temprana de la expresión de ET-2 en el colon distal. Aunque ET-1 no mostró modificaciones relevantes, hubo un aumento en la expresión de ETA y una disminución del receptor de depuración, ETB, que podría potenciar la actividad de ET-1. El CNP mostró aumentos sostenidos en su expresión, lo que sugiere que podría actuar contrarrestando los roles de las ET. Endothelins (ET) are molecules with important roles in physiological and pathophysiological processes. Their roles were analyzed both in normal and pathological colon. The study of the natriuretic peptides (NP) ANP and CNP, their natural antagonists, was included. ET-1 is the major isoform found in the distal colon, while ET-2 predominates in the proximal segment. The main endothelin receptor is ETB, which is mainly located in the nuclei of mucosal cells. The ETA receptor exhibits weak levels of gene expression although depicts a widespread localization. In summary, the results revealed that both ET and NP exhibit a distribution that allows postulating that they would be involved in maintaining the mechanical properties of the colon crypts. For the induction of murine colorectal cancer (CRC), azoxymethane and dextran sodium sulfate were used. Samples were taken at the fourth, eighth, sixteenth and twentieth weeks. The tumor progression, mainly generated in the distal colon, was observed by classical histological techniques. Also, second harmonic generation microscopy, was used to analyze the collagen fibers arrangement in the extracellular matrix. In the induced CRC, the ET profile exhibit differential changes in its expression levels. The most relevant finding is the early ET-2 expression remission in the distal colon. While ET-1 did not exhibit relevant modifications, there was an increase in the ETA expression and a decrease in the clearance receptor, ETB, that could enhance ET-1 activity. CNP showed sustained increases in gene expression in distal colon, suggesting that it could act counteracting the roles of ET family. Universidad Nacional de Entre Ríos Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas

Androgen signaling in prostate smooth muscle cells (pSMCs) is critical for the maintenance of prostate homeostasis, with its alterations being a central aspect in the development of pathological conditions. Testosterone can act through the classical androgen receptor (AR) in the cytoplasm eliciting genomic signaling, or through different types of receptors located at the plasma membrane for nongenomic signaling. We here aimed to evidence nongenomic testosterone-signaling mechanisms in pSMCs and their participation in cell proliferation, differentiation, and the modulation of the response to lipopolysaccharide. We demonstrated that pSMCs can respond to testosterone by a rapid activation of ERK1/2 and Akt. Furthermore, a pool of ARs localized at the cell surface of pSMCs is responsible for a nongenomic testosterone-induced increase in cell proliferation. Through membrane receptor stimulation, testosterone favors a muscle phenotype, evidenced trough an increase in smooth muscle markers. In addition, we showed that the anti-inflammatory effects of testosterone, capable of attenuating lipopolysaccharide-induced proinflammatory actions, are promoted only by receptors located inside the cell. We postulate that testosterone might perform pro-homeostatic effects through intracellular-initiated mechanisms, by modulating cell proliferation and inflammation, while some pathological, hyperproliferative actions would be induced by membrane-initiated nongenomic signaling in pSMCs. Fil: Peinetti, Nahuel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina Fil: Scalerandi, María Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina Fil: Cuello Rubio, Mariana Micaela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina Fil: Leimgruber, Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina Fil: Nicola, Juan Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina Fil: Torres, Alicia Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina Fil: Quintar, Amado Alfredo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina Fil: Maldonado, Cristina Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina

Candida albicans is the prevalent etiological agent in acute vulvovaginal infection and the most severe chronic condition known as recurrent vulvovaginal candidiasis (VVC). A critical role of local innate immunity in defense and pathogenesis of vaginal infection by Candida is proposed. The fungal recognition by the innate immune receptor is an essential step for the induction of local responses including cytokines and antimicrobial peptides (AMPs) production for host protection. Using TLR2-deficient mice, we characterized the early innate immune response during VVC. Intravaginal challenge of TLR2-/- mice with C. albicans demonstrated that in response to the initial massive penetration, a strong local inflammatory reaction with recruitment of polymorphonuclear neutrophils was developed. Both interleukin 1β (IL1β)-regarded as the hallmark of VVC immunopathogenesis-and IL6 were increased in vaginal lavage. Murine beta defensin 1 (mBD1), a constitutive AMP with fungicidal and chemotactic activity, was significantly upregulated in wild type (WT) animals in response to infection. Interestingly, in the absence of TLR2 recognition, levels of mBD1 RNA more than twice higher than those in WT infected animals were observed. Interestingly, our results demonstrate that TLR2 signaling is important to control the fungal burden in the vaginal tract. These finding provide new evidence about the role of this innate receptor during VVC. Fil: Miró, María Soledad. Universidad Nacional de Córdoba; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina Fil: Rodriguez, Emilse. Universidad Nacional de Córdoba; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina Fil: Vigezzi, Cecilia. Universidad Nacional de Córdoba; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina Fil: Icely, Paula Alejandra. Universidad Nacional de Córdoba; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina Fil: García, Luciana Noemí. Centro de Investigación de la Fundación Repro; Argentina Fil: Painetti, Nahuel. Universidad Nacional de Córdoba; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina Fil: Maldonado, Cristina Alicia. Universidad Nacional de Córdoba; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina Fil: Riera, Fernando Oscar. Sanatorio Allende; Argentina Fil: Caeiro, Juan Pabl. Hospital Privado Centro Medico de Córdoba; Argentina Fil: Sotomayor, Claudia Elena. Universidad Nacional de Córdoba; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina

The antiprogesterone mifepristone facilitates prolactin release, an effect enhanced by administration of the opioid antagonist naloxone. The present study explores ultrastructural changes in lactotropes after mifepristone and naloxone administration, correlating them with the expression of pituitary prolactin. Methods/Results: Rats were sacrificed at 18:00 h on day 19 of pregnancy. Prolactin immunoelectron microscopy of lactotropes from control rats showed characteristics of quiescent cells with numerous small and spherical secretory granules. Naloxone administration did not modify lactotrope morphology or prolactin expression in terms of mRNA or protein abundances. Mifepristone treatment induced lactotrope activation with development of the rough endoplasmic reticulum and Golgi complex with prolactin immunoreactive small newly formed and large mature secretory granules. Mifepristone increased prolactin mRNA and protein expression. Naloxone administration to mifepristone-treated rats potentiated lactotrope activation compared with mifepristone alone showing exocytotic images of prolactin granules and some cells with evident signs of involution. Conclusions: (1) Blockade of progesterone action by mifepristone activated the lactotrope, increased significantly prolactin mRNA and protein expression and prepared the pituitary for naloxone action. (2) The high serum prolactin levels induced by mifepristone and naloxone may regulate negatively lactotrope activity as suggested by the presence of regressing cells neighboring the actively secreting cells. Fil: Villegas Gabutti, Carlos Mauricio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; Argentina Fil: Ezquer, Eduardo Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; Argentina Fil: Deis, Ricardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; Argentina Fil: Maldonado, Cristina Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina Fil: Soaje, Marta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; Argentina

The objectives of the present work were to assess whether epithelial cells from the different segments of epididymis express TR alpha 1-beta 1 isoforms, to depict its subcellular immunolocalization and to evaluate changes in their expression in rats experimentally submitted to a hypothyroid state by injection of 131I. In euthyroid and hypothyroid groups, TR protein was expressed in epididymal epithelial cells, mainly in the cytoplasmic compartment while only a few one showed a staining in the nucleus as well. A similar TR immunostaining pattern was detected in the different segments of the epididymis. In hypothyroid rats, the number of TR-immunoreactive epithelial cells as well as the intensity of the cytoplasmic staining significantly increased in all sections analyzed. In consonance to the immunocytochemical analysis, the expression of TR alpha 1-beta 1 isoforms, assessed by Western blot revealed significantly higher levels of TR in cytosol compared to the nuclear fractions. Furthermore, TR expression of both alpha 1 and beta 1 isoforms and their mRNA levels were increased by the hypothyroid state. The immuno-electron-microscopy showed specific reaction for TR in principal cells associated with eucromatin, cytosolic matrix and mitochondria. The differences in expression levels assessed in control and thyroidectomized rats ascertain a specific function of TH on this organ. Fil: de Paul, Ana Lucia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones En Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones En Ciencias de la Salud; Argentina Fil: Mukdsi, Jorge Humberto. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina Fil: Pellizas, Claudia Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones En Bioquímica Clínica E Inmunología; Argentina Fil: Montesinos, Maria del Mar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones En Bioquímica Clínica E Inmunología; Argentina Fil: Gutiérrez, Silvina Elena. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Susperreguy, Sebastian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones En Bioquímica Clínica E Inmunología; Argentina Fil: Del Rio, Alberto. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; Argentina Fil: Maldonado, Cristina Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones En Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones En Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina Fil: Torres, Alicia Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones En Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones En Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina

Atopic asthma is a chronic allergic disease that involves T-helper type 2 (Th2)-inflammation and airway remodeling. Bronchiolar club cells (CC) and alveolar macrophages (AM) are sentinel cells of airway barrier against inhaled injuries, where allergy induces mucous metaplasia of CC and the alternative activation of AM, which compromise host defense mechanisms and amplify Th2-inflammation. As there is evidence that high levels of environmental endotoxin modulates asthma, the goal of this study was to evaluate if the activation of local host defenses by Lipopolysaccharide (LPS) previous to allergy development can contribute to preserving CC and AM protective phenotypes. Endotoxin stimulus before allergen exposition reduced hallmarks of allergic inflammation including eosinophil influx, Interleukin-4 and airway hyperreactivity, while the T-helper type 1 related cytokines IL-12 and Interferon-γ were enhanced. This response was accompanied by the preservation of the normal CC phenotype and the anti-allergic proteins Club Cell Secretory Protein (CCSP) and Surfactant-D, thereby leading to lower levels of CC metaplasia and preventing the increase of the pro-Th2 cytokine Thymic stromal lymphopoietin. In addition, classically activated alveolar macrophages expressing nitric oxide were promoted over the alternatively activated ones that expressed arginase-1. We verified that LPS induced a long-term overexpression of CCSP and the innate immune markers Toll-like receptor 4, and Tumor Necrosis Factor-α, changes that were preserved in spite of the allergen challenge. These results demonstrate that LPS pre-exposition modifies the local bronchioalveolar microenvironment by inducing natural anti-allergic mechanisms while reducing local factors that drive Th2 type responses, thus modulating allergic inflammation. Fil: García, Luciana Noemí. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina Fil: Leimgruber, Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina Fil: Uribe Echevarría, E. M.. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina Fil: Acosta, Patricio Leandro. Fundación para la Investigación en Infectologia Infantil; Argentina Fil: Brahamian, Jorge M.. Fundación para la Investigación en Infectologia Infantil; Argentina Fil: Polack, Fernando P.. Fundación para la Investigación en Infectologia Infantil; Argentina. Vanderbilt University; Estados Unidos Fil: Miró, María Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina Fil: Quintar, Amado Alfredo. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina Fil: Sotomayor, Claudia Elena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina Fil: Maldonado, Cristina Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina

Spermatogenesis is disrupted in Graomys griseoflavus × Graomys centralis male hybrids. This study was aimed to determine whether morphological alterations in Leydig cells from hybrids accompany the arrest of spermatogenesis and cell death of germ cells and whether apoptotic pathways are also involved in the response of these interstitial cells. We used three groups of 1-, 2- and 3-month-old male animals: (1) G. centralis, (2) G. griseoflavus and (3) hybrids obtained by crossing G. griseoflavus females with G. centralis males. Testicular ultrastructure was analyzed by transmission electron microscopy. TUNEL was studied using an in situ cell death detection kit and the expression of apoptotic molecules by immunohistochemistry. The data confirmed arrest of spermatogenesis and intense apoptotic processes of germ cells in hybrids. These animals also showed ultrastructural alterations in the Leydig cells. Fas, FasL and calbindin D28k overexpression without an increase in DNA fragmentation was detected in the Leydig cells from hybrids. In conclusion, the sterility of Graomys hybrids occurs with ultrastructural changes in germ and Leydig cells. The enhancement of Fas and FasL is not associated with cell death in the Leydig cells. Probably the apoptosis in these interstitial cells is inhibited by the high expression of the antiapoptotic molecule calbindin D28k. Fil: Díaz de Barboza, Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas; Argentina Fil: Rodriguez, Valeria Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas; Argentina Fil: Ponce, Rubén Hugo. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas; Argentina Fil: Theiler, Gerardo. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Odontologia; Argentina Fil: Maldonado, Cristina Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas; Argentina Fil: Tolosa, Nori Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas; Argentina

Bronchiolar Clara cells play a critical role in lung homoeostasis. The main goal of this study was to evaluate the effects of chronic allergy on these cells and the efficacy of budesonide (BUD) and montelukast (MK) in restoring their typical phenotypes after ovalbumin-induced chronic allergy in mice. Chronic allergy induced extensive bronchiolar Alcian blue-periodic acid-Schiff (AB/PAS)-positive metaplasia. In addition, cells accumulated numerous big electron-lucent granules negative for Clara cell main secretory protein (CC16), and consequently, CC16 was significantly reduced in bronchoalveolar lavage. A concomitant reduction in SP-D and CYP2E1 content was observed. The phenotypic changes induced by allergy were pharmacologically reversed by both treatments; MK was more efficient than BUD in doing so. MK decreased AB/PAS reactivity to control levels whereas they remained persistently elevated after BUD. Moreover, most non-ciliated cells recovered their normal morphology after MK, whereas for BUD normal cells coexisted with ‘transitional’ cells that contained remnant mucous granules and stained strongly for CC16 and SP-D. Glucocorticoids were also less able to reduce inflammatory infiltration and maintained higher percentage of neutrophils, which may have contributed to prolonged mucin expression. These results show that chronic allergy-induced mucous metaplasia of Clara cells affects their defensive mechanisms. However, anti-inflammatory treatments were able to re-establish the normal phenotype of Clara cell, with MK being more efficient at restoring a normal profile than BUD. This study highlights the role of epithelial cells in lung injuries and their contribution to anti-inflammatory therapies. Fil: Roth, Félix Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina Fil: Quintar, Amado Alfredo. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina Fil: Leimgruber, Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina Fil: García, Luciana. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina Fil: Uribe Echevarría, Elisa M.. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina. Sanatorio Allende; Argentina Fil: Torres, Alicia Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina Fil: Maldonado, Cristina Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina

Prostate smooth muscle cells (pSMCs) are capable of responding to inflammatory stimuli by secreting proinflammatory products, which causes pSMCs to undergo dedifferentiation. Although it has been proposed that androgens decrease proinflammatory molecules in many cells and under various conditions, the role of testosterone in the prostate inflammatory microenvironment is still unclear. Therefore, our aim was to evaluate if testosterone was able to modulate the pSMCs response to bacterial LPS by stimulating primary pSMC cultures, containing testosterone or vehicle, with LPS (1 or 10mg/ml) for 24–48 h. The LPS challenge induced pSMCs dedifferentiation as evidenced by a decrease of calponin and alpha smooth muscle actin along with an increase of vimentin in a dose-dependent manner, whereas testosterone abrogated these alterations. Additionally, an ultrastructural analysis showed that pSMCs acquired a secretory profile after LPS and developed proteinopoietic organelles, while pSMCs preincubated with testosterone maintained a more differentiated phenotype. Testosterone downregulated the expression of surface TLR4 in control cells and inhibited any increase after LPS treatment. Moreover, testosterone prevented IkB-a degradation and the LPS-induced NF-kB nuclear translocation. Testosterone also decreased TNF-a and IL6 production by pSMCs after LPS as quantified by ELISA. Finally, we observed that testosterone inhibited the induction of pSMCs proliferation incited by LPS. Taken together, these results indicate that testosterone reduced the proinflammatory pSMCs response to LPS, with these cells being less reactive in the presence of androgens. In this context, testosterone might have a homeostatic role by contributing to preserve a contractile phenotype on pSMCs under inflammatory conditions. Fil: Leimgruber, Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones En Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina Fil: Quintar, Amado Alfredo. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina Fil: García, Luciana Noemí. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina Fil: Petiti, Juan Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina Fil: de Paul, Ana Lucia. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina Fil: Maldonado, Cristina Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina

The defence of the male reproductive tract against microorganisms is critical for fertilization. The prostate gland has been reported to express several molecules of the innate immune system. However, little information is available about how androgens may modulate host defences within the prostate. We therefore aimed to examine in the rat the expression of the TLR4 system, which is strongly involved in pathogen recognition, and the secretion of the antibacterial substances rBD-1 and SP-D after androgen withdrawal. Immunoblotting and immunocytochemical analysis revealed a time-dependent increase in these molecules after orchiectomy, with epithelial and stromal cells being an important source of prostatic host defence proteins. In view of this, we evaluated the potential improvement in antibacterial ability of the prostatic fluid from orchiectomized animals ex vivo. Only samples from rats at 5 days postorchiectomy showed a slight inhibition of Escherichia coli growth. Finally, E. coli was inoculated into the ventral prostate of orchiectomized or control rats, with bacterial growth being counted at 5 days after infection. Animals with androgen depletion presented a lower bacterial count, and showed few histological signs of prostatic inflammation compared with controls. In vitro studies confirmed that isolated lipopolysaccharide (LPS)-treated prostatic cells in the absence of testosterone increased SP-D. Moreover, media from these cells showed a higher antimicrobial activity than supernatants from testosterone- and LPS-treated cells. Our findings indicate that testosterone maintains a reduced expression of key elements for innate immunity and diminishes the antibacterial ability of the rat prostate. These data may represent an important mechanism underlying the immunosuppressive activity of testosterone in the gland. However, this immunosuppressive function of androgens is understandable as a means of avoiding uncontrolled immune responses against the haploid male gamete in the reproductive tract. Fil: Quintar, Amado Alfredo. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina Fil: Leimgruber, Carolina. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina Fil: Pessah, O. A.. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Medicina. Departamento de Medicina. Cat.de Bacteriologia y Virologia Medicas; Argentina Fil: Doll, A.. Universidad Autonoma de Barcelona. Hospital Vall D; España Fil: Maldonado, Cristina Alicia. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina

Caltrin is a small and basic protein of the seminal vesicle secretion that inhibits sperm calcium uptake. The influence of rat caltrin on sperm physiological processes related to fertilizing competence was studied by examining its effect on 1) spontaneous acrosomal exocytosis, 2) protein tyrosine phosphorylation, and 3) sperm-egg interaction. Results show that the presence of caltrin during in vitro capacitation both reduced the rate of spontaneous acrosomal exocytosis without altering the pattern of protein tyrosine phosphorylation, and enhanced the sperm ability to bind to the zona pellucida (ZP). The significantly higher proportion of sperm with intact acrosome observed in the presence of caltrin was accompanied by a strong inhibition in the acrosomal hyaluronidase release. Enhancement of sperm-ZP binding was evident by the increase in the percentage of eggs with bound spermatozoa as well as in the number of bound sperm per egg. Similar results were obtained when the assays were performed using spermatozoa preincubated with caltrin and then washed to remove the unbound protein, indicating that the sperm-bound caltrin was the one involved in both acrosomal exocytosis inhibition and sperm-ZP binding enhancement. Caltrin bound to the sperm head was partially released during the acrosomal exocytosis induced by Ca-ionophore A23187. Indirect immunofluorescence and immunoelectron microscopy studies revealed that caltrin molecules distributed on the dorsal sperm surface disappeared after ionophore exposure, whereas those on the ventral region remained in this localization after the treatment. The present data suggest that rat caltrin molecules bound to the sperm head during ejaculation prevent the occurrence of the spontaneous acrosomal exocytosis along the female reproductive tract. Consequently, more competent spermatozoa with intact and functional acrosome would be available in the oviduct to participate in fertilization. Fil: Dematteis, Andrea. Universidad Nacional de Córdoba; Argentina Fil: Miranda, Sabrina Desiree. Universidad Nacional de Córdoba; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Novella, María de Lourdes. Universidad Nacional de Córdoba; Argentina Fil: Maldonado, Cristina Alicia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Microscopia Electronica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Ponce, Rubén Hugo. Universidad Nacional de Córdoba; Argentina Fil: Maldera, Julieta Antonella. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina Fil: Cuasnicu, Patricia Sara. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina Fil: Coronel, Carlos Enrique. Universidad Nacional de Córdoba; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina