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A criopreservação de folículos ovarianos pré-antrais é uma perspectiva promissora para a preservação da fertilidade e desenvolvimento de banco de oócitos ou em caso de patologias e terapêuticas que possam comprometer as reservas foliculares. A grande vantagem da criopreservação do tecido ovariano é que independe da idade e fase do ciclo menstrual/estral, além de envolver menos questões éticas e sociais. No entanto, como qualquer exposição de um material biológico a temperaturas extremamente baixas, a criopreservação pode levar a um desequilíbrio na produção de espécies reativas de oxigênio (EROs), podendo causar danos celulares. In vivo, as EROS são equilibradas pelo sistema de defesa de antioxidantes, porém, in vitro, a falta do sistema fisiológico, pode levar ao estresse oxidativo. Portanto, antioxidantes vêm sendo utilizados antes ou após a criopreservação, os quais pode-se destacar o ácido alfa lipóico ou ácido tióctico (ALA) e catalase (CAT). Por tanto, o objetivo desse artigo é auxiliar no entendimento da relevância da criopreservação do tecido ovariano para a preservação da fertilidade das fêmeas, bem como o controle na produção de EROS durante o processo, e a necessidade da suplementação de antioxidantes como o ALA e a CAT.

RESUMO Objetivou-se avaliar a condição metabólica e estrutural das células espermáticas bovinas após congelação, com adição prévia de IGF-I e insulina no meio diluidor seminal. Os ejaculados de seis touros Nelore foram submetidos a quatro tratamentos: controle; insulina (100µUI/mL); IGF-I (150ng/mL) e insulina + IGF-I (50µUI/mL e 75ng/mL, respectivamente). Após a congelação, realizaram-se os testes de termorresistência rápida, coloração pelo corante azul de tripan e Giemsa, além da análise computadorizada da motilidade espermática, da integridade das membranas plasmática e acrossomal, e da peça intermediária por meio de sondas fluorescentes. O teste de termorresistência rápida apresentou efeito dentro do tempo de cada tratamento, mas não entre os tratamentos. Na análise computadorizada da motilidade espermática, foram observados movimento, motilidade e velocidade espermáticos; não houve efeitos dos tratamentos sobre qualquer uma dessas variáveis. Respostas iguais foram obtidas com as sondas fluorescentes e o corante azul de tripan/Giemsa. A adição de insulina e IGF-I, de forma isolada ou combinada, ao meio diluidor para congelação de sêmen não produziu efeitos sobre as condições metabólica e estrutural das células espermáticas.

A crioconservação é uma técnica avançada que envolve estruturas de congelação a temperaturas muito baixas (- 196) para o propósito de preservação por muitos anos, as células ou tecidos. O princípio básico e simples do processo é a remoção de água das células antes da congelação-los a fim de evitar a formação de cristais. Os agentes crioprotectores podem ser classificados em penetrante (glicerol, DMSO, etileno-glicol e 1,2 propanodiol) e não penetrante (sacarose, trealose e rafinose, polímeros, proteínas e lipoproteínas). Neste texto se descrevem técnicas para a criopreservação de oócitos e embriões a partir das características e factores que afectam cada um dos métodos.

Introdução: Os agentes fibrinolíticos, como o ativador do plasminogênio tecidual recombinante (rt-PA) têm sido utilizados para restauração da patência e prevenção de mau funcionamento de cateteres para hemodiálise crônica, evitando remoções desnecessárias. Estudos indicam que a criopreservação de rt-PA, a -30 °C, reconstituído em 1 mg/mL, mantém a estabilidade, por um período de três meses, com pequena perda de atividade (8%). Considerando o alto custo da alteplase como agente fibrinolítico, a implantação desta metodologia pode trazer grande economia para o serviço hospitalar. Objetivo: Avaliar o impacto financeiro da criopreservação de alteplase para prevenção de mau funcionamento e desobstrução de cateteres, na unidade de hemodiálise do Complexo Hospitalar Universitário Professor Edgard Santos - Universidade Federal da Bahia. Métodos: Realizada avaliação retrospectiva de um período de 3 meses, pré e pós implantação da criopreservação de alteplase (01/09/2017 a 30/11/2017 e 01/12/2017 a 28/02/2018), através do levantamento no sistema informatizado, foram verificadas as saídas do medicamento para a unidade de hemodiálise. Alteplase 50 mg foi diluída para obter uma concentração de 2 mg/mL sob condições assépticas em cabine de fluxo laminar, procedimento realizado por farmacêutico. As alíquotas foram armazenadas a temperatura de -80 °C com validade para três meses. Resultados: Anteriormente à implantação deste método foram necessárias 14 ampolas de alteplase em 3 meses, após a criopreservação, o consumo reduziu para 4 ampolas no mesmo período. O tempo médio de armazenamento das alíquotas de alteplase foi de 26 dias, variando de 10 a 49 dias, até sua utilização. Considerando que o valor médio do medicamento foi de R$ 1.849,30; o custo anterior ao estudo foi R$ 25.890,20 e após a implementação do método, reduziu para R$ 7.397,20. Desta forma, no período de 3 meses, obteve-se uma economia de R$ 18.493,00, equivalente a uma redução de 71% nos gastos com este medicamento. Extrapolando estes dados para um período de 12 meses, sugere-se uma redução no custo de aproximadamente R$ 73.972,00. Conclusão: A criopreservação de alteplase pode ser considerada uma alternativa segura, além de preservar a eficácia como agente fibrinolítico reduziu consideravelmente os gastos na unidade de hemodiálise, permitindo assim outros investimentos para instituição.

RESUMO O objetivo deste trabalho foi avaliar a recuperação de espermatozoides epididimários de cães castrados, utilizando as técnicas de fluxo retrógrado (FR) e flutuação (FL) em diluidor Tris-gema, antes e após a criopreservação. Foram coletados 30 complexos testículo-epididímos (CTE), sendo 15 para FR e 15 para FL, e, logo após a recuperação dos espermatozoides, foram analisadas as alterações morfológicas nessas células espermáticas. Após a adição do diluidor, foram avaliados os parâmetros de motilidade total (MOT) e vigor (V) espermáticos. O sêmen pós-criopreservado foi submetido ao teste de termorresistência nos tempos T0, T30, T60 e T90 minutos, além da avaliação das membranas plasmática e acrossomal por sondas fluorescentes. Não houve diferença estatística entre as técnicas quanto à MOT e ao vigor no sêmen diluído (FR-MOT: 82,3% e V: 3,4; FL-MOT: 79,6% e V: 3,2) e pós-criopreservado (FR-MOT: 34% e V: 2,8; FL-MOT: 30% e V: 2,7). A partir do T30, houve diferença significativa quanto à MOT e ao vigor nas técnicas utilizadas, e o tempo também prejudicou o acrossoma espermático a partir do T30. Conclui-se que as técnicas de recuperação de espermatozoides epididimários de cães castrados, testadas neste trabalho, podem ser utilizadas para refrigeração e criopreservação de sêmen.

RESUMO A utilização da gema de ovo dificulta a padronização de meios diluidores e apresenta riscos biológicos. Assim, este estudo avaliou diferentes concentrações da lipoproteína de baixa densidade (LDL), em substituição à gema de ovo, para a confecção de diluentes para criopreservação espermática em ovinos. Foram utilizados um diluidor controle (CTR= 20% de gema de ovo) e cinco tratamentos, substituindo-se a gema pelas diferentes proporções de LDL (T1=6%; T2=8%; T3=12%; T4=16%; T5=20%), todos à base de TRIS-glicerol. Para o estudo, utilizaram-se dois ejaculados, de seis reprodutores da raça Santa Inês. Sessenta dias após a criopreservação, as amostras foram descongeladas e avaliadas subjetivamente quanto à motilidade total (MT, %) e progressiva (MP, %), ao vigor (1-5) e à integridade funcional (choque hisposmótico com água destilada, %) e estrutural (corante supravital eosina, %) das membranas espermáticas. As avaliações de vigor e funcionalidade de membrana não diferiram (P>0,05) entre os grupos. Entretanto, os grupos T4 (P

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RESUMO Os objetivos do presente estudo foram analisar a ultraestrutura do espermatozoide do jundiá amazônico e avaliar a sua criopreservação com três agentes crioprotetores (metanol 10%, DMSO 10% e etilenoglicol 10%) e duas soluções ativadoras (NaCl 0,29% e NaHCO3 1%). Como diluente, foi utilizada uma solução de glicose a 5%, sendo o sêmen envasado em palhetas de 0,25mL e congelado em vapor de nitrogênio (botijão dry shipper). No sêmen fresco, o espermatozoide apresentou comprimento de 25,46±2,54μm, cabeça esférica (1,51±0,18μm), ausência de acrossoma, peça intermediária com formato cônico (0,93±0,17μm), ligeiramente assimétrica, com presença de vesículas, e flagelo único (21,48±2,45μm). O sêmen descongelado apresentou valores mais altos (P

Introdução: Devido à pandemia do novo Coronavírus, a criopreservação tem sido recomendada para garantir a continuidade do transplante de medula óssea (TMO) alogênico não aparentado independentemente da fonte de células. Porém, a criopreservação de células progenitoras hematopoéticas coletadas por punção aspirativa da medula óssea (CPH,MO) é menos utilizada e poucos dados estão disponíveis na literatura. Objetivo: descrever a experiência do Centro de Processamento Celular do Cetebio/Fundação Hemominas com a criopreservação de CPH,MO para utilização terapêutica em TMO. Métodos: Trata-se de um estudo do tipo série de casos e a casuística foi composta por oito unidades de CPH,MO criopreservadas entre 10/2020 e 06/2021. As unidades de CPH,MO foram submetidas à deseritrocitação utilizando hidroxietilamido (HES) 450/0,7 e, em seguida, à centrifugação para desplasmatização. O volume da camada leucocitária foi ajustado para atingir a concentração de células nucleadas final ≤2 × 108 NC/mL após a adição da solução de criopreservação (5%HES/5%DMSO). As unidades foram congeladas em freezer mecânico a -80°C e armazenadas em tanque a vapor de nitrogênio. Resultados: oito unidades de CPH,MO foram criopreservadas para utilização em nove pacientes; uma unidade foi dividida para uso em dois pacientes pediátricos irmãos HLA idênticos. Uma (11,1%) unidade foi criopreservada para o uso autólogo e oito (88,9%) para uso alogênico não aparentado. Cinco (55,6%) pacientes eram do sexo masculino. A média de idade dos pacientes foi 14,7 ± 19,1 anos (1–42). Um (11,1%) paciente possuía neuroblastoma, um (11,1%) LMC, um (11,1%) LMA, um (11,1%) síndrome de Griscelli, dois (22,2%) síndrome de Wiskott-Aldrich e três (33,3%) LLA. O volume (mL) médio das unidades pré e pós-processamento foi 756,9 ± 411,7 e 78,7 ± 45,8, respectivamente. O volume (mL) médio de hemácias pré e pós-processamento foi 239,1 ± 150,8 e 27,02 ± 16,9, respectivamente. A média do total de células nucleadas (x108) pré e pós-processamento foi 153,07 ± 80,0 e 120,01 ± 67,7, respectivamente. A média de células CD34+ viáveis (x106) pré e pós-processamento foi 131,7 ± 74,0 e 120,2 ± 77,8, respectivamente. Quatro (50%) unidades apresentaram teste microbiológico positivo (Staphylococcus hominis, Staphylococcus epidermidis, Corynebacterium sp e Staphylococcus aureus). A viabilidade celular (%) média pós-descongelamento em amostras de segmento foi 66,1 ± 8,5. Os ensaios clonogênicos realizados em amostras pré-processamento (n = 6), pós-processamento (n = 8) e pós-descongelamento (n = 7) apresentaram crescimento positivo. Seis (66,6%) unidades foram liberadas para uso terapêutico, das quais cinco (83,3%) possuímos os dados da enxertia. Nenhum paciente apresentou falha de enxertia ou óbito após a infusão. O tempo médio de enxertia de granulócitos e plaquetas foi 17 ± 5,8 e 19,5 ± 9,2 dias, respectivamente. Discussão: A redução do volume possibilitou a criopreservação do material, sendo que a recuperação celular foi satisfatória. Os testes de controle de qualidade realizados em todas etapas do processo evidenciaram a qualidade e segurança do procedimento e foram corroborados pelos dados de enxertia. Alertamos, entretanto, sobre a necessidade de cuidados adicionais com os pacientes devido ao volume de hemácias a ser infundido e à contaminação bacteriana, mais frequentemente observada nas unidades de CPH,MO. Conclusões: A criopreservação CPH, MO apresentou resultados satisfatórios, demonstrando que a metodologia utilizada é segura e eficiente.

Avaliou-se o congelamento do plasma rico em plaquetas (PRP) de equinos, a -196ºC em nitrogênio líquido, utilizando-se como crioprotetor o DMSO em duas concentrações (3% e 6%), e, como ponto final, a avaliação da morfologia e da agregometria plaquetária. Foram utilizadas 12 amostras de PRP em duas repetições. Previamente ao congelamento, as amostras foram submetidas a um resfriamento lento (-0,07ºC/minuto) até a temperatura final de 4-5ºC. A criopreservação do PRP equino, incluindo um resfriamento lento a 4-5ºC, previamente ao congelamento a -197ºC em nitrogênio líquido, foi similar para as concentrações do crioprotetor DMSO a 3% ou 6%, quando avaliado o percentual de ativação e de agregação plaquetária.

Há 32 anos nascia Zoe Leyland, primeiro bebê fruto de um embrião congelado. Após compreender o congelamento de embriões no contexto das técnicas de reprodução assistida, na pesquisa com células-tronco embrionárias e as discussões no Brasil, passa- -se a apresentar a visão do Magistério a partir da Evangelium Vitae. Como ato clínico, a criopreservação tem uma dimensão técnica, jurídica e uma dimensão ética. Diante da inexistência de um conceito teórico unívoco em questões do início da vida, surge o dilema moral: doar, descartar ou criopreservar os embriões sobrantes? Qual o futuro da técnica da criopreservação de embriões humanos? Poderá desaparecer ou evoluirá a níveis éticos satisfatórios?

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A criopreservação seminal apresenta baixos resultados produtivos. Objetivou-se testar a Água de Coco em Pó (ACP-103®) como diluente de ressuspensão após a descongelação seminal e avaliar a qualidade espermática durante a curva de resfriamento até a descongelação do sêmen. Para isso, o sêmen de 15 reprodutores foi coletado uma vez por semana, incubado a 30 oC por 15 minutos, e em seguida diluído em Beltsville Thawing Solution – BTS (controle) ou em ACP-103®, e submetidos a uma curva de resfriamento lenta, onde foram feitas análises de vigor e motilidade em cada passo. O sêmen descongelado foi ressuspenso em seus respectivos diluentes e analisado quanto às características: vigor, motilidade, vitalidade, integridade acrossomal e funcionalidade da membrana. Durante as análises de vigor e motilidade que compõem a curva de resfriamento, e na descongelação, para as análises de vitalidade e membrana acrossomal intacta, observou-se que não houve diferença significativa entre os tratamentos. Já após a descongelação, o BTS apresentou melhores resultados de vigor, motilidade espermática e funcionalidade da membrana. No entanto, a curva de resfriamento e o ACP-103® podem ser utilizadas no protocolo de criopreservação do sêmen suíno, visto que ambas asseguraram qualidade da viabilidade espermática.

Resumo Butia yatay é uma palmeira nativa do Rio Grande do Sul que encontra-se em risco de extinção. Sua propagação é realizada por via sexuada, porém a germinação por sementes é baixa, lenta e desuniforme. Objetivou-se estabelecer um protocolo de criopreservação visando a conservação da espécie. Foram testadas concentrações de sacarose em pré-tratamento de embriões antes do congelamento. Embriões de Butia yatay podem ser criopreservados, com subseqüente retomada do crescimento, quando submetidos ao prévio tratamento com sacarose a 0,4 M. Neste estudo, os embriões foram congelados por 10 dias, indicando que o pré-tratamento possibilita a conservação de Butia yatay por longo tempo.

INTRODUÇÃO: O tecido adiposo obtido por lipoaspiração pode ser uma fonte acessível de células-tronco, para posterior aplicação clínica na regeneração tecidual. O processo de criopreservação mantém essas células vivas por longos períodos, sem prejuízo a suas funções. O objetivo deste estudo foi avaliar a influência de um protocolo de criopreservação na proliferação das células-tronco derivadas do tecido adiposo. MÉTODO: Fragmentos de tecido adiposo de camundongos foram submetidos a digestão enzimática e as células foram cultivadas em meio α-MEM (do inglês Minimum Essential Medium), suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB), e mantidas a 37ºC em 5% de dióxido de carbono. No primeiro subcultivo, uma alíquota de 1x10(6) células foi criopreservada em SFB com 10% de dimetilsulfóxido por 30 dias, e outro grupo permaneceu em cultura. No terceiro subcultivo, as células dos dois grupos (não-criopreservadas e criopreservadas) foram plaqueadas e a viabilidade celular e as curvas de crescimento foram estabelecidas a partir de contagem em hemocitômetro e pelo ensaio de MTT, nos intervalos de 24 horas, 48 horas e 72 horas. A avaliação da morfologia nuclear foi realizada pela marcação por DAPI. Os dados foram analisados estatisticamente, com nível de significância de 5%. RESULTADOS: Observou-se padrão de crescimento celular ascendente em ambos os grupos, sem diferença significante ao longo do experimento (P > 0,05). Não houve alteração considerável da viabilidade celular e danos nucleares também não foram observados nos grupos estudados. CONCLUSÕES: O protocolo de criopreservação avaliado mostrou-se eficaz para manter a integridade das células-tronco de tecido adiposo, permitindo seu armazenamento para uso posterior.BACKGROUND: Adipose tissue obtained by liposuction may be an accessible source of stem cells for future clinical application in tissue regeneration. Cryopreservation maintains stem cells in a live state for long periods of time, without impairing their function. The aim of this study was to assess the effect of a cryopreservation protocol on the proliferation of adipose-derived stem cells. METHODS: Fragments of mouse adipose tissue were subjected to enzymatic digestion in order to isolate cells that were then cultured in minimum essential medium (α-MEM) supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS). Cells were maintained at 37°C in 5% carbon dioxide (CO2). At the first passage, an aliquot of 1 × 10(6) cells was cryopreserved in FBS with 10% dimethylsulfoxide (DMSO) for 30 days, whereas the remaining cells were seeded and maintained in culture. When these cells reached the third passage, the 2 groups of cells (cryopreserved and non-cryopreserved) were seeded for experiments. Cell viability and proliferation curves were established at intervals of 24, 48, and 72 hours by counting cells with a hemocytometer and MTT assay. Nuclear morphology was assessed by DAPI staining. The data were statistically analyzed, with a significance level of 5%. RESULTS: Increasing cellular proliferation was observed in both groups, with no significant difference throughout the experiment (P > 0.05). There was no significant change in cell viability and signs of nuclear damage were not detected in both the groups studied. CONCLUSIONS: The cryopreservation protocol analyzed was effective for maintaining the integrity of adipose-derived stem cells, allowing their storage for later use.

O objetivo do presente estudo foi testar a dimetilacetamida (DMA) em diferentes concentrações, associada ou não ao glicerol (GL), sobre a viabilidade espermática do sêmen ovino congelado. Foram utilizados 10 ejaculados de dois carneiros adultos da raça Santa Inês. Os ejaculados foram divididos em sete grupos experimentais, respeitando o limite máximo de 5% de DMA, sendo eles: GL6%, DMA3%, GL5%+DMA1%, GL4%+DMA2%, GL3%+DMA3%, GL2%+DMA4%, GL1%+DMA5%. Os espermatozoides criopreservados nos diferentes tratamentos foram analisados quanto à cinética subjetiva, integridade estrutural da membrana plasmática (EOS), integridade funcional da membrana plasmática (CO) e morfologia espermática, observando defeitos totais (DT) e defeitos maiores (DM). A motilidade total (MT) e a progressiva (MP) pós-descongelação nos grupos GL5%+DMA1%; GL4%+DMA2% e GL3%+DMA3%, foram semelhantes (P>0,05) ao tratamento controle (GL6%). Destes, o diluidor GL4%+DMA2% foi o único que promoveu a manutenção da MT e MP pós-descongelação, quando comparado com o sêmen in natura (P>0,05). Não foram observadas diferenças significativas (P>0,05) para os parâmetros de EOS, CO, DT e DM nos diferentes grupos avaliados. A dimetilacetamida associada ao glicerol mostrou-se eficaz na manutenção da viabilidade espermática em ovinos, avaliada pós-descongelação. Entretanto, foi observado efeito deletério da DMA nas concentrações mais elevadas ou quando não esteve associada ao glicerol.Palavras-chave: Criopreservação; Dimetilacetamida; Ovino; Sêmen

A preservação do sêmen é uma importante ferramenta para o melhoramento genético animal. O presente trabalho teve como objetivo comparar os fatores motilidade e vigor na criopreservação manual de sêmen de carneiros nativos em MS, fazendo uso de dois diluidores: TRIS e Bovimix®. Para o estudo foram utilizados seis carneiros nativos, obtendo-se dois ejaculados por semana de cada animal até atingir um total de 30 doses de sêmen por diluidor por carneiro. O sêmen foi analisado em microscopia de campo claro. Comparando-se as médias obtidas, estatisticamente, foram observadas diferenças significativas entre os resultados dos dois diluidores quanto aos fatores analisados (motilidade e vigor) pós-descongelamento. Os resultados permitiram inferir que o meio diluidor Bovimix® apresentou eficiência superior em criopreservar o sêmen ovino pós-descongelamento em comparação ao diluidor Tris, quando somente os fatores motilidade e vigor foram analisados. Mais estudos serão necessários para avaliar a integridade de membrana dos espermatozóides.

Os objetivos neste estudo foram verificar se a própolis e o ácido ascórbico têm efeito sobre a integridade da membrana plasmática dos espermatozoides de caprinos e investigar o potencial desses antioxidantes no uso de meios diluidores de criopreservação de sêmen caprino. Foram utilizados cinco bodes adultos das raças Alpina (n = 2) e Saanen (n = 3). Após a coleta de sêmen, realizaram-se o exame físico do sêmen e morfológico dos espermatozoides, o teste supravital e o teste hiposmótico. Em seguida, o sêmen fresco foi diluído com o diluidor Bioxcell® (controle); Bioxcell® + 0,25% de extrato liofilizado de própolis; Bioxcell® + 0,5% de extrato liofilizado de própolis; Bioxcell® + 0,05% de ácido ascórbico; ou Bioxcell® + 0,25% de ácido ascórbico. Após as diluições finais, foram avaliados a motilidade e o vigor espermático obtidos com cada diluidor e posteriormente o sêmen foi submetido a envase, resfriamento e congelamento. No sêmen fresco, os aspectos físicos e morfológicos e os resultados dos testes supravital e hiposmótico não diferiram entre os animais nem entre raças. As médias gerais de motilidade e vigor espermático e dos testes supravital e hiposmótico obtidos logo após o descongelamento e após 3 horas de teste de termorresistência diferiram entre si, de modo que o diluidor contendo ácido ascórbico e o controle foram similares e superiores àqueles contendo própolis. O ácido ascórbico mantém a integridade estrutural da membrana dos espermatozoides durante o processo de criopreservação, bem como sua viabilidade após o teste de termorresistência, e pode ser uma alternativa na composição de diluentes para criopreservação de sêmen caprino; a própolis não é eficaz na manutenção da integridade e da viabilidade espermática pós-descongelamento e é tóxica aos espermatozoides nas concentrações de 0,25 e 0,5%.The objectives of this study were to verify whether propolis and ascorbic acid have an effect on plasmatic membrane integrity of goat spermatozoa and investigate the potential of these antioxidants in the use of goats spermatozoa cryopreservation extenders. Five adult boars were used of the Alpine (n = 2) and Saanen (n = 3) breeds. After semen collection, the evaluation consisted of the physical and morphological exam, live and dead cells (supravital test) and hyposmotic swelling test. Afterwards, the fresh semen was diluted with the Bioxcell® extender (control); Bioxcell® + 0.25% freeze dried propolis extract); Bioxcell® + 0.5% freeze dried propolis extract); Bioxcell® + 0.05% ascorbic acid) or Bioxcell® + 0.25% ascorbic acid). After final dilutions, the sperm motility and vigor were assessed obtained in each extender, and then the semen was sealed, cooled and frozen. In fresh semen, the physical and morphological aspects and the results of the supravital test and hyposmotic swelling test did not differ between animals or breeds. The general means of the sperm motility and vigor, supravital test and hyposmotic swelling test obtained immediately after thawing and after three hours of heat resistence test were different, so that the extender with ascorbic acid and the control were similar and higher than the extenders containing propolis. The ascorbic acid maintained the structural integrity of the spermatozoa membrane during the cryopreservation process and its viability after the heat resistance test, and may be an alternative in extender composition for cryopreservation of goat semen; the propolis was not effective in maintaining sperm integrity and viability after thawing and was toxic to spermatozoa at concentrations of 0.25 and 0.5%.

Durante o processo de criopreservação de sêmen, os espermatozóides sofrem alguns danos que resultam na diminuição da fertilidade deste. O presente estudo foi realizado com o objetivo de avaliar os efeitos da utilização combinada de duas curvas de congelamento com dois diluentes comerciais (FR-5® e Botu-Crio®) sobre a criopreservação de sêmen eqüino. Foram analisados 20 ejaculados de dois garanhões. As amostras foram avaliadas por microscopia de contraste de fase e microscopia de epifluorescência, observando-se a motilidade progressiva e total do sêmen pós-descongelamento e a integridade e a funcionalidade da membrana dos espermatozóides. A combinação entre curva automatizada e Botu-Crio® apresentou as maiores médias nas análises de motilidade total e progressiva, após o descongelamento. O diluente Botu-Crio®, isoladamente, preservou também as membranas destes, quando foram realizadas as análises de integridade utilizando teste com diacetato de carboxifluoresceína e iodeto de propídio e funcionalidade de membrana pelo teste hiposmótico.During semen cryopreservation, sperm cells were submitted to several deleterious events leading to membrane damage which result in fertility decrease. This study was designed to compare the effects of two freezing techniques (conventional and automated), and the use of two commercial extenders as cryoprotectants (FR-5® and Botu-Crio®) on total and progressive motility, integrity and functionality of spermatic membranes during the cryopreservation of equine semen. Twenty ejaculates from two stallions were analyzed. The total and progressive motility of fresh and post-thawing semen samples were evaluated by patterns assays. Function of plasmatic membrane was measured by the hipoosmotic swelling test. Integrity of plasmatic membrane was evaluated using carboxifluorescein diacatate and iodidium propide fluorescent probes. There were significant differences between the two freezing techniques and/or between cryoprotectants for all assessed parameters. The combination of Botu-Crio® and automated curves showed better results on total and progressive post-thawing motility. The extender Botu-Crio®, alone, showed to better preserve the membrane integrity and function.

Realizaram-se dois experimentos de criopreservação de espermatozoides epididimários caninos, investigando-se o efeito da centrifugação e da adição do líquido prostático sobre as características físicas do espermatozoide pós-descongelação. No experimento I, foi testado o efeito da centrifugação. As amostras congeladas sem centrifugação apresentaram pós-descongelação: motilidade total (MT) de 26,7±21,2%, motilidade progressiva (MP) de 21,2±20,1% e vigor espermático (V) de 2,2±1,3, e as congeladas após a centrifugação: MT de 23,9±17,9%, MP de 20,6±17,4% e V de 2,2±1,0. No teste de termorresistência, o período médio de duração com MT mínima de 10% foi de 165±21,2 minutos sem centrifugação e de 77,5±63,6 minutos para as centrifugadas, indicando maior longevidade espermática das amostras não centrifugadas. No experimento II, foi avaliado o efeito da adição de líquido prostático homólogo no meio diluidor. As amostras congeladas sem líquido prostático no meio diluidor apresentaram MT de 13,3±13,1%, MP de 10,9±11,4% e V de 2,1±1,2, e as congeladas com líquido prostático MT de 14,1±12,6%, MP de 12,2±11,6% e V de 2,2±1,3. Os resultados sugerem que a centrifugação e a adição de 10% de líquido prostático ao diluidor não tiveram efeito sobre as características físicas do espermatozoide epididimário canino pós-descongelamento.The effect of centrifugation and the prostatic fluid addition were evaluated on the physical characteristics of the cryopreserved canine epydidimal spermatozoa. In the first experiment, the effect of centrifugation was analysed. The samples without centrifugation showed 26.7±21.2% of total motility (TM), 21.2±20.1% of progressive motility (PM), and 2.2±1.3 of intensity of movement (I). In addition, the samples after centrifugation showed 23.9±17.9% of TM, 20.6±17.4% of PM, and 2.2±1 of I. The mean time of samples duration, at least with 10% of total motility, was 165±21.2min without centrifugation and 77.5±63.6min with centrifugation during the thermal resistance test. It suggests a better spermatic longevity in samples without centrifugation. In the second experiment, the effect of the prostatic fluid addition was evaluated. The samples cryopreserved without prostatic fluid showed 13.3±13.1%, 10.9±11.4%, and 2.1±1.2% of TM, PM, and I, respectively. Furthermore, the samples with prostatic fluid showed 14.1±12.6%, 12.2±11.6%, and 2.2±1.3% of TM, PM, and I, respectively. These data support that centrifugation and 10% of prostatic fluid addition does not induce any effect on the physical characteristics of canine epydidimal spermatozoa cryopreserved.

(Germinability after desiccation, storage and cryopreservation of seeds from endemic Encholirium Mart. ex Schult. & Schult. f. and Dyckia Schult. & Schult. f. species (Bromeliaceae)). Seed storage procedures require previous determination of optimal temperature and light conditions for germination, as well as of tolerance to desiccation and low temperatures. The aim of this paper was to study the effects of desiccation, storage at low temperatures and cryopreservation on the germinability of seeds of six Encholirium and two Dyckia species, which were selected according to vulnerability criteria. Initial germinability of newly harvested seeds varied from 35 to 95%. Seeds presented photoblastic behaviour since light was necessary to induce or increase germination. Except for E. heloisae and E. scrutor, desiccation did not affect significantly the germinability of tested seeds. Storage for one year at 4 and -20 ºC did not affect the germinability of desiccated seeds, except for E. pedicellatum. Germinability after freezing in liquid nitrogen was higher than or similar to control seeds for all species. However, freezing tolerance of E. pedicellatum seeds was only achieved after desiccation to 2.5% moisture content. As regards tolerance to desiccation and to storage at low temperatures, the seeds studied here can be classified as orthodox and conserved ex situ.(Germinabilidade de sementes de espécies endêmicas de Encholirium Mart. ex Schult. & Schult. f. e Dyckia Schult. & Schult. f. (Bromeliaceae) após dessecação, armazenamento e criopreservação). O armazenamento de sementes requer a determinação prévia das condições ótimas de temperatura e luz para a germinação, assim como da tolerância à dessecação e a baixas temperaturas. O objetivo deste trabalho foi o estudo do efeito da dessecação, armazenamento a baixa temperatura e criopreservação de seis espécies de Encholirium e duas de Dyckia, selecionadas de acordo com critérios de vulnerabilidade. A germinabilidade de sementes recém-coletadas variou entre 35 e 95%. As sementes apresentaram comportamento fotoblástico, uma vez que a presença de luz foi necessária para induzir a germinação ou aumentar sua eficiência. A dessecação não afetou significativamente a germinabilidade das sementes testadas, com exceção de E. heloisae e E. scrutor. Sementes dessecadas e armazenadas durante um ano a 4 e -20 ºC não apresentaram alterações na germinabilidade, exceto em E. pedicellatum. A germinabilidade após congelamento em nitrogênio líquido foi maior que ou similar à obtida no controle, em todas as espécies estudadas. Entretanto, em E. pedicellatum a tolerância ao congelamento só foi obtida após dessecação das sementes a um conteúdo hídrico de 2,5%. Considerando a tolerância à dessecação e ao armazenamento em baixas temperaturas, as sementes estudadas podem ser classificadas como ortodoxas e conservadas ex situ.

As biotécnicas aplicadas à reprodução animal como inseminação artificial, transferência e produção in vitro de embriões, indução e sincronização de cio e congelamento de gametas vêm sendo cada vez mais utilizadas na prática veterinária. No entanto, algumas biotécnicas ainda não alcançaram o seu total aperfeiçoamento técnico na reprodução equina, como a criopreservação de sêmen. Objetivou-se avaliar as características pós-descongelamento (motilidade total, vigor e integridade de membrana plasmática e acrosomal) dos espermatozoides de garanhões da raça Mangalarga Marchador (n=5), empregando-se três diluentes de criopreservação. Após a colheita, o sêmen foi diluído na proporção de 1:1 em meio à base de leite em pó desnatado e centrifugado a 600 G por 10 minutos. Após a centrifugação, o sobrenadante foi desprezado e o pellet obtido dividido e ressuspendido com Botucrio, FR5 ou FR6. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 mL sendo a concentração ajustada para 200x106 espermatozoides/mL. As palhetas foram distribuídas em uma plataforma-suporte e estabilizadas a 5 ºC/60 min., em refrigerador comercial. Para o congelamento, as palhetas, posicionadas horizontalmente, foram expostas por 15 minutos ao vapor de nitrogênio líquido, em uma caixa de isopor, a 6 cm acima do nível de nitrogênio líquido. Logo em seguida, as palhetas foram imersas no nitrogênio líquido, acondicionadas em raques e estocadas em botijão criogênico a -196 ºC, para posterior avaliação. Não houve diferença para as variáveis motilidade, vigor e integridade das membranas plasmática e acrossomais quando se utilizaram diluentes que contêm a associação de amidas e glicerol (Botucrio e FR6; P>0,05). As variáveis seminais no diluente contendo apenas glicerol foram inferiores em todas as avaliações (P

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Resumo - A conservação de recursos genéticos vegetais é fundamental para o desenvolvimento da agricultura. O desenvolvimento de protocolos eficientes de criopreservação tornou-se uma ferramenta eficaz para conservar espécies vegetais propagadas vegetativamente. Tradicionalmente, os recursos genéticos de videiras têm sido mantidos principalmente em coleções no campo. Como coleções no campo, os acessos de Vitis são vulneráveis a estresses abióticos e ameaças bióticas, como patógenos e pragas. Assim, quando métodos robustos de criopreservação estão disponíveis, há uma oportunidade para preservar coleções por longos períodos de tempo, com segurança e com baixo custo de manutenção. Vários métodos têm sido descritos para Vitis e, até agora, a vitrificação em gotas tem sido o mais efetivo para várias espécies de videira e, parece ser um método promissor para superar as respostas específicas de genótipos/espécies para um determinado protocolo que tem sido o gargalo para o uso generalizado da criopreservação de Vitis. Esse artigo de revisão apresenta informações atualizadas e relevantes sobre o uso da criopreservação como ferramenta complementar para a conservação de recursos genéticos de videira.

OBJETIVOS: comparar duas diferentes técnicas de congelação e dois tipos de envase do sêmen humano durante processo de criopreservação. MÉTODOS: estudo experimental, no qual foi analisada a criopreservação de 18 amostras de sêmen de 18 voluntários. Após a adição de meio crioprotetor, "Test-yolk buffer" , as amostras de sêmen foram envasadas em palhetas com capacidade de 0,25 mL ou em criotubos de 2 mL e submetidas à criopreservação por dois métodos, um lento e outro rápido, totalizando quatro tratamentos distintos: RP (congelação pelo método rápido e envasado em palheta), RT (rápido-criotubo), LP (lento-palheta) e LT (lento-criotubo). As amostras, após 24 horas, foram descongeladas em temperatura ambiente e mantidas a 37ºC. Os dados coletados foram analisados através do teste t de Student, com pPURPOSE: to compare two different methods of freezing and two types of human semen storage during cryopreservation process. METHODS: experimental research in which the cryopreservation of 18 semen samples from 18 volunteers was studied. Following the addition of the cryoprotectant medium, Test-yolk buffer, the semen samples were packaged into 0.25 mL straws or into 2 mL cryotubes and submitted to cryopreservation by slow or rapid methods, in four different treatments: RS (cryopreservation by rapid method and packaged in straws), RT (rapid-cryotubes), SS (slow-straws), and ST (slow-cryotubes). Samples were thawed after 24 hand then maintained at 37ºC. Data collected were analyzed by the Student t-test, with p