Influência de condições de cultivo na formação de células persisters em Acinetobacter calcoaceticus-baumannii

Os patógenos oportunistas do complexo Acinetobacter calcoaceticus-baumannii são responsáveis por diversas enfermidades, acometendo principalmente pacientes de unidades de tratamento intensivo e imunocomprometidos. Estas bactérias podem ainda apresentar o fenótipo de persistência, onde uma pequena população de bactérias suscetíveis sobrevive após o tratamento com elevadas concentrações de antimicrobianos - podendo essa fração de células sobreviventes ser afetada pelas condições ambientais presentes no meio. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da disponibilidade de oxigênio e da presença de galactose, citrato de sódio e sangue de carneiro na formação destas células frente à exposição ao meropenem e à tobramicina. Para isto, 10 isolados clínicos, cedidos pelo Laboratório de Patologia Clínica do Hospital São Lucas da PUCRS, tiveram sua suscetibilidade caracterizada quanto à concentração inibitória mínima (CIM) de tobramicina e de meropenem. A influência das diferentes condições ambientais foi analisada ao expor culturas de fase exponencial tardia ao meropenem e à tobramicina por 48 h na presença de citrato de sódio, galactose ou sangue de carneiro; ou em uma condição aerada ou estática. Para todas as observações, alíquotas foram removidas em tempos determinados, seguidas de diluições decimais seriadas e semeadura pela técnica da gota em ágar nutriente, para estimar a fração de células sobreviventes.A condição aerada promoveu uma diminuição na fração de células persisters - independente do antimicrobiano utilizado -, e também verificarmos que concentrações superiores a 10X a CIM de tobramicina proporcionaram níveis ainda menores destas células após 48 h de tratamento. Quanto à presença de diferentes fontes de nutrientes, foi observado que a presença de citrato de sódio no tratamento de 48 h com meropenem proporcionou uma menor fração de células sobreviventes comparado a quando este mesmo antimicrobiano estava associado à galactose; enquanto a
Acinetobacter calcoaceticus-baumannii complex opportunistic human pathogens are responsible for several diseases affecting specially intensive care units and immunocompromised patients. These bacteria may also present the persistence phenotype, where a small population of susceptible bacteria survives after a high antimicrobial concentration treatment – which the fraction of surviving cells may be affected by environmental conditions present in the medium. Thus, the aim of this study was to evaluate the influence of oxygen availability and galactose, sodium citrate and sheep blood presence in the formation of these cells upon meropenem and tobramycin exposure. For this, 10 clinical isolates, sent by the Clinical Pathology Laboratory of São Lucas Hospital, had their susceptibility characterized regarding the minimum inhibitory concentration (MIC) to tobramycin and meropenem. The influence of different environmental conditions was analyzed by exposing late exponential-phase cultures to meropenem and tobramycin for 48 h in the presence of sodium citrate, galactose and sheep blood; or in aerated or static condition. For all evaluations, aliquots were removed at determined time points, followed by serial decimal dilutions and drop plating technique on nutrient agar, to estimate the fraction of surviving cells.Aerated condition promoted a reduction of persister cells fraction – independent of antimicrobial used –, and, in addition, concentrations of tobramycin higher than 10X MIC provided even lower levels of these cells after 48 h of treatment. Regarding the presence of different sources of nutrients, it was observed that sodium citrate presence in 48 h of meropenem treatment promoted lower fraction of surviving cells when compared to this same antibiotic associated with galactose; whereas tobramycin exposure in the presence of galactose provided a reduced formation of persister cells in the first 6 h of treatment. Sheep blood, however, did not affect the fraction of sur