Detection of Helicobacter pylori antigen using monoclonal antibodies

Työn tarkoituksena oli kehittää menetelmä Helicobacter pylori antigeenin osoittamiseksi ulostenäytteestä QuikRead-analysaattorilla käyttäen monoklonaalisia vasta-aineita (mab). Työn kirjallisuusosassa tarkastellaan H. pylori -bakteeria, sen kasvuympäristöä sekä sen aiheuttamaa tautikirjoa ja helikobakteeri-infektion tunnistusmenetelmiä. Lisäksi kirjallisuusosassa kerrotaan lateksien valmistusmenetelmistä ja päällystystavoista sekä monoklonaalisista vasta-aineista. Lateksin ja monoklonaalisen vasta-aineen ominaisuudet vaikuttavat kitin toimivuuteen. Tutkimusosassa päällystettiin latekseja neljällä eri mab:lla. Näistä parhaimmat vasta-aine-antigeeni-reaktiot antoivat mab:lla III 5E3A3 ja III 5E3A9 päällystetyt lateksit. Näillä latekseilla tutkittiin lateksin määrän ja koon sekä detergenttien vaikutusta reaktioon. Reaktionopeus kasvoi lateksin määrän kasvaessa, mutta partikkelikoon pienentäminen ei puolestaan tuonut parannusta reaktionopeuteen. Detergenteistä Triton X-100:lla oli paras vaikutus reaktionopeuteen. Kun sopiva lateksi- ja puskurikoostumus oli valittu siirryttiin tekemään kokeita ulostenäytteillä. Ulosteliuoksen pitoisuudella oli huomattava vaikutus reaktioon. Liian vahva ulosteliuos näytti inhiboivan mab-antigeeni-reaktiota. Näissä mittauksissa reaktionopeus kasvoi lateksin määrän kasvaessa aivan kuten ilman ulostetta mitattaessa. Työn tutkimusosassa verrattiin myös tämän menetelmän herkkyyttä markkinoilla olevaan testiin. Mab:lla III 5E3A3 päällystetty lateksi vaikutti olevan hieman herkempi kuin mab:lla III 5E3A9 päällystetty lateksi. Lateksien väliset erot olivat kuitenkin pienet. Silti herkkyys ei yltänyt aivan markkinoilla olevan kitin tasolle. Myöskään partikkelikoon muutos ei parantanut herkkyyttä. Tutkimusosassa pystyttiin osoittamaan, että lateksi voitiin päällystää monoklonaalisilla vasta-aineilla ja tällaisen lateksin avulla H. pylori antigeenin osoitus ulostenäytteestä QuikRead-analysaattorilla oli mahdollista.