At the Far Ends of Kinetic Analysis - Very Fast and Slow Binding Transitions Resolved with a Novel Fluorescence-Based Biosensor

In this work, a novel fluorescence-based biosensor is used to resolve very fast and slow binding kinetics in three case studies. Fast kinetics of 15 congeneric ligands against cAMP-dependent protein kinase are determined with a competition assay. In a second study, the transition dynamics of mono- to multivalent TNFa and its interplay with therapeutic antibodies is investigated. In a third example, the unusually slow dissociation of Sirtuin-rearranging ligands from Sirtuin-2 is studied.
In vorliegender Arbeit wird ein fluoreszenz-basierter Biosensor zur Auflösung sehr schneller und langsamer Bindungskinetiken von drei Fallstudien verwendet. Schnelle Kinetiken von 15 artverwandten Liganden gegen Proteinkinase A werden mittels einer Verdrängungsmethode bestimmt. In einer zweiten Studie wird die Oligomerisierung von TNFa im Zusammenhang mit Antikörperbindung untersucht. Drittens wird die ungewöhnlich langsame Dissoziation von Sirtuin-umlagernden Liganden von Sirtuin-2 aufgelöst.