Desarrollo de una técnica de inmunoelectrotransferencia 'Westernblot' para la detección de anticuerpos contra componentes proteínicos de Salmonella Typhi

Since its development, inmunoblotting has been widely used as a tool in molecular biology studies as well as in the diagnosis of infectious diseases. Traditionally the demostration of antibodies against Salmonella typhi has focussed in those against polysaccharide components specially related to somatic antigen "O". Very few works, if any, have been done to investigate antibodies against other antigens such as protoplasmic proteins. The paper presented hereby intends to demonstrate the presence of such antibodies in experimentally immunized rabbits as well in volunteers vaccinated with oral anti-typhoid fever vaccine (T y 21 a strain). A sonicate protein mixture from Salmonella typhi was separated into fractions by polyacrylaminde-SDS electrophoresis; after transfer to nitrocellulose membranes, bands were immuno-stained with sera fromrabbits immunized with the sonicate mixture, or with sera from volunteers before and after immunization with the vaccine strain T y21a. The immune-staihing was performed with enzymatic reactions, using either anti-rabbit IgG conjugated with alkaline phosphatase, or anti-human IgG conjugated with alkaline phosphatase. A 38 kd band was consistently seen with sera from immunized rabbits and with sera from the vaccinated volunteers. No such a band was Seen in the controls. No cross reactions were observed, suggesting that immunobloting could be a usefull technnique for detec tion of antibodies against Salmonella typhi.
Desde su desarrollo la lnmunoelectrotransferencia (INMET) ha sido una herramienta útil en biología molecular así como también en el diagnóstico de diferentes enfermedades infecciosas. Tradicionalniente la demostración de anticuerpos contra Salmonella typhi, se ha enfocado hacia la detección de aquellos, que se producen contra lipopolisacáridos, especialmente los que se relacionan con el antígeno somático "0". Pero pocos trabajos, se han realizado para la detección de anticuerpos contra otros antígenos tales como proteínas protoplasmáticas. Este trabajo intenta demostrar si tales anticuerpos se producen en conejos inmunizados experimentalmente, así como también en voluntarios vacunados contra la fiebre Tifoidea con lavacuna oral (cepa Ty21a). El antígeno preparado y purificado a partir de una cepa de Salmonella typhi, fue suspendido en una solución tampón y sonicado para obtener sus productos celulares; de esta manera y con la adecuada concentración de proteínas fue separado en gel de poliacrilamida en sus diferentes fracciones antigénicas y luego transferidos a membranas de nitrocelulosa en donde por medio de reacción inmunoenzimática, se visualizó la banda característica, al poner en contacto la membrana con el antisuero hiperinmune obtenido en conejos (Modelo Experimental) y el suero de voluntarios antes y después de la inmunización (Modelo Humano). La banda visualizada correspondió a un peso aproximado de 38.000 kd. Trece de los voluntarios (32.5%), presentaron esta misma banda antes de la inmunización, la cual, aunque más tenue, representó un complejo antígeno-anticuerpo, lo cual, induce a pensar en un posible contacto con el microorganismo en el pasado. La posibilidad de la reacción cruzada se descartó realizando el mismo procedimiento con lisados de Escherichia coli.