Development of new artificial insemination extenders supplemented with GnRH analogues to induce ovulation and proteomic characterization of rabbit semen

Tesis por compendio
Los objetivos generales de esta tesis fueron desarrollar nuevos diluyentes de inseminación artificial (IA) suplementados con un análogo de GnRH y caracterizar el proteoma del semen de conejo. En el capítulo I, se evaluó la inclusión de un cóctel de inhibidores de proteasas en el diluyente de inseminación (DI) para evitar parte de la actividad proteasa del plasma seminal de conejo. La calidad seminal y la fertilidad no se vieron afectadas por el cóctel. Sin embargo, la prolificidad fue significativamente menor en el grupo experimental en comparación con los grupos de control positivo y negativo (8,2±0,22 vs. 9,3±0,23 y 9,2±0,26 gazapos por parto, respectivamente). De este capítulo, se puede concluir que la adición de una amplia variedad de inhibidores de proteasas en el diluyente de semen de conejo afecta negativamente la tasa de prolificidad y que en el futuro sería aconsejable probar inhibidores específicos de aminopeptidasas (AMIs). En el capítulo II, suplementamos el DI con AMIs (bestatina y EDTA), y estudiamos su efecto sobre la calidad seminal y el rendimiento reproductivo. La inclusión de AMIs no afectó la calidad seminal, ni la fertilidad (85,3 vs. 88,6%), ni la prolificidad (10,12 vs. 10,51 gazapos por parto) en comparación con el grupo control. Por lo tanto, concluimos que los AMIs se pueden utilizar en los DIs de conejo para inhibir parte de la actividad aminopeptidasa del plasma seminal (PS). En el capítulo III, probamos nuevos DIs de conejo que contenían AMIs con o sin nanopartículas de quitosano (CS)-sulfato de dextrano (DS) que atrapan el análogo de GnRH. Se estudiaron los siguientes diluyentes: C4 (4 µg de buserelina/coneja en medio control (MC): tris-ácido cítrico-glucosa suplementado con AMIs), C5 (5 µg de buserelina/coneja en MC), Q4 (4 µg de buserelina/coneja en nanopartículas CS-DS en MC) y grupo Q5 (5 µg de buserelina/coneja en nanopartículas CS-DS en MC). La fertilidad fue significativamente menor en el grupo C4 en comparación con los grupos C5
The general objectives of this thesis were to develop new artificial insemination (AI) extenders supplemented with a GnRH analogue and to characterise the proteomic profile of rabbit semen. In chapter I, the inclusion of a protease inhibitors cocktail in the insemination extender (IE) to avoid part of the rabbit seminal plasma protease activity was evaluated. Seminal quality and fertility rate were not affected by the cocktail, having similar values between experimental and control groups. However, prolificacy rate was significantly lower in experimental group compared to positive and negative control groups (8.2 ±0.22 vs. 9.3 ±0.23 and 9.2 ±0.26 total born per litter, respectively). From this chapter, it may be concluded that the addition of a wide variety of protease inhibitors in the rabbit semen extender negatively affects prolificacy rate and it in the future it would be advisable to test specific aminopeptidase inhibitors (AMIs). Therefore, in chapter II, we supplemented the IE with AMIs (bestatin and EDTA), and we studied their effect on rabbit seminal quality and reproductive performance. Seminal quality was not affected by AMIs. Regarding reproductive performance, the inclusion of AMIs, did not affect fertility (85.3 vs. 88.6%), nor the prolificacy rate (10.12 vs. 10.51 kits per delivery) in comparison with control group. Thus, we concluded that AMIs can be used in rabbit IEs to inhibit part of the seminal plasma aminopeptidase activity. In chapter III, we test new rabbit IEs containing AMIs with or without chitosan (CS)-dextran sulfate (DS) nanoparticles entrapping the GnRH analogue. The following experimental extenders were studied: C4 (4 µg buserelin/doe in control medium (CM): Tris-citric acid-glucose supplemented with AMIs), C5 (5 µg of buserelin/doe in CM), Q4 (4 µg of buserelin/doe into CS-DS nanoparticles in CM) and Q5 group (5 µg of busereline/doe into CS-DS nanoparticles in CM). Results showed that fertility was significantly lower in C4 group com
Els objectius generals d'aquesta tesi van ser desenvolupar nous diluents d'inseminació artificial (IA) suplementats amb un anàleg de GnRH i caracteritzar el proteoma del semen de conill. En el capítol I, es va avaluar la inclusió d'un còctel d'inhibidors de proteases en el diluent d'inseminació (DI) per evitar part de l'activitat proteasa del plasma seminal de conill. La qualitat seminal i la fertilitat no es van veure afectades pel còctel. No obstant això, la prolificitat va ser significativament menor en el grup experimental en comparació amb els grups de control positiu i negatiu (8,2 ± 0,22 vs. 9,3 ± 0,23 i 9,2 ± 0,26 catxaps per part, respectivament). D'aquest capítol, es pot concloure que l'addició d'una àmplia varietat d'inhibidors de proteases en el diluent de semen de conill afecta negativament la taxa de prolificitat i que en el futur seria aconsellable provar inhibidors específics de aminopeptidasas (AMIS). En el capítol II, suplementàrem el DI amb AMIs (bestatina i EDTA), i vam estudiar el seu efecte sobre la qualitat seminal i el rendiment reproductiu. La inclusió de AMIs no va afectar la qualitat seminal, ni la fertilitat (85,3 vs. 88,6%), ni la prolificitat (10,12 vs. 10,51 catxaps per part) en comparació amb el grup control. Per tant, concloem que els AMIs es poden utilitzar en els DIs de conill per inhibir part de l'activitat aminopeptidasa del plasma seminal (PS). En el capítol III, vam provar nous DIs de conill que contenien AMIs amb o sense nanopartícules de quitosà (CS)-sulfat de dextrà (DS) que atrapen l'anàleg de GnRH. Es van estudiar els següents diluents: C4 (4 µg de buserelina/conilla en medi control (MC): tris-àcid cítric-glucosa suplementat amb AMIs), C5 (5 µg de buserelina/conilla en MC), Q4 (4 µg de buserelina/conilla en nanopartícules CS-DS en MC) i grup Q5 (5 µg de buserelina/conilla en nanopartícules CS-DS en MC). La fertilitat va ser significativament menor en el grup C4 en comparació amb els grups C5, Q5 i Q4 (0,7 enfront de 0,85