Long noncoding RNA XIST regulates the EGF receptor to promote TGF-[beta]1-induced epithelial-mesenchymal transition in pancreatic cancer

Background: This study focuses on the lncRNA XIST (X inactive-specific transcript), an lncRNA involved in multiple human cancers, and investigates the functional significance of XIST and the molecular mechanisms underlying the epithelial--mesenchymal transition (EMT) in pancreatic cancer (PC). Methods: Clinical specimens from 25 patients as well as 5 human PC cell lines were analyzed for XIST, YAP, and microRNA(miR)-34a by quantitative real-time PCR (qRT-PCR) and immunohistochemistry. To investigate how XIST influences cell proliferation, invasiveness, and apoptosis in PC, we performed the CCK-8 assays, Transwell assays, and flow cytometry. Luciferase reporter assays, qRT-PCR, and Western blot were applied to prove that miR-34a directly binds to XIST. Results: Up-regulation of XIST and Yes associated protein (YAP) and down-regulation of miR-34a were consistently observed in the clinical specimens and PC cell lines. Silencing XIST reduced the expression of YAP and suppressed transforming growth factor (TGF)-[beta]1-induced EMT, while over-expression of XIST increased the expression of YAP and promoted EMT. In addition, inhibition of epidermal growth factor receptor (EGFR) hampered the XIST-promoted EMT. The results from the luciferase reporter assays confirmed that miR-34a directly targets XIST and suggested that XIST regulates cell proliferation, invasiveness, and apoptosis in PC by sponging miR-34a. Conclusions: XIST promotes TGF-[beta]1-induced EMT by regulating the miR-34a-YAP-EGFR axis in PC. Key words: lncRNA XIST, miR-34a, pancreatic cancer, YAP, EGFR. Contexte : Cette étude se concentre sur l'ARNnm long XIST (X inactive-specific transcript), un ARNnm long impliqué dans plusieurs types de cancer chez l'humain, et vise à examiner l'importance fonctionnelle de XIST et les mécanismes moléculaires qui sous-tendent la TEM dans le cancer pancréatique (CP). Méthodes: Des spécimens cliniques prélevés de 25 patients et 5 lignées cellulaires humaines de cancer du pancréas ont été analysées quant à la présence de XIST, YAP, et du micro ARN (miR)-34a par qRT-PCR et immunohistochimie. Afin d'examiner comment XIST influence la prolifération, l'invasion et l'apoptose des cellules de CP, les auteurs ont réalisé un dosage avec le CCK-8, un test sur supports de culture Transwell, et de la cytométrie en flux. Le dosage du rapporteur luciférase, la qRT-PCR et le buvardage de Western ont été réalisés pour confirmer que le miR-34a se lie directement à XIST. Résultats : La régulation à la hausse de XIST et YAP, et la régulation à la baisse du miR-34a étaient systématiquement observées dans les spécimens cliniques et les lignées de CP. Le silençage de XIST réduisait l'expression de YAP et réprimait la TEM induite par le TGF-[beta]1 (Transforming Growth Factor Beta 1), alors que la surexpression de XIST accroissait l'expression de YAP et favorisait la TEM. De plus, l'inhibition du récepteur de l'EGF (EGFR) ralentissait la TEM favorisée par XIST. Le dosage du rapporteur luciférase confirmait que le miR-34a ciblait directement XIST et suggérait que XIST pourrait réguler la prolifération, l'invasion et l'apoptose des cellules de CP en captant le miR-34a. Conclusions: XIST favorise la TEM induite par le TGF-[beta]1 en régulant l'axe miR-34a-YAP-EGFR dans le CP. [Traduit par la Rédaction] Mots-clés: ARNnm long XIST, miR-34a, cancer pancréatique, YAP, EGFR.
Introduction As one of the most fatal human malignancies, pancreatic cancer (PC) ranks as the 4th leading cause of cancer-related deaths in the USA (Michaud 2004). Because there is still [...]