Characterization of a thermostable endoglucanase from Cellulomonas fimi ATCC484

Bacteria in the genus Cellulomonas are well known as secretors of a variety of mesophilic carbohydrate degrading enzymes (e.g., cellulases and hemicellulases), active against plant cell wall polysaccharides. Recent proteomic analysis of the mesophilic bacterium Cellulomonas fimi ATCC484 revealed uncharacterized enzymes for the hydrolysis of plant cell wall biomass. Celf_1230 (CfCel6C), a secreted protein of Cellulomonas fimi ATCC484, is a novel member of the GH6 family of cellulases that could be successfully expressed in Escherichia coli. This enzyme displayed very little enzymatic/hydrolytic activity at 30 [degrees]C, but showed an optimal activity around 65 [degrees]C, and exhibited a thermal denaturation temperature of 74 [degrees]C. In addition, it also strongly bound to filter paper despite having no recognizable carbohydrate binding module. Our experiments show that CfCel6C is a thermostable endoglucanase with activity on a variety of [beta]-glucans produced by an organism that struggles to grow above 30 [degrees]C. Key words: Cellulomonas, endoglucanase, thermostable, GH6. Les bactéries du genre Cellulomonas sont bien connues pour sécréter une variété d'enzymes mésophiles de dégradation d'hydrates de carbone (p. ex. les cellulases et hémicellulases), actives sur les polysaccharides des parois des cellules végétales. Une analyse récente en protéomique de la bactérie mésophile Cellulomonas fimi ATCC484 a révélé la présence d'enzymes encore non caractérisées pour l'hydrolyse de la biomasse des parois cellulaires végétales. Celf_1230 (CfCel6C), une protéine sécrétée par Cellulomonas fimi ATCC484, est un nouveau membre de la famille GH6 des cellulases qui a pu être exprimé avec succès chez Escherichia coli. Cette enzyme présentait très peu d'activité enzymatique/hydrolytique à 30 [degré]C, mais montrait une activité optimale à 65 [degré]C environ et présentait une température de dénaturation thermique de 74 [degré]C. De plus, elle se liait très fortement au papier filtre malgré l'absence d'un module de liaison glucidique reconnaissable. Les expériences des auteurs montrent que CfCel6C est une endoglucanase thermostable active sur une variété de [beta]-glucanes, produite par un organisme qui a du mal à croître à des températures supérieures à 30 [degré]C. [Traduit par la Rédaction] Mots-clés : Cellulomonas, endoglucanase, thermostable, GH6.
Introduction Cellulomonas spp. are Gram-positive, mesophilic, coryneform rod shaped bacteria of the Actinobacteria phylum (Stackebrandt and Kandler 1979), and are best known as decomposers of lignocellulosic substrates (Beguin et al. [...]