过表达pellino-1在Kupffer细胞内毒素耐受时对TRAF3 泛素化及MAPK信号通路的调控

【目的】探讨上调pellino-1在Kupffer细胞（KC）内毒素耐受时对肿瘤坏死因子受体相关因子3（TRAF3）泛素化、 促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路及下游细胞因子分泌情况的影响。【方法】分离、培养 C57BL/6 小鼠 KC，随机分 为2组：①空载对照组：转染空载质粒48 h后，先给予小剂量LPS（10 ng/mL）刺激24 h，再给予大剂量LPS（300 ng/mL）刺激。 ②过表达组：过表达pellino-1慢病毒转染48 h后，先给予小剂量LPS（10 ng/mL）刺激24 h，再给予大剂量LPS（300 ng/mL）刺 激。两组分别于处理后0、5、10、30、60 min收获细胞，蛋白质免疫印迹试验（Western blot）检测pellino-1、K48泛素化（K48 ubiquitin，K48-Ub）、TRAF3、JNK 、p-JNK、p38、p-p38蛋白水平表达变化；酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞培养上清液中 IL-1β、TNF-α及IL-10的分泌情况。【结果】与空载对照组相比，过表达组pellino-1蛋白表达量在各个时间点均明显升高； K48-Ub水平明显升高；TRAF3蛋白表达量明显降低；JNK、p38蛋白表达量没有明显变化，但p-JNK及p-p38蛋白表达量显 著升高；过表达组细胞上清中IL-1β及TNF-α的量明显升高（P < 0.05），而IL-10的量则明显降低（P < 0.05）。【结论】过表达 pellino-1可促进TRAF3蛋白K-48泛素化降解，导致TRAF3蛋白表达量降低，激活下游的MAPK信号，从而抑制内毒素耐受 的形成。