SUBSTRATE SPECIFICITY OF ВACILLUS THURINGIENSIS IМV В-7324 PEPTIDASE 2

Мета. Вивчення субстратної специфічності очищеної пептидази 2 Вacillus thuringiensis IМВ В-7324. Методи. Для вивчення субстратної специфічності пептидази 2 використовували білки: еластин, фібрин, фібриноген, колаген і казеїн. Визначення оптимальних співвідношень ензим-субстрат проводили за допомогою повного двофакторного досліду. Спорідненість (константу Міхаеліса, Km) до субстратів пептидази 2 B. thuringiensis IMB B-7324 визначали за методом подвійних обернених величин в координатах Лайнуївера-Берка (1/ν0–1/[S]). Для обчислення та графічного представлення результатів повного двофакторного експерименту використовували метод стрімкого сходження (метод Бокса-Уілсона) та комп’ютерну систему аналізу даних STATISTICA 8.0. Результати. Дослідження гідролізу нативних білкових субстратів пептидазою 2 В. thuringiensis IМВ В-7324 показало, що ензим здатний розщеплювати фібрин, фібриноген, казеїн і колаген. Для ефективного гідролізу білків за результатами повного двофакторного досліду було встановлено оптимальні співвідношення концентрацій ензиму і субстратів: 1 мг пептидази 2 здатен розщеплювати 54 мг фібрину, 67 мг фібриногену, 25 мг казеїну і 49 мг колагену. Показано, що досліджуваний ензим виявляє вищу спорідненість дофібрину і казеїну, для яких значення константи Міхаеліса Km становить 1,1 і 1,2 мг, відповідно. Висновки. Пептидаза 2 B. thuringiensis IМВ В-7324 характеризується вищою специфічністю щодо фібрину і фібриногену, ніж до казеїну і колагену, проте більшою спорідненістю до фібрину і казеїну.
Цель. Исследование субстратной специфичности очищенной пептидазы 2 Вacillus thuringiensis ИМ В В-7324. Методы. Для изучения субстратной специфичности пептидазы 2 использовали белки: эластин, фибрин, фибриноген, коллаген и казеин. Определение оптимальных соотношений фермент-субстрат проводили с помощью полного двухфакторного опыта (ПФО). Сродство (константу Михаэлиса, Km) к субстратам пептидазы 2 B. thuringiensis ИMB B-7324 определяли по методу двойных обратных величин в координатах Лайнуивера-Бэрка (1/ν0 – 1/[S]). Для вычисления и графического представления результатов полного двухфакторного опыта использовали метод стремительного восхождения (метод Бокса-Уилсона) и компьютерную систему анализа данных STATISTICA 8.0. Результаты. Исследование гидролиза нативных белковых субстратов пептидазой 2 В. thuringiensis ИМ В В-7324 показало, что фермент расщепляет фибрин, фибриноген, казеин и коллаген. Для эффективного гидролиза белков по результатам полного двухфакторного опыта (ПФО) были установлены оптимальные соотношения концентраций фермента и субстратов: 1 мг пептидазы 2 может расщепить 54 мг фибрина, 67 мг фибриногена, 25 мг казеина и 49 мг коллагена. Показано, что исследуемый фермент проявляет большее сродство к фибрину и казеину, для которых значения константы Михаэлиса Km составляет 1,1 и 1,2 мг, соответственно. Выводы. Пептидаза 2 B. thuringiensis ИМ В В-7324 характеризуется более высокой специфичностью к фибрину и фибриногену, чем к казеину и коллагену, но большим сродством к фибрину и казеину.
Ai m. Investigation of substrate specificity of the purified peptidase 2 from Вacillus thuringiensis IМV В-7324. Methods. To study the substrate specificity of the peptidase 2 we used protein: elastin, fibrin, fibrinogen, collagen and casein. Determination of the optimal ratio of the enzymesubstrate was carried out a two-level factorial design. Substrate affinity (Michaelis constant, Km) of enzyme was established by the double reciprocal coordinates in the Lineweaver-Burk (1/ν0 - 1 / [S]). For calculation and graphic presentation of the results obtained by two factorial experiments there were used Box-Wilson method and computer program STATISTICA 8.0. Results. The study of hydrolysis of native protein substrates by В. thuringiensis IМV В-7324 peptidase 2 showed that the enzyme is able to cleave the fibrin, fibrinogen, casein and collagen. For effective hydrolysis of proteins according to the results of full two-way experience (CFE) was determined the optimal correlation of enzyme concentration and substrates concentration. So 1 mg of peptidase 2 is able to cleave 54 mg of fibrin, 67 mg of fibrinogen, 25 mg of casein and 49 mg of collagen. It was shown that the examine enzyme is more affinity to the fibrin and casein for that the Michaelis constant Km is 1.1 and 1.2 mg, respectively. Conclusions. The peptidase 2 of B. thuringiensis IМV В-7324 is characterized by higher specificity to the fibrin and fibrinogen than to casein and collagen, but more affinity to fibrin and casein.