Hybridoma development; monoclonal antibody production in search for protein purification

oz HIBRIDOMA GELİŞİMİ; PROTEIN PÜRİFİKASYONU ARAŞTIRMASI İÇİN MONOKLONAL ANTİKOR ÜRETİMİ Yücel, Gözde Yüksek Lisans, Biyoloji Bölümü Tez Danışmanı: Prof. Dr. Gürdal Alaeddinoğlu Ortak Tez Danışmanı: Prof. Dr. Vasıf Hasırcı Ocak 2002, 81 sayfa Bu çalışmada, protein saflaştırılmasında kullanılmak üzere, hibridoma teknolojisi kullanılarak BSA ve katalaz enzimine karşı monoklonal antikor üretilmesi amaçlanmıştır. Antijenik enjeksiyon, her iki protein için de en iyi doz olarak 100 u.g olarak belirlendi ve immünizasyonlar, 2-3 hafta aralıklarla, 3 kez deri altı olarak gerçekleştirildi. Füzyon, son immünizasyonlar 3 veya 4 gün sonra yapıldı. Myeloma hücreleri, füzyondan bir hafta önce üretilmeye başlandı. Dalak- myeloma hibridlerini seçmek için HAT ve HT seçici besiyerleri kullanıldı. Pozitif kuyuları belirlemek için ELİSA yapıldı. Bulunan hibridlerin ön çoğaltma işlemi yapılarak sınırlayıcı dilüsyon ile ayrı klonları izole edildi. Klonlar arasından,yüksek antikor üreticileri için seçildi. BSA'ya karşı antikor üreten 7 adet ve katalaza karşı antikor üreten 8 adet hibrit ELISA ile belirlendi ve OD değerlerinin sırasıyla, 0.75 ve 0.883 arasında ve 0.675 ve 1.864 arasında değiştiği saptandı. Pozitif klonlar kullanılarak, monoklonal antikorların in vitro üretimi yapıldı ve antikor titreleri belirlendi. BSA monoklonal antikorları için titre 1/256 ve katalaz monoklonal antikorları için titre 1/64 bulundu. Anahtar kelimeler: Hibridoma teknolojisi, monoklonal antikorlar, BSA, katalaz ABSTRACT HYBRIDOMA DEVELOPMENT; MONOCLONAL ANTIBODY PRODUCTION IN SEARCH FOR PROTEIN PURIFICATION Yücel, Gözde M.S., Department of Biology Supervisor: Prof. Dr. Gürdal Alaeddinoğlu Co- Supervisor: Prof. Dr. Vasıf Hasırcı January 2002, 81 pages The present study was aimed at production of monoclonal antibodies against BSA and catalase using hybridoma technology for future use in the purification of proteins. The best dose of antigenic administration was determined to be 100 u.g for both the proteins and the immunizations were carried out subcutaneously 3 times with 2 to 3 week intervals. Fusion was performed 3 or 4 days after the last immunization. Growth of myeloma cells were initiated a week before the fusion. HAT and HT selective media were used to select for spleen- myeloma hybrids. ELISA was carried out to find out the positive wells. Once found, the hybrids were further cultivated and through limiting dilution, seperateclones were isolated. The clones were screened for high antibody producers. Of hybrids, 7 producing monoclonal antibodies against BSA and 8 producing monoclonal antibodies against catalase were tested in ELISA and the OD values differed between 0.75- 0.883, and between 0.675-1.864 respectively. By employing the positive clones, in vitro production of monoclonal antibodies was performed and antibody titreş were determined. The titreş were found to be 1/256 and 1/64 for monoclonal antibodies to BSA and for monoclonal antibodies to catalase respectively. Keywords: Hybridoma technology, monoclonal antibodies, BSA, catalase IV 81