Mullet(Lisa saliens) liver glucose-6-phosphate dehydrogenase; isolation and characterization

oz KEFAL (LISA SALIENS) KARACİĞERİNDEN GLUKOZ-6-FOSFAT DEHİDROGENAZ ENZİMİNİN İZOLASYONU VE KARAKTERİZASYONU Elay, Yurdaer Yüksek Lisans, Biyokimya Bölümü Tez Yöneticisi: Prof. Dr. Emel Arınç Eylül 1999, 103 sayfa Bu çalışmada pentoz fosfat yolunun ilk enzimi olan glukoz-6-fosfat dehidrogenaz, İzmir Körfezi'nden toplanan kefal {Lisa saliens) balığının karaciğerinden izole edildi ve çeşitli biyokimyasal özellikleri karakterize edildi. Enzimin izolasyonu amonyum sülfat çöktürmesi ve 2',5'-ADP- Sepharose 4B afinite kromatografisi yöntemleri ile yapıldı. SDS- poliakrilamit jel elektroforezinde enzim tek bir protein bandı verdi veenzimin monomer moleküller ağırlığı 64000 Dalton olarak hesaplandı. İlki 7.0-8.0 değerleri arasında ve ikincisi 9.5'ten 10.5'e doğru artmak suretiyle, yüksek enzim aktivitesinin gözlendiği iki farklı pH aralığı saptandı. Enzimin doğal substratı glukoz-6-fosfat için Vmax ve Km değerleri sırasıyla 244 nmol/dak/ml ve 0.098 mM olarak hesaplandı. Enzimin spesifik koenzimi NADP+ için Vmax ve Km değerleri sırasıyla 256 nmol/dak/ml ve 0.008 mM olarak hesaplandı. Enzim kinetiğinin hem glukoz-6-fosfat için hem de NADP+ için aynı olduğu ve Michaelis-Menten kinetiğine uyduğu görüldü. Magnezyum iyonunun, çok düşük derişimlerde dahi enzimin aktivitesini stimule ettiği görülürken, kadmiyum ve nikel iyonlarının da enzim aktivitesini artırdıkları gözlendi. Çinko iyonunun enzimi inhibe ettiği görüldü. Alüminyum iyonunun enzim aktivitesi üzerinde önemli bir etkisinin olmadığı görüldü. Gliserolün varlığında enzimin ısıya maruz kaldığında stabilitesini koruduğu gözlendi. Anahtar kelimeler: Pentoz fosfat yolu, glukoz-6-fosfat dehidrogenaz, karakterizasyon, kefal (Lisa saliens) vı ABSTRACT MULLET {LISA SALIENS) LIVER GLUCOSE-6-PHOSPHATE DEHYDROGENASE; ISOLATION AND CHARACTERIZATION Elay, Yurdaer M. S., Department of Biochemistry Supervisor: Prof. Dr. Emel Arınç September 1999, 103 pages In this study, glucose-6-phosphate dehydrogenase, the first enzyme of the pentose phosphate pathway was isolated from the liver of leaping mullet (Lisa saliens) collected in Izmir Bay, Agean coast of Turkey and several biochemical properties of the enzyme was characterized. Isolation of the enzyme involved ammonium sulfate precipitation and 2',5'-ADP-Sepharose 4B affinity chromatography methods. The enzyme showed a single protein band on SDS-polyacrylamide gel iii 103