Stability Analysis of Immunoglobulin G Glycosylation by Liquid Chromatography Coupled with Mass Spectrometry

Plazma stanice luče protutijela tj. imunoglobuline. Do danas je poznato pet vrsta imunoglobulina kategoriziranih kao IgA, IgG, IgM, IgD, IgE. Područje interesa ovoga rada je IgG, odnosno N-glikozilacija fragmenta Fc imunoglobulina G. Glikozilacija ovog fragmenta je od velike važnosti; najmanja promjena može utjecati na efektorsku ulogu samog IgG-a, a time u konačnici na imunološku reakciju. Prvi dio rada usredotočen je na optimizaciju predanalitičkih koraka već postojeće metode. Drugi dio rada je usredotočen na analizu stabilnosti glikozilacije IgG-a. Analizirana je glikozilacija fragmenta Fc IgG-a kod 8 ispitanika u tri vremenske točke. Dobiveni rezultati ovom metodom (LC-ESI-MS) upućuju na to da postoje promjene u glikozilaciji IgG-a. Promjene su uočene u IgG4 kod dvije glikoforme; G0FN te G1FN u istog ispitanika. Plasma cells secrete antibodies ie. immunoglobulins. Until now, there are five types of immunoglobulins known classified as IgA, IgG, IgM, IgD, IgE. The area of interest in this thesis is IgG, particularly N-glycosylation of the Fc fragment of immunoglobulin G. Glycosylation of this fragment is of great importance; the smallest change can affect the effector role of IgG, and thus ultimately the immunological reaction. The first part of the thesis focuses on the optimization of preanalytical steps of existing method. The second part focuses on stability analysis of glycosylation of IgG. Glycosylation of Fc fragment of IgG is analysed in 8 subjects at three time points. The results obtained by this method (LC-ESI-MS) indicate that there are changes in the glycosylation of IgG. Changes are observed in the IgG4 in two glycoforms; G0FN and G1FN in the same subject.