Avaliação do citrato de tamoxifeno e temperatura na inversão sexual da tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus)

Aquaculture in Brazil has been improving and finding new techniques to improve the quality of fish produced, one of the main problems is the use of steroids in sex inversion of tilapia, despite being a widespread technique and practiced in various regions of the world is increasing concern to environmental liabilities generated by the use of 17 α-methyltestosterone. In this context, this study aims to evaluate the overall use of non steroids in sex inversion of Nile tilapia. The first experiment was conducted to evaluate the influence of citrate tamoxifen on sex inversion of Nile tilapia larvae from two days of life, they were divided into an experimental design of five treatments and three replicates, and fed diets with different amounts of citrate tamoxifen: 0, 25, 50, 75 and 100 mg kg-1 of feed. After 28 days of treatment, the larvae remaining in each treatment were counted and transferred to water tanks of 500 liters which were fed a diet containing 28% crude protein for 60 days. After this period the fry were sexed by the "squash" method. The survival 75.5 ± 5.74, 73 ± 4.76, 66 ± 11.19, 76.5 ± 4.12, 75 ± 3.46 and average percentage of male individuals 62.5 ± 5, 70 ± 8.1, 60 ± 8.2, 70 ± 0.0, 62.5 ± 9.5 for treatments 0, 25, 50, 75 and 100 mg of citrate tamoxifen kg-1 diet, respectively, showed no statistically significant differences. The number of gonads in each subject experienced a significant reduction in the treatments with 75 and 100 mg of citrate tamoxifen (89.3 and 79.3 ± 0.527 ± 0.378) when compared with treatments 0, 25 and 50 mg of citrate tamoxifen (98, 9 ± 1.0, 97.6 ± 1.0 and 94.5 ± 1.0, respectively), the histological structure of female gonads did not differ and ovaries in all treatments showed well-defined and oocytes at various stages of maturation. The second experiment evaluated the effects of temperature 28, 30, 32 and 34°C and control (28ºC + ration plus 60 mg of 17 α-methyltestosterone) in sexual inversion, survival and presence of deformities in Nile tilapia. The results showed a statistical difference between the proportion of males, with a temperature of 32 and 34°C and control (91 ± 0.71; 96 ± 0.59 and 98.33 ± 1.0%, respectively) showed better results than those obtained for 28 and 30 degrees treatments (71 and 82 ± 0.29 ± 0.33%). Survival: 90.49 ± 2.32, 88.20 ± 2.04, 85.43 ± 1.58, 82.16 ± 1.63 and 90.74 ± 2.28% for temperatures 28, 30, 32 and 34°C, respectively, showed no statistical differences, but there were differences in survival between the control and treatments 32 and 34°C. In the analysis of radiographs was not possible to observe the presence of morphological changes in fish subjected to different treatments. With this experiment it was concluded that temperatures of 32 and 34°C larvae were able to genetically masculinizing females, and that there was no increase in mortality and in deformities presence that can be attributed to treatment. This technique is an alternative to the use of steroid hormones. The third experiment was conducted in order to describe gonads of Nile tilapia fingerlings (Supreme) with 75 days of age, using as a tool cytological techniques, structural and ultrastructural. Cytological technique gonads were stained with carmine acetate pressed between slide and coverslip and observed under light microscopy. To structural prepare gonads, after processing, were cut in microtome at thickness of 5 mm, stained with hematoxylin-eosin and observed under light microscopy. At the ultrastructural method, gonads were photo documented in a scanning electron microscope FEI QUANTA 200. The structural and cytological preparations allowed the visualization of the ovaries of oocytes, cell boundaries, nuclei and nucleoli associated. In males the cytologic preparations did not allow a clear identification of the structures, but in preparing structural testicular sperm was possible to visualize cysts, Sertoli cells and the beginning of the formation of seminiferous tubules. The scanning electron microscopy, used to visualize surface allowed, after the fracture of the gonads, to observe internal structure, such as spermatogonia, oocytes and collagen fibers. The results showed that all three techniques were efficient in distinguishing the sex of the individual, allowing observation and comparison of the structures present in the gonads. A aquicultura no Brasil vem se aprimorando e buscando novas técnicas para melhorar a qualidade do pescado produzido, mas um dos principais problemas é a utilização de esteroides na inversão sexual da tilápia, apesar de ser uma técnica difundida e praticada em várias regiões do mundo; é crescente a preocupação com um passivo ambiental gerado pela utilização da 17 α-metiltestosterona. Nesse contexto, esse trabalho teve como objetivo geral avaliar a utilização de não-esteroides na inversão sexual de tilápia do Nilo. O primeiro experimento foi realizado para avaliar a influência do citrato de tamoxifeno na inversão sexual de larvas de tilápia a partir dos dois dias de vida, que foram distribuídas em um delineamento experimental de cinco tratamentos e três repetições, recebendo dietas com diferentes quantidades de citrato de tamoxifeno: 0, 25, 50, 75 e 100 mg kg-1 de ração. Após 28 dias de tratamento, as larvas restantes em cada tratamento foram contadas e transferidas para caixas de água de 500 L onde receberam dieta contendo 28% de proteína bruta por 60 dias. Após este período, os alevinos foram sexados pelo método "squash". A sobrevivência 75,5 ± 5,74; 73 ± 4,76; 66 ± 11,19; 76,5 ± 4,12; 75 ± 3,46% e a porcentagem média de indivíduos machos 62,5 ± 5; 70 ± 8,1; 60 ± 8,2; 70 ± 0,0; 62,5 ± 9,5% para os tratamentos 0, 25, 50, 75 e 100 mg de citrato tamoxifeno kg-1 de ração, respectivamente, não apresentaram diferenças estatísticas significativas. O número de gônadas presentes em cada indivíduo apresentou redução significativa, nos tratamentos com 75 e 100 mg de tamoxifeno (89,3 ± 0,527 e 79,3 ± 0,378%) quando comparado com os tratamentos 0, 25 e 50 mg de tamoxifeno (98,9 ± 1,0; 97,6 ± 1,0 e 94,5 ± 1,0%, respectivamente), a estrutura histológica das gônadas femininas não apresentou diferenças e os ovários em todos os tratamentos apresentaram ovócitos bem definidos e em vários estádios de maturação. O segundo experimento avaliou os efeitos da temperatura 28, 30, 32 e 34ºC e do controle (28ºC + ração acrescida de 60 mg de 17 α-metiltestosterona) na inversão sexual, sobrevivência e presença de deformidades na tilápia do Nilo. Os resultados demonstraram diferença estatística entre a proporção de machos, sendo que a temperatura de 32 e 34ºC e controle (91 ± 0,71; 96 ± 0,59 e 98,33 ± 1,0%, respectivamente) apresentaram resultados superiores aos obtidos para os tratamentos 28 e 30ºC (71 ± 0,29 e 82 ± 0,33%). A sobrevivência: 90,49 ± 2,32; 88,20 ± 2,04; 85,43 ± 1,58; 82,16 ± 1,63 e 90,74 ± 2,28% para as temperaturas 28, 30, 32 e 34ºC e controle com hormônio, respectivamente, não apresentou diferenças estatísticas, mas houve diferenças na sobrevivência entre o controle e os tratamentos 32 e 34oC. Na análise das radiografias não foi possível observar presença de alterações morfológicas nos peixes submetidos aos diferentes tratamentos. Com esse experimento concluiu-se que as temperaturas de 32 e 34ºC foram capazes de masculinizar larvas geneticamente fêmeas, e que não houve incremento na mortalidade e na presença de deformidades que possam ser atribuídas aos tratamentos. Essa técnica é uma alternativa para a utilização de hormônios esteroides. O terceiro experimento foi realizado com o objetivo de descrever as gônadas de alevinos de tilápia do Nilo (Supreme) com 75 dias de idade, utilizando técnicas citológicas, estruturais e ultraestruturais como ferramenta. Na técnica citológica, as gônadas coradas com acetato carmim foram prensadas entre lâmina e lamínula e observadas em microscopia de luz. Para a preparação estrutural, as gônadas após processamento foram cortadas em micrótomo na espessura de 5 μm, coradas com hematoxilina-eosina e observadas em microscopia de luz. No método ultraestruturais, as gônadas foram fotodocumentadas em microscópio eletrônico de varredura FEI QUANTA 200. As preparações citológicas e estruturais dos ovários permitiram a visualização de ovócitos, seus limites celulares, os núcleos e nucléolos associados. Nos machos, a preparação citológica não permitiu a identificação clara das estruturas, mas na preparação estrutural dos testículos foi possível visualizar cistos espermáticos, células de sertoli e o início da formação de túbulos seminíferos. A microscopia eletrônica de varredura, utilizada para a visualização de superfície, permitiu após a fratura das gônadas, observar estrutura internas, tais como espermatogônias, ovócitos e fibras de colágeno. Os resultados obtidos demonstraram que as três técnicas foram eficientes na distinção do sexo do indivíduo, permitindo a observação e a comparação das estruturas presentes nas gônadas. xiv, 63 f