Histomolecular evaluation of the fractal dimension and remodeling of the extracellular matrix during the ovarian development fetal bovine

Submitted by Michele Mologni (mologni@unoeste.br) on 2021-01-22T19:38:22Z No. of bitstreams: 1 Ellyn Amanda Fonseca Martins.pdf: 1811029 bytes, checksum: 958c7e57b2ca67aa3d07f419216cd1a3 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-22T19:38:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ellyn Amanda Fonseca Martins.pdf: 1811029 bytes, checksum: 958c7e57b2ca67aa3d07f419216cd1a3 (MD5) Previous issue date: 2020-03-06 Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - FAPESP The reproductive physiology of female mammals is different due to their estrous phase, the formation of female gametes and ovarian follicles that started in the prenatal period. The appearance of preantral stages in the ovary has a species-specific temporal pattern. In females of Bos taurus indicus, studies have already shown that primordial, primary and secondary follicles appear close to 90, 120 and 150 days of gestation, respectively. Although studies have focused on remodeling the extracellular matrix (ECM) during the formation and functionality of adult ovaries, there is a lack of understanding about the mechanisms that control the formation of preantral follicles during pregnancy. The aim of the study was to characterize the histomolecular phenotype of ECM remodeling through the fractal dimension (FD), quantification of collagen and profile of transcripts involved with remodeling of ECM in ovaries of bovine fetuses associated with the temporality of formation of pre-antral follicles. Thus, in order to investigate tissue remodeling along fetal ovarian development, fetal ovaries were used to quantify FD, total collagen and relative mRNA abundance of genes related to ECM remodeling (COL1A1, COL1A2, COL4A1, MMP2, MMP9, MMP14, TIMP1 and TIMP2). For this purpose, pairs of fetal ovaries were obtained from Bos taurus indicus females at 60, 90, 120 and 150 days of gestation in a slaughterhouse, one of which was destined for the extraction of total RNA and further investigation of the target transcripts and the other for collagen analysis. total and FD. The present study demonstrated that after 120 days there was a greater area of total collagen in the fetal ovary. In the staining analyzes in hematoxylin eosin (HE), the FD was lower at 150 days when compared to 60 days of gestation, however, it presented an inverse pattern in the picrosirius staining. The expression of the target genes for the relative abundance of mRNA transcripts for COL1A1, COL4A1, MMP2, MMP14, TIMP1 and TIMP2 was greater at 150 days compared to day 60. It is concluded that the fractal dimension reflects the morphological changes during structural organization of fetal ovarian tissue and that the expression of genes related to ECM remodeling is modulated throughout pregnancy in fetal bovine ovaries. A fisiologia reprodutiva de fêmeas mamíferas é distinta em decorrência de sua fase estral, formação dos gametas femininos e dos folículos ovarianos iniciada no período pré-natal. O aparecimento dos estágios pré-antrais no ovário tem padrão temporal espécie-específico. Em fêmeas de Bos taurus indicus, estudos já demonstraram que folículos primordiais, primários e secundários aparecem próximo aos 90, 120 e 150 dias de gestação, respectivamente. Embora os estudos foquem na remodelação da matriz extracelular (MEC) durante a formação e funcionalidade de ovários adultos, há escassez no entendimento sobre os mecanismos que controlam a formação dos folículos pré-antrais durante a gestação. O objetivo do estudo foi caracterizar o fenótipo histomolecular do remodelamento MEC através da dimensão fractal (DF), quantificação de colágeno e perfil de transcritos envolvidos com remodelação de MEC em ovários de fetos bovinos associados à temporalidade de formação dos folículos pré-antrais. Assim, a fim de investigar o remodelamento tecidual ao longo do desenvolvimento ovariano fetal, foi utilizado ovários de fetos para quantificar a DF, o colágeno total e a abundância relativa de mRNA de genes relacionados ao remodelamento da MEC (COL1A1, COL1A2, COL4A1, MMP2, MMP9, MMP14, TIMP1 e TIMP2). Para tanto, pares de ovários fetais foram obtidos de fêmeas Bos taurus indicus com 60, 90, 120 e 150 dias de gestação em matadouro, sendo um deles destinado à extração de RNA total e posterior investigação dos transcritos alvos e o outro para análise de colágeno total e DF. O presente estudo demonstrou que a partir dos 120 dias houve maior área de colágeno total no ovário fetal. Nas análises de coloração em hematoxilina eosina (HE), a DF foi menor aos 150 dias quando comparada aos 60 dias de gestação, todavia, apresentou padrão inverso na coloração de picrosirius. A expressão dos genes alvos da abundância relativa dos transcritos de mRNA para COL1A1, COL4A1, MMP2, MMP14, TIMP1 e TIMP2 foi maior aos 150 dias em comparação ao dia 60. Conclui-se que a dimensão fractal reflete às alterações morfológicas durante a organização estrutural do tecido ovariano fetal e que a expressão de genes relacionados ao remodelamento da MEC é modulada ao longo da gestação em ovários fetais bovinos.