Estudio de las variantes genéticas de diaphorina citri, vector de candidatus liberibacter spp. en cítricos

"El presente trabajo se basó en técnicas moleculares para la detección de Candidatus Liberibacter de las especies americana y asiática, se utilizó la técnica PCR punto final y se aplicó a muestras vegetales y de insectos usando los iniciadores BK-DY2F (5´- CGCGTATGCAATACGAGCGGCA-3´) Y BK-DY2R (3´- GCCTCGCGACTTCGCAACCCAT-5´) para la especie asiática y BK-DY1F (5´- AGTCGAGCGAGTACGCAAGTACT-3´) y BK-DY1R (3´- CAACTTAATGATGGCAAATATAG-5´) para la especie americana. No se detectó presencia de Huanglongbing en ninguno de los casos, se concluyó que esto pudo deberse a que no se eligieron plantas con sintomatología aparente. Se sugiere el uso de PCR Tiempo Real o PCR anidada y se propuso que los muestreos sean basados en plantas con sintomatología aparente. La técnica que se usó para la identificación de haplotipos del Psílido Asiático de los Cítricos (PAC) fue PCR punto final. La amplificación del ADN se realizó con los iniciadores específicos DCITRI COI-L y DCITRI COI-R, el producto de la reacción PCR fue secuenciado en el Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica A. C. (IPICYT), obteniendo 22 secuencias finales que se analizaron con los programas Oligo analizer y Clustal Omega. Las secuencias obtenidas se compararon con las que se encuentran reportadas en el GenBank y se determinó que existe una línea matriz que corresponde al haplotipo Dcit-1 con número de identificación FJ190306, sin embargo, también existen algunos individuos con diferencias en dos nucleótidos y que corresponden a los sitios de muestreo donde no hay estudios previos. Se identificaron dos nuevos posibles haplotipos a los que se les denominó DcitACC-1 y DcitACC-2. La distribución de las nuevas variantes corresponde a estados que no se han estudiado anteriormente, el haplotipo Dcit-1 ya se ha reportado en Nuevo León (Fuentes et al., 2018). Las nuevas posibles variantes pueden estar relacionadas con las condiciones climáticas a las que habita el PAC. Se sugirió realizar muestreos más amplios en zonas donde el PAC no haya sido estudiado, esto con la finalidad de describir todas las variantes distribuidas en el país." "The present work was based on molecular techniques for the detection of Candidatus Liberibacter of the American and Asian species, endpoint PCR technique was used and applied to plant and insect samples using the primers BK-DY2F (5'- CGCGTATGCAATACGAGCGGCA-3') and BK-DY2R (3'- GCCTCGCGACTTCGCAACCCAT-5') for the Asian species and BK-DY2R for the Asian species. GCCTCGCGACTTCGCAACCCAT-5') for the Asian species and BK-DY1F (5'- AGTCGAGCGAGCGAGTACGCAAGTACT-3') and BK-DY1R (3'- CAACTTAATGATGGATGGCAAATATATAG-5') for the American species. The presence of Huanglongbing was not detected in any of the cases, it was concluded that this could be due to the fact that plants with apparent symptomatology were not selected. The use of Real Time PCR or nested PCR is suggested and it was proposed that sampling be based on plants with apparent symptomatology. The technique used for the identification of Asian citrus psyllid (ACP) haplotypes was endpoint PCR. DNA amplification was performed with the specific primers DCITRI COI-L and DCITRI COI-R, the product of the PCR reaction was sequenced at the Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica A. C. (IPICYT), obtaining 22 final sequences that were analyzed with the Oligo analyzer and Clustal Omega programs. The sequences obtained were compared with those reported in GenBank and it was determined that there is a parent line that corresponds to the Dcit-1 haplotype with identification number FJ190306, however, there are also some individuals with differences in two nucleotides and that correspond to sampling sites where there are no previous studies. Two new possible haplotypes were identified and named DcitACC-1 and DcitACC-2. The distribution of the new variants corresponds to states that have not been previously studied; the Dcit-1 haplotype has already been reported in Nuevo León (Fuentes et al., 2018). The new possible variants may be related to the climatic conditions at which the CAP inhabits. It was suggested to conduct broader sampling in areas where PAC has not been studied, this with the aim of describing all variants distributed in the country."