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Purificação e caracterização de uma ß-N-acetillhexosaminadase extraída do mamífero marinho Sotalia fluviatilis
- Source :
- Repositório Institucional da UFRN, Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN), instacron:UFRN
- Publication Year :
- 2006
- Publisher :
- Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2006.
-
Abstract
- This report shows 2232 times purification of a βNAcetylhexosaminidase from hepatic extracts from the sea mammal Sotalia fluviatilis homogenate with final recovery of 8,4%. Sequenced steps were utilized for enzyme purification: ammonium sulfate fractionation, Biogel A 1.5 m, chitin, DEAESepharose and hydroxyapatite chromatographies. The protein molecular mass was estimated in 10 kDa using SDSPAGE and confirmed by MALDITOF. It was found to have an optimal pH of 5.0 and a temperature of 60°C. Using pnitrophenylNAcetylβDglycosaminide apparent Km and Vmax values were of 2.72 mM and 0.572 nmol/mg/min, respectively. The enzyme was inhibited by mercury chloride (HgCl2) and sodium dodecil sulfate (SDS) Este trabalho mostra a purificação de 2232 vezes de uma βNAcetilhexosaminidase obtida a partir dos extratos hepáticos do mamífero marinho Sotalia fluviatilis com recuperação final de 8,4%. Passos seqüenciais foram utilizados para a purificação enzimática: fracionamento com sulfato de amônio e as cromatografias de Biogel A 1.5 m, Quitina, DEAESepharose e Hidroxiapatita. A massa molecular protéica foi estimada em 10 kDa usando SDSPAGE e confirmada por MALDITOF. Foi encontrado como pH e temperatura ótimos, 5,0 e 60°C, respectivamente. Os valores de Km e Vmáx aparentes foram 2,72 mM e 0,572 nmol/mg/min, sendo utilizado o pnitrofenilNAcetilβDglicosaminídeo como substrato. A enzima foi inibida pelo cloreto de mercúrio (HgCl2) e dodecil sulfato de sódio (SDS)
- Subjects :
- NAcetylgalactosaminidase
NAcetilhexosaminidase
β
Sotalia fluviatilis
Extratos hepáticos
NAcetilglucosaminidase
NAcetilgalactosaminidase
NAcetylhexosaminidase
Sea mammal
Mamíferos marinhos
NAcetylglycosaminidase
Glicosaminoglicanos
Hepatics extracts
CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA [CNPQ]
Glycosaminoglycans
Subjects
Details
- Language :
- Portuguese
- Database :
- OpenAIRE
- Journal :
- Repositório Institucional da UFRN, Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN), instacron:UFRN
- Accession number :
- edsair.od......3056..49da331677b4c49a3e3a5e91c27dc2eb