Analyse de peupliers transgéniques sur-exprimant miR397a et caractérisation des sites d'insertion des transgènes

L’intérêt général pour les bioénergies a conduit au développement de biocarburants de seconde génération via l’utilisation de biomasse lignocellulosique. Afin d’en apprendre davantage sur les gènes impliqués dans les propriétés du bois, des espèces à croissance rapide tel que le peuplier ont été étudiées et transformées génétiquement. Nous nous intéressons dans un premier temps à l’endroit où s’est inséré l’ADN-T d’Agrobacterium tumefaciens chez des peupliers transgéniques : c’est la caractérisation du (des) site(s) d’insertion. Cette méthode a d’abord été mise au point sur certaines lignées connues du laboratoire, comme FAS13. Nous avons pu constater, chez FAS13, qu’un ADN-T s’est inséré dans le chromosome 6 au niveau d’un gène d’ubiquitine Potri.006G129600. En parallèle, une analyse est réalisée sur des peupliers transgéniques sur-exprimant miR397a, afin de voir si ce micro-ARN a un impact sur l’expression de gènes codant des laccases. L’expression de 4 laccases représentatives, PtrLAC1, PtrLAC15, PtrLAC16 et PtrLAC42, est suivie grâce à la RT-PCR semi-quantitative et la RT-PCR quantitative chez ces plants transgéniques. Trois de ces lignées sur-exprimant miR397a ont une diminution de l’expression des gènes codant pour les quatre laccases étudiées. Le but est désormais de caractériser les sites d’insertion de ces lignées.
The global interest in bio-energy has led to the development of second-generation biofuels through the use of lignocellulosic biomass. To learn more about the genes involved in wood properties, fast-growing tree species such as poplar were studied and genetically transformed. Firstly, we are interested in the place where the T-DNA of Agrobacterium tumefaciens is inserted in transgenic poplars: it’s the characterization of the insertion site. This method was developed on some known strains of the laboratory, for example FAS13. We have seen, in FAS13, that a T-DNA is inserted into the 6th chromosome, in the ubiquitin gene Potri.006G129600. In parallel, an analysis is performed on transgenic poplars over-expressing miR397a, to observe any impact of this miRNA on the expression of genes encoding laccases. The expression of four representative laccases, PtrLAC1, PtrLAC15, PtrLAC16 and PtrLAC42, are followed by semi-quantitative RT-PCR and quantitative RT-PCR in these transgenic plants. Three of these lines over-expressing miR397a have decreased expression of genes coding for the four laccases studied. The aim now is to characterize the insertion sites of these lines.