Citometrijsko razlikovanje podrijetla hematurije uporabom antitijela na glikoforin A

Uvod: Laboratorijsko razlikovanje glomerularne i neglomerularne hema-turije godinama se uglavnom temelji na ispitivanju morfologije eritrocita u mokraći. Za razliku od eritrocita iz donjih mokraćnih puteva koji su intaktni, pravilnih oblika, glomerularni eritrociti su manji i imaju nepravilne i složene oblike. U ovom raduje ispitana mogućnost razlikovanja podrijetla hematurije protočnom citometrijom, mjerenjem parametara ovisnih o morfološkim značajkama eritrocita u mokraći nakon obilježavanja eritrocita fluorescentnim monoklonskim antitijelima na glikoforin A. Materijali i metode: Svježi uzorci mokraće od ukupno 31 bolesnika s dokazanim glomerularnim i 31 bolesnika s dokazanim urološkim bolestima analizirani su na protočnom citometru FACScan (Becton Dickinson, San Jose, SAD). Eritrociti su izdvojeni od ostalih stanica i nestaničnih elemenata u mokraći bojenjem fluorescentnim monoklonskim antitijelima na glikoforin A, a zatim su mjereni intenziteti rasapa svjetlosti u smjeru ulazne zrake (engl. forward scatter, FSC) i okomito na smjer ulazne zrake (engl. sidescatter, SSC), te je izračunat omjer SSC/FSC. FSC je bio mjera veličine, a SSC mjera oblika eritrocita. Rezultati: Nađena je statistički značajna razlika u izmjerenim vrijednostima FSC (P < 0,001), SSC (P = 0,016), kao i u omjeru SSC/FSC (P < 0,001) između dviju skupina bolesnika. Prema ROC analizi (engl. ReceiverOperating Characteristic) dobiveni su slijedeći rezultati: za FSC (granična vrijednost za glomerular-nu hematuriju FSC ≤ 49) dijagnostička osjetljivost 90,3% i specifičnost 83,9%; za SSC (granična vrijednost za glomerularnu hematuriju SSC > 73) dijagnostička osjetljivost 83,9% i specifičnost 61,3%; za omjer SSC/FSC (granična vrijednost za glomerularnu hematuriju SSC/FSC > 2,42) dijagnostička osjetljivost 83,9% i specifičnost 90,3%. Zaključak: Opisana metoda analize eritrocita protočnom citometrijom je jednostavna, automatizirana tehnika za razlikovanja podrijetla hematurije. U odnosu na metodu ispitivanja morfologije eritrocita daje objektivnije i pouzdanije podatke, te omogućuje usmjeravanje bolesnika prema urološkoj, odnosno nefrološkoj problematici.
Background: Glomerular and urinary tract origins of hematuria are differentiated on the basis of urinary red cell morphology. Glomerular erythro-cytes are distorted and are smaller than erythrocytes from the lower urinary tract. In this study, we investigated the possibility of flow cytometric differentiation of the origin of hematuria using phycoerythrin-conjugated antibody against glycophorin A, by measuring parameters dependent on morphologic characteristics of urinary erythrocytes. Materials and methods: Fresh urine samples from 31 patients with glomerular disease and 31 patients with urological disease were analyzed on the flow cytometer FACScan (Becton Dickinson, San Jose, USA). Erythrocytes were distinguished from other particles with similar size in urine by staining with phycoerythrin-conjugated antibody against glycophorin A. The intensity of forward scattered light (FSC) and side scattered light (SSC) of the erythrocytes were measured as indicators of red cell size and shape, respectively. Also, the SSC/FSC ratio was calculated. Results: A statistically significant difference in FSC (P < 0.001), SSC (P = 0.016) and SSC/FSC ratio (P < 0.001) values between two groups of patients were found. According to ROC analysis (Receiver Operating Characteristic) the following results were obtained in distinguishing the origin of hematuria: for FSC (cut-off value for glomerular hematuria: FSC ≤ 49), diagnostic sensitivity 90.3% and specificity 83.9%; for SSC (cut-off value for glomerular hematuria: SSC > 73), diagnostic sensitivity 83.9% and specificity 61.3%; for SSC/FSC ratio (cut-off value for glomerular hematuria: SSC/FSC > 2.42), diagnostic sensitivity 83.9% and specificity 90.3%. Conclusion: The described flow cytometry analysis is a simple, automated method that can be used to establish distinction between glomerular and non-glomerular bleeding. Compared to the method of urinary red cell morphology examination, it yields more objective and reliable informations and allows directing of patients to urologic or nephrologic treatment.