Implementación de un método para la cuantificación de cistina intraleucocitaria como apoyo diagnóstico para la cistinosis

Resumen: Antecedentes y objetivos: La cistinosis es un error innato del metabolismo cuyas características clínicas incluyen compromiso renal severo y formación de cristales de cistina en la córnea, especialmente en la presentación adulta de la enfermedad. Es una enfermedad tratable, por lo cual establecer el diagnóstico de forma oportuna es fundamental para iniciar la terapia. Para la confirmación bioquímica de la enfermedad se requiere determinar las concentraciones intracelulares de cistina, para lo cual se han reportado diferentes métodos tanto para el aislamiento de las células como para la cuantificación del aminoácido. Con el objetivo de mejorar el diagnóstico bioquímico confirmatorio en nuestro medio establecimos un protocolo de cuantificación intraleucocitaria de cistina. Métodos: Se implementó un método de cuantificación de cistina en polimorfonucleares por cromatografía líquida de alta resolución, evaluando el mejor anticoagulante a utilizar, la estabilidad de la muestra a 4 ̊C y estableciendo valores de referencia para nuestra población. Resultados: Se determinó que la muestra para cuantificación intraleucocitaria de cistina debe ser anticoagulada mediante la adición de ácido cítrico-dextrosa como anticoagulante. La muestra debe ser procesada inmediatamente, dada su baja estabilidad incluso en refrigeración. Con 50 individuos sanos se estableció como punto de corte para nuestra población 0,34 nmol 1/2 cistina/mg. Conclusión: La adaptación realizada del método de cuantificación de cistina utiliza el número más alto de muestras control hasta ahora reportado en la literatura. Nuestros resultados dan cuenta de la necesidad de implementar el método a nivel local y reafirman la conveniencia de que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia para proporcionar una mayor confiabilidad a la hora de interpretar los resultados. Abstract: Background and aims: Cystinosis is an inborn error of metabolism, clinically characterised by severe renal involvement and development of corneal cystine deposits, especially in the adult form of the disease. Cystinosis is a treatable condition. Therefore, an early diagnosis is necessary to start therapy. For biochemical confirmation of the condition it is necessary to quantify intracellular cystine concentrations. For this, different methods have been described with variations in cell isolation strategies and the amino acid quantification techniques used. In order to improve confirmatory biochemical diagnosis in our setting, a protocol for intraleukocitary cystine quantification was established. Methods: A high performance liquid chromatography based method for cystine quantification in polymorphonuclear cells was implemented. Evaluation of the best anticoagulant to use and temperature stability of the sample at 4 ̊C were performed. In addition, we established reference values for our population. Results: It was determined that intraleukocitary cystine quantification must be performed in blood samples containing acid-citrate-dextrose as anticoagulant. Samples must be processed immediately due to their poor stability even when refrigerated. Based on the results from 50 healthy individuals, the cut-off point established for our population was 0.34 nmol 1/2 cystine/mg. Conclusion: The adaptation performed to the cystine quantification method here presented the highest control population that has been reported in the literature so far. Our results highlight the need for making available a cystine quantification method locally and confirm the convenience for each laboratory to establish its own reference values to provide greater reliability for interpreting results. Palabras clave: Cistinosis, Aminoacidopatía, Error innato del metabolismo, Cistina intraleucocitaria, Síndrome de Fanconi, Keywords: Cystinosis, Aminoacidopathy, Inborn error of metabolism, Intraleukocitary cystine, Fanconi syndrome