Detección molecular de Ralstonia solanacearum en agroecosistemas bananeros de Colombia

El Moko del banano causado por Ralstonia solanacearum es una de las enfermedades más limitantes en la producción de este cultivo en el mundo. Una alternativa viable para reducir la incidencia de la enfermedad consiste en la detección temprana de plantas afectadas y de suelos con altos niveles de inóculo bacterial. En esta investigación se evaluaron diferentes metodologías de extracción de ácidos nucleicos a partir de material vegetal y de suelos para su utilización en el diagnóstico molecular de la bacteria, determinándose además las características de los filotipos y secuevares que causan esta enfermedad en la región bananera de Urabá, Colombia. Los resultados indican que para el caso del diagnóstico de material vegetal, los métodos más efectivos consisten en la utilización de kits comerciales de extracción de ADN que utilizan columnas de silica gel en presencia de altas concentraciones salinas o alternativamente métodos convencionales con buffers que contengan PVPP. Para la detección a partir de muestras de suelo, la metodología más apropiada resultó ser aquella en la cual se realizó previa a la extracción de ADN, el enriquecimiento microbiano en medio liquído semiselectivo SMSA. El diagnóstico molecular mediante PCR múltiple permitió determinar que el agente causal del Moko del banano en Urabá corresponde al Filotipo II, secuevar 4 de R. solanacearum. Los procedimientos establecidos se constituyen en una herramienta a ser empleada en nuestro medio para el diagnóstico temprano del Moko del banano tanto en las investigaciones epidemiológicas como en el manejo de esta enfermedad en el campo. Moko disease of banana caused by Ralstonia solanacearum is one of the most limiting factors in the production of this crop in the world. An alternative to reduce the incidence of this disease consists in the early detection of affected plants and soils with high levels of bacterial inoculum. This research evaluated different methods of nucleic acids extraction from plant material and soils, to be used in molecular diagnosis of R. solanacearum in the banana-growing region of Urabá, Colombia. Results showed that for diagnosis of plant material, DNA extraction should be done with commercial kits including silica gel columns or alternatively conventional methods using buffers containing PVPP. For bacterial detection from soil samples the most appropriated method was the microbial enrichment in SMSA broth medium before DNA extraction. Multiplex PCR analysis indicated that phylotype II, sequevar 4 was the causal agent of Moko disease of banana in the region of Urabá. Techniques applied in this research could be used in epidemiological studies as well as to support management strategies of this disease in banana plantations.