Propriedades funcionais e conformacionais de hemoglobinas de Pipa pipae

Orientador: Aldo Focesi Junior Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A caracterização de três dos quatro componentes das hemoglobinas de Pipa pipae obtidos pela cromatografia em DEAE-sephadex mostrou que os três componentes bem como o hemolisado de eritrócitos apresentam uma afinidade pelo oxigênio na ordem de 4 mm de Hg quando em tampão bis-tris lactato 0,05M pH 7.0. A afinidade dessas moléculas pelo ligante CO apresenta uma afinidade 50 vezes maior que a apresentada pelo oxigênio e o efeito Bohr estudado nos equilíbrios com CO mostra-se praticamente nulo nas hemoglobinas isentas de cofatores e um aumento desse efeito para ¿ 0,3 é encontrado quandona presença de ATP ¿10 POT. ¿3¿M, sugerindo a existência de sítios de fosfato nos três componentes estudados. A cinética de desnaturação por benzoato de sódio 1M e uréia 7M mostra existir uma grande resistência da molécula quando isenta de cofatores e existir sensibilidade quando em presença do efetor alostérico. Com o agente desnaturante SDS a 1%, tanto a forma oxi como a forma deoxi se comportam de maneira semelhante à deoxihemoglobina humana, que sofre desnaturação de 20% das moléculas com esse tratamento, ao contrário da oxihemoglobina humana, que desnatura cerca de 80% das moléculas. Suspeitando ser as hemoglobinas de Pipa pipae estabilizadas na forma T (do modelo MWC) mesmo após a saturação, foi estudado seu comportamento frente ao ligante CO dentro dos parâmetros do esquema de Adair calculando-se as constantes intrínsecas de associação... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: Three out of the four components of hemoglobin of Pipa pipae, obtained by DEAE-sephadex chromatography, were studied. The three components and the whol hemolisated showed an oxygen affinity around 4mm of HG when in bis-0,05M bis-tris-lactant buffer pH 7,0. the affinity of the molecules to CO binding is 50 times greater than that of the oxygen, the Bohr effect, studied in CO equilibria is, in practice, equal to zero in hemoglobins without cofactors. An increase of that effect of zero to ¿0,3 is observed in the presence of ¿10 POT. ¿3¿M of ATP, which indicates the existence of phosphate sites in the three components. The kinetics of denaturation by 1 M sodium benzoate and 7 M urea shows that there is a strong resistance of the stripped molecule to denaturation and there is sensibility when in the presence of the allosteric effector. With the denaturating agent SDS (1%) where both the oxy form and the deoxy form behave as the human deoxyhemoglobin which shows denaturation of 20% of the molecules, with the same treatment. Supposing that the hemoglobins of Pipi pipae are estabilezed in the T form (MWC model) even after te saturation, their behavior in the presence of the CO ligands was studied according to Adair¿s theory... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations Doutorado Doutor em Ciências Biológicas