Conception et validation préclinique de nanobodies radiomarqués dirigés contre HER3 dans le cancer du sein triple négatif

Le cancer du sein triple-negatif (CSTN) est le sous-type le plus agressif. L’identification precoce des patientes resistantes a la chimiotherapie neoadjuvante peut permettre une readaptation therapeutique et ainsi ameliorer leur pronostic. Depuis plusieurs annees, les nanobodies (VHHs) sont apparus comme une alternative aux anticorps conventionnels et montrent un fort potentiel pour l’imagerie nucleaire. L’objectif de ce projet est de developper un nouveau radioligand de type nanobody, radiomarque par le Technetium-99 m, ciblant l’Human Epidermal growth factor Receptor 3 (HER3), recepteur implique dans les mecanismes de resistance des CSTN a la chimiotherapie neoadjuvante. La production des VHHs a ete realisee par la societe Caminnov. L’immunisation des camelides a ete induite par injection de proteine recombinante HER3-Fc (R&D Systems) ou de fragments membranaires de cellules HEK293 transfectees avec la proteine recombinante HER3-Fc. La selection des VHHs a ete realisee sur cinq lignees cellulaires avec differents niveaux d’expression du recepteur HER3 : MCF-7, MDA-MB-468, MDA-MB-231, SkBr3 et CHO. L’affinite des VHHs pour HER3 a ete mesuree par cytometrie de flux (CMF) et par test ELISA avec presence ou non de neureguline (R&D systems). En parallele, la faisabilite du radiomarquage des tags histidines, presents sur l’extremite C-terminale des VHHs, par le Technetium-99 m a ete realisee grâce a l’utilisation du complexe [99mTc(H2O)3(CO)3]+. Sur 13 VHHs produits, un seul a montre une affinite pour les cellules exprimant HER3 en presence ou non de la neureguline par CMF. L’analyse des tests ELISA realises sur ce VHH a mis en evidence une affinite plus importante pour la lignee cellulaire exprimant HER3 (KDMCF-7 = 0,027) comparativement a la lignee n’exprimant pas HER3 (KDCHO = 0,078). Les etudes de radiomarquage avec le [99mTc(H2O)3(CO)3]+ ont permis d’obtenir 2 VHHs avec des rendements d’environ 90 % sans purification et 2 VHHs avec des rendements de 20 et 25 % avec purification sur colonne d’exclusion sterique NAP-5. Ils ont tous ete obtenus avec une purete radiochimique > 90 %. Ces resultats preliminaires confirment la possibilite de produire et de radiomarquer des naonobodies ciblant HER3. Des etudes complementaires de resonnance plasmonique de surface sont en cours pour evaluer la specificite du VHH selectionne par rapport aux autres membres de la famille HER. Support : Ligue regionale contre le cancer, I-site Clermont.