Simultaneous determination of guanidinoacetate, creatine and creatinine by liquid chromatography-tandem mass spectrometry: a diagnostic tool for creatine deficiency syndromes in body fluids and a perspective use on cultured fibroblasts

Guanidinoacetate (GAA) et creatine (Cr) sont des marqueurs biochimiques des syndromes de deficit en Cr (SDC). Nous decrivons une methode de chromatographie liquide couplee a la spectrometrie de masse en tandem (LC/MSMS) pour la determination simultanee de GAA, Cr et creatinine (Crn). L’incorporation de Cr dans les fibroblastes pour la confirmation diagnostique du deficit en transporteur de la Cr est egalement etudiee. La separation chromatographique des trois composes butyles et l’utilisation d’etalons internes marques permet leur quantification par LC/MSMS en mode electrospray positif. La technique est lineaire de 0 a 600, 675 et 4 500 μmol/L et la limite de quantification est de 0,1 ; 0,04 et 0,9 μmol/L pour GAA, Cr et Crn respectivement. La repetabilite et la fidelite intermediaire presentent un coefficient de variation < 11 %. Les taux de recuperation des surcharges sont compris entre 83 et 109 %. Les valeurs de reference dans le liquide cephalorachidien de sujets ≥ 14 ans ont ete etablies pour GAA et Cr. Cinq lignees de fibroblastes ont ete utilisees pour l’etude de l’incorporation de Cr. Celle-ci augmente avec la concentration en Cr dans le milieu de culture et est diminuee par un inhibiteur du transporteur de la Cr (3-guanidinopropionate, 500 μmol/L) (96 h d’incubation ; [Cr dans le milieu] = 25 μmol/L ; p < 0,05). Le dosage de GAA, Cr et Crn par LC/MSMS pour le diagnostic de SDC propose est fiable et s’applique a plusieurs milieux biologiques. Nous renforcons egalement l’interet de l’etude d’incorporation de la Cr pour le diagnostic de deficits en transporteur de la Cr.