Avaliação clinica do estudo da expressão de NIS em tecido tiroidiano, da detecção de NIS em sangue periferico e de mutações do gene

Orientador: Laura Sterian Ward Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: A captação de iodo é um passo fundamental no metabolismo da célula folicular normal, que o utiliza na fabricação de hormônios tiroidianos. O tratamento cirúrgico, seguido de radioiodoterapia, possibilita a cura de grande parte dos pacientes com câncer bem diferenciado da tiróide que possuem a característica de manter a capacidade de captar iodo. Infelizmente, cerca de 20% dos casos de câncer de tiróide que não são bem diferenciados, além de uma parte dos próprios tumores bem diferenciados, não responde bem e, apesar dos esforços cirúrgicos e radioterápicos, evolui com recidivas e culmina com a morte do paciente. Com a identificação do gene que codifica a glicoproteína intramembranosa responsável pelo transporte de iodo para a célula folicular, chamado NIS, tem se tentando relacionar a falta de captação de iodo com a não expressão do gene e, portanto, pior prognóstico de alguns casos Estudamos um total de 77 tecidos tiroidianos comparando 27 carcmomas (21 carcinomas papilíferos e 6 carcinomas foliculares) com 8 tumores benignos (adenomas foliculares). Também incluímos 39 bócios benignos (33 bócios multinodulares, 4 casos de doença de Hashimoto e 2 casos de Graves). Foram ainda estudados 3 carcinomas medulares da tiróide. Utilizando a técnica nested-PCR que inclui o gene p-actina como I controle de DNA na reação, identificamos a expressão do gene NIS em todos os casos, inclusive nos carcinomas medulares de tiróide. A expressão do gene NIS foi encontrada mesmo no tecido tumoral de 2 casos que não apresentavam captação de radioiodo na pesquisa de corpo inteiro (PCI) apesar de apresentarem evidências de metástase com níveis séricos de tiroglobulina (Tg) elevados e/ou ultrassom positivo para neoplasia. A razão pela qual esses pacientes não captam iodo apesar de expressarem o gene NIS, poderia ser a ocorrência de mutações. Para verificar tal possibilidade, padronizamos a técnica de screening de mutações pela técnica de DGGE para estudo dos exons 4, 5 e 6 do gene. Não foram encontradas mutações nesses exons nos 57 casos investigados, sugerindo que, caso ocorram, as mutações do gene não devem ser as principais responsáveis pelas alterações na função da proteína NIS. ; Como a proteína é produzida preferencialmente por células foliculares ~ tiroidianas, pressupõe-se que indivíduos com câncer poderiam apresentar níveis séricos de NIS mais elevados do que indivíduos livres da doença. Assim, desenvolveu-se um ensaio de PCR simples para detecção dos exons 4 e 6 de NIS em sangue periférico no intUitode verificar a possível utilidade deste parâmetro no acompanhamento de portadores de carcinomas diferenciados da tiróide. Em sangue periférico de 13 pacientes que possuíam o gene NIS expresso no tumor inicial e retomaram 6, 12 e 24 meses após a cirurgia, verificou-se que o gene NIS não era detectável em 4 casos: 2 carcinomas foliculares, 1 carcinoma papilifero e 1 caso de Graves. No entanto, o exon 6 de NIS foi positivo em todas as amostras com exceção de 1 caso que, apesar de apresentar metástases durante o seguimento, manteve NIS sérico indetectável. Assim, pode-se concluir que a pesquisa da expressão do gene NIS circulante não tem valor para seguimento clínico, não apresentando correlação com a presença de metástases e/ou recorrência Abstract: Iodine uptake plays an important role in the metabolism ofthe normal follicular cell, that uses it to produce thyroid hormones. Surgery followed by radiotherapy may cure most ofthe patients with well differentiated thyroid cancer, that keep their ability to capture iodine. Unfortunately, about 20 per cent ofthe thyroid cancer cases are undifferentiated and some of the well differentiated tumors do not respond to the treatment, and end up dying. With the identification of the gene that encodes the intra-membrane glycoprotein responsible for the transportation of iodine to the follicular cell, called NIS, there has been an effort to correlate the lack of iodine uptake with a non expression of the gene, and, therefore, a worst prognosis. We have studied a total of 77 thyroid tissue samples comparing 27 carcinomas (21 papillary carcinomas and 6 follicular carcinomas), with 8 benign tumors (follicular adenomas). We included 39 benign goiters (33 multinodular goiter, 4 cases ofHashimoto disease and two Graves diseases). AIso there were 3 medullary carcinomas. Using a nested-PCR, that included (3-actinas a DNA control, we identified NIS expression in all cases, even in the thyroid medullary carcinomas. NIS expression was found in tumor tissue .of two cases that did not have iodine uptake in the whole body scan, even though there was evidence of metastasis with high serum leveIs of tirogIobulin (Tg) and ultrasound positive for neopIasia. The reason why these patients did not present iodine uptake although they expressed the gene NIS, could be a mutation. In order to test such possibility, we have set the patterns for the use of a DGGE screening of exons 4, 5 and 6 of the gene. We did not identify any mutation in the cases investigated so far, which may suggest that mutations are not the main reason for modifying the NIS protein function. As the protein is produced preferably by follicular thyroid cells, we assumed that individuaIs with cancer may present higher serum leveIs of NIS when compared with normal individuaIs. In order to check the usefulness of NIS as a clinical marker, we developed .a simple PCR to detect exons 4 and 6. Among the peripheral blood of 13 patients that had NIS expressed in the initial tumor and had 6, 12 and 24 months follow-up, exon 4 ofNIS was not detectable in 4 cases: 2 follicuIar carcinomas, 1 papillary carcinoma and 1 Graves disease patient. However, exon 6 of NIS was found in all the samples but one This Iast patient presented metastasis during the follow-up, maintaining serum NIS undetectable. We conclude that the detection ofserum NIS has no clinical utility Mestrado Clínica Médica Mestre em Clínica Médica