Avaliação dos produtos finais de glicosilação e o fator nuclear K-B em glandulas lacrimais e superficie ocular de modelos animais de diabetes e envelhecimento

Orientador: Eduardo Melani Rocha Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Este estudo avaliou as possíveis vias comuns na fisiopatogênese da síndrome do olho seco no Diabetes Mellitus (DM) e no envelhecimento, envolvendo o acúmulo dos produtos de glicosilação ("Advanced Glycation End-products" - AGEs), seu receptor RAGE e a ativação do Fator Nuclear-?B (NF-?B) na glândula lacrimal (GL) e alterações do filme lacrimal nessas condições. Modelos animais de DM induzido com estreptozotocina e animais senis (24 meses de vida) foram comparados a animais controle tratados com tampão citrato e adultos jovens (2 meses de vida). Foram avaliadas vias de sinalização, envolvendo AGEs, RAGE e a ativação do NF-?B na GL e alterações no filme lacrimal em ratos Wistar de todos os grupos. A análise do filme lacrimal foi realizada através de medidas de volume de secreção basal e dosagem de citocinas como a Interleucina-1 ß (IL-1 ß) e Fator de Necrose Tumoral - a (TNF- a). A capacidade secretória da GL foi avaliada através de medidas da atividade de peroxidase. Técnicas de "western blot" foram utilizadas para avaliar a expressão e ativação do NF-?B na GL. A expressão de AGE, RAGE e NF-?B na GL e córnea nos grupos estudados, foi avaliada através de microscopia confocal com imunofluorescência. O volume lacrimal foi significativamente menor nos animais diabéticos e senis (P=0,02 e 0,016, respectivamente). Concentrações de IL-1ß e TNF-a na lágrima foram mais altas nos ratos diabéticos e senis do que nos controles e adultos jovens (P=0,007 e 0,02 nos diabéticos e P= 0,007 e P= 0,05 nos senis). A atividade de peroxidase foi significativamente mais baixa no grupo senil (P=0,016), mas não nos experimentos, comparando animais diabéticos e controles (P=0,34). A expressão de AGE, RAGE e NF-?B na GL foi aumentada nos animais diabéticos e senis. O DM e a senilidade induzem alterações estruturais e secretórias significativas na GL e nos tecidos da superfície ocular e associa-se a maior incidência de olho seco. A expressão aumentada de AGE, RAGE e NF-?B na GL sugere a participação desses fatores nas vias de sinalização e subseqüentes alterações inflamatórias relacionadas ao olho seco nessas condições. Abstract: The present study evaluates the dry eye syndrome related to diabetes and aging through the involvement of the Advanced Glycation End-product (AGEs), the Advanced Glycation End-product Receptor (RAGE) axis and Nuclear Factor-?B (NF-?B) activation in lacrimal gland (LG) and tear film dysfunction in these conditions. To evaluate whether AGE, RAGE and NF-?B signaling in LG are altered in diabetes and aging, streptozotocin-induced diabetic, normoglicaemic, aging (24 month-old) and young adults (2 month-old) male Wistar rats were compared. Tear film alterations and the expression of AGE, RAGE and NF-?B in ocular tissues were evaluated in all considered groups. Tear secretion parameters as basal tear secretion volume, Interleukin-1 ß (IL-1 ß) and Tumor Necrosis Factor- a (TNF- a) levels and LG and peroxidase activity in LG tissue were measured. NF-?B expression and activation was evaluated in LG by western blot. Immunohistochemistry with confocal microscopy was used to assess AGE, RAGE and NF-?B expression in LG of all groups. Tear volume was significantly lower in diabetic and aging rats (P=0.02 and 0.016, respectively). IL-1ß and TNF-a concentrations in tears were higher in diabetic and aging than in control and young rats (P=0.007 and 0.02 in diabetic and P= 0.007 and P= 0.05 in aging). Peroxidase activity was significantly lower in the aging group (P=0.016) but not the assays with diabetic rats (P=0.34). AGE, RAGE and NF-?B expressions were increased in LG of diabetic and aging rats. Diabetes and aging induce significant alterations in rat LG structure and secretion. The higher expression of AGE, RAGE and NF-?B in LG may suggest that these factors are involved in signalling and in subsequent inflammatory alterations related to dry eye related to these conditions. Doutorado Clínica Médica Doutor em Clínica Médica