Proteômica da matriz nuclear espermática suína

The objective of this study was to perform the isolation and identification of proteins of sperm nuclear matrix of a pig breeder. It was used pre-chilled diluted boar semen obtained from an apparently healthy breeder boar, with normal morphology and chromatin condensation tests, from a commercial line landrace X large white X pietran, with 22 weeks of age, usually used in an artificial insemination central, located in Uberlândia, Minas Gerais. The semen was processed to separate the sperm heads, extraction of chromatin and nuclear matrix, protein quantification and analysis by mass spectrometry (Equipment LTQ-Orbitrap Elite). The most abundant family corresponded of ribosomal proteins (18%), followed by uncharacterized (15,6%), cytoskeleton (11,4%), histones (3,8%), proteasome subunits (2,8% ) and heat shock (1,9%). The other proteins were grouped into other families and corresponded to 46,5% of total proteins described. Were identified 211 different proteins in the sample and 149 of these (70,7%) have been described previously as present in the somatic or sperm nucleus of other species, 29 (13,7%) did not have nuclear presence previously described and 33 (15,6%) have not been characterized. Protamine 2 was first identified in swine, however protamine 1 has not been described. It follows that the proteins isolation of the nuclear matrix of swine spermatozoid was satisfactory, showing that the protocol used was efficient. Some protein families have been identified and described. However it was not possible to identify some protein structures. Therefore this study contributes to a catalog of protein structures that may be useful in future proteomics studies. Objetivou-se com este estudo realizar o isolamento e identificação das proteínas da matriz nuclear espermática de um reprodutor suíno. Foi utilizado sêmen de suíno pré-diluído resfriado, obtido de um reprodutor aparentemente saudável, com testes de morfologia e de condensação de cromatina normais, da linha comercial landrace X large White X pietran, com 22 semanas de idade, utilizado normalmente em uma central de inseminação artificial de suínos localizada em Uberlândia, Minas Gerais. O sêmen foi processado para separação das cabeças dos espermatozoides, extração da cromatina e matriz nuclear, quantificação de proteínas e análise por espectrometria de massas (Aparelho LTQ-Orbitrap Elite). A família de proteínas mais abundantes correspondeu às ribossomais (18%), seguida pelas não caracterizadas (15,6%), citoesqueleto (11,4%), histonas (3,8%), subunidades proteossomais (2,8%) e heat shock (1,9%). As outras proteínas foram agrupadas em outras famílias e corresponderam a 46,5% do total de proteínas descritas. Foram identificadas 211 proteínas diferentes na amostra, e destas 149 (70,7%) foram previamente descritas como presentes no núcleo espermático ou somático de outras espécies, 29 (13,7%) não têm presença nuclear previamente descrita e 33 (15,6%) foram não caracterizadas. A protamina 2 foi identificada pela primeira vez na espécie suína, no entanto a protamina 1 não foi descrita. Conclui-se que o isolamento das proteínas da matriz nuclear de espermatozoides suíno foi satisfatório, demonstrando que o protocolo utilizado foi eficiente. Algumas famílias de proteínas foram identificadas e descritas. Contudo não foi possível identificar algumas estruturas proteicas. Desta forma este estudo vem contribuir com um catálogo de estruturas proteicas que podem ser úteis em futuros estudos proteômicos. Mestre em Ciências Veterinárias