Técnicas biológicas, serológicas y moleculares para la detección asintomática de Xanthomonas axonopodis pv. citri

Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) produce cancro cítrico en todas las especies cítricas comerciales. La bacteria puede diseminarse mediante material vegetal de propagación contaminado y asintomático. Con el objetivo de optimizar técnicas de detección de bacterias para el análisis de rutina de material vegetal cítrico asintomático, se compararon las técnicas ELISA, Inmunoflorescencia, PCR, qRT_PCR e inoculación en plantas indicadoras (bioensayo). Las pruebas se realizaron a partir de diluciones al décimo entre 10(8) ufc.mL-1 y 10² ufc.mL-1 de un cultivo puro de cepa 49b. El nivel de detección obtenido fue de 1,8 x 10² ufc. mL-1 utilizando inmunoflorescencia, 1,8x10(4) ufc.mL-1 con ELISA indirecto, 1,8x10³ ufc. mL-1 mediante la técnica de PCR, 10 ufc. mL-1 a través de qRT_PCR, y 230 ufc.mL -1 en plantas inoculadas de naranjo amargo. En base a estos resultados y teniendo en cuenta que para el análisis masivo de muestras es importante además de la sensibilidad, el costo y la practicidad, las técnicas de PCR e inoculación en plantas hospedero fueron las que reunieron las mejores características para ser evaluadas en material vegetal asintomático. Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) produces citrus canker disease in all citrus commercial species. The bacteria can be disseminated through vegetative propagation material in asymptomatic form. To optimize bacteria detection techniques applicable to asymptomatic citrus plant tissue routine analysis, ELISA, Immunofluorescence, PCR, qRT_PCR and host plant inoculation (bioassay) diagnostic techniques were compared. Tests were made from decimal dilutions between 10(8) ufc.mL-1 and 10² ufc.mL-1 using a pure culture of 49b strain.The detection level obtained was 1.8 x 10² ufc.mL-1 using Inmunofluorescence; 1.8x10(4) ufc.mL-1 with indirect ELISA, 1.8 x 10³ ufc.mL-1 by means of PCR; 10 ufc.mL-1 through of qRT_PCR and 230 ufc.mL-1 in sour orange inoculated plants. The experiment was repeated at least three times for each technique. Considering this result, and taking into account that sensitivity, practicity and cost, are important when a great number of plants need to be tested, the PCR and inoculation in host plants were those that met the best characteristics to be evaluated in asymptomatic plant material