Overexpression of the get Gene Encoding 4-α-Glucanotransferase of a Hyperthermophilic Archaeon, Thermococcus litoralis

초호열성 고세균 Thermococcus litoralis 유래의 4-α-glucanotransferase는 클로닝되어 염기배열이 밝혀졌으며, 대장균에서 발현되었다. 발현된 이 효소는 기능적인 면에서는 D-enzyme과 유사하지만 아미노산 배열에서는 큰 차이점을 나타내었다. 이 효소는 cycloamylose를 생산하는 새로운 기능적인 특성을 가지고 있어 당대사 관련 효소 단백질에 관한 연구의 중요성 때문에 산업적으로 많은 각광을 받고 있다. 본 연구는 초호열성 고세균 T. litoralis 유래 4-α-glucanotransferase 유전자를 부위 특이적 변이 방법으로 재조합하여 lac와 T7 프로모터를 이용해서 대장균 발현 벡터 시스템에서 대량발현 시켰다. 대장균에서 대량 발현된 재조합 효소 단백질은 열처리, Butyl-Toyopearl, Mono Q 크로마티그래피 방법에 의하여 간단히 정제되었다. 정제된 재조합 효소 단백질은 본래의 효소 단백질과 같은 기능을 가지고 있는 것으로 확인되었다.