Ein neues System zur Bestimmung der Zellwachstumskinetik in 96 Well-Platten: General Cell Screening System (GCSS)

Als Alternativen zu Tierversuchen bieten sich fur viele Fragestellungen in vitro-Tests mit tierischen oder anderen Zellen an. 96 Well-Mikrotiterplatten erlauben eine grose Anzahl von Versuchen unter gleichen Bedingungen (Zeit, Temperatur, etc.) durchzufuhren. Die Quantifizierung solcher Tests erfolgt bisher anhand von indirekten Zellzahlbestimmungen oder direkter Zellzahlung nach dem Absaugen der Zellen aus den Wells. Diese Methoden sind alle Endpunktbestimmungen und konnen daher nur einmal pro Platte durchgefuhrt werden. Sei es die Quantifizierung uber den Einbau radioaktivmarkierter Nucleotide wie Thymidin (Hewlett G. et al., 1989), oder die Aktivitatsbestimmung von “Marker-Enzymen”, wie mitochondriale Dehydrogenasen mit MTT (Mosmann T., 1983), XTT (Paull K.D. et al., 1988), oder MTS (Baltrop J.A. et al., 1991) als chromogenem Substrat, wie Laktat-Dehydrogenase (Racher A.J. et al., 1990), wie Saure Phosphatase (Conolly D.T. et al., 1986) etc., erlaubt nur eine einzige punktuelle Momentaufnahme pro Platte, deren Ergebnis nicht nur von der vorhandenen Zellzahl, sondern auch vom Aktivierungsgrad der Zellen abhangig ist. Alle kinetischen Parameter und die gesamte Entwicklung des Versuches bis zum gemessenen Endpunkt bleiben bei diesen Methoden als “black box” verborgen.