Une nouvelle stratégie de validation de gènes candidats obtenus par séquençage d’exome dans l’hypodysplasie rénale

Introduction Le sequencage d’exome permet une analyse genetique precise des pathologies rares du developpement humain. Toutefois, cette technique aboutit a l’identification d’un grand nombre de variants, dont la pathogenie doit ensuite etre demontree. Nous proposons ici une nouvelle strategie, rapide et peu onereuse, pour determiner le role fonctionnel et biologique de genes candidats, obtenus par sequencage d’exome, dans l’hypodysplasie renale. Methodes Cette approche consiste a utiliser un vivo-morpholino en culture de reins murins ex vivo, afin d’inhiber l’expression d’un gene candidat au cours du developpement renal et ainsi, recapituler le phenotype observe chez le patient. La presence d’un phenotype renal est analysee apres culture renale par acquisition multiphotonique apres immunofluorescence en whole-mount. Six genes candidats ont ainsi ete testes, potentiellement responsables d’hypodysplasie renale dans 7 familles differentes. Resultats Un gene candidat a ete identifie par la presence d’un variant heterozygote avec decalage du cadre de lecture, segregeant avec un phenotype de dysplasie kystique dans une famille. Son expression etait diminuee de 65 % en culture (p Conclusion Cette nouvelle approche a permis de recapituler ex vivo le phenotype observe dans 2 familles differentes, confirmant le role fonctionnel et biologique de 2 genes candidats obtenus par sequencage d’exome. Cette nouvelle strategie est rapide, fiable, et peu onereuse, particulierement comparee a la generation de lignees de souris transgeniques. Elle est notamment pertinente pour l’analyse de mutations avec decalage du cadre de lecture ou de mutations faux-sens, resultant en une perte de fonction de la proteine cible.