Microscopies multiharmoniques pour l’imagerie structurale de tissus intacts

Depuis son introduction en 1990, la microscopie de fluorescence excitee a deux photons (Fluo-2P) s’est peu a peu imposee comme une methode incontournable d’imagerie de tissus intacts a l’echelle sub-cellulaire. En effet, la caracteristique la plus remarquable de la microscopie multiphotonique est de maintenir une resolution tridimensionnelle micrometrique lors de l’observation en profondeur d’un milieu optiquement diffusant. Combinee aux technologies de proteines-fusion (type GFP), cette approche est aujourd’hui utilisee dans de nombreux domaines, notamment en neurophysiologie. Un autre attrait de ce type d’imagerie reside dans l’utilisation possible d’autres phenomenes optiques non lineaires (c’est-a-dire impliquant l’interaction simultanee de plusieurs photons avec une molecule observee) comme source de contraste. Ainsi, les microscopies par generation de second harmonique (GSH) et par generation de troisieme harmonique (GTH) permettent egalement d’observer des milieux complexes et fournissent des informations complementaires par rapport a l’imagerie de fluorescence. Certaines structures cellulaires ou tissulaires fournissent, en effet, ce type de reponse optique sans necessiter de marquage exogene. La microscopie GSH permet, par exemple, de detecter le collagene fibrillaire et la microscopie GTH permet d’observer sans marquage le developpement embryonnaire de petits organismes.