A New Determination Method of Tryptophan and its Related Compounds by High-performance Liquid Chromatography and its Application to Rumen Fluid

本研究では,トリプトファン(Trp)ならびにその関連化合物としてインドール乳酸(ILA),トリプトフォール(TPP),トリプタミン(TPM),インドール-3-アセトアルデヒド(ICA),インドール酢酸(IAA),インドール-3-アルデヒド(ILD),スカトール(SKT)およびインドール(IND)のほかこれら化合物のピーク出現時間の範囲内に入るp-ヒドロキシフェニル酢酸(HPA)およびtrans-ケイ皮酸(CNM)の高速液体クロマトグラフィー(HPLC)による新迅速定量法を確立した.カラムとしてはLiChrospher 100 RP-18 (250×4mm I.D.)を使用した.また,イソクラティック溶離液の移動相としては,メタノール:50mM酢酸ナトリウム緩衝液(pH4.2)(30:70,v/v)を使用し,ピークはUV検出器(280nm)によりモニターした.分析に先立ち,標準溶液または試料溶液に等量のスルフォサリチル酸(SSA)(4%,w/v)を加えて除タンパク処理を行った後,除タンパク液5μlをHPLCに注入した.最終ピークのSKTは60分頃に出現し,60分以内に上記11種類の化合物の分析が終了した.化合物の回収率は,95%以上であり,また,これらの化合物の検出限界は次のとおり(pmol/5μl): Trp, ILA, IAA,ILDおよびTPP, 19; ICA, HPA, INDおよびCNM, 39; SKT, 156; TPM, 625.次に本法をヤギのルーメン液の分析に応用した結果,HPA, ICA, Trp, ILA, IAA, ILDおよびTPPが検出された.中でも,ICA, HPAおよびIAAは比較的多かった.これらの化合物の濃度は,給餌後の時間により変化した.