P202 Utilisation des cellules souches somatiques pour modéliser le diabète monogénique lié aux anomalies du canal potassique de KCNJ11

Introduction Des mutations du gene KCNJ11 sont responsables de differentes formes de diabete precoce. La mutation KCNJ11-E227K est associee a la fois au MODY et au diabete neonatal dans differentes familles, suggerant que le fonds genetique familial contribuerait a moduler le phenotype. Afin de mieux caracteriser les mecanismes induits par cette mutation, nous utilisons les nouvelles techniques de modification ciblee du genome. Materiels et methodes Nous avons derive les cellules-souches pluripotentes induites (iPSC) a partir des cellules mononucleees du sang d’individus porteurs des mutations des genes impliques dans le diabete monogenique. Grâce a la technique des TALE Nucleases et/ou Crispr/Cas9, nous introduisons des cassures double-brin dans l’ADN et la reparation faite par recombinaison homologue afin de realiser la modification nucleotidique specifique de la mutation KCNJ11-E227K. Nous etudierons les iPSC en presence ou non de la mutation E227K pendant leur differenciation en cellules beta-pancreatiques, et l’impact fonctionnel sur leur capacite a secreter l’insuline. Resultats Nous presentons notre strategie de modification ciblee dans une lignee cellulaire qui exprime le gene KCNJ11. Nous avons analyse trois ARNguide de Cas9, et grâce au clonage TOPO-TA, nous avons mis en evidence plusieurs evenements de la reparation de l’ADN par « jonction d’extre-mites non homologues » accompagne de la perte, du gain ou de l’inversion de nucleotides. Ce type de modification n’a pas ete observe aux loci non-specifiques. Pour stimuler la « recombinaison homologue », nous realisons des clonages de donneurs d’ADN avec des fragments d’ADN synthetise. Cette strategie pourra etre facilement adaptee a d’autres regions de genes cibles. Nous utilisons deux etapes de la recombinaison homologue consecutives pour realiser une correction nucleotidique specifique sans alterer l’integrite de l’ADN genomique environnant. Conclusion Les techniques de modification ciblee du genome sont performantes et permettent l’analyse d’une mutation specifique (KCNJ11-E227K) sur un fonds genetique familial lie a la severite du phenotype. Declaration d’interet Les auteurs declarent ne pas avoir d’interet direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme prive, industriel ou commercial en relation avec le sujet presente.