Cloning an Autonomous Replication Sequence fromAspergillus oryzae

DNA sequence from Aspergillus oryzae genome which, confers on pOK-1 the ability to replicate autonomously in Saccharomyces cerevisiae is described. A hybrid plasmid pOK-1 was constructed from pBR325 and YEp13 fragment containing Leu2+ gene. Asp. oryzae DNA and pOK-1 were cleaved with BamHI, ligated and introduced into Escherichia coli. About 600 recombinant plasmids were obtained. One of them transforms S. cerevisiae SHY3 to Leu2+ with middle efficiency. The plasmid designated as pSB1–2 contained two BamHI fragments (4.3 kb and 4.1 kb) of Asp. oryzae DNA. Klonung einer selbstandigen Replikations-Reihenfolge von Aspergillus oryzae. Die DNA-Sequenz aus dem Aspergillus oryzae-Chromosomensatz, die pOK-1 die Fahigkeit vermittelt, sich selbst in Saccharomyces cerevisiae zuruckzuverwandeln, wird beschrieben. Ein Hybriden-Plasmid pOK-1 wurde aus einem pBR325 und einem YEp13-Fragment aufgebaut, welches das Leu2+-Gen enthalt. Aspergillus oryzae-DNA und pOK-1 wurden mit BamHI gespalten und in Escherichia coli eingefuhrt. Etwa 600 rekombinante Plasmiden wurden erhalten. Eines von ihnen transformiert S. cerevisiae SHY3 in Leu2+ mit mittlerer Wirksamkeit. Das als pSB1–2 designierte Plasmid enthielt zwei BamHI-Fragmente (4.3 kb und 4.1 kb) von Aspergillus oryzae-DNA.