L’Histone Acétyltransférase Tip60 régule l’activité biologique du facteur de transcription E2F1

Introduction : E2F1 est un facteur de transcription qui joue un role cle dans la progression du cycle cellulaire mais aussi dans l’apoptose. Nous avons decrit la deregulation de son expression dans les cancers du poumon suggerant un role important de cette proteine lors de la carcinogenese bronchique. L’acetylation est une modification epigenetique reversible des residus lysines des proteines, qui emerge comme un nouveau systeme de signalisation controlant la croissance cellulaire. Nous avons recemment mis en evidence le role cle de l’histone acetyltransferase (HAT) Tip60 dans la reponse aux dommages de l’ADN induite par les carcinogenes du tabac [1] . Il est connu que E2F1 est implique dans la reponse aux dommages de l’ADN et que son activite biologique est regulee par acetylation. Ces donnees nous ont conduits a emettre l’hypothese que E2F1 pourrait etre une cible de Tip60. Methodes : L’acetylation de E2F1 a ete analysee in vitro par un test HAT utilisant des proteines recombinantes et de l’Acetyl-CoA radiomarque, et in vivo par immunoprecipitation et immunodetection avec un anticorps anti-lysine acetylee. L’interaction entre E2F1 et Tip60 a ete etudiee in vitro par GST pull down et in vivo par co-immunoprecipitation sur des cellules co-transfectees. L’activite transcriptionnelle de E2F1 a ete analysee dans des experiences de co-transfection a l’aide d’un vecteur reporteur codant pour le gene de la luciferase sous le controle du promoteur de la Cycline E. Resultats : Nous montrons l’interaction entre Tip60 et E2F1in vivo et mettons en evidence par des techniques in vitro que cette liaison est directe et implique les acides amines 191 a 284 de E2F1 comprenant notamment son domaine de dimerisation avec son co- facteur DP1. Nous montrons aussi que la proteine E2F1 est acetylee par Tip60 in vitro et in vivo. Nos resultats in vitro indiquent que cette acetylation s’effectue au niveau des lysines 120 et 125 jouxtant son domaine de liaison a l’ADN. De facon interessante, nous demontrons egalement la capacite de Tip60 a inhiber l’activite transcriptionnelle de E2F1. Conclusions : Ces resultats dentifient E2F1 comme une nouvelle cible directe de Tip60 et suggerent que la regulation des fonctions de E2F1 par Tip60 pourrait contribuer a l’activation des voies de reponse aux dommages de l’ADN induite par les carcinogenes du tabac.